ENU诱变构建Jag1基因mRNA剪接异常眼畸形小鼠模型

1

作者 徐佳 魏婉娥 +3 位作者 吴秋一 释晓纯 王烁 陈兵 《河南农业科学》 北大核心 2023年第9期148-155,共8页

为建立人类和动物眼病的小鼠模型,采用乙烷基亚硝基脲(ENU)诱导C57BL/6J(B6)小鼠突变手段获得眼病小鼠,利用苏木精-伊红(HE)染色法及免疫组织化学染色技术分析小鼠角膜病变特点,通过连锁分析及位置候选克隆确定致病基因。结果显示,ENU... 为建立人类和动物眼病的小鼠模型,采用乙烷基亚硝基脲(ENU)诱导C57BL/6J(B6)小鼠突变手段获得眼病小鼠,利用苏木精-伊红(HE)染色法及免疫组织化学染色技术分析小鼠角膜病变特点,通过连锁分析及位置候选克隆确定致病基因。结果显示,ENU诱变获得1例眼畸形小鼠,小鼠角膜上皮细胞层出现明显空泡,且分化异常,角膜基质层胶原纤维排列杂乱松散,角膜内皮细胞部分脱落。染色体定位将致病基因定位于小鼠第2号染色体微卫星D2Mit107(距着丝粒65.13 cM)与D2Mit423(距着丝粒73.57 cM)之间。对候选基因齿状基因1(Jag1)测序发现,突变杂合子小鼠1条染色体上Jag1基因第24号内含子3′端AG碱基被GG碱基替代,导致第25号外显子存在7个碱基的缺失;蛋白质预测发现,该突变引起Jag1编码区移码及蛋白质编码提前终止。综合分析可知,Jag1基因突变是引起小鼠眼畸形表型的分子基础。 展开更多

关键词 小鼠 乙烷基亚硝基脲 眼畸形 基因定位 齿状基因1

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An experimental study on N-ethyl-N-nitrosourea-induced rat brain gliomas

2

作者 卞修武 史景泉 +2 位作者 陶海鹏 杨光华 辛榕 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1994年第4期241-245,共5页

ＡｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｎＮ－ｅｔｈｙｌ－Ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ－ｉｎｄｕｃｅｄｒａｔｂｒａｉｎｇｌｉｏｍａｓＢｉａｎＸｉｕｗｕ（卞修武）；ＳｈｉＪｉｎｇｑｕａｎ（史景泉）；ＴａｏＨａｉｐｅｎｇ（... ＡｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｎＮ－ｅｔｈｙｌ－Ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ－ｉｎｄｕｃｅｄｒａｔｂｒａｉｎｇｌｉｏｍａｓＢｉａｎＸｉｕｗｕ（卞修武）；ＳｈｉＪｉｎｇｑｕａｎ（史景泉）；ＴａｏＨａｉｐｅｎｇ（陶海鹏）；ＹａｎｇＧｕａｎｇｈｕａ... 展开更多

关键词 GLIOMA n-ethyl-n-nitrosourea OnCOLOGY RATS

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1例ENU诱变小鼠模型角膜病变分析及致病基因定位

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作者 陈兵 王红玲 +4 位作者 陈莉 陈瑞 王怡 杨玲 薛整风 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2022年第2期62-68,共7页

角膜病是人类第4大致盲眼病。通过乙烷基亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱导小鼠突变建立遗传性角膜病小鼠模型,对角膜病小鼠角膜组织进行病理分析并确定致病基因的染色体位置。HE染色发现:角膜病小鼠角膜基质层出现新生血管及较... 角膜病是人类第4大致盲眼病。通过乙烷基亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱导小鼠突变建立遗传性角膜病小鼠模型,对角膜病小鼠角膜组织进行病理分析并确定致病基因的染色体位置。HE染色发现:角膜病小鼠角膜基质层出现新生血管及较多的角膜细胞,角膜与虹膜发生粘连。采用免疫组织化学技术检测角膜上皮Keratin 12(K12)、Keratin 14(K14)、Keratin 10(K10)及PAX6的表达情况,结果发现:角膜病小鼠K12信号局部减弱或为阴性,K10局部免疫组织化学染色结果为阳性,K14可表达于整个角膜上皮层且局部信号增强,PAX6阳性细胞明显减少或消失。连锁分析将致病基因定位于小鼠第10号染色体D10Mit162与D10Mit233之间。该研究有望为人类角膜病研究提供一种新的小鼠模型。 展开更多

关键词 乙烷基亚硝基脲 角膜病 基因定位 小鼠模型

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免疫磁珠分离技术联合流式细胞术检测ENU致大鼠体内Pig-a基因突变

4

作者 秦美蓉 郑丹丹 +3 位作者 黄泽愉 王晓炜 李俊鹏 王平 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期211-216,共6页

目的结合免疫磁珠分离技术和流式细胞术两种方法,对大鼠外周血突变型红细胞进行富集和检测,优化大鼠外周血Pig-a基因突变试验方法。方法用20、40和80 mg/(kg·bw)剂量的N-乙基-N-亚硝基脲(Nethyl-N-nitrosourea,ENU)连续3 d给予SD大... 目的结合免疫磁珠分离技术和流式细胞术两种方法,对大鼠外周血突变型红细胞进行富集和检测,优化大鼠外周血Pig-a基因突变试验方法。方法用20、40和80 mg/(kg·bw)剂量的N-乙基-N-亚硝基脲(Nethyl-N-nitrosourea,ENU)连续3 d给予SD大鼠,在染毒前、染毒后第7、14和28天分别采集大鼠外周血,经免疫磁性分离柱富集RET^(CD59-)和RBC^(CD59-),用流式细胞术分别对免疫磁珠分离柱前和柱后的外周血红细胞进行计数。结果与对照组相比,ENU各剂量组的RET^(CD59-)和RBC^(CD59-)发生率均显著升高(P<0.05);采用免疫磁珠分离技术后,可以在3 min内完成一个样品的Pig-a基因突变检测,分析的RET^(CD59-)或RBC^(CD59-)细胞数量分别最高可达2×10~4个或9×10~4个。结论本研究联合运用免疫磁珠分离术和流式细胞术,建立并优化了大鼠体内Pig-a基因突变试验方法,实现了高通量检测,提高了试验的准确性和效率。 展开更多

关键词 Pig-a基因突变 免疫磁珠分离 流式细胞术 n-乙基-n-亚硝基脲 大鼠 外周血红细胞

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N－乙基－N－亚硝基脲诱发大鼠胶质瘤的实验研究

5

作者 卞修武 史景泉 +2 位作者 辛榕 陶海鹏 杨光华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期29-32,共4页

采用人工合成的Ｎ－乙基－Ｎ－亚硝基脲（ＥＮＵ，６０ｍｇ／ｋｇ体重），经胎盘和皮下给药分别在妊娠晚期孕鼠子代和３天龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠经１２个月诱发出神经系统胶质瘤．成瘤率分别为７３．２％和６８．３％（胶质瘤为６５．９％... 采用人工合成的Ｎ－乙基－Ｎ－亚硝基脲（ＥＮＵ，６０ｍｇ／ｋｇ体重），经胎盘和皮下给药分别在妊娠晚期孕鼠子代和３天龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠经１２个月诱发出神经系统胶质瘤．成瘤率分别为７３．２％和６８．３％（胶质瘤为６５．９％和６３．４％）；胶质瘤以少突－星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤为主，呈小灶性、多灶性、混合性，并伴有灶性和／或弥漫性胶质增生存在．结果表明，这两种胶质瘤模型为深入研究胶质瘤的发生、生长及分化提供了良好的途径．本文讨论了灶性胶质母细胞增生在胶质瘤发生学上的意义． 展开更多

关键词 胶质瘤 乙基亚硝基脲 大鼠 动物模型 病因

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乙基亚硝基脲致大鼠脑星形胶质细胞DNA损伤及对P53和P21蛋白表达的影响 被引量：1

6

作者 杨雪莲 张振祥 +2 位作者 宋辉 刘志宏 陶茂萱 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期21-24,共4页

目的研究乙基亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea熏ENU)诱发原代大鼠脑星形神经胶质细胞DNA损伤及对P53、P21蛋白表达的影响。方法采用机械分离技术,在体外培养大鼠脑神经胶质细胞,通过传代培养的方法纯化大鼠脑星形胶质细胞。给予不同浓度... 目的研究乙基亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea熏ENU)诱发原代大鼠脑星形神经胶质细胞DNA损伤及对P53、P21蛋白表达的影响。方法采用机械分离技术,在体外培养大鼠脑神经胶质细胞,通过传代培养的方法纯化大鼠脑星形胶质细胞。给予不同浓度ENU(1.7、3.4、6.8、13.6、27.2mmol/L)染毒,采用单细胞凝胶电泳(single-cellgelelectrophoresis,SCGE)和免疫组织化学的方法观察ENU对星形胶质细胞DNA的损伤作用和抑癌基因p53、p21的产物P53、P21蛋白在细胞中表达。结果不同染毒浓度下,各染毒组对星形胶质细胞均有不同程度DNA损伤作用,各染毒组拖尾细胞百分率与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),且随受试物浓度增加而增加,表现出明显的剂量-效应关系(r=0.916)。各染毒组细胞DNA的迁移距离(尾长)与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。在13.6、27.2mmol/LENU染毒组,P53有阳性表达,与阴性对照组比较,有统计学意义(P<0.01),而P21在各实验组均未见阳性表达。结论ENU对大鼠脑星型胶质细胞的毒性主要表现在诱导细胞遗传物质DNA损伤以及抑癌基因p53的表达水平升高。 展开更多

关键词 DnA损伤 乙基亚硝基脲 P53 P21

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N-(2-氯乙基)-N'-2-(O^6-苄基-9-鸟嘌呤基)乙基-N-亚硝基脲的合成 被引量：1

7

作者 王雅朦 任婷 +2 位作者 宋秀庆 赵丽娇 钟儒刚 《合成化学》 CAS CSCD 2016年第3期215-218,共4页

以O^6-苄基鸟嘌呤为原料,经取代反应和盖布瑞尔反应制得N9-(2-胺基)乙基-O6-苄基鸟嘌呤(4);4与异氰酸酯经取代反应和经亚硝化反应合成了N-(2-氯乙基)-N'-2-(O6-苄基-9-鸟嘌呤基)乙基-N-亚硝基脲(6)。4和6为新化合物,其结构经UV-Vis,... 以O^6-苄基鸟嘌呤为原料,经取代反应和盖布瑞尔反应制得N9-(2-胺基)乙基-O6-苄基鸟嘌呤(4);4与异氰酸酯经取代反应和经亚硝化反应合成了N-(2-氯乙基)-N'-2-(O6-苄基-9-鸟嘌呤基)乙基-N-亚硝基脲(6)。4和6为新化合物,其结构经UV-Vis,1H NMR,13C NMR,IR和HR-ESI-MS表征。 展开更多

关键词 O6-苄基鸟嘌呤 n-(2-氯乙基)-n'-2-(O^6-苄基-9-鸟嘌呤基)乙基-n-亚硝基脲 联合亚硝基脲 合成 AGT抑制剂

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ENU诱变获得一种多趾小鼠及其突变基因的鉴定 被引量：3

8

作者 陈兵 李柯 +2 位作者 陈德洋 糜婷 薛整风 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期32-40,共9页

采用化学诱变剂乙酰基亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)获得一种常染色体显性遗传多趾突变小鼠(Mus musculus),该突变小鼠在后趾内侧(即轴前部)多出一个脚趾,且严重程度不一,部分小鼠双侧后足都有多趾表型。阿尔新蓝-茜素红染色结... 采用化学诱变剂乙酰基亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)获得一种常染色体显性遗传多趾突变小鼠(Mus musculus),该突变小鼠在后趾内侧(即轴前部)多出一个脚趾,且严重程度不一,部分小鼠双侧后足都有多趾表型。阿尔新蓝-茜素红染色结果表明,多趾突变杂合子小鼠除多趾异常发育外,其余骨骼无明显异常。为定位该突变基因,利用微卫星标记对(C57BL/6J×DBA/2J)F1代多趾突变小鼠回交C57BL/6J得到的[(C57BL/6J×DBA/2J)F1×C57BL/6J]N2代多趾小鼠进行全基因组扫描,最终将本例多趾突变基因定位于小鼠第2号染色体微卫星D2mit45与D2mit184之间,并初步确定Alx4为该突变候选基因。在此基础上对Alx4进行测序分析,测序结果发现突变小鼠Alx4基因编码区第433位碱基处发生A到T的颠换,导致编码区第145位密码子AAA(编码赖氨酸)变为终止密码子TAA,引起蛋白编码提前终止,是引起多趾表型的原因。 展开更多

关键词 乙酰基亚硝基脲 多趾突变 阿尔新蓝-茜素红染色 微卫星 Alx4基因

原文传递

亚硝基脲类遗传毒性杂质稳定性影响因素考察

9

作者 关皓月 孙百浩 牛剑钊 《中国食品药品监管》 2023年第7期66-73,共8页

目的:考察以N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)和N-乙基-N-亚硝基脲(ENU)为代表化合物的亚硝基脲类遗传毒性杂质的稳定性及其影响因素。方法:采用高效液相色谱(HPLC)考察不同光照(避光、自然光、紫外光)和不同温度(室温、冷藏)条件对ENU和MNU溶液... 目的:考察以N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)和N-乙基-N-亚硝基脲(ENU)为代表化合物的亚硝基脲类遗传毒性杂质的稳定性及其影响因素。方法:采用高效液相色谱(HPLC)考察不同光照(避光、自然光、紫外光)和不同温度(室温、冷藏)条件对ENU和MNU溶液稳定性的影响;采用HPLC考察MNU和ENU在不同储存条件下的短期稳定性;采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)考察不同进样口温度(200℃和120℃)对ENU测定准确性的影响。结果:MNU和ENU对光照和温度较为敏感,在光照和室温条件下,均会发生降解;MNU和ENU分别在40℃、75%湿度下放置5天和12天后降解明显;GC-MS进样口温度对ENU的检测影响较大。结论:建议亚硝基脲类遗传毒性杂质应在-20℃避光处保存,在检测过程中控制温度参数;在溶液配制过程中应避光操作、临用新制,以避免出现遗传毒性杂质检测假阴性结果。 展开更多

关键词 遗传毒性杂质 n-甲基-n-亚硝基脲 n-乙基-n-亚硝基脲 稳定性

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化学性诱变和内耳基因突变

10

作者 郭运凯 谢鼎华 杨新明 《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》 CAS 2006年第2期156-160,共5页

随着人类基因组序列的完成,学者们系统地确定基因功能及其在人类疾病中的作用已成为生命科学研究的中心。小鼠突变对于展现哺乳动物基因功能和模拟人类疾病具有关键性的作用,对分析和探讨疾病的发病机制具有特别重要意义。小鼠全基因组... 随着人类基因组序列的完成,学者们系统地确定基因功能及其在人类疾病中的作用已成为生命科学研究的中心。小鼠突变对于展现哺乳动物基因功能和模拟人类疾病具有关键性的作用,对分析和探讨疾病的发病机制具有特别重要意义。小鼠全基因组的突变率很低,常规的基因敲除(knock-out)和转基因(transgenesis)突变规模小,且研究的是已知基因的功能。近年,采用化学诱导突变的表型筛选(phenotype screens)已成为日益关注的目标,乙烷亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱变的大规模表型筛选能获得大量新突变,确定了一些新基因,同时也发现了与听觉及平衡功能有关的突变和基因。本文对近年采用ENU诱变表型筛选的方法和在确定新的耳聋基因中的作用进行概述。 展开更多

关键词 聋/遗传学 乙烷亚硝基脲(n-ethyl-n-nitrosourea enu) 突变 表型筛选 疾病模型 动物

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一种新的斑马鱼cloche突变体亚型的基因鉴定

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作者 马宁 霍中军 +3 位作者 颜广 黄红辉 罗深秋 张文清 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期458-462,共5页

目的斑马鱼cloche172突变体的基因鉴定。方法采用化学诱变剂N-乙基-N-亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱变雄性野生型AB斑马鱼,实施大规模正向遗传学方法筛选髓系细胞标记物lysozymeC(lyC)表达缺失突变体,并对其中一个名为cloche17... 目的斑马鱼cloche172突变体的基因鉴定。方法采用化学诱变剂N-乙基-N-亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱变雄性野生型AB斑马鱼,实施大规模正向遗传学方法筛选髓系细胞标记物lysozymeC(lyC)表达缺失突变体,并对其中一个名为cloche172突变体进行大体形态学观察,基因定位克隆和遗传学互补实验。结果大规模正向遗传学筛选出4个lyc表达缺失突变体,其中一个cloche172突变体受精后3d(day post fertilization,dpf)时期大体形态改变与已知但基因不明的cloche突变体相似。遗传学互补实验观察到有1/4胚胎出现类似cloche突变体的表型。同时,cloche172突变体基因定位在13号染色体近端粒的区域,与cloche突变体基因定位区域一致。而o-dianisdine实验证实cloche172突变体有较多红细胞聚集,cloche突变体仅有少量在尾部存在。结论cloche172基因与cloche基因定位一致,cloche172突变体是一个新的点突变位点的cloche突变体。 展开更多

关键词 斑马鱼enu诱变 大规模lyC缺失突变体筛选 cloche172突变体 造血过程

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乙烷基亚硝基脲诱变获得一例小眼畸形小鼠及其遗传实验

12

作者 王建明 耿滕 +4 位作者 陈航 倪俊达 王文华 陈兵 薛整风 《实验动物与比较医学》 CAS 2014年第6期473-475,共3页

目的 通过乙烷基亚硝基脲（ENU）诱导小鼠突变手段获得眼部异常小鼠模型.方法 选用8～ 10周龄C57BL/6J （B6）雄鼠40只,腹腔内注射ENU.将处理雄鼠与同品系母鼠交配,在其后代小鼠中筛选眼部异常个体,并对突变个体进行遗传实验.结果 通过... 目的 通过乙烷基亚硝基脲（ENU）诱导小鼠突变手段获得眼部异常小鼠模型.方法 选用8～ 10周龄C57BL/6J （B6）雄鼠40只,腹腔内注射ENU.将处理雄鼠与同品系母鼠交配,在其后代小鼠中筛选眼部异常个体,并对突变个体进行遗传实验.结果 通过ENU诱变手段获得一例可稳定遗传的小眼畸形小鼠,该小鼠小眼畸形表型受小鼠遗传背景影响,在B6背景中外显率为90％,BDF1背景中外显率为0,BDBN2背景为27.8％.结论 ENU诱变获得了类似人类小眼畸形疾病的小鼠模型,为人类相应眼病研究提供一种新模型. 展开更多

关键词 乙烷基亚硝基脲 小眼畸形 诱变 小鼠模型

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一种斑马鱼原始造血髓系细胞突变体的研究

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作者 颜广 刘伟 +10 位作者 戴朝霞 王鹍 刘靖 赵灵凤 黄志斌 陈小辉 马宁 孟萍 许孟畅 温子龙 张文清 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期755-760,共6页

目的斑马鱼原始造血髓系细胞突变体1276的表型鉴定及性状分析。方法利用化学诱变剂N-乙基-N-亚硝基脲诱变野生型AB斑马鱼雄鱼的精原细胞,突变基因组保留传代,采用中性红染液对F3代的胚胎进行细胞化学染色,筛选原始造血髓系细胞突变体。... 目的斑马鱼原始造血髓系细胞突变体1276的表型鉴定及性状分析。方法利用化学诱变剂N-乙基-N-亚硝基脲诱变野生型AB斑马鱼雄鱼的精原细胞,突变基因组保留传代,采用中性红染液对F3代的胚胎进行细胞化学染色,筛选原始造血髓系细胞突变体。并通过细胞化学染色及检测不同谱系血细胞标记基因在不同发育阶段的mRNA及蛋白的表达水平,对其中之一突变体1276进行表型鉴定及性状分析。结果成功筛选1296个F2家族,2140个突变基因组,发现中性红染色信号异常突变体12个。突变体1276在原始造血阶段,中性红染色全身信号缺失,小胶质细胞标记基因apoe表达缺失,巨噬细胞标记基因l-plastin,头部表达减少,背主动脉壁腹侧区域表达正常,粒细胞、红细胞均未见异常;在定向造血阶段,巨噬细胞仍存在异常,但粒细胞、红细胞、淋巴细胞以及造血干细胞均未见明显异常。结论突变体1276在原始造血阶段,巨噬细胞存在功能障碍,以及不同程度发育及迁徙异常;在定向造血阶段这一性状并未得到代偿。 展开更多

关键词 斑马鱼突变体 n-乙基-n-亚硝基脲诱变筛选 中性红 原始髓系造血 巨噬细胞 小胶质细胞

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乙酰基亚硝基脲对C57BL/6J雄鼠毒性作用的研究

14

作者 张琦 胡安康 +1 位作者 庄明 朱孝荣 《徐州医学院学报》 CAS 2011年第2期99-101,共3页

目的 观察乙酰基亚硝基脲（ENU）对C57BL/6J雄鼠的毒性作用及对睾丸等组织器官的影响,分析引起小鼠死亡的原因,探索ENU处理雄鼠的最佳处理浓度.方法 将8～10周龄的C57BL/6J 雄鼠分为实验组和对照组.实验组又分为A、B、C、D 4组,分别腹... 目的 观察乙酰基亚硝基脲（ENU）对C57BL/6J雄鼠的毒性作用及对睾丸等组织器官的影响,分析引起小鼠死亡的原因,探索ENU处理雄鼠的最佳处理浓度.方法 将8～10周龄的C57BL/6J 雄鼠分为实验组和对照组.实验组又分为A、B、C、D 4组,分别腹腔注射ENU 150、100、75、50 mg/kg,每周1次,共3次.对照组腹腔注射生理盐水.首次注射ENU后的第1周至12周,每周分别取实验组和对照组小鼠2 只进行剖检并行组织病理学观察,取其睾丸、附睾称重,记录死亡小鼠数量.结果 实验组小鼠剖检发现胸腔纵隔内有巨大肿块,明显压迫心脏;组织切片观察发现睾丸和肝、肾有不同程度的病理改变.结论 ENU为小鼠的一种强诱变剂,纵隔肿瘤是导致雄鼠死亡的主要原因,ENU对睾丸的毒性作用最强,主要表现为曲精小管组织结构破坏,生精细胞减少.ENU处理雄鼠的最佳浓度为150 mg/kg. 展开更多

关键词 乙酰基亚硝基脲(enu) C57BL/6J雄鼠 睾丸

原文传递

体内Pig-a基因突变试验高通量方法联合验证研究 被引量：4

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作者 张铭 周长慧 +3 位作者 常艳 王征 涂宏刚 李婕 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2013年第5期392-395,共4页

目的:建立大鼠磷脂酰肌醇聚糖A类(Pig-a)基因突变试验高通量方法,验证该方法的重复性,并探索将此方法与流式体内微核整合至同一个试验中的可能性。方法:将20只雄性SD大鼠按照体质量随机分为4组:溶剂对照组(PBS,pH=6.0)、N-乙基-N-亚硝基... 目的:建立大鼠磷脂酰肌醇聚糖A类(Pig-a)基因突变试验高通量方法,验证该方法的重复性,并探索将此方法与流式体内微核整合至同一个试验中的可能性。方法:将20只雄性SD大鼠按照体质量随机分为4组:溶剂对照组(PBS,pH=6.0)、N-乙基-N-亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)低剂量组(10 mg/kg)、ENU中剂量组(20 mg/kg)和ENU高剂量组(40 mg/kg),给药容量均为10mL/kg,经口灌胃给药,每天1次,连续给药3 d。分别于给药前1天、首次给药后第14和30天颈静脉取血,进行Pig-a基因突变分析;首次给药后第4天颈静脉取血,采用流式细胞仪进行微核检测。结果:在首次给药后第14和30天,3种剂量(10、20和40CD59-CD59-mg/kg)下的ENU均导致大鼠外周血RBC和RET频率显著增加(P<0.05),Pig-a基因突变结果与之前的基础型试验得到的结果类似,分析速率和分析细胞的数目得到显著提升;3个剂量的ENU均导致明显的微核率升高,与对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究成功建立了大鼠体内Pig-a基因突变高通量试验方法,该试验具有较好的重复性,并提示该试验可以和微核试验结合到同一个试验中。 展开更多

关键词 n-乙基-n-亚硝基脲 Pig-a基因突变 免疫磁珠筛选 微核 流式细胞术

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体内彗星实验联合微核实验检测化合物的遗传毒性 被引量：4

16

作者 王欣 王晨 +1 位作者 宋捷 李波 《中国药房》 CAS CSCD 2014年第33期3107-3109,共3页

目的:考察体内彗星实验联合微核实验检测化合物遗传毒性的可行性。方法:以阳性化合物N-乙基-N-亚硝基脲为模型药物,取♂大鼠随机分为空白对照组和给药组[40 mg/(kg·d)],每组5只,灌胃给药3次,末次给药后3 h处死大鼠。进行彗星实验,... 目的:考察体内彗星实验联合微核实验检测化合物遗传毒性的可行性。方法:以阳性化合物N-乙基-N-亚硝基脲为模型药物,取♂大鼠随机分为空白对照组和给药组[40 mg/(kg·d)],每组5只,灌胃给药3次,末次给药后3 h处死大鼠。进行彗星实验,收集大鼠外周血、肝、胃、睾丸组织经前处理制备成单细胞凝胶玻片进行电泳,使用Komet 6.0软件分析单细胞显微图像,每种组织分析100个细胞(胃组织50个细胞),计算尾部DNA百分含量。进行微核实验,收集大鼠骨髓细胞进行涂片,计数2 000个嗜多染红细胞(PCE)中含微核细胞(MNPCE)的数目及嗜多染红细胞微核率。结果:与空白对照组比较,模型药物可使大鼠外周血淋巴、肝、胃、睾丸细胞组织的尾部DNA百分含量明显增加(P<0.05),并可使大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率明显升高(P<0.05)。结论:彗星实验可用于动物体内多种脏器遗传毒性的检测;微核实验可用于动物骨髓细胞的遗传毒性检测。 展开更多

关键词 彗星实验 微核实验 遗传毒性 大鼠 n-乙基-n-亚硝基脲

原文传递

大鼠体内肝细胞碱性彗星试验评估3种参考化学物的遗传毒性 被引量：2

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作者 王宁 张文众 +6 位作者 孙宇立 邵乃敏 成雪晴 刘君丽 丁瑜 孙拿拿 洪新宇 《上海预防医学》 CAS 2021年第7期624-629,共6页

【目的】建立大鼠体内肝细胞碱性彗星试验方法,检测3种参考化学物的遗传毒性。【方法】将6~10周龄的Sprague Dawley大鼠随机分为4组,每组10只,雌雄各半。以生理盐水(0.9%NaCl溶液)为阴性对照组,受试物组分为甲基磺酸乙酯(EMS)200 mg/kg... 【目的】建立大鼠体内肝细胞碱性彗星试验方法,检测3种参考化学物的遗传毒性。【方法】将6~10周龄的Sprague Dawley大鼠随机分为4组,每组10只,雌雄各半。以生理盐水(0.9%NaCl溶液)为阴性对照组,受试物组分为甲基磺酸乙酯(EMS)200 mg/kg组、N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)50 mg/kg组和D-甘露醇2 000 mg/kg组。连续2次(间隔21 h)灌胃染毒,实验期间记录动物临床症状和体质量变化。末次染毒3 h后处死大鼠,称量肝脏重量,取肝脏制备单细胞悬液开展肝细胞碱性彗星试验,测定肝细胞平均尾部DNA含量百分比(DNA%)等指标。【结果】受试物EMS、MNU和D-甘露醇均未对动物整体产生严重的毒性作用。与阴性对照组大鼠肝细胞平均尾部DNA含量百分比[(2.32±1.39)%]相比,EMS和MNU组分别为(60.07±24.69)%和(41.66±22.35)%,差异有统计学意义(P<0.05);D-甘露醇组差异无统计学意义[(3.06±3.30)%,P>0.05]。【结论】本实验室初步建立了大鼠体内肝细胞碱性彗星试验方法,3种参考化学物质中,EMS和MNU有明显遗传毒性,D-甘露醇组未见遗传毒性。 展开更多

关键词 大鼠体内肝细胞碱性彗星试验 甲基磺酸乙酯 n-甲基-n-亚硝基脲 D-甘露醇 遗传毒性

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SD大鼠连续灌胃给药对碱性彗星电泳和骨髓微核的影响 被引量：7

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作者 文海若 毛志慧 +6 位作者 陈高峰 宋捷 李琛 杨莹 王伟凡 王雪 黄芝瑛 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1063-1070,共8页

目的:开展SD大鼠3天重复经口灌胃给药毒性实验,联合肝、肾和外周血碱性彗星电泳试验和骨髓微核试验,并对遗传毒性试验常用的溶媒及阳性化合物进行检测和比较。通过对比相同实验条件下开展的以染色体损伤和DNA断裂为检测终点的组合遗传... 目的:开展SD大鼠3天重复经口灌胃给药毒性实验,联合肝、肾和外周血碱性彗星电泳试验和骨髓微核试验,并对遗传毒性试验常用的溶媒及阳性化合物进行检测和比较。通过对比相同实验条件下开展的以染色体损伤和DNA断裂为检测终点的组合遗传毒性试验结果,为给药和取材时间点以及阳性剂的选择提供参考依据。方法:雄性SD大鼠随机分为去离子水组、0.9%氯化钠注射液组、玉米油组、环磷酰胺(CPA)10 mg·kg^(-1)组、环磷酰胺(CPA)40 mg·kg^(-1)组、N-乙基-N-亚硝基脲(ENU)40 mg·kg^(-1)组和甲磺酸乙酯(EMS)200 mg·kg^(-1)组,每组5只。连续3 d灌胃给药,实验期间记录动物临床症状和体重变化。末次给药后3 h处死大鼠。称量肝、肾脏器重量,并收集肝、肾及外周血制备单细胞悬液开展多脏器碱性彗星试验。样本制片后分别经裂解、解旋、电泳、染色等步骤,使用Komet 6.0软件进行图像分析;取材同时收集骨髓细胞制作涂片,计数2 000个嗜多染红细胞(PCE)的含微核细胞发生率。结果:1)CPA、ENU和EMS均未对动物整体产生严重的毒性作用。2)只有EMS组的肝细胞、肾细胞和淋巴细胞的刺猬细胞百分率明显升高,CPA及ENU对刺猬细胞百分率无明显影响。ENU组在3种组织的彗尾DNA含量百分率及Olive尾矩与溶媒对照组比较为弱致DNA断裂作用;而EMS则在3种组织中均显示了强致DNA断裂作用。3)CPA作为经典的骨髓微核试验阳性剂,其微核结果显示了一定的剂量相关性;ENU的致微核作用相对较弱。结论:将多脏器彗星试验与微核试验与3天重复给药毒性实验整合是可行的;实验流程的标准化、阳性剂的选择及实验设计等需根据具体情况来设计。 展开更多

关键词 药物安全性试验 遗传毒性试验 阳性对照物 阴性对照物 氯化钠 玉米油 环磷酰胺 n-乙基-n-亚硝基脲 甲磺酸乙酯 碱性彗星电泳 骨髓微核试验

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