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淋巴囊肿病毒mcp基因变异特征及其基因型分析 被引量:1
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作者 闫秀英 吴灶和 +2 位作者 简纪常 鲁义善 孙修勤 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期39-45,共7页
淋巴囊肿病毒是引起多种海、淡水鱼淋巴囊肿病的病原,且不同淋巴囊肿病毒分离株间存在一定的差异。本文对25株淋巴囊肿病毒分离株mcp基因的变异特征进行分析,结果表明:分离自同一宿主的淋巴囊肿病毒mcp基因序列并非完全一致,有些同宿主... 淋巴囊肿病毒是引起多种海、淡水鱼淋巴囊肿病的病原,且不同淋巴囊肿病毒分离株间存在一定的差异。本文对25株淋巴囊肿病毒分离株mcp基因的变异特征进行分析,结果表明:分离自同一宿主的淋巴囊肿病毒mcp基因序列并非完全一致,有些同宿主分离株间存在着较少的变异,其MCP蛋白序列间的变异位点多位于不规则结构域、属于非蛋白相互作用位点;分属不同基因型淋巴囊肿病毒分离株MCP蛋白序列间的变异位点也多位于不规则结构域,变异位点为蛋白相互作用位点的比率仅占21.98%。金头鲷淋巴囊肿病毒分离株LCDV-sa是一种新的淋巴囊肿病毒基因型,此25株淋巴囊肿病毒可分为7个基因型。对淋巴囊肿病毒变异的研究,可加深对其感染机制的认识,有助于了解其传播途径,可为淋巴囊肿病的防控提供重要的理论依据。 展开更多
关键词 淋巴囊肿病毒 mcp基因 变异 基因
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大鲵虹彩病毒贵州分离株MCP基因的克隆与原核表达 被引量:4
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作者 余波 王芳 +2 位作者 康超 李永霞 周思旋 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2017年第2期18-22,共5页
根据Gen Bank中大鲵虹彩病毒主衣壳蛋白MCP(major capsid protein,MCP)基因序列(序列号:KF512820),设计一对特异性引物,以大鲵虹彩病毒贵州分离株基因组DNA为模板,PCR扩增大鲵虹彩病毒MCP基因并测序,与Gen Bank中大鲵虹彩病毒MCP基因进... 根据Gen Bank中大鲵虹彩病毒主衣壳蛋白MCP(major capsid protein,MCP)基因序列(序列号:KF512820),设计一对特异性引物,以大鲵虹彩病毒贵州分离株基因组DNA为模板,PCR扩增大鲵虹彩病毒MCP基因并测序,与Gen Bank中大鲵虹彩病毒MCP基因进行比对,然后将其亚克隆到原核表达载体p ET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后进行Western blot分析。结果显示:PCR扩增出长度为1 392 bp的片段,与Gen Bank中大鲵虹彩病毒MCP基因核苷酸序列相似性为99.7%~99.9%,SDSPAGE电泳显示该重组蛋白的相对分子质量约为67×103。免疫原性检测结果表明,该重组蛋白可与兔抗大鲵虹彩病毒阳性血清特异性反应,具有免疫原性。 展开更多
关键词 大鲵虹彩病毒 mcp基因 原核表达 免疫原性
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大鲵虹彩病毒贵州分离株MCP基因的克隆与B细胞表位预测
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作者 王芳 康超 +2 位作者 余波 李永霞 周思旋 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第11期14-16,22,共4页
为了研究大鲵虹彩病毒(GSIV)MCP基因以及预测其B细胞表位,试验采用PCR方法扩增大鲵虹彩病毒MCP基因,采用生物学软件对大鲵虹彩病毒MCP基因的氨基酸序列进行B细胞表位预测分析。结果表明:扩增产物大小为1 392 bp,将该序列与Gen Bank中大... 为了研究大鲵虹彩病毒(GSIV)MCP基因以及预测其B细胞表位,试验采用PCR方法扩增大鲵虹彩病毒MCP基因,采用生物学软件对大鲵虹彩病毒MCP基因的氨基酸序列进行B细胞表位预测分析。结果表明:扩增产物大小为1 392 bp,将该序列与Gen Bank中大鲵虹彩病毒MCP基因中的中国分离株核苷酸相似性为99.8%。MCP蛋白有多个抗原表位位点,抗原性指数较高,而这些区域可能是B细胞抗原表位区域。说明预测的结构、亲水性、柔性区域和抗原指数可用于大鲵虹彩病毒亚单位疫苗和分子诊断试剂的研究。 展开更多
关键词 大鲵虹彩病毒(GSIV) mcp基因 B细胞表位预测 氨基酸序列 抗原指数
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一例牙鲆淋巴囊肿病例的诊断及病毒MCP基因遗传进化分析 被引量:1
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作者 孟凡亮 曹龙龙 +5 位作者 焦秋林 李焱 王宏宇 刘照虎 马梓承 刘思当 《中国动物检疫》 CAS 2019年第10期98-103,共6页
2019年1月,山东省某牙鲆鱼场出现疑似淋巴囊肿病例。患病鱼体表长有灰白色菜花样瘤状物,死亡率超过30%,给养殖场造成了较为严重的经济损失。为确定发病原因,对该鱼场病死鱼进行了病理组织学诊断和病毒检测,并对病毒MCP基因进行了序列测... 2019年1月,山东省某牙鲆鱼场出现疑似淋巴囊肿病例。患病鱼体表长有灰白色菜花样瘤状物,死亡率超过30%,给养殖场造成了较为严重的经济损失。为确定发病原因,对该鱼场病死鱼进行了病理组织学诊断和病毒检测,并对病毒MCP基因进行了序列测定及遗传变异分析。结果显示:眼观及组织学病变符合淋巴囊肿病的病变特征;所检测到的病毒与选定的参考毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为78.7%~99.9%和86.8%~100%。MCP基因遗传进化分析显示,检测到的病毒与LCDV-C、JF00Kuma、JF03Yoshi、JF03GunNeA、JF、LCDV-K1等毒株同属于淋巴囊肿病毒基因II型,且与我国分离株LCDV-C有较高的同源性。经综合诊断,确定该流行病由淋巴囊肿病毒基因II型所致。该研究为该病的综合诊断及流行病学调查提供了新资料,为下一步进行该病毒相关分子生物学研究以及疫苗制备等提供了理论依据。 展开更多
关键词 淋巴囊肿病毒 牙鲆 综合诊断 mcp基因 病理组织学 遗传进化分析
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MCP-1基因多态性与结核性脓胸发病风险的关系 被引量:2
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作者 徐伟乐 齐海亮 +2 位作者 秦学博 李建行 马辉 《临床肺科杂志》 2015年第8期1490-1492,共3页
目的探讨中国河北地区MCP-1(单核细胞趋化因子蛋白-1)基因-2518A/G和-362G/C单核苷酸多态性(SNP)与结核性脓胸的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对结核性脓胸患者500例和健康对照组500例进行MCP-1基因-2... 目的探讨中国河北地区MCP-1(单核细胞趋化因子蛋白-1)基因-2518A/G和-362G/C单核苷酸多态性(SNP)与结核性脓胸的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对结核性脓胸患者500例和健康对照组500例进行MCP-1基因-2518A/G和-362G/C SNPs检测。结果与MCP-1-2518A/A基因型相比,携带A/G和G/G基因型均可增加结核性脓胸发病风险(OR=2.254和OR=8.728)。进行分层分析发现,无卡介苗(BCG)接种史、体质量指数(BMI)<18.5均增加结核性脓胸发病风险(OR=3.309和OR=2.767)。MCP-1-362G/C SNP无统计学意义。结论 (1)MCP-1基因-2518A/G SNP可能与结核性脓胸的发病风险有关。(2)-362G/C SNP可能与结核性脓胸无关。 展开更多
关键词 结核性脓胸 mcp.1基因 单核苷酸多态性(SNP)
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金属螯合蛋白异源表达提高E.coli对镉的生物吸附能力:修复潜力和潜在机制
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作者 武晨 吴玉俊 +1 位作者 易盛炜 李峰 《Journal of Central South University》 SCIE EI CAS CSCD 2024年第4期1265-1275,共11页
镉(Cd)作为一种生物非必需的有毒重金属,通过自然排放或人类活动进入环境,对人类健康构成威胁。在微生物中高效表达金属螯合蛋白(MCP)可以增强生物对Cd的吸附能力。本研究构建了mcp基因编码的MCP的异源表达体系(GEM01),探究了其对Cd的... 镉(Cd)作为一种生物非必需的有毒重金属,通过自然排放或人类活动进入环境,对人类健康构成威胁。在微生物中高效表达金属螯合蛋白(MCP)可以增强生物对Cd的吸附能力。本研究构建了mcp基因编码的MCP的异源表达体系(GEM01),探究了其对Cd的吸附效果和潜在机制。结果表明,Cd^(2+)调控GEM01中mcp基因丰度,mcp基因的表达增加了Cd^(2+)的生物吸附能力(8.09 mg/g,比对照组高2.32倍)。在GEM01自溶过程中Cd^(2+)的保留率为87.87%。荧光光谱和分子动力学模拟表明了Cd^(2+)与MCP之间存在较强的相互作用且Cd^(2+)影响了MCP的二级结构。FT-IR证明了MCP中的官能团(如羧基、甲基和亚甲基)参与了MCP与Cd^(2+)的相互作用。分子对接进一步表明MCP蛋白表面的一些极性和亲水残基(如天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸和组氨酸)通过静电引力与Cd^(2+)结合。本研究为MCP介导的Cd^(2+)生物修复提供了新的见解,为微生物修复重金属污染提供了基因资源。 展开更多
关键词 mcp基因 金属螯合蛋白 相互作用 微生物修复
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一株大口黑鲈(Micropterus salmoides)虹彩病毒(Iridoviridae)的分离及鉴定 被引量:11
7
作者 许峰 鲁建飞 +2 位作者 魏永伟 苗亮 陈炯 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期156-162,共7页
2018年7月,浙江省某大口黑鲈(Micropterus salmoides)养殖场暴发疑似病毒引起的疾病。现场采样发现,病鱼体长约15-20cm,鱼体于水面下暗游,反应迟钝,体表有出血点或溃疡症状。本研究通过采用鲤鱼上皮瘤细胞(epithelioma papulosum cyprin... 2018年7月,浙江省某大口黑鲈(Micropterus salmoides)养殖场暴发疑似病毒引起的疾病。现场采样发现,病鱼体长约15-20cm,鱼体于水面下暗游,反应迟钝,体表有出血点或溃疡症状。本研究通过采用鲤鱼上皮瘤细胞(epithelioma papulosum cyprinid,EPC)培养、超薄切片透射电镜观察、病毒主要衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)克隆与测序分析等方法,从患病大口黑鲈中分离得到一株病毒,鉴定其属于虹彩病毒科蛙病毒属,命名为大口黑鲈虹彩病毒宁波分离株(LMBIV-NB001)。EPC经患病鱼组织匀浆液接种后出现细胞圆缩、死亡、脱落等典型的细胞病变症状。将感染后的EPC细胞制作超薄切片,通过电镜观察发现,EPC细胞质中存在大量直径约120nm具囊膜的正六边形成熟病毒粒子,形态与虹彩病毒相似。根据虹彩病毒MCP基因保守区域序列设计特异性引物对病鱼组织样本进行PCR扩增,获得了1029bp的目的基因片段。将该扩增片段连入pMD19-T simple质粒后测序,经BLAST比对分析显示,其与GenBank中已报道的鳜鱼蛙病毒NH-1609、大口黑鲈溃疡综合征病毒BG/TH/CU3、EPC060608-08的MCP基因同源性最高,相似度均达到99.13%。构建系统进化树分析表明,本研究分离的LMBIV-NB001株与NC_038508、GU256635、MG941005等虹彩病毒科蛙病毒属毒株聚成一簇。本论文研究结果为不同地区蛙病毒属成员的起源和分化等相关研究等提供了基础材料。 展开更多
关键词 大口黑鲈 虹彩病毒科 mcp基因 鲤鱼上皮瘤细胞(EPC) 分离鉴定
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山东沿海部分地区真鲷虹彩病毒病初步调查与分析 被引量:4
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作者 赵玉然 岳志芹 +4 位作者 谭乐义 马亚 李琼 梁成珠 李八方 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2011年第6期31-36,共6页
2008年11月~2010年11月,采集山东海域大菱鲆、石鲽、鲈鱼各20批,按照世界动物卫生组织推荐的PCR检测方法对真鲷虹彩病毒病(Red Sea Bream Iridoviral Disease,RSIVD)进行初步调查。结果显示,共检出4例RSIVD感染样品。以真鲷虹彩病毒(Re... 2008年11月~2010年11月,采集山东海域大菱鲆、石鲽、鲈鱼各20批,按照世界动物卫生组织推荐的PCR检测方法对真鲷虹彩病毒病(Red Sea Bream Iridoviral Disease,RSIVD)进行初步调查。结果显示,共检出4例RSIVD感染样品。以真鲷虹彩病毒(Red Sea Bream Iridovirus,RSIV)和传染性脾肾坏死病毒(Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus,ISKNV)主要衣壳蛋白基因为基础,设计简并引物,PCR扩增本次检出阳性样品的RSIV/ISKNV MCP基因。将MCP基因PCR扩增产物测序,提交GenBank,并以MCP基因为基础,对被检出的阳性样品进行虹彩病毒属系统分类,绘制进化树。由进化树得出,4例阳性病毒株均属于虹彩病毒科细胞肿大病毒属。 展开更多
关键词 真鲷虹彩病毒 传染性脾肾坏死病毒PCR mcp基因 同源性
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RNA干扰对LCDV-cn在牙鲆体内复制的影响 被引量:2
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作者 闫秀英 邢明清 +3 位作者 郑风荣 孙修勤 简纪常 吴灶和 《广东海洋大学学报》 CAS 2013年第1期38-43,共6页
海水养殖生物病毒病是世界性难题,淋巴囊肿病毒中国分离株(LCDV-cn)是牙鲆(Paralichthys olivaceus)淋巴囊肿病的病原。以mcp基因为靶基因,设计siRNA-mcp1、siRNA-mcp2、siRNA-mcp3等3条siRNA序列,研究RNA干扰(RNAi)对淋巴囊肿病毒在牙... 海水养殖生物病毒病是世界性难题,淋巴囊肿病毒中国分离株(LCDV-cn)是牙鲆(Paralichthys olivaceus)淋巴囊肿病的病原。以mcp基因为靶基因,设计siRNA-mcp1、siRNA-mcp2、siRNA-mcp3等3条siRNA序列,研究RNA干扰(RNAi)对淋巴囊肿病毒在牙鲆体内复制的影响。结果表明,牙鲆体内注入siRNA-mcp1和siRNA-mcp3后,mcp基因的表达有所下调;统计分析表明,注入siRNA-mcp1后,mcp基因的表达下调明显,具有显著性差异(p<0.05),注入siRNA-mcp2、siRNA-mcp3后,mcp基因的表达下调不明显,差异不显著(p>0.05)。本实验中初步实现了RNAi对LCDV-cn复制的抑制作用。 展开更多
关键词 淋巴囊肿病毒中国分离株(LCDV-cn) mcp基因 RNA干扰
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大鲵虹彩病毒TaqManreal·timePCR检测方法的建立
10
作者 周勇 曾令兵 +5 位作者 孟彦 周群兰 张辉 高正勇 肖艺 孙建滨 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2013年第B07期18-25,共8页
利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒(Giantsalamanderiridovirus,GSIV)主要衣壳蛋白(MCP)编码区长度为1392bp的片段,克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T—MCP。经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pMD19-T—MCP重组质粒,作... 利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒(Giantsalamanderiridovirus,GSIV)主要衣壳蛋白(MCP)编码区长度为1392bp的片段,克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T—MCP。经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pMD19-T—MCP重组质粒,作为标准模板进行TaqMan实时荧光定量PCR扩增,制作标准曲线,建立了大鲵虹彩病毒的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。制作的标准曲线有极好的线性关系,且线性范围宽,相关系数为0.99019。组内重复试验的Ct值标准偏差为0.52%。检测结果显示,该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性,与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤鱼上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应,特异性好,检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数,约1.1×10^-3g/μL病毒核酸,较之常规PCR的敏感度高出约1000倍。本研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。 展开更多
关键词 大鲵出血病 虹彩病毒 mcp基因 TaqMan实时荧光定量PCR
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蛙病毒三重荧光PCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 李江宇 王树云 +10 位作者 王姝 任彤 高志强 谷强 张伟 刘艳华 王娜 张旻 景宏丽 江育林 张利峰 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期746-752,共7页
根据GenBank中收录的蛙病毒属虹彩病毒主要衣壳蛋白(MCP)基因序列设计了一对通用引物和3条Taqman探针,通过PCR反应体系的优化以及反应的特异性、灵敏性和干扰性试验,建立了一种可检测蛙病毒属大部分成员并能进行初步分类的三重荧光... 根据GenBank中收录的蛙病毒属虹彩病毒主要衣壳蛋白(MCP)基因序列设计了一对通用引物和3条Taqman探针,通过PCR反应体系的优化以及反应的特异性、灵敏性和干扰性试验,建立了一种可检测蛙病毒属大部分成员并能进行初步分类的三重荧光PCR方法。通过鉴定分析将蛙病毒属成员分为三类,其中第一类包括蛙病毒3型(FV3)、饰纹汀蛙虹彩病毒(BIV)、流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、欧洲鲴鱼病毒(ECV)、欧鲶病毒(ESV)、中华鳖虹彩病毒(STIV)、大鲵虹彩病毒(ADIV)、沼泽绿牛蛙虹彩病毒(RGV)和虎纹蛙病毒(TFV),第二类是Santee.Cooper蛙病毒(SCRV),由大口黑鲈虹彩病毒(LMBV)、裂唇鱼病毒(DFV)和孔雀鱼病毒(GV6)组成,而新加坡石斑鱼虹彩病毒(SGIV)则单独作为第三类。进一步分析发现各病毒的最低检测量均达到10^2拷贝,表明该方法除了具有良好的特异性和稳定性之外还具有高度灵敏性。建立的该蛙病毒三重荧光PCR方法可为蛙病毒的快速诊断和分子流行病学调查提供一种有效的技术手段。 展开更多
关键词 蛙病毒 虹彩病毒 主要衣壳蛋白(mcp)基因 三重荧光PCR TAQMAN探针
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人补体调节蛋白基因MCP和DAF的克隆及其在E.coli中的表达
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作者 刘旭 崔秀璟 +3 位作者 罗轶英 焦达 邓可京 乔守怡 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期532-535,540,共5页
人膜辅基蛋白MCP(membranecofactorprotein)和降解加速因子DAF(decay acceleratingfactor)是免疫排斥反应中补体系统活性调节的重要蛋白.以PCR的方法分别从成人肝cDNA文库和胎儿骨髓cDNA文库中扩增得到MCP和DAF基因,克隆入载体pUC19,再... 人膜辅基蛋白MCP(membranecofactorprotein)和降解加速因子DAF(decay acceleratingfactor)是免疫排斥反应中补体系统活性调节的重要蛋白.以PCR的方法分别从成人肝cDNA文库和胎儿骨髓cDNA文库中扩增得到MCP和DAF基因,克隆入载体pUC19,再以所构建质粒为模板,以PCR的方式在二基因间加入编码柔性连接肽的DNA序列,构建融合基因MCP DAF,并克隆入pUC19质粒.将MCP、DAF及MCP DAF亚克隆至大肠杆菌表达载体pET 32a(+)或pET 32b(+),构建表达载体MCP pET32a,DAF pET32b及MCP DAF pET32a,分别导入E.coliBL21菌株中表达,得到预期分子质量大小的蛋白. 展开更多
关键词 mcp基因 DAF基因 融合蛋白
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虾虹彩病毒TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:7
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作者 韦信贤 陈孝宇 +5 位作者 贾鹏 王瑞 谭红连 杨慧赞 童桂香 黄光华 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期404-411,共8页
【目的】建立检测虾虹彩病毒(SIV)的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR,为实现虾虹彩病毒病(SIVD)快速诊断及疫情监测提供一种新的技术手段。【方法】根据SIV的MCP基因保守序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,将目的片段克隆至pMD18-T载体制... 【目的】建立检测虾虹彩病毒(SIV)的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR,为实现虾虹彩病毒病(SIVD)快速诊断及疫情监测提供一种新的技术手段。【方法】根据SIV的MCP基因保守序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,将目的片段克隆至pMD18-T载体制备重组质粒pMD18-T-MCPSIV;优化反应体系及扩增条件后建立检测SIV的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR,以pMD18-T-MCPSIV为标准品绘制标准曲线,并通过特异性、敏感性、重复性试验及临床应用验证其实用性。【结果】制备的重组质粒(pMD18-T-MCPSIV)DNA稳定性好,满足作为标准品的要求;标准品起始模板范围为2.0×101~2.0×109拷贝/反应时,建立的标准曲线具有良好线性关系。优化后的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR灵敏度高,对重组质粒的检测灵敏度可达20拷贝/反应,对虾组织SIV的检测灵敏度约10拷贝/mg,其临床检测的敏感性与套式PCR相当;与虾类其他常见病原无交叉反应,组内和组间变异系数分别为0.27%~0.54%和0.61%~0.95%,且扩增与产物分析同步完成,整个检测过程仅需1 h左右。采用建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR与目前农业农村部推荐的套式PCR同时对276份临床虾样品进行SIV检测,结果显示,两种方法的大部分检测结果一致,符合率为98.6%,但检测低拷贝数样品时前者具有更高的灵敏度。2018和2019年广西虾样品的SIV阳性检出率分别为19.7%和7.5%,且养殖凡纳滨对虾、罗氏沼虾和红螯螯虾均检测到SIV阳性。【结论】基于SIV MCP基因保守序列建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、定量范围宽及简单快速等优点,适用于虾类样品SIV检测,可为SIVD快速诊断及疫情监测提供一种新的技术手段。 展开更多
关键词 虾虹彩病毒(SIV) mcp基因 TAQMAN-MGB探针 荧光定量PCR 套式PCR
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NANOPARTICLE AS A NEW GENE TRANSFERRING VECTOR IN SPECIFIC EXPRESSION GENE 被引量:1
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作者 管珩 李拥军 +7 位作者 郑曰宏 刘昌伟 杨菁 宋存先 王彭延 赵三妹 王宗立 佘铭鹏 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2002年第4期220-224,共5页
Objective. To evaluate the possibility and efficiency of nanoparticle as a new vector in specific gene transference.Methods. Nanoparticle-DNA complex was prepared with Poly- dl-lactic-co-glycolic acid (PLGA) bearing a... Objective. To evaluate the possibility and efficiency of nanoparticle as a new vector in specific gene transference.Methods. Nanoparticle-DNA complex was prepared with Poly- dl-lactic-co-glycolic acid (PLGA) bearing anti-sense monocyte chemotactic protein-1 (A-MCP-l), a specific expression gene, and the package efficiency, release progress in vitro, and the size of the complex were determined. The possibility of the new vector was evaluated with genomic DNA PCR by transferring gene into cultured smooth muscle cells (SMC), cationic lipids as a control. For study in vivo, jugular vein-to-artery bypass grafting procedures were performed on 20 New Zealand white rabbits, of which 6 grafts were transferred with nanoparticle-A-MCP-1 (200 μg), 6 with A - MCP-1 (200 μ g) by cationic liposome, 4 with LNCX plasmid, and 4 as control. Fourteen days after the grafts were harvested, the expression of A-MCP-l and its effect on MCP-1 in vein grafts were detected by dot blot, and the morphologic evaluation of grafts was performed.Results. The package efficiency of the nanoparticle-DNA complex was 0. 9% , release progress in vitro lasted 2 weeks, and the size ranged from 150 to 300nm. SMC genomic DNA PCR showed that A-MCP-l gene could be successfully transfected into cells by nanoparticle. The study in vivo indicated that A-MCP-l mRNA was expressed in both local gene delivery groups, nanoparticle and liposome, meanwhile, MCP-1 expression in vein grafts was significantly inhibited and neointimal hyperplasia was notably reduced.Conclusion. Nanoparticle can act as a vector to transfect specific gene. 展开更多
关键词 gene therapy NANOPARTICLE monocyte chemotactic protein-1
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Effect of monocyte chemoattractant protein-1 on chemotactic gene expression by macrophage cell line U937
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作者 卞广兴 郭葆玉 +4 位作者 苗红 邱磊 曹冬梅 道书艳 张冉 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2004年第3期135-138,共4页
Objective: To study the chemotactic superfamily genes expression profiling of macrophage line U937 treated with monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) using gene chip technique. Methods: Total RNA from macrophage ... Objective: To study the chemotactic superfamily genes expression profiling of macrophage line U937 treated with monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) using gene chip technique. Methods: Total RNA from macrophage line U937 (as control) and U937 with MCP-1 was extracted, made reverse transcript to cDNA and tested with gene expression chip HO2 human. Results: Some chemotactic-related gene expressions were changed in all analyzed genes. Regulated upon activation, normal T cell expressed and secreted (RANTES) was up-regulated over 2-fold and 7 chemotactic-related genes (CCR2, CCR5, CCL16, GROβ, GROγ, IL-8 and granulocyte chemotactic protein 2) were down-regulated over 2-fold in MCP-1 treated U937 cells at mRNA level. Conclusion: MCP-1 can influence some chemokines and receptors expression in macrophage in vitro, in which MCP-1 mainly down-regulates the chemotactic genes expression of those influencing neutrophilic granulocyte (GROβ, GROγ, IL-8 and granulocyte chemotactic protein 2). Another novel finding is that it can also down-regulate the mRNA level of CCR5, which plays a critical role in many disorders and illnesses. 展开更多
关键词 monocyte chemoattractant protein-1 gene chip macrophage line U937
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大鲵蛙病毒LAMP检测方法的建立 被引量:5
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作者 刘星星 耿毅 +5 位作者 汪开毓 周燕 陈德芳 黄小丽 刘丹 陈成 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期558-564,共7页
根据大鲵蛙病毒(Chinese giant salamander ranavirus,CGSRV)主要核衣壳蛋白MCP编码基因的序列设计合成4条特异性引物,以重组pMD19-T-MCP质粒为模板,通过反应条件与反应体系优化,建立CGSRV的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,测定LAMP对CG... 根据大鲵蛙病毒(Chinese giant salamander ranavirus,CGSRV)主要核衣壳蛋白MCP编码基因的序列设计合成4条特异性引物,以重组pMD19-T-MCP质粒为模板,通过反应条件与反应体系优化,建立CGSRV的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,测定LAMP对CGSRV的最低检测限,并与巢式PCR和普通PCR进行比较。结果表明,该LAMP方法最佳反应温度为62℃,反应时间为40min,对CGSRV最低检测限5copies/μL,而巢氏PCR和常规PCR的检测限为50和5×103copies/μL,表明该LAMP方法的灵敏度显著高于巢氏PCR和常规PCR;且与淋巴囊肿病毒、鲫鱼出血病疱疹病毒2型、云斑尖塘鳢虹彩病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒、迟钝爱德华菌、嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌等均无交叉反应;反应结束后加入荧光染料EtBr可肉眼判定粉色为阳性,而棕色则为阴性。因此,该方法对CGSRV的检测较巢氏PCR和常规PCR更为简便、快速、灵敏、特异,且不需昂贵仪器设备,更适合养殖现场检测,为CGSRV早期感染的快速检测提供了新方法。 展开更多
关键词 大鲵蛙病毒 环介导等温扩增 巢氏PCR mcp基因
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1株牛蛙虹彩病毒的分离鉴定及其致病性 被引量:1
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作者 张丽娟 杨金先 +2 位作者 陈强 李英英 葛均青 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期2001-2008,共8页
为了明确一种牛蛙(Rana catesbiana Shaw)传染性疾病的致病病原,本研究利用收集的病料进行病毒分离培养、鉴定和致病性分析。结果显示,接种病料的鲤鱼表皮瘤细胞(epithelioma papulosum cyprini cell line, EPC)出现变圆、脱落等典型细... 为了明确一种牛蛙(Rana catesbiana Shaw)传染性疾病的致病病原,本研究利用收集的病料进行病毒分离培养、鉴定和致病性分析。结果显示,接种病料的鲤鱼表皮瘤细胞(epithelioma papulosum cyprini cell line, EPC)出现变圆、脱落等典型细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),病毒粒子的电镜观察表明其可能为虹彩病毒,进一步的基因组PCR鉴定和序列的同源性分析证实分离的病毒为一株蛙虹彩病毒(Rana grylio virus, RGV),称之为RGV-FJ。攻毒试验表明,感染RGV-FJ的牛蛙出现腹部及大腿出血,肝脏变白肿大,脾脏、肾脏及肺部出血等症状。组织病理学观察发现,攻毒组牛蛙皮肤的黏液层细胞肿胀、排列紊乱,细胞间红细胞浸润,上皮细胞肿胀、坏死;肝细胞肿胀或萎缩、坏死、排列紊乱,门静脉与肝组织剥离,红细胞渗出且肿胀成不规则形态;肾脏的肾小管管腔狭窄,细胞界限模糊,大量红细胞和单核细胞浸润;肺部囊泡细胞排列紊乱,有大量红细胞浸润、淤积。同时利用透射电镜在蛙的肺部观察到病毒粒子。PCR检测显示,攻毒组牛蛙肝脏、脾脏、肾脏、肠道、肌肉、皮肤和肺中均可检测到RGV-FJ,这表明牛蛙发生了RGV-FJ的系统侵染;攻毒组牛蛙从攻毒第2天开始出现死亡,第4天的累计死亡率达到94.12%;并从病死牛蛙的主要内脏器官中重新分离出了RGV-FJ。上述结果表明,分离的RGV-FJ具有较强致病性,这为进一步开展分离病毒的致病机理研究奠定基础。 展开更多
关键词 牛蛙 虹彩病毒 mcp基因 致病性
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