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黎药海南地不容氧化克班宁对人乳腺癌MCF-7细胞微管位点和微管蛋白的调控机制研究
1
作者 肖迪 闫彩凤 +3 位作者 于晶涵 许声江 王先正 王正文 《海南医学院学报》 2023年第15期1121-1127,共7页
目的:本论文深入探究黎药海南地不容抗乳腺癌活性化合物氧化克班宁对微管网络的破坏能力,研究氧化克班宁在分子层面和细胞层面对微管网络稳态的影响。方法:首先采用EBI位点竞争法和分子对接来确定氧化克班宁对微管位点的占据力;其次,采... 目的:本论文深入探究黎药海南地不容抗乳腺癌活性化合物氧化克班宁对微管网络的破坏能力,研究氧化克班宁在分子层面和细胞层面对微管网络稳态的影响。方法:首先采用EBI位点竞争法和分子对接来确定氧化克班宁对微管位点的占据力;其次,采用Western Blot法检测STAT3、PKA1、CAMK4和PKA检测氧化克班宁对微管蛋白的影响。结果:EBI位点竞争法结果显示,EBI与β-微管蛋白加合物比β-微管蛋白出现在分子量更小的区域(ctrl2)。分子对接结果显示,氧化克班宁可以占据微管蛋白的秋水仙碱位点。Western Blot结果显示,低、中、高3个浓度的氧化克班宁或阳性药Taxol作用MCF-7细胞48 h后,显著降低STAT3蛋白表达水平(P<0.01),显著降低PKA1和CAMK4蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),并且可降低PKA蛋白表达水平,与对照组差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:氧化克班宁结合在微管蛋白秋水仙碱位点扰乱微管蛋白聚合,造成MCF-7细胞有丝分裂,从而导致MCF-7细胞死亡。氧化克班宁可通过抑制MCF-7细胞中STAT3、PKA1、CAMK4和PKA蛋白的表达水平,干扰纺锤体形成,最终造成MCF-7细胞有丝分裂灾难。 展开更多
关键词 黎药海南地不容 氧化克班宁 MCF-7细胞 微管位点 微管蛋白
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甲状腺滤泡细胞的自噬活性参与慢性淋巴细胞性甲状腺炎的发病机制 被引量：2
2
作者 李北宁 于娟 《安徽医药》 CAS 2020年第3期560-564,共5页
目的探讨甲状腺滤泡细胞自噬对慢性淋巴细胞性甲状腺炎(CLT)的影响及炎性因子干扰素⁃γ(IFN⁃γ)对甲状腺滤泡细胞自噬参与CLT的作用。方法2018年1—7月,选取新疆喀什地区第二人民医院24例CLT甲状腺切除的病人作为CLT组,并选择同期入院... 目的探讨甲状腺滤泡细胞自噬对慢性淋巴细胞性甲状腺炎(CLT)的影响及炎性因子干扰素⁃γ(IFN⁃γ)对甲状腺滤泡细胞自噬参与CLT的作用。方法2018年1—7月,选取新疆喀什地区第二人民医院24例CLT甲状腺切除的病人作为CLT组,并选择同期入院的24例单纯甲状腺肿(SG)甲状腺切除病人作为SG组;对人甲状腺滤泡细胞分离、培养、鉴定;流式细胞技术检测甲状腺组织中CD3+T细胞占比;放射性免疫法检测甲状腺滤泡细胞三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、甲状腺球蛋白(Tg)的水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测IFN⁃γ、环磷酸腺苷(cAMP)水平;蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白Be⁃cline、微管相关蛋白1轻链3⁃Ⅱ(LC3B⁃Ⅱ)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及不同浓度IFN⁃γ对Becline、LC3B⁃Ⅱ、mTOR蛋白的影响。结果成功分离出人甲状腺滤泡上皮细胞,倒置显微镜下观察,可见人甲状腺滤泡细胞在贴壁之前呈圆形或椭圆形或不规则形状,CLT病人组织切片可见多个淋巴生发中心,大量淋巴细胞浸润,甲状腺滤泡细胞萎缩。SG病人甲状腺组织甲状腺滤泡细胞未见明显炎症浸润。流式细胞分析结果显示,CLT组甲状腺滤泡上皮细胞内浸润的CD3+淋巴细胞数所占百分比(25.76±4.05)%明显高于SG组(10.35±4.21)%,两组间比较差异有统计学意义(n=24,P<0.001)。与SG组比较,CLT组中T3、T4、Tg、INF⁃γ及cAMP水平[甲状腺组织:(6.70±0.32)nmol/L,(44.05±0.39)nmol/L,(0.65±0.01)μg/L,(15.84±1.43)μg/L,(3.680±0.046)μmol/L;血清:(9.89±0.32)nmol/L,(39.25±0.27)nmol/L,(1.86±0.42)μg/L,(16.32±0.31)μg/L,(4.325±0.012)μmol/L]均升高,差异有统计学意义。CLT组织与SG组织相比自噬水平低下,表现为Becline,LC3B⁃Ⅱ蛋白低表达[Becline蛋白:(7.16±0.15);LC3B⁃Ⅱ蛋白:(0.82±0.01)],mTOR蛋白高表达(12.26±0.16)。IFN⁃γ干预后,甲状腺滤泡细胞中自噬蛋白Be⁃cline,mTOR,LC3B⁃Ⅱ被诱导,表现为Becline,LC3B⁃Ⅱ水平高表达[250 U/mL组:(7.80±0.07),(1.51±0.05);500 U/mL组:(8.50±0.10),(1.82±0.04);1000 U/mL:(9.16±0.14),(2.47±0.09)],mTOR水平低表达[250 U/mL组:(12.26±0.16);500 U/mL组:(0.84±0.13);1000 U/mL组:(9.66±0.07)],随着IFN⁃γ浓度的增加,诱导作用愈明显。结论甲状腺滤泡细胞自噬参与CLT的发展,且作用机制可能与炎性因子IFN⁃γ有关。 展开更多
关键词 桥本病 自噬 干扰素⁃γ 三碘甲状腺原氨酸 甲状腺素 甲状腺球蛋白 微管相关蛋白质类 他克莫司结合蛋白质类 甲状腺滤泡细胞
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针刺结合运动训练对脑梗死大鼠学习记忆功能和患侧海马CA3区微管相关蛋白-2表达的影响 被引量：2
3
作者 姜伟 杨敏 +2 位作者 毕研贞 胡可慧 余茜 《中华物理医学与康复杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期484-487,共4页
目的探讨针刺结合运动训练对脑梗死大鼠患侧海马CA3区微管相关蛋白-2（MAP-2）表达的影响及其促进学习记忆功能恢复的可能机制。方法将80只Wistar大鼠分为假手术组（8只）和手术组（72只），后者制成右侧大脑中动脉闭塞（MCAO）模型后... 目的探讨针刺结合运动训练对脑梗死大鼠患侧海马CA3区微管相关蛋白-2（MAP-2）表达的影响及其促进学习记忆功能恢复的可能机制。方法将80只Wistar大鼠分为假手术组（8只）和手术组（72只），后者制成右侧大脑中动脉闭塞（MCAO）模型后再分为模型组、运动训练组、针刺运动训练组，每组24只，于术后第1，3，5周用免疫组化方法检测患侧海马CA3区MAP-2的表达，同时在术后第5周时进行学习记忆能力测评。结果假手术组MAP-2阳性纤维排列整齐，分布密集。梗死后患侧海马CA3区阳性神经元及树突纤维减少。术后1周针刺运动训练组MAP-2阳性纤维稍有增多，与模型组、运动训练组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）；在术后第3周、5周时MAP-2阳性表达明显增多，光密度值高于运动训练组（P〈0．05）和模型组（P〈0．01）。术后第5周针刺运动训练组在Y迷宫分辨学习测试中记忆力明显优于模型组（P〈0．01）和运动训练组（P〈0．05）。结论针刺配合运动训练可明显促进脑梗死后患侧海马CA3区树突结构可塑性变化，且MAP-2表达增加与学习记忆功能恢复成正相关。 展开更多
关键词 脑梗死 学习记忆 针刺 运动训练 微管相关蛋白-2 海马
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丙戊酸钠诱导人结肠癌细胞HT-29自噬及其机制研究 被引量：2
4
作者 王洋 师水生 +3 位作者 刘庆彤 谢江柳 马西强 王永翔 《中国临床研究》 CAS 2014年第8期897-900,共4页
目的对丙戊酸钠诱导人结肠癌细胞HT-29发生自噬性死亡的过程进行观察,并初步探讨其可能的机制。方法用不同浓度、不同作用时间的丙戊酸钠处理人结肠癌细胞系HT-29,用细胞计数试剂盒CCK8法观察其对细胞增殖的抑制作用,丹酰戊二胺染色法... 目的对丙戊酸钠诱导人结肠癌细胞HT-29发生自噬性死亡的过程进行观察,并初步探讨其可能的机制。方法用不同浓度、不同作用时间的丙戊酸钠处理人结肠癌细胞系HT-29,用细胞计数试剂盒CCK8法观察其对细胞增殖的抑制作用,丹酰戊二胺染色法观察细胞自噬,荧光测试仪检测自噬水平,荧光定量PCR法检测以下基因表达水平的变化:微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬相关基因Beclin-1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化核糖体蛋白S6激酶(p-p70S6K)。结果随着丙戊酸钠处理浓度的递增及作用时间的延长,其对人结肠癌细胞HT-29的增殖抑制率逐渐提高,呈剂量依赖性及时间依赖性(P均﹤0.01);同时,随着药物浓度的增加,细胞中自噬泡数量增多,荧光强度增强,与对照组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。经丙戊酸钠处理后,自2 mmol/L浓度始,人结肠癌细胞系HT-29自噬相关基因LC3-Ⅱ和Beclin-1表达水平明显升高(P均<0.01),而mTOR、p-Akt和p-p70S6K表达水平明显降低(P均<0.01)。结论丙戊酸钠可诱导结肠癌细胞发生自噬,其诱导结肠癌细胞发生自噬的机制可能与阻断mTOR-Akt信号转导通路及激活Beclin-1信号转导通路有关。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 丙戊酸钠 自吞噬 增殖抑制率 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 自噬相关基因Beclin-1 磷酸化蛋白激酶B 信号转导通路
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