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RGD修饰的腺病毒介导LIF和IL-24双基因共表达对MEG01白血病细胞的抑制作用 被引量：1
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作者 李帅 郁心 +4 位作者 何峰 朱霞霞 杨吉成 盛伟华 缪竞诚 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2015年第5期385-392,共8页
目的利用RGD修饰改造白血病抑制因子(LIF)和白细胞介素-24(IL-24)双基因共表达腺病毒载体,以提高感染效率,探讨其对人白血病MEG01细胞的抑制作用。方法同源重组法构建RGD修饰的表达LIF、IL-24的腺病毒载体Ad.RGD-LIF、Ad.RGD-IL24和Ad.R... 目的利用RGD修饰改造白血病抑制因子(LIF)和白细胞介素-24(IL-24)双基因共表达腺病毒载体,以提高感染效率,探讨其对人白血病MEG01细胞的抑制作用。方法同源重组法构建RGD修饰的表达LIF、IL-24的腺病毒载体Ad.RGD-LIF、Ad.RGD-IL24和Ad.RGD-LIF-IL24。在QBI-293A细胞中扩增腺病毒,检测病毒滴度。流式细胞仪检测各组腺病毒载体对MEG01细胞的感染效率。应用Western blotting检测目的基因LIF、IL-24在MEG01细胞中的表达。CCK-8法检测各组腺病毒载体Ad.RGD-LIF、Ad.RGD-IL24、Ad.RGD-LIF-IL24感染MEG01细胞后对细胞增殖的影响。PE-Anexin V/7-AAD双染后,经流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。PI染色后,流式细胞仪检测目的基因表达对MEG01细胞周期的影响。实时定量PCR检测细胞周期调控基因p21和E2F1的表达。结果成功构建了RGD修饰的腺病毒载体Ad.RGD-LIF、Ad.RGD-IL24和Ad.RGD-LIF-IL24。RGD修饰后的腺病毒能够显著增强对MEG01细胞的感染效率。CCK-8检测显示,与PBS组比较,携带单个目的基因的腺病毒载体Ad.RGD-LIF和Ad.RGD-IL24在第5 d对细胞生长的抑制率分别为29.2%和31.5%,均能够显著抑制MEG01细胞的生长;携带Ad.RGD-LIF-IL24双基因组的抑制率达42.5%,优于单基因组,差异均有统计学意义(P<0.05)。凋亡检测显示,与PBS组(4.5%)和空病毒组Ad.RGD(7.4%)比较,Ad.RGD-IL24(20.9%)、Ad.RGD-LIF(17.8%)均能够显著促进细胞凋亡,且Ad.RGD-LIF-IL24双基因组(29.7%)的促凋亡作用更强。Western blotting显示,LIF和IL-24能够提高促凋亡蛋白p53、Bax的表达,同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达。目的基因LIF、IL-24过表达会影响MEG01细胞周期的进程,使细胞阻滞在G2期。实时定量PCR显示,LIF和IL-24能够上调细胞周期调控基因p21的转录,抑制E2F1的表达。结论 LIF和IL-24过表达的腺病毒载体在体外通过调节p53、Bax、Bcl-xl的表达,影响白血病细胞MEG01的生长,诱导其凋亡,并通过调控p21、E2F1的水平影响细胞周期的进程。 展开更多
关键词 腺病毒 白血病抑制因子(LIF) 白细胞介素-24(IL-24) meg01细胞 生长抑制 凋亡
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Sema7a促进内皮细胞与巨核细胞粘附的机制研究
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作者 赖冬娣 董涵 +1 位作者 魏亚明 苑召虎 《临床输血与检验》 CAS 2024年第3期299-308,共10页
目的 本研究旨在探讨Sema7a蛋白促进内皮细胞和巨核细胞之间粘附的分子机制。方法 通过使用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs)和巨核细胞系MEG01在体外模拟肺部血管和巨核细胞的粘附,使用免疫荧光... 目的 本研究旨在探讨Sema7a蛋白促进内皮细胞和巨核细胞之间粘附的分子机制。方法 通过使用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs)和巨核细胞系MEG01在体外模拟肺部血管和巨核细胞的粘附,使用免疫荧光、流式细胞术、4D非标记定量蛋白质组学分析等技术,检测内皮细胞与巨核细胞之间的粘附、HUVECs表面的Sema7a蛋白结合情况,及与Sema7a蛋白结合后的HUVECs蛋白质表达差异及相关生物学信息的变化,预测潜在的信号通路。并利用免疫荧光技术检测HUVECs的细胞间粘附分子1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)和血管黏附分子1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)的表达。结果 Sema7a蛋白与HUVECs结合后,激活了HUVECs细胞MAPK信号通路,并上调了HVUECs的黏附分子ICAM-1和VCAM-1的表达,促进了巨核细胞MEG01与HUVECs的粘附。结论 Sema7a蛋白通过上调内皮细胞黏附分子ICAM-1和VCMA-1的表达,促进了巨核细胞MEG01与内皮细胞HUVECs间的粘附。 展开更多
关键词 Sema7a 脐静脉内皮细胞 meg01 ICAM-1 VCAM-1
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