背景与目的肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)是肺癌的一种主要亚型,其治疗与诊断依然是目前的研究热点。靶向Xklp2靶蛋白(targeting protein for Xenopus kinesin-like protein 2,TPX2)在多种癌细胞中高表达,可能与LUAD的发生发展相关...背景与目的肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)是肺癌的一种主要亚型,其治疗与诊断依然是目前的研究热点。靶向Xklp2靶蛋白(targeting protein for Xenopus kinesin-like protein 2,TPX2)在多种癌细胞中高表达,可能与LUAD的发生发展相关。本研究旨在探究TPX2对LUAD细胞恶性进程的影响以及调控机制。方法通过生物信息学分析技术,对癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中LUAD组织中基因TPX2的表达情况进行分析。实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测人肺正常细胞系和人LUAD细胞系中TPX2和miR-218-5p的表达水平。蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞系中TPX2蛋白表达以及其对p53信号通路关键蛋白表达的影响。使用生物信息学预测并通过双荧光素酶报告基因检测验证TPX2与miR-218-5p的关系,细胞活力检测(cell counting kit-8,CCK-8)、细胞克隆形成、细胞划痕、Transwell实验、流式细胞术检测miR-218-5p和TPX2对LUAD细胞功能的影响。结果LUAD细胞中TPX2显著高表达,敲低TPX2可以抑制LUAD细胞的增殖、迁移、侵袭,促进凋亡并产生G_(2)/M期阻滞,并且促进p53信号通路关键蛋白的表达。miR-218-5p是TPX2的上游调控因子,可以抑制其表达。过表达miR-218-5p能消除TPX2高表达导致的恶性发展,抑制LUAD细胞的增殖、迁移等恶性进程以及促进p53信号通路。结论miR-218-5p靶向抑制TPX2表达,并通过p53发挥抑制LUAD细胞恶性发展的作用。展开更多
目的:研究微小RNA-218(microRNA-218,miR-218)靶向B细胞特性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(B-cell specific moloney leukemia virus insertion site 1,Bmi-1)抑制肺腺癌细胞增殖的作用及机制。方法:培养肺腺癌细胞株A549,分别转染miR-...目的:研究微小RNA-218(microRNA-218,miR-218)靶向B细胞特性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(B-cell specific moloney leukemia virus insertion site 1,Bmi-1)抑制肺腺癌细胞增殖的作用及机制。方法:培养肺腺癌细胞株A549,分别转染miR-阴性对照(NC)核苷酸序列、miR-218核苷酸序列、NC质粒、Bmi-1质粒,采用平板克隆形成实验、CCK8实验检测细胞增殖水平,采用荧光定量PCR实验检测miR-218的表达,采用Western blot实验检测Bmi-1的表达,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-218与Bmi-1的靶向关系。建立移植瘤裸鼠,慢病毒转染miR-NC或miR-218核苷酸序列,检测移植瘤体积、质量及Bmi-1的表达。结果:与转染miR-NC核苷酸序列的miR-NC组比较,转染miR-218核苷酸序列的miR-218组A549细胞miR-218表达水平、增殖抑制率增加,克隆形成率、Bmi-1表达水平及野生型Bmi-1质粒的荧光素酶活性降低(P<0.05);与共转染miR-218核苷酸序列及NC质粒的miR-218+NC质粒组比较,共转染miR-218核苷酸序列及Bmi-1质粒的miR-218+Bmi-1质粒组A549细胞增殖抑制率降低,克隆形成率、Bmi-1表达水平增加(P<0.05);与慢病毒转染miR-NC核苷酸序列的miR-NC组比较,慢病毒转染miR-218核苷酸序列的miR-218组裸鼠移植瘤体积、质量及Bmi-1表达水平均降低(P<0.05)。结论:miR-218靶向下调Bmi-1表达并抑制肺腺癌细胞增殖。展开更多
文摘背景与目的肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)是肺癌的一种主要亚型,其治疗与诊断依然是目前的研究热点。靶向Xklp2靶蛋白(targeting protein for Xenopus kinesin-like protein 2,TPX2)在多种癌细胞中高表达,可能与LUAD的发生发展相关。本研究旨在探究TPX2对LUAD细胞恶性进程的影响以及调控机制。方法通过生物信息学分析技术,对癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中LUAD组织中基因TPX2的表达情况进行分析。实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测人肺正常细胞系和人LUAD细胞系中TPX2和miR-218-5p的表达水平。蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞系中TPX2蛋白表达以及其对p53信号通路关键蛋白表达的影响。使用生物信息学预测并通过双荧光素酶报告基因检测验证TPX2与miR-218-5p的关系,细胞活力检测(cell counting kit-8,CCK-8)、细胞克隆形成、细胞划痕、Transwell实验、流式细胞术检测miR-218-5p和TPX2对LUAD细胞功能的影响。结果LUAD细胞中TPX2显著高表达,敲低TPX2可以抑制LUAD细胞的增殖、迁移、侵袭,促进凋亡并产生G_(2)/M期阻滞,并且促进p53信号通路关键蛋白的表达。miR-218-5p是TPX2的上游调控因子,可以抑制其表达。过表达miR-218-5p能消除TPX2高表达导致的恶性发展,抑制LUAD细胞的增殖、迁移等恶性进程以及促进p53信号通路。结论miR-218-5p靶向抑制TPX2表达,并通过p53发挥抑制LUAD细胞恶性发展的作用。
文摘目的:研究微小RNA-218(microRNA-218,miR-218)靶向B细胞特性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(B-cell specific moloney leukemia virus insertion site 1,Bmi-1)抑制肺腺癌细胞增殖的作用及机制。方法:培养肺腺癌细胞株A549,分别转染miR-阴性对照(NC)核苷酸序列、miR-218核苷酸序列、NC质粒、Bmi-1质粒,采用平板克隆形成实验、CCK8实验检测细胞增殖水平,采用荧光定量PCR实验检测miR-218的表达,采用Western blot实验检测Bmi-1的表达,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-218与Bmi-1的靶向关系。建立移植瘤裸鼠,慢病毒转染miR-NC或miR-218核苷酸序列,检测移植瘤体积、质量及Bmi-1的表达。结果:与转染miR-NC核苷酸序列的miR-NC组比较,转染miR-218核苷酸序列的miR-218组A549细胞miR-218表达水平、增殖抑制率增加,克隆形成率、Bmi-1表达水平及野生型Bmi-1质粒的荧光素酶活性降低(P<0.05);与共转染miR-218核苷酸序列及NC质粒的miR-218+NC质粒组比较,共转染miR-218核苷酸序列及Bmi-1质粒的miR-218+Bmi-1质粒组A549细胞增殖抑制率降低,克隆形成率、Bmi-1表达水平增加(P<0.05);与慢病毒转染miR-NC核苷酸序列的miR-NC组比较,慢病毒转染miR-218核苷酸序列的miR-218组裸鼠移植瘤体积、质量及Bmi-1表达水平均降低(P<0.05)。结论:miR-218靶向下调Bmi-1表达并抑制肺腺癌细胞增殖。
