目的观察60Co照射后体外培养的食管癌细胞株TE-13和ECA109细胞中MDC1和53BP1蛋白表达、ECA109细胞核内MDC1和53BP1斑点数量的变化,探讨放射线对食管癌细胞中相关蛋白表达的影响。方法 Western blot检测照射后细胞中MDC1和53BP1蛋白表达...目的观察60Co照射后体外培养的食管癌细胞株TE-13和ECA109细胞中MDC1和53BP1蛋白表达、ECA109细胞核内MDC1和53BP1斑点数量的变化,探讨放射线对食管癌细胞中相关蛋白表达的影响。方法 Western blot检测照射后细胞中MDC1和53BP1蛋白表达,激光共聚焦显微镜观察放射线照射后食管癌细胞ECA109中MDC1和53BP1细胞核内斑点数量的变化。结果 0、1、2、5、10Gy照射后1、2、24h,TE-13和ECA109细胞MDC1和53BP1蛋白表达未见明显变化(P>0.05);细胞接受不同剂量放射线照射后1h,MDC1和53BP1核内斑点的数量呈现明显剂量依赖性,与对照组(0Gy组)相比,差异具有统计学意义(P<0.05);同时发现4Gy放射线照射后30min(MDC1)～1h(53BP1)细胞核内斑点的数量最多,分别为26.3和36.7个,其后斑点的数量逐渐下降,与对照组(0Gy组)相比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论单纯放射线照射未发现食管癌细胞中MDC1和53BP1蛋白表达发生明显变化,但两种蛋白在细胞核内斑点的数量与剂量和照射后时间存在明显的量效关系。展开更多
目的:探讨口腔鳞状细胞癌中MDC1(mediator of DNA damage checkpoint protein 1)蛋白的表达水平及意义。方法:采用免疫组织化学Envision法检测10例正常口腔黏膜、60例口腔鳞状细胞癌中MDC1的表达水平,并分析其与临床病理参数之间的关系...目的:探讨口腔鳞状细胞癌中MDC1(mediator of DNA damage checkpoint protein 1)蛋白的表达水平及意义。方法:采用免疫组织化学Envision法检测10例正常口腔黏膜、60例口腔鳞状细胞癌中MDC1的表达水平,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果:MDC1蛋白在口腔鳞状细胞癌中表达高于正常口腔黏膜,两者之间差异有统计学意义(P=0.042),而且MDC1蛋白的表达升高与淋巴结转移有关(P=0.033),但与病理分级(P=0.986)、患者的年龄(P=0.723)、性别(P=0.142)无关。结论:MDC1蛋白在口腔鳞状细胞癌中表达增高,提示它可能在肿瘤的发生和发展中具有一定的作用,为进一步理解细胞DNA损伤与肿瘤发生的关系提供了依据。展开更多
目的探究SUMO E3连接酶(zinc finger protein 451,ZNF451)介导非小细胞肺癌A549细胞和宫颈癌HeLa细胞DNA损伤修复的功能及机制。方法采用γ射线或依托泊苷处理A549细胞和HeLa细胞,CCK-8法检测细胞增殖活力,蛋白免疫印迹法检测蛋白表达量...目的探究SUMO E3连接酶(zinc finger protein 451,ZNF451)介导非小细胞肺癌A549细胞和宫颈癌HeLa细胞DNA损伤修复的功能及机制。方法采用γ射线或依托泊苷处理A549细胞和HeLa细胞,CCK-8法检测细胞增殖活力,蛋白免疫印迹法检测蛋白表达量。DR-GFP质粒系统检测DNA损伤修复水平,免疫荧光法检测蛋白的空间定位。结果依托泊苷抑制了ZNF451的表达并呈剂量及时间依赖性。30、50、80μmol/L依托泊苷处理,敲低ZNF451后的A549和HeLa细胞增殖活力显著降低(A549:t=27.62、25.61、5.32,P<0.01;HeLa:t=30.77、21.28、4.18,P<0.01)。ZNF451在DNA损伤位点处募集并与γ-H2AX存在胞内共定位和内源性的相互作用,且在30、50、80μmol/L依托泊苷处理的ZNF451敲低细胞中,γ-H2AX的表达水平显著增加(A549:t=6.12、10.67、4.68,P<0.01;HeLa:t=7.94、9.81、15.12,P<0.01)。敲低ZNF451的细胞非同源末端连接(NHEJ)修复效率降低(t=18.60,P<0.05)。在辐射和依托泊苷处理后,ZNF451与P53结合蛋白1(53BP1)和DNA损伤检查点介质1(MDC1)有明显的共定位。结论敲低ZNF451抑制A549和HeLa细胞增殖并诱导DNA损伤水平加剧。ZNF451可以募集至DNA损伤位点,通过与DNA损伤修复因子53BP1/MDC1共定位参与NHEJ修复。展开更多
文摘目的观察60Co照射后体外培养的食管癌细胞株TE-13和ECA109细胞中MDC1和53BP1蛋白表达、ECA109细胞核内MDC1和53BP1斑点数量的变化,探讨放射线对食管癌细胞中相关蛋白表达的影响。方法 Western blot检测照射后细胞中MDC1和53BP1蛋白表达,激光共聚焦显微镜观察放射线照射后食管癌细胞ECA109中MDC1和53BP1细胞核内斑点数量的变化。结果 0、1、2、5、10Gy照射后1、2、24h,TE-13和ECA109细胞MDC1和53BP1蛋白表达未见明显变化(P>0.05);细胞接受不同剂量放射线照射后1h,MDC1和53BP1核内斑点的数量呈现明显剂量依赖性,与对照组(0Gy组)相比,差异具有统计学意义(P<0.05);同时发现4Gy放射线照射后30min(MDC1)～1h(53BP1)细胞核内斑点的数量最多,分别为26.3和36.7个,其后斑点的数量逐渐下降,与对照组(0Gy组)相比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论单纯放射线照射未发现食管癌细胞中MDC1和53BP1蛋白表达发生明显变化,但两种蛋白在细胞核内斑点的数量与剂量和照射后时间存在明显的量效关系。
文摘目的:探讨口腔鳞状细胞癌中MDC1(mediator of DNA damage checkpoint protein 1)蛋白的表达水平及意义。方法:采用免疫组织化学Envision法检测10例正常口腔黏膜、60例口腔鳞状细胞癌中MDC1的表达水平,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果:MDC1蛋白在口腔鳞状细胞癌中表达高于正常口腔黏膜,两者之间差异有统计学意义(P=0.042),而且MDC1蛋白的表达升高与淋巴结转移有关(P=0.033),但与病理分级(P=0.986)、患者的年龄(P=0.723)、性别(P=0.142)无关。结论:MDC1蛋白在口腔鳞状细胞癌中表达增高,提示它可能在肿瘤的发生和发展中具有一定的作用,为进一步理解细胞DNA损伤与肿瘤发生的关系提供了依据。
文摘目的探究SUMO E3连接酶(zinc finger protein 451,ZNF451)介导非小细胞肺癌A549细胞和宫颈癌HeLa细胞DNA损伤修复的功能及机制。方法采用γ射线或依托泊苷处理A549细胞和HeLa细胞,CCK-8法检测细胞增殖活力,蛋白免疫印迹法检测蛋白表达量。DR-GFP质粒系统检测DNA损伤修复水平,免疫荧光法检测蛋白的空间定位。结果依托泊苷抑制了ZNF451的表达并呈剂量及时间依赖性。30、50、80μmol/L依托泊苷处理,敲低ZNF451后的A549和HeLa细胞增殖活力显著降低(A549:t=27.62、25.61、5.32,P<0.01;HeLa:t=30.77、21.28、4.18,P<0.01)。ZNF451在DNA损伤位点处募集并与γ-H2AX存在胞内共定位和内源性的相互作用,且在30、50、80μmol/L依托泊苷处理的ZNF451敲低细胞中,γ-H2AX的表达水平显著增加(A549:t=6.12、10.67、4.68,P<0.01;HeLa:t=7.94、9.81、15.12,P<0.01)。敲低ZNF451的细胞非同源末端连接(NHEJ)修复效率降低(t=18.60,P<0.05)。在辐射和依托泊苷处理后,ZNF451与P53结合蛋白1(53BP1)和DNA损伤检查点介质1(MDC1)有明显的共定位。结论敲低ZNF451抑制A549和HeLa细胞增殖并诱导DNA损伤水平加剧。ZNF451可以募集至DNA损伤位点,通过与DNA损伤修复因子53BP1/MDC1共定位参与NHEJ修复。
