MDPC-23细胞内Smad信号途径在转化生长因子β1调控Smad7基因转录中的作用 被引量：2

1

作者 何文喜 牛忠英 +3 位作者 赵守亮 臧晓霞 高杰 李萍 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2005年第2期143-146,共4页

目的:研究成牙本质细胞系M DPC-23内Sm ad信号途径在转化生长因子β1(transform ing growth factor-β1,TGF-β1)调控Sm ad7基因转录调控中的作用,从基因转录水平探讨成牙本质细胞内TGF-β调控Sm ad7基因表达的分子机制。方法:培养M DPC... 目的:研究成牙本质细胞系M DPC-23内Sm ad信号途径在转化生长因子β1(transform ing growth factor-β1,TGF-β1)调控Sm ad7基因转录调控中的作用,从基因转录水平探讨成牙本质细胞内TGF-β调控Sm ad7基因表达的分子机制。方法:培养M DPC-23细胞,通过瞬时共转染和报告基因检测方法观察Sm ad蛋白分子对Sm ad7启动子活性的影响,实验数据采用单因素方差分析。结果:当Sm ad7启动子(-408bp至+112bp)荧光素酶活性载体表达在M DPC-23细胞时,其基础启动子活性被TGF-β1显著诱导增加,而骨形成蛋白2(bone m orphogenetic protein-2,BM P-2)对其活性无明显影响。单独过表达Sm ad1、2、4、5对Sm ad7启动子活性无明显影响。Sm ad3过表达显著增强Sm ad7启动子活性,而Sm ad3与Sm ad4共转染进一步增强了Sm ad3的作用。过表达Sm ad3突变型载体或Sm ad3反义cDNA(AS-Sm ad3)均显著抑制TGF-β1对Sm ad7启动子活性的诱导作用。结论:在成牙本质细胞系M DPC-23内,TGF-β通过Sm ad3与Sm ad4协同调控Sm ad7基因转录。 展开更多

关键词 mdpc-23 SMAD7 转化生长因子Β1 SMAD3

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TGF-β1诱导小鼠成牙本质细胞系MDPC-23细胞凋亡 被引量：1

2

作者 何文喜 牛忠英 +2 位作者 赵守亮 高杰 李萍 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期515-518,共4页

目的:研究转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)是否诱导成牙本质细胞系MDPC23细胞凋亡。方法:培养MDPC23细胞,用不同浓度的TGFβ1刺激培养48h后,分别用3种检测细胞凋亡的方法,包括膜联蛋白V(AnnexinV)和碘化丙啶(propi... 目的:研究转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)是否诱导成牙本质细胞系MDPC23细胞凋亡。方法:培养MDPC23细胞,用不同浓度的TGFβ1刺激培养48h后,分别用3种检测细胞凋亡的方法,包括膜联蛋白V(AnnexinV)和碘化丙啶(propidiumiodide,PI)双染色法、细胞凋亡的酶联免疫分析法、以及DNA琼脂糖凝胶电泳法,检测MDPC23细胞凋亡情况。结果:TGFβ1能诱导MDPC23细胞凋亡,且呈剂量依赖性。 展开更多

关键词 转化生长因子Β mdpc-23 细胞凋亡 细胞培养

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Smads蛋白在成牙本质细胞系MDPC-23中的表达及功能 被引量：1

3

作者 何文喜 牛忠英 +2 位作者 赵守亮 高杰 李萍 《口腔医学》 CAS 2005年第4期193-195,共3页

目的研究Smads蛋白在成牙本质细胞系MDPC-23作为转化生长因子(TGF)β信号分子的作用。方法常规条件下培养MDPC-23细胞,在TGF-β1刺激培养1h后,观察细胞内Smad分子的定位变化。将Smads真核表达载体分别与报告基因载体p3TP-Lux瞬时共转染... 目的研究Smads蛋白在成牙本质细胞系MDPC-23作为转化生长因子(TGF)β信号分子的作用。方法常规条件下培养MDPC-23细胞,在TGF-β1刺激培养1h后,观察细胞内Smad分子的定位变化。将Smads真核表达载体分别与报告基因载体p3TP-Lux瞬时共转染至MDPC-23,在TGF-β1刺激培养24h后,裂解细胞,用双荧光素酶报告基因检测系统检测细胞裂解液中的荧光素酶活性。结果MDPC-23细胞表达Smad2和Smad3蛋白分子,主要定位于细胞质,在TGF-β1刺激1h后,Smad2和Smad3从胞质向胞核转位聚集。TGF-β1可诱导p3TP-Lux基础启动子活性,约增加13倍。过表达野生型Smad3蛋白可促进TGF-β1对p3TP-Lux启动子活性的诱导,但是过表达Smad3突变体抑制TGF-β1对p3TP-Lux启动子活性的诱导。和Smad3作用相比,过表达Smad2野生型或突变型蛋白对TGF-β1诱导p3TP-Lux启动子活性无明显影响。结论在成牙本质细胞系MDPC-23内,Smad信号途径存在并参与介导TGF-β1诱导的转录调控。 展开更多

关键词 mdpc-23 SMADS 转化生长因子Β1 转录调控

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成牙本质细胞系MDPC-23的生物学特性

4

作者 何文喜 牛忠英 +2 位作者 赵守亮 臧晓霞 高杰 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2004年第2期113-115,共3页

目的 :观察成牙本质细胞系MDPC - 2 3的生物学特性。方法 :细胞培养 ,细胞计数和逆转录多聚酶链反应。结果 :MDPC - 2 3为上皮样细胞形态 ,有多个细胞膜突起 ,易形成细胞结节 ,细胞倍增时间少于 2 4h。在mRNA水平证实MDPC - 2 3表达Ⅰ... 目的 :观察成牙本质细胞系MDPC - 2 3的生物学特性。方法 :细胞培养 ,细胞计数和逆转录多聚酶链反应。结果 :MDPC - 2 3为上皮样细胞形态 ,有多个细胞膜突起 ,易形成细胞结节 ,细胞倍增时间少于 2 4h。在mRNA水平证实MDPC - 2 3表达Ⅰ型原胶原a2、碱性磷酸酶和牙本质涎磷蛋白。结论 :MDPC - 2 展开更多

关键词 成牙本质细胞 mdpc-23细胞 生物学特性 碱性磷酸酶 细胞培养 逆转录多聚酶链反应法

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TGF-β1对MDPC-23细胞增殖和细胞周期的影响

5

作者 何文喜 牛忠英 +2 位作者 赵守亮 张进 高杰 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2003年第6期433-435,共3页

目的 :研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor- β1,TGF - β1)对成牙本质细胞系MDPC - 2 3增殖和细胞周期的影响。方法 :细胞培养 ,MTT比色测定法和流式细胞仪 (flowcytometry ,FCM)分析技术。结果 :TGF - β1能明显抑制MDPC ... 目的 :研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor- β1,TGF - β1)对成牙本质细胞系MDPC - 2 3增殖和细胞周期的影响。方法 :细胞培养 ,MTT比色测定法和流式细胞仪 (flowcytometry ,FCM)分析技术。结果 :TGF - β1能明显抑制MDPC - 2 3细胞增殖 ,无剂量依赖性 ,但呈时间依赖性 ;FCM结果显示 ,TGF - β1作用后 ,MDPC - 2 3细胞G1%升高 ,而S %显著降低 ,反映细胞增殖活性的增殖指数PrI值 (S +G2 M) %增高。结论 :TGF - β1抑制成牙本质细胞系MDPC - 2 展开更多

关键词 TGF-Β1 mdpc-23 细胞增殖 细胞周期 转化生长因子Β1 成牙本质细胞系

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TGF-β1对成牙本质细胞系MDPC-23中Smads mRNA表达的影响

6

作者 何文喜 牛忠英 +3 位作者 赵守亮 臧晓霞 高杰 李萍 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2006年第1期9-12,共4页

目的:研究TGF-β1对成牙本质细胞系MDPC-23细胞中Sm ads mRNA表达的影响,探讨成牙本质细胞内Sm ads分子基因表达调控机制。方法:培养MDPC-23细胞,细胞分为5组,分别用TGF-β1刺激0、0.5 h、1.5 h、4 h、24 h,提取总RNA。用半定量RT-PCR观... 目的:研究TGF-β1对成牙本质细胞系MDPC-23细胞中Sm ads mRNA表达的影响,探讨成牙本质细胞内Sm ads分子基因表达调控机制。方法:培养MDPC-23细胞,细胞分为5组,分别用TGF-β1刺激0、0.5 h、1.5 h、4 h、24 h,提取总RNA。用半定量RT-PCR观察Sm ad 2、Sm ad 3和Sm ad 7 mRNA表达变化。结果:MDPC-23细胞表达Sm ad 2、Sm ad 3和Sm ad 7 mRNA。在TGF-β1作用24 h内,MDPC-23细胞内Sm ad 2 mRNA表达水平无明显变化。在TGF-β1作用4 h后,Sm ad 3 mRNA表达水平下调。Sm ad 7 mRNA水平在TGF-β1作用下1.5 h达到最高峰,以后逐渐下降。结论:在成牙本质细胞内,TGF-β1可能通过不同的方式调控其细胞内信号分子Sm ad 2、Sm ad 3和Sm ad 7的表达,从而使成牙本质细胞对Sm ad介导的TGF-β1信号得到精确调控。 展开更多

关键词 mdpc-23 SMAD 转化生长因子B 调控 基因表达 牙本质

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Smad7在成牙本质细胞系MDPC-23内转化生长因子β信号转导中的作用

7

作者 何文喜 牛忠英 +2 位作者 赵守亮 高杰 李萍 《北京口腔医学》 CAS 2005年第2期76-78,共3页

目的研究Smad7在成牙本质细胞系MDPC23内转化生长因子(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ)信号转导的作用。方法培养MDPC23细胞,免疫组化法观察TGFβ1对MDPC23细胞内Smad7分子定位改变。通过瞬时共转染和报告基因检测方法观察Smad7分子... 目的研究Smad7在成牙本质细胞系MDPC23内转化生长因子(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ)信号转导的作用。方法培养MDPC23细胞,免疫组化法观察TGFβ1对MDPC23细胞内Smad7分子定位改变。通过瞬时共转染和报告基因检测方法观察Smad7分子对TGFβ1调控目的基因转录的影响。结果MDPC23细胞表达Smad7蛋白,主要定位于细胞胞浆,在转化生长因子β1刺激30min后,Smad7从胞核向胞浆转位聚集。TGFβ1显著诱导p3TP Lux基础启动子活性。过表达Smad7完全抑制TGFβ1对p3TP Lux启动子活性的诱导,而过表达Smad7反义cDNA载体则显著促进了TGFβ1对p3TP Lux启动子活性的诱导。结论在成牙本质细胞系MDPC23内,Smad7可能作为一种抑制性Smad分子在拮抗TGFβ1信号转导过程中发挥重要的作用。 展开更多

关键词 mdpc-23 SMAD7 转化生长因子Β1 信号转导

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建立稳定表达Smad蛋白的MDPC-23细胞模型 被引量：1

8

作者 何文喜 牛忠英 +2 位作者 赵守亮 臧晓霞 朱怡玲 《临床口腔医学杂志》 2004年第2期79-81,共3页

建立稳定表达Smad蛋白的MDPC -2 3细胞克隆。方法 :将Smad表达载体转染进MDPC -2 3细胞内 ,通过G418筛选出阳性克隆 ,用Flag抗体进行Westernblot鉴定。 结果 :表达Flag融合蛋白细胞克隆为稳定整合Smad基因的阳性克隆 ,不表达Flag融合蛋... 建立稳定表达Smad蛋白的MDPC -2 3细胞克隆。方法 :将Smad表达载体转染进MDPC -2 3细胞内 ,通过G418筛选出阳性克隆 ,用Flag抗体进行Westernblot鉴定。 结果 :表达Flag融合蛋白细胞克隆为稳定整合Smad基因的阳性克隆 ,不表达Flag融合蛋白细胞克隆为表达空载体的细胞克隆。结论 :获得稳定表达Smad的细胞克隆 。 展开更多

关键词 mdpc-23 转染 细胞克隆 SMAD

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Smad8在成牙本质细胞系MDPC-23内BMP-2信号转导中的作用

9

作者 刘晗 孙叶芳 +1 位作者 李芳 何文喜 《临床口腔医学杂志》 2007年第3期134-136,共3页

目的:观察成牙本质细胞系MDPC-23内Smad8蛋白的表达,以及Smad8蛋白在骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)信号转导中的作用。方法:免疫组化法观察MDPC-23细胞内Smad8蛋白的表达,以及BMP-2和转化生长因子β1(TGF-β1)对MDP... 目的:观察成牙本质细胞系MDPC-23内Smad8蛋白的表达,以及Smad8蛋白在骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)信号转导中的作用。方法:免疫组化法观察MDPC-23细胞内Smad8蛋白的表达,以及BMP-2和转化生长因子β1(TGF-β1)对MDPC-23细胞内Smad8分子定位的改变。结果:MDPC-23细胞的胞浆和胞核均有Smad8表达,在BMP-2刺激1h后,Smad8从胞浆向胞核转位聚集。TGF-β1刺激后无类似现象发生。结论:成牙本质细胞系MDPC-23内存在Smad8的表达,且Smad8可特异性地将BMP-2的信号由胞浆转至胞核,但不能转导TGF-β1信号。 展开更多

关键词 mdpc-23 Smad8 骨形成蛋白-2 信号转导

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TGF-β_1对MDPC-23细胞DPP表达调控的体外研究

10

作者 张敬雷 汪平 吴补领 《临床口腔医学杂志》 2004年第5期267-269,共3页

目的 :研究转化生长因子 β1(TGF -β1)对成牙本质细胞表达DPP的调控作用。方法 :给体外细胞培养的MDPC -2 3成牙本质细胞不同浓度的TGF -β1刺激 ,利用原位杂交的方法观察细胞内DPPmRNA的变化 ,所得结果进行图像分析和统计处理。结果 :... 目的 :研究转化生长因子 β1(TGF -β1)对成牙本质细胞表达DPP的调控作用。方法 :给体外细胞培养的MDPC -2 3成牙本质细胞不同浓度的TGF -β1刺激 ,利用原位杂交的方法观察细胞内DPPmRNA的变化 ,所得结果进行图像分析和统计处理。结果 :TGF -β1刺激前后的成牙本质细胞均表达DPPmRNA ,但刺激后的成牙本质细胞DPPmRNA表达下降 ,不同浓度TGF -β1刺激成牙本质细胞后DPPmRNA表达程度不等。结论 :外源性TGF -β1下调成牙本质细胞表达DPP ,并有浓度差异。 展开更多

关键词 牙本质磷蛋白 mdpc-23细胞 转化生长因子-Β1 细胞培养 原位杂交

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小鼠牙乳头来源MDPC-23细胞自发形成的类破牙细胞鉴定

11

作者 祁文婷 田俊 +2 位作者 李琛 任晶 蒋宏伟 《中华口腔医学研究杂志（电子版）》 CAS 2015年第5期1-5,共5页

目的探寻小鼠牙乳头来源MDPC-23细胞自发形成的体外破牙细胞的培养方法。方法 MDPC-23细胞常规培养6 d,利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法与RANKL诱导RAW264.7细胞形成的破骨细胞相比较;金相显微镜及扫描电镜(SEM)观察牙本质片上细胞... 目的探寻小鼠牙乳头来源MDPC-23细胞自发形成的体外破牙细胞的培养方法。方法 MDPC-23细胞常规培养6 d,利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法与RANKL诱导RAW264.7细胞形成的破骨细胞相比较;金相显微镜及扫描电镜(SEM)观察牙本质片上细胞形态及吸收陷窝形成情况;免疫荧光染色观察丝状肌动蛋白(F-actin)细胞骨架结构;免疫印迹、免疫荧光和(或)ELISA法检测破牙细胞形成相关蛋白RANKL、RANK、TRAF6以及破牙细胞标志蛋白TRAP、组织蛋白酶K(Cathepsin K)的表达情况。Cathepsin K和TRAP蛋白表达的灰度值比较采用两独立样本的t检验进行统计;0、2、4、6 d四个时间点RANKL分泌水平的比较采用方差分析进行统计分析。结果MDPC-23细胞常规培养6 d可自发形成少量TRAP染色阳性的多核巨细胞,其形态有别于RAW 264.7细胞形成的破骨细胞;自发形成的多核巨细胞仅能在牙本质片上形成少量较浅的吸收陷窝;免疫荧光结果显示,自发形成的类破牙细胞具有破牙细胞特征性丝状肌动蛋白环结构;免疫印迹、免疫荧光和(或)ELISA结果表明,MDPC-23细胞体外常规培养下表达RANK、TRAF6蛋白并自分泌RANKL,第0、2、4、6天RANKL分泌水平总体差异有统计学意义(F=5.373,P=0.026),第2天RANKL分泌水平较第0天增加(P=0.007);第6天TRAP及Cathepsin K蛋白表达上调(tTRAP=5.033,PTRAP=0.0024;tCathepsin K=12.95,PCathepsin K=0.0002)。结论 MDPC-23细胞体外常规培养下可自发形成少量吸收能力较弱的TRAP染色阳性的多核巨细胞,具有特征性肌动蛋白环结构,同时能上调破牙细胞特征性蛋白TRAP和Cathepsin K表达,自分泌RANKL并表达RANK、TRAF6蛋白,是与成熟破牙细胞形态、结构及蛋白表达相似的类破牙细胞。 展开更多

关键词 牙根吸收 破牙细胞 mdpc-23细胞 破牙细胞分化

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RNA干涉法观察成纤维细胞生长因子18对成牙本质样细胞涎磷蛋白表达的影响 被引量：2

12

作者 姜永 肖明振 +2 位作者 杨帆 何文喜 范晓敏 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2006年第5期243-245,共3页

目的:通过RNA干涉的方法研究成纤维细胞生长因子18(Fibroblast Growth Factor18,FGF18)对成牙本质样细胞中牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)表达的影响。方法:RNA干涉质粒pH1-siFGF18瞬时转染成牙本质样细胞MDPC-23,RT-... 目的:通过RNA干涉的方法研究成纤维细胞生长因子18(Fibroblast Growth Factor18,FGF18)对成牙本质样细胞中牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)表达的影响。方法:RNA干涉质粒pH1-siFGF18瞬时转染成牙本质样细胞MDPC-23,RT-PCR检测FGF18和DSPP的表达,观察FGF18低表达对DSPP表达的影响。结果:瞬时转染RNA干涉质粒后,MDPC-23细胞内FGF18表达明显减少,与此同时DSPP的表达量也明显减少。结论:FGF18可以调控DSPP的表达,影响成牙本质细胞的分化。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子18 牙本质涎磷蛋白 mdpc-23 RNA干涉 瞬时转染

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脂多糖诱导成牙本质细胞凋亡模型的建立与评价 被引量：1

13

作者 童娟 殷广 +3 位作者 罗颖 王胜朝 尹秋蓉 胡轶 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2013年第11期705-708,712,共5页

目的：建立并评价脂多糖（LPS）诱导的成牙本质细胞（OB）凋亡模型。方法：采用梯度LPS（0、0．1、1、10、100tzg／mL）刺激法诱导小鼠OB细胞系MDPC-23细胞凋亡；分别于诱导后24、48、72、96h各时间点，以MTT法检测细胞增殖活力，流式... 目的：建立并评价脂多糖（LPS）诱导的成牙本质细胞（OB）凋亡模型。方法：采用梯度LPS（0、0．1、1、10、100tzg／mL）刺激法诱导小鼠OB细胞系MDPC-23细胞凋亡；分别于诱导后24、48、72、96h各时间点，以MTT法检测细胞增殖活力，流式细胞术检测细胞凋亡比例，确定合适的诱导浓度和时间后，建立OB细胞凋亡模型，并通过Hoechst染色观察细胞形态和凋亡比例。结果：0．1μg／mL和1μg／mL的LPS作用24h可明显促进MDPC-23细胞增殖，72h后则明显抑制细胞增殖（P〈0．05）；当LPS浓度大于1μg／mL时，对细胞的影响以毒性作用为主。在各个时间点不同浓度的LPS均可诱导MDPC-23细胞凋亡，其中以0．1μg／mL的LPS诱导MDPC-23细胞凋亡的效果较理想。Hoechst染色显示0．1μg／mL LPS可诱导细胞出现典型的凋亡形态学特征，且随着LPS作用时间的延长，凋亡细胞比例逐渐增高（P〈0．05），但96h时有大量细胞死亡。结论：LPS诱导MDPC-23细胞凋亡的合适浓度为0．1μg／mL，合适作用时间为24—72h。 展开更多

关键词 脂多糖(LPS) 成牙本质细胞样细胞系(mdpc-23) 细胞凋亡

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神经生长因子受体介导的黑色素瘤抗原编码基因同源蛋白对牙髓细胞增殖的影响

14

作者 陆梦婷 颜娅楠 +3 位作者 唐凤勤 祁胜财 张旭 徐远志 《口腔医学》 CAS 2016年第12期1057-1064,共8页

目的探索神经生长因子受体介导的黑色素瘤抗原编码基因同源蛋白(NRAGE)对人牙髓细胞(h DPCs)和小鼠成牙本质细胞(MDPC-23)细胞增殖的影响。方法重组慢病毒转染细胞稳定敲除h DPCs和MDPC-23的NRAGE表达,体外组织块法原代培养h DPCs和MDPC... 目的探索神经生长因子受体介导的黑色素瘤抗原编码基因同源蛋白(NRAGE)对人牙髓细胞(h DPCs)和小鼠成牙本质细胞(MDPC-23)细胞增殖的影响。方法重组慢病毒转染细胞稳定敲除h DPCs和MDPC-23的NRAGE表达,体外组织块法原代培养h DPCs和MDPC-23,进而检测NRAGE对h DPCs和MDPC-23的增殖影响。采用CCK-8法分析NRAGE对h DPCs和MDPC-2细胞增殖的影响,流式细胞术分析NRAGE对h DPCs和MDPC-23的细胞周期分布和细胞凋亡影响。免疫荧光法检测NRAGE和NF-κB的表达和定位,分析NF-κB蛋白表达水平,并用IKK抑制剂处理细胞后,分析细胞周期和细胞凋亡。结果重组慢病毒转染后NRAGE的mRNA和蛋白水平下降显着。NRAGE敲减后抑制了h DPCs和MDPC-23的增殖活性和凋亡。NRAGE敲减后显示h DPCs的G0G1期滞留显著,而对MDPC-23没有影响。同时,NRAGE敲减后激活NF-κB信号通路。IKK抑制剂可以抑制NRAGE敲除后对h DPCs和MDPC-23的细胞凋亡的抑制作用。结论 NRAGE敲减后抑制牙髓细胞的增殖活性。NRAGE通过NF-κB信号通路调控h DPCs的细胞周期和凋亡。 展开更多

关键词 NRAGE 人牙髓细胞 mdpc-23 细胞周期 凋亡 NF-ΚB

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小鼠牙本质涎磷蛋白基因启动子的克隆与序列分析

15

作者 何文喜 牛忠英 +2 位作者 赵守亮 金卫林 高杰 《现代口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期183-185,共3页

目的克隆小鼠牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein ,DSPP)基因启动子片段。方法培养MDPC - 2 3细胞,从培养的细胞中提取基因组DNA ,利用设计的上下游引物,进行PCR反应。将扩增得到的DSPP基因启动子片段克隆到pMD18-T载体,酶切鉴定... 目的克隆小鼠牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein ,DSPP)基因启动子片段。方法培养MDPC - 2 3细胞,从培养的细胞中提取基因组DNA ,利用设计的上下游引物,进行PCR反应。将扩增得到的DSPP基因启动子片段克隆到pMD18-T载体,酶切鉴定后,进一步进行DNA序列测定。结果酶切结果表明成功构建重组质粒,序列分析结果与国外报道一致。结论成功克隆获得小鼠DSPP基因的启动子片段。 展开更多

关键词 基因启动子 小鼠 牙本质涎磷蛋白 克隆 培养的细胞 序列分析 重组质粒 酶切 PCR反应 片段

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尼古丁对成牙本质细胞凋亡影响的实验研究 被引量：1

16

作者 郭晓娟 袁杰 +2 位作者 王胜朝 余擎 屈铁军 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2015年第7期400-403,399,共5页

目的：探讨尼古丁刺激对小鼠成牙本质细胞凋亡的影响。方法：将培养的小鼠成牙本质样细胞系MDPC-23分为4组：0、1、10、100μg/m L不同浓度尼古丁处理组,分别进行Hoechst 33258染色观察细胞形态变化,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bc... 目的：探讨尼古丁刺激对小鼠成牙本质细胞凋亡的影响。方法：将培养的小鼠成牙本质样细胞系MDPC-23分为4组：0、1、10、100μg/m L不同浓度尼古丁处理组,分别进行Hoechst 33258染色观察细胞形态变化,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3以及p-JNK等的表达。另设尼古丁和JNK抑制剂SP600125共同作用组,检测Caspase-3表达。结果：0~100μg/m L范围内,随着尼古丁浓度增加,细胞形态逐渐出现凋亡变化,Bcl-2表达下调和Bax、Caspase-3表达上调等趋势均逐渐明显;尼古丁单独作用下p-JNK表达增强,并呈现一定时间依赖性和浓度依赖性;尼古丁和SP600125共同作用下,Caspase-3表达明显降低。结论：尼古丁对小鼠成牙本质细胞有毒性作用,一定程度上可促进细胞的凋亡。 展开更多

关键词 尼古丁 成牙本质样细胞系(mdpc-23) 细胞凋亡

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RNAi对成牙本质细胞表达TRAF6干涉作用 被引量：2

17

作者 李霞 肖明振 +2 位作者 余擎 李卫星 王翔宇 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期496-497,共2页

目的采用针对小鼠肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的siRNA真核表达载体,探讨其对小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23中表达TRAF6的干涉作用。方法将构建成功的2个针对TRAF6基因的siRNA真核表达载体(pSUPER-T和pSUPER-2T),通过脂质体介导... 目的采用针对小鼠肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的siRNA真核表达载体,探讨其对小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23中表达TRAF6的干涉作用。方法将构建成功的2个针对TRAF6基因的siRNA真核表达载体(pSUPER-T和pSUPER-2T),通过脂质体介导瞬时转染MDPC-23细胞,RT-RCR和Western blot法检测其对转染后细胞中TRAF6的mRNA和蛋白表达干涉效果。结果 pSUPER-T和pSUPER-2T转染MDPC-23细胞后,RT-RCR法显示2组TRAF6 mRNA表达下调、Western blot结果表明2组TRAF6蛋白表达水平降低,其中pSUPER-2T转染组抑制TRAF6表达作用较强。结论针对TRAF6的siRNA真核表达载体,在MDPC-23细胞中有效发挥了TRAF6表达干涉作用。 展开更多

关键词 RNA干涉 肿瘤坏死因子受体相关因子6 mdpc-23细胞

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肌切蛋白adseverin对小鼠成牙本质细胞增殖、迁移及矿化作用的影响

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作者 郭冰 蒋宏伟 凌均棨 《中华口腔医学研究杂志（电子版）》 CAS 2017年第3期129-135,共7页

目的通过构建沉默肌切蛋白(adseverin)的成牙本质细胞模型,探索肌切蛋白对成牙本质细胞MDPC-23增殖、迁移及矿化能力的影响。方法构建沉默表达肌切蛋白的慢病毒载体质粒,转染MDPC-23细胞,获得肌切蛋白沉默表达的稳定转染细胞模型。空载... 目的通过构建沉默肌切蛋白(adseverin)的成牙本质细胞模型,探索肌切蛋白对成牙本质细胞MDPC-23增殖、迁移及矿化能力的影响。方法构建沉默表达肌切蛋白的慢病毒载体质粒,转染MDPC-23细胞,获得肌切蛋白沉默表达的稳定转染细胞模型。空载体转染细胞及未转染细胞作为对照组,蛋白印迹法(Western blot)检测肌切蛋白干扰效率,细胞计数(CCK-8)法检测细胞的增殖情况,Transwell小室实验观察细胞迁移率,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒及茜素红染色检测细胞矿化差异。采用单因素方差分析对数据进行统计分析,LSD-t检验进行两两比较。结果成功构建肌切蛋白沉默表达的细胞模型,CCK-8结果显示沉默肌切蛋白后,MDPC-23细胞的增殖率在48和72 h时分别下降26.8%(F_(48h)=11.025,P=0.01)和26.5%(F_(72h)=86.205,P<0.001);Transwell结果显示,沉默肌切蛋白后,MDPC-23细胞迁移能力降低61.2%(F=6.005,P=0.008);干扰肌切蛋白后MDPC-23细胞ALP活性明显升高,约为空载体组的4倍(ALP_(干扰组)=568.43 U/gprot,ALP_(空载体组)=142.56 U/gprot,ALP_(空转染组)=118.16 U/gprot;F=49.002,P<0.001),矿化结节形成量高于对照组。结论肌切蛋白可能参与成牙本质细胞MDPC-23的增殖、迁移及矿化过程。 展开更多

关键词 肌切蛋白 mdpc-23 细胞增殖 细胞运动 矿化

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FGF18对成牙本质细胞样细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响 被引量：5

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作者 姜永 杨帆 +2 位作者 肖明振 何文喜 范晓敏 《临床口腔医学杂志》 2006年第5期269-271,共3页

目的:研究FGF18对成牙本质细胞样细胞MDPC-23增殖和ALPase活性的影响。方法:用MTT法和酶动力法分别检测MDPC-23细胞经不同浓度的FGF18刺激48 h和72 h后细胞增殖和ALPase活性的变化。结果:在一定范围内,FGF18显著促进MDPC-23细胞的增殖和... 目的:研究FGF18对成牙本质细胞样细胞MDPC-23增殖和ALPase活性的影响。方法:用MTT法和酶动力法分别检测MDPC-23细胞经不同浓度的FGF18刺激48 h和72 h后细胞增殖和ALPase活性的变化。结果:在一定范围内,FGF18显著促进MDPC-23细胞的增殖和ALPase活性,随着浓度的增高和时间的延长,作用更加明显。结论:FGF18可能促进小鼠成牙本质细胞的增殖和分化。 展开更多

关键词 FGF18 mdpc-23 细胞增殖 ALPase活性

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