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人MDC1基因shRNA反转录病毒载体的构建及鉴定 被引量：1
1
作者 袁成福 黄秀凝 +5 位作者 程莉 卜友泉 刘涛 刘革力 易发平 宋方洲 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期441-444,共4页
目的建立反转录病毒介导的MDC1基因RNA干扰表达体系并观察其在宫颈癌细胞(HeLa)中对MDC1表达的影响。方法将人MDC1基因的RNA干扰双链DNA片段重组到反转录病毒质粒pSilencer5.1-H1Retro中,构建携带人MDC1基因的RNA干扰反转录病毒载体psiR... 目的建立反转录病毒介导的MDC1基因RNA干扰表达体系并观察其在宫颈癌细胞(HeLa)中对MDC1表达的影响。方法将人MDC1基因的RNA干扰双链DNA片段重组到反转录病毒质粒pSilencer5.1-H1Retro中,构建携带人MDC1基因的RNA干扰反转录病毒载体psiRNA-MDC1。经PT67细胞包装后,产生的重组反转录病毒感染宫颈癌细胞株HeLa细胞,并用嘌呤霉素筛选稳定的细胞克隆。采用RT-PCR和Western blotting检测细胞中MDC1mRNA和蛋白表达的变化。结果重组psiRNA-MDC1质粒经测序鉴定正确;重组反转录病毒感染HeLa细胞后用嘌呤霉素筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Western blotting检测人MDC1mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组。结论携带人MDC1基因RNA干扰双链DNA片段的反转录病毒感染HeLa细胞后能明显抑制MDC1mRNA和蛋白表达,为进一步研究MDC1在宫颈癌中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 psiRNA-mdc1反转录病毒载体 mdc1基因 宫颈癌
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抑制MDC1基因蛋白表达对裸鼠食管癌细胞移植瘤大小及放疗敏感程度的影响 被引量：3
2
作者 尤胜 宋歌 +1 位作者 李文瑶 鄂颖 《临床和实验医学杂志》 2019年第6期576-580,共5页
目的分析抑制MDC1基因蛋白表达对裸鼠食管癌细胞移植瘤大小及放疗敏感程度的影响。方法取54只SPF级BALB/C雄性裸鼠,构建食管癌动物模型。通过MDC1 mRNA序列,对有效的干扰序列与阴性对照序列进行设计并合成,且与载体p SIH1-H1-cop GFP生... 目的分析抑制MDC1基因蛋白表达对裸鼠食管癌细胞移植瘤大小及放疗敏感程度的影响。方法取54只SPF级BALB/C雄性裸鼠,构建食管癌动物模型。通过MDC1 mRNA序列,对有效的干扰序列与阴性对照序列进行设计并合成,且与载体p SIH1-H1-cop GFP生成重组质粒。裸鼠随机分为6组,分别为空白对照组(Eca109细胞未进行任何处理)、阴性转染组(转染阴性Eca109细胞)、单一照射组(Eca109细胞仅进行放射线照射)、阳性转染组(转染阳性ECA09细胞)、阴性转染+照射组(转染阴性Eca109细胞联合放射线照射)、阳性转染+照射组(转染阳性ECA09细胞联合放射线照射),每组各9只。采用蛋白印迹法与实时荧光定量PCR法对MDC1蛋白及mRNA表达量进行检测,取MDC1阳性转染Eca109细胞、阴性转染的Eca109细胞,分别将其接种于裸鼠。记录各组裸鼠移植瘤照射后1周、2周、3周、4周的体积变化情况,并用流式细胞仪对裸鼠移植瘤组织中细胞周期分布及细胞凋亡情况进行检测,且根据蛋白印迹法对各组裸鼠移植瘤组织中CHK2、CHK2-T68、CHK1表达情况进行检测,并将所得数据纳入统计学分析。结果p MDC1-shRNA质粒成功构建,且Eca109细胞得以转染,取得MDC1稳定转染的Eca109细胞。接种的裸鼠均成活,且于接种后7 d左右裸鼠爪下移植瘤形成。经15 Gy照射后,单一照射组、阴性转染+照射组裸鼠移植瘤生长速度较空白对照组明显减缓(P <0. 05),阳性转染+照射组裸鼠移植瘤生长速度较其它各组均明显减缓(P <0. 05),生长抑制率明显增高(P <0. 05)。照射前,各组裸鼠移植瘤体积的比较,并无显著差异(P> 0. 05);照射后1周、2周、3周、4周,空白对照组裸鼠移植瘤增长较明显,阳性转染+照射组裸鼠移植瘤增长较缓慢,与单一照射组、阴性转染+照射组裸鼠移植瘤体积明显缩小(P <0. 05)。各组裸鼠移植瘤组织中细胞周期分布及细胞凋亡率的比较,并无显著差异(P> 0. 05)。与对照组、单一照射组比较,阳性转染+照射组裸鼠移植瘤组织中CHK2-T68磷酸化水平显著下降(P <0. 05),而CHK2与CHK1蛋白表达水平较接近(P> 0. 05)。结论 RNA干扰下调MDC1基因蛋白表达具有提高裸鼠食管癌细胞放疗敏感程度的作用,主要体现在阻滞放射线照射后裸鼠移植瘤的肿瘤体积增长方面。 展开更多
关键词 裸鼠 食管癌 移植瘤 mdc1基因 放疗
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RNA干扰MDC1基因对食管癌细胞X线照后细胞周期及相关蛋白表达影响 被引量：9
3
作者 刘志坤 祝淑钗 +2 位作者 苏景伟 李娟 沈文斌 《中华放射肿瘤学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第6期708-713,共6页
目的：利用RNA干扰技术降低食管癌细胞ECA109中MDC1基因表达，观察照射后细胞周期和放射敏感性变化并探讨相关机制。方法针对MDC1mRNA序列设计合成3对有效干扰序列和阴性对照序列，与载体pSIH1？H1？copGFP形成重组质粒，RT？PCR和蛋白... 目的：利用RNA干扰技术降低食管癌细胞ECA109中MDC1基因表达，观察照射后细胞周期和放射敏感性变化并探讨相关机制。方法针对MDC1mRNA序列设计合成3对有效干扰序列和阴性对照序列，与载体pSIH1？H1？copGFP形成重组质粒，RT？PCR和蛋白印迹法测定MDC1mRNA和蛋白水平表达。克隆形成实验检测细胞放射敏感性，流式细胞术检测细胞周期，蛋白印迹法检测CHK1、CHK2蛋白表达，激光共聚焦显微镜观察细胞核内MDC1斑点数量。单因素方差分析组间差别。结果成功构建 pMDC1？shRNA 质粒并感染 ECA109细胞，获得稳定转染细胞 ECA109M。ECA109M细胞MDC1mRNA、蛋白表达水平低于ECA109N、ECA109细胞（ P＝0．032、P＝0．041）。5 Gy照射后 ECA109M 细胞 G2＋M 期比例低于 ECA109N、ECA109（P＝0．026）。5 Gy 照射后 ECA109、ECA109N、ECA109M细胞中CHK1和CHK2蛋白表达相近（P＝0．345和P＝0．451），ECA109M 细胞CHK2T68蛋白表达低于ECA109、ECA109N细胞（ P＝0．012）。 ECA109细胞D0值为3．06 Gy，SF2值为0．91；ECA109N、ECA109M细胞的D0值分别为2．90、1．88 Gy；SF2值分别为0．89、0．84（ P＝0．021；P＝0．037）。结论 RNA干扰降低MDC1蛋白表达后可以降低细胞周期相关蛋白的表达，解除细胞周期阻滞，增强食管癌细胞ECA109的放射敏感性。 展开更多
关键词 食管癌细胞 RNA干扰 mdc1基因 细胞周期相关蛋白 放射敏感性 mdc1
原文传递
慢病毒介导的RNAi沉默食管癌Eca109细胞MDC1基因表达对裸鼠移植瘤放射敏感性的影响 被引量：1
4
作者 刘志坤 祝淑钗 +2 位作者 苏景伟 李娟 沈文斌 《中华放射肿瘤学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第7期753-758,共6页
目的 研究抑制MDC1基因的蛋白表达对裸鼠移植瘤的影响,观察裸鼠肿瘤病理组织学和细胞生物学特征的变化。方法 根据MDC1 mRNA序列,设计合成3对有效的干扰序列和阴性对照序列,并与载体pSIH1-H1-copGFP形成重组质粒,RT-PCR和蛋白印迹法测定... 目的 研究抑制MDC1基因的蛋白表达对裸鼠移植瘤的影响,观察裸鼠肿瘤病理组织学和细胞生物学特征的变化。方法 根据MDC1 mRNA序列,设计合成3对有效的干扰序列和阴性对照序列,并与载体pSIH1-H1-copGFP形成重组质粒,RT-PCR和蛋白印迹法测定MDC1 mRNA和蛋白表达水平,筛选出阴性转染组（ECA109-N）、MDC1转染组（ECA109-M）细胞,将其接种裸鼠分为ECA109-M、ECA109-N、ECA109组,上述各组又分为^60Coγ射线照射组和未照射组。观察各组裸鼠移植瘤照射后体积变化,蛋白印迹法检测移植瘤组织中CHK1、CHK2、CHK2T68表达水平,流式细胞仪分析裸鼠肿瘤组织中细胞周期分布和细胞凋亡情况。多组样本均数间的比较采用方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果 成功构建pMDC1-shRNA质粒并转染ECA109细胞,获得稳定转染细胞ECA109-M。所有接种裸鼠均成活并在接种后1周左右可见裸鼠爪下形成移植瘤,各组之间肿瘤大小相近（P〉0.05）。15 Gy照射后单纯照射组和空载照射组裸鼠的肿瘤生长速度慢于未照射组（P〈0.05）,其中MDC1转染联合照射组较阴性对照组和空白组肿瘤相对生长速率降低（P〈0.05）,生长抑制率升高（P〈0.05）。MDC1转染联合照射组q值为1.36。MDC1转染联合照射组裸鼠体内CHK1和CHK2的蛋白表达水平相近（P〉0.05）,但CHK2T68磷酸化水平明显降低（P〈0.05）,各组裸鼠肿瘤组织中细胞周期分布和凋亡细胞比例也相近（P〉0.05）。结论 RNA干扰降低MDC1蛋白表达后可有效增强细胞的放射敏感性,表现为抑制了^60Coγ射线照射后裸鼠移植瘤的生长速度。 展开更多
关键词 RNA干扰 放射敏感性 mdc1基因 裸鼠移植瘤 ECA109细胞 肿瘤生长延迟
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顺铂联合唑来膦酸对肺癌A549细胞增殖的影响及其机制 被引量：4
5
作者 茆勇 马凤锦 +3 位作者 黄朝晖 许林 游庆军 华东 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1939-1940,共2页
目的观察顺铂联合唑来膦酸对肺癌A-549细胞增殖的影响并探讨其作用机制。方法以噻唑蓝（MTT）比色法观察顺铂联合唑来膦酸对A549细胞增殖的影响，以Annexin-V／PI双染法检测细胞凋亡，逆转录一聚合酶链反应（RT—PcR）检测DNA损伤检查... 目的观察顺铂联合唑来膦酸对肺癌A-549细胞增殖的影响并探讨其作用机制。方法以噻唑蓝（MTT）比色法观察顺铂联合唑来膦酸对A549细胞增殖的影响，以Annexin-V／PI双染法检测细胞凋亡，逆转录一聚合酶链反应（RT—PcR）检测DNA损伤检查点蛋白调节因子1（MDCl）mRNA的表达。结果顺铂联合唑来膦酸对A549细胞增殖的抑制率（39．16±4．94）％高于顺铂（16．87±2．50）％、唑来膦酸（19．66±4．57）％；联合用药诱导A549细胞的凋亡率（32．30±0．50）％较顺铂（23．90±2．46）％、唑来膦酸（18．87±3．04）％上升；联合用药后A549细胞MDC1 mRNA的相对表达水平（0．134±0．037）较顺铂（0．356±0．033）、唑来膦酸（0．208±0.040）下降，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论顺铂、唑来膦酸可抑制肺癌A549细胞的增殖，诱导其凋亡；顺铂联合唑来膦酸抑制A549细胞的增殖具有协同作用；其协同作用可能与下调MDC1 mRNA表达有关。 展开更多
关键词 肺肿瘤 顺铂 唑来膦酸 A549细胞 mdc1基因
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