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重组大肠杆菌全细胞催化法生产N-乙酰神经氨酸
1
作者 郑蝶 杨海泉 +2 位作者 夏媛媛 沈微 陈献忠 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期38-46,共9页
N-乙酰神经氨酸具有多种生物学功能,在食品添加剂和药物合成等方面有着重要的应用。为了降低成本,作者利用重组大肠杆菌,并以含有N-乙酰葡萄糖胺的发酵液为底物进行全细胞催化生产N-乙酰神经氨酸。结果表明,在温度为30℃、转化液初始pH... N-乙酰神经氨酸具有多种生物学功能,在食品添加剂和药物合成等方面有着重要的应用。为了降低成本,作者利用重组大肠杆菌,并以含有N-乙酰葡萄糖胺的发酵液为底物进行全细胞催化生产N-乙酰神经氨酸。结果表明,在温度为30℃、转化液初始pH为6.5、底物丙酮酸浓度为1.38 mol/L、Triton X-100添加质量分数为0.4%、菌体OD_(600)为30的条件下在5 L发酵罐等条件下进行全细胞转化,可以得到N-乙酰神经氨酸180 mmol/L,摩尔转化率为65.45%。用阴离子树脂对产物进行初步分离纯化,经高效液相色谱分析证实纯化后产品为高纯度N-乙酰神经氨酸,其纯度为98.3%,结晶回收率为42.5%。作者建立并优化了一种以含有N-乙酰葡萄糖胺的发酵液为底物直接进行全细胞催化生产N-乙酰神经氨酸的工艺流程,既节约了成本,又具有可持续发展的优势。 展开更多
关键词 n-乙酰神经氨酸 发酵液 全细胞催化
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高效液相色谱法测定化妆品原料中N-乙酰神经氨酸
2
作者 刁飞燕 李俊婕 +3 位作者 吴晓云 刘慧香 于海英 李启艳 《化学分析计量》 CAS 2024年第1期41-45,52,共6页
建立高效液相色谱法测定化妆品原料中N-乙酰神经氨酸含量的方法。以体积分数为50%的乙酸溶液为水解溶剂,样品于80℃水浴中加热30 min,以CAPCELL PAK SCX柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(体积比为80∶2... 建立高效液相色谱法测定化妆品原料中N-乙酰神经氨酸含量的方法。以体积分数为50%的乙酸溶液为水解溶剂,样品于80℃水浴中加热30 min,以CAPCELL PAK SCX柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(体积比为80∶20),等度洗脱,流量为1.0 mL/min,柱温为35℃,采用高效液相色谱二极管阵列检测器测定,以色谱峰面积外标法定量。检测波长为205 nm,进样体积为10μL。N-乙酰神经氨酸的色谱峰面积与质量浓度在10.0~500.0μg/ml范围内线性关系良好,相关系数为0.9999,方法检出限为0.12μg/mL,定量限为0.4μg/mL。样品加标平均回收率为97.7%~98.9%,测定结果的相对标准偏差为0.37%~1.36%(n=6)。该方法样品处理简便、高效,适用于化妆品原料中N-乙酰神经氨酸的含量测定。 展开更多
关键词 n-乙酰神经氨酸 高效液相色谱法 化妆品 原料
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N-乙酰神经氨酸增强小鼠免疫力功能研究 被引量：1
3
作者 肖敏 郑立新 +5 位作者 丰珂珏 蔡祥焜 项威 陆姝欢 李翔宇 田世民 《中国食品添加剂》 CAS 北大核心 2023年第5期103-110,共8页
目的:探究N-乙酰神经氨酸增强小鼠免疫力的功能。方法:经口给予小鼠8、17、50mg/kg·BW剂量的N-乙酰神经氨酸30 d,按《保健食品功能检验与评价方法》中有助于增强免疫力检验方法,测定小鼠的细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬... 目的:探究N-乙酰神经氨酸增强小鼠免疫力的功能。方法:经口给予小鼠8、17、50mg/kg·BW剂量的N-乙酰神经氨酸30 d,按《保健食品功能检验与评价方法》中有助于增强免疫力检验方法,测定小鼠的细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞吞噬功能及NK细胞活性,此外还用试剂盒测定了小鼠血清中IL-2、IL-12(P40)、TNF-α、IFN-γ含量。结果:中、高剂量组抗体生成细胞数、中剂量组半数溶血值及中、高剂量组巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率均显著高于阴性对照组,可判定小鼠体液免疫功能、单核-巨噬细胞吞噬功能结果阳性。中、高剂量组小鼠血清中IL-12(P40)含量显著高于阴性对照组。N-乙酰神经氨酸对小鼠其他指标无明显影响。结论:依据《保健食品功能检验与评价方法》中的结果判定标准,N-乙酰神经氨酸有助于增强免疫力。 展开更多
关键词 n-乙酰神经氨酸 唾液酸 小鼠 增强免疫力
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射频消融术治疗的心房颤动患者血清N-乙酰神经氨酸、硫酸吲哚酚与3类标志物的相关性及与术后复发的关系
4
作者 秦晓丹 潘德禄 +1 位作者 李轶男 赵继义 《国际检验医学杂志》 CAS 2023年第4期436-441,共6页
目的探讨行射频消融术治疗的心房颤动患者血清N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)、硫酸吲哚酚(IS)与炎症标志物、心房纤维化标志物、心肌损伤标志物的相关性及其与术后复发的关系。方法将2020年2月至2021年5月于大庆龙南医院行射频消融术治疗的AF... 目的探讨行射频消融术治疗的心房颤动患者血清N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)、硫酸吲哚酚(IS)与炎症标志物、心房纤维化标志物、心肌损伤标志物的相关性及其与术后复发的关系。方法将2020年2月至2021年5月于大庆龙南医院行射频消融术治疗的AF患者156例纳入研究作为AF组。另外,选取100例同期体检健康者作为对照组。检测并比较两组血清Neu5Ac、IS、炎症标志物[超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素6(IL-6)]、心房纤维化标志物[Ⅰ型胶原羧基端前肽(PⅠCP)、Ⅲ型胶原前多肽(PⅢNP)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、组织型基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)]及心肌损伤标志物[肌红蛋白(MYO)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)]水平。采用Pearson相关分析血清Neu5Ac、IS与炎症标志物、心房纤维化标志物及心肌损伤标志物水平的相关性。术后对AF患者进行随访,根据1年内的复发情况将纳入研究的患者分为复发组和未复发组,比较两组临床资料及各项标志物。采用多因素Logistic回归分析AF患者射频消融术后复发的危险因素。结果AF组血清Neu5Ac、IS水平高于对照组(P<0.05)。AF组血清hs-CRP、IL-6、PⅠCP、PⅢNP、MMP-1、TIMP-1、HA、LN、MYO、cTnI、CK-MB水平高于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示:血清Neu5Ac、IS与hs-CRP、IL-6、PⅠCP、PⅢNP、MMP-1、TIMP-1、HA、LN、MYO、cTnI、CK-MB水平均呈正相关(P<0.05)。随访结果显示:患者术后复发42例,复发率为26.92%(42/156)。复发组与未复发组病程、AF类型、QRS时限(QRSd)值、左房内径、左室射血分数、左房容积指数及血清Neu5Ac、IS、hs-CRP、IL-6、PⅠCP、PⅢNP、MMP-1、TIMP-1、HA、LN、MYO、cTnI、CK-MB水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示:血清Neu5Ac、IS、hs-CRP、IL-6、PⅠCP、MMP-1、HA、MYO、cTnI、CK-MB水平升高均为AF患者术后复发的危险因素(P<0.05)。结论行射频消融术治疗的AF患者血清Neu5Ac、IS水平升高,与炎症标志物、心房纤维化及心肌损伤标志物水平呈正相关,是患者术后复发的危险因素。 展开更多
关键词 心房颤动 射频消融术 n-乙酰神经氨酸 硫酸吲哚酚 术后复发
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离子色谱-积分脉冲安培法测定燕窝中N-乙酰神经氨酸的含量 被引量：8
5
作者 李耿 ASANTE Joseph Obiri +2 位作者 戴洁 吴依娜 赖小平 《广东药学院学报》 CAS 2014年第1期40-43,共4页
目的建立一种离子色谱-积分脉冲安培法测定燕窝、速食燕窝及银耳、海藻酸钠、鱼胶等常见伪品燕窝中N-乙酰神经氨酸的含量。方法采用DionexICS-5000离子色谱仪、DionexASRSRR5004-mm抑制器、电导检测器测定，色谱柱为CarbonPacPAI柱，柱... 目的建立一种离子色谱-积分脉冲安培法测定燕窝、速食燕窝及银耳、海藻酸钠、鱼胶等常见伪品燕窝中N-乙酰神经氨酸的含量。方法采用DionexICS-5000离子色谱仪、DionexASRSRR5004-mm抑制器、电导检测器测定，色谱柱为CarbonPacPAI柱，柱温为30℃．流动相为100mmol／LNaOH＋50mmol／LNaAc，流速为1．0mL／min，进样量为10μL，分别测定燕窝、速食燕窝及伪品中N-乙酰神经氨酸的含量。结果N-乙酰神经氨酸在0．25～5．00μg/mL范围内线性良好，r=0．9999；在燕窝中的平均回收率为99．7％，RSD为0．82％（n=6）。结论本方法灵敏度高、重复性好，可准确测定燕窝中^L乙酰神经氨酸的含量，为燕窝的质量控制提供了一种检测方法。 展开更多
关键词 燕窝 唾液酸 n-乙酰神经氨酸 离子色谱法 含量测定
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高效液相色谱法测定牛奶中N-乙酰神经氨酸的含量 被引量：4
6
作者 冯君 李卫华 +2 位作者 李宏基 韩立强 杨国宇 《河南工业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2007年第6期29-31,共3页
利用酸水解法把牛奶中的N-乙酰神经氨酸释放出来，以邻苯二氨盐酸盐为衍生化试剂，80℃水浴锅中衍生40min，采用Symmetry C18柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相为1.0％的四氢呋喃水溶液（含0．2％磷酸）-乙腈（92：8），流速为1．... 利用酸水解法把牛奶中的N-乙酰神经氨酸释放出来，以邻苯二氨盐酸盐为衍生化试剂，80℃水浴锅中衍生40min，采用Symmetry C18柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相为1.0％的四氢呋喃水溶液（含0．2％磷酸）-乙腈（92：8），流速为1．0mL／min，柱温为35℃，紫外检测波长230nm，结果表明N-乙酰神经氨酸在10—320μg／mL范围内线性良好，平均回收率为96．5％． 展开更多
关键词 牛奶 唾液酸 n-乙酰神经氨酸 高效液相色谱法
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N-乙酰神经氨酸醛缩酶的固定化及固定化酶性质研究 被引量：1
7
作者 王惠兰 吴金勇 +3 位作者 陈祥松 袁丽霞 朱薇薇 姚建铭 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期165-173,共9页
使用LX-1000HFA氨基树脂对N-乙酰神经氨酸醛缩酶(NAL)进行固定化,并对游离酶与固定化酶的酶学性质及稳定性进行了对比研究。结果显示,最佳固定化条件为载体投放量5.0 g,固定化时间12 h,缓冲液浓度1.0 mol/L,pH7.5,温度25℃。在此条件下... 使用LX-1000HFA氨基树脂对N-乙酰神经氨酸醛缩酶(NAL)进行固定化,并对游离酶与固定化酶的酶学性质及稳定性进行了对比研究。结果显示,最佳固定化条件为载体投放量5.0 g,固定化时间12 h,缓冲液浓度1.0 mol/L,pH7.5,温度25℃。在此条件下制备的固定化NAL活力最高,比酶活可达200 U/g湿载体。与游离酶相比,最适反应温度提高了5℃,最适反应pH没有变化,温度和pH耐受性明显提升。同时固定化酶储存稳定性和操作稳定性也显著增强,在4℃条件下储存10 d后其酶活仅损失6%,重复使用10次后仍保持初始酶活的80%。因此,该固定化酶具有良好的温度稳定性、pH稳定性、储存稳定性和操作稳定性,为酶法工业化生产N-乙酰神经氨酸研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 n-乙酰神经氨酸醛缩酶 LX-1000HFA氨基树脂 固定化 酶学性质 n-乙酰神经氨酸
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不同来源的N-乙酰神经氨酸裂合酶的特性及在大肠埃希菌中的表达
8
作者 管艳 陈代杰 倪兵 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期445-448,共4页
综述了N-乙酰神经氨酸裂合酶的特性、应用及反应机理,对不同来源的N-乙酰神经氨酸裂合酶进行了比较。简要阐述N-乙酰神经氨酸裂合酶在大肠埃希菌中的克隆表达及其纯化。
关键词 n-乙酰神经氨酸裂合酶 n-乙酰甘露糖胺 n-乙酰神经氨酸
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在线富集毛细管区带电泳测定唾液中的N-乙酰神经氨酸 被引量：3
9
作者 贾丽 周维 高文华 《汕头大学学报（自然科学版）》 2004年第3期42-47,共6页
建立了一种测定N 乙酰神经氨酸的在线富集毛细管区带电泳法 .该方法用 40mmol/L磷酸二氢钠作为缓冲溶液电解质 ,通过将样品溶解在乙腈∶水 ( 2∶1 )的样品基体中 ,进样时间增加到 1 0 0s来达到样品富集的效果 ,并考察了样品基体中乙腈... 建立了一种测定N 乙酰神经氨酸的在线富集毛细管区带电泳法 .该方法用 40mmol/L磷酸二氢钠作为缓冲溶液电解质 ,通过将样品溶解在乙腈∶水 ( 2∶1 )的样品基体中 ,进样时间增加到 1 0 0s来达到样品富集的效果 ,并考察了样品基体中乙腈浓度和进样时间对富集效果的影响 .研究了缓冲溶液pH值、三种不同电解质和有机修饰剂的加入对N 乙酰神经氨酸检测的影响 .最后考察了所建立方法的线性、检测限和重现性 ,并将该方法成功地应用于测定人体唾液中的N 乙酰神经氨酸 ,在 1 0min内完成分离 . 展开更多
关键词 毛细管区带电泳法 在线富集 n-乙酰神经氨酸 唾液酸 有机修饰剂
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适应性进化和改造质粒稳定性促进枯草芽孢杆菌合成N-乙酰神经氨酸 被引量：4
10
作者 钱蕾 刘延峰 +2 位作者 李江华 刘龙 堵国成 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1-6,共6页
N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,NeuAc)作为营养化学品和药物中间体在保健品和医药领域具有广泛的应用。为了提升重组枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)合成NeuAc的产量,首先利用NeuAc生物传感器(NeuAc-Biosensor)调控抗生素抗... N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,NeuAc)作为营养化学品和药物中间体在保健品和医药领域具有广泛的应用。为了提升重组枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)合成NeuAc的产量,首先利用NeuAc生物传感器(NeuAc-Biosensor)调控抗生素抗性基因表达,在抗生素存在条件下将细胞生长与NeuAc合成相关联。进而通过增加抗生素浓度进行适应性进化,促进NeuAc合成效率提升。研究结果显示,当利用NeuAc-Biosensor分别调控壮观霉素抗性基因(spc)和红霉素抗性基因(erm)时,高产菌株能够在较高抗生素浓度条件下生长。通过在培养过程中逐步增加抗生素浓度开展适应性进化,结果表明采用壮观霉素和红霉素进行双抗性适应性进化时,进化获得的菌株中假阳性率(产量未提高的菌株比例)为46.7%,显著低于采用壮观霉素或红霉素单一抗生素进化获得的菌株中假阳性率(73.3%和66.7%)。通过适应性进化与发酵验证得到1株NeuAc产量为(3.16±0.19)g/L的菌株,产量比出发菌株提高了31.7%。为进一步解决发酵过程中重组B.subtilis质粒丢失的问题,通过将必需基因folB(编码二氢喋呤醛缩酶,dihydroneopterin aldolase)插入携带NeuAc合成途径关键酶编码基因重组质粒并且敲除基因组中的folB基因,质粒的丢失率由34.1%下降至11.8%。该研究提升了重组B.subtilis合成NeuAc的产量和稳定性,为重组B.subtilis发酵法生产NeuAc奠定了基础。 展开更多
关键词 生物传感器 适应性进化 质粒稳定性 n-乙酰神经氨酸 枯草芽孢杆菌
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N-乙酰神经氨酸合成途径在枯草芽孢杆菌的构建 被引量：2
11
作者 李思杰 纪明华 +2 位作者 赵利超 史吉平 孙俊松 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第16期131-135,共5页
对食品安全认可的枯草芽孢杆菌进行菌株改造,利用生物发酵法制备N-乙酰神经氨酸。首先通过基因合成获取来自枯草芽孢杆菌溶源体的P_(holin)启动子并构建了p MK4-P_(holin)-GFP质粒,转入枯草芽孢杆菌,以GFP为报告基因,对P_(holin)及其它... 对食品安全认可的枯草芽孢杆菌进行菌株改造,利用生物发酵法制备N-乙酰神经氨酸。首先通过基因合成获取来自枯草芽孢杆菌溶源体的P_(holin)启动子并构建了p MK4-P_(holin)-GFP质粒,转入枯草芽孢杆菌,以GFP为报告基因,对P_(holin)及其它常见的强启动子进行了转录效率的比较,然后将优化后的P_(holin)用于构建N-乙酰神经氨酸表达质粒p MK4-P_(holin)-neu BC。研究结果显示:P_(holin)启动子是一种优异的枯草芽孢杆菌组成型强启动子,在利用LB进行发酵培养的实验中,P_(holin)的转录效率为同样方式构建下的P43启动子的2.62倍。通过N-乙酰神经氨酸表达质粒,可以成功地在枯草芽孢杆菌168菌株中实现N-乙酰神经氨酸的重组生产,摇瓶培养中N-乙酰神经氨酸的产量为0.226 g/L。本文为枯草芽孢杆菌进行N-乙酰神经氨酸的工业化发酵生产奠定了研究基础。 展开更多
关键词 启动子 n-乙酰神经氨酸 枯草芽孢杆菌
原文传递
全细胞催化法生产N-乙酰神经氨酸的研究进展 被引量：1
12
作者 张丛丛 陈彩霞 +3 位作者 陈笑 温雅 晏礼明 陶勇 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期175-183,共9页
N-乙酰神经氨酸(N-acetyl-D-neuraminic acid,Neu5Ac)及其衍生物不仅在人体内发挥重要的生理生化功能,且已经应用到流感的预防和治疗。但已有的N-乙酰神经氨酸生产方法产量低、成本高,限制了其大规模生产和广泛应用。随着分子生物学技... N-乙酰神经氨酸(N-acetyl-D-neuraminic acid,Neu5Ac)及其衍生物不仅在人体内发挥重要的生理生化功能,且已经应用到流感的预防和治疗。但已有的N-乙酰神经氨酸生产方法产量低、成本高,限制了其大规模生产和广泛应用。随着分子生物学技术及糖组学研究的发展与成熟,一种新型的生物技术即全细胞催化法生产N-乙酰神经氨酸正成为研究的热点。旨在介绍全细胞催化技术合成N-乙酰神经氨酸的研究进展。 展开更多
关键词 n-乙酰神经氨酸 唾液酸 全细胞催化法 生物转化
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离子色谱法测定母乳和牛乳中的N-乙酰神经氨酸 被引量：6
13
作者 刘爽 陈磊 +6 位作者 Philip Haselberger 田芳 蔡小堃 毛颖异 王津 赵艳荣 王硕 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第9期250-256,共7页
目的:母乳及动物乳汁中含有丰富的N-乙酰神经氨酸。本研究拟建立方法用于测定不同乳汁中N-乙酰神经氨酸。方法:本文采用高效阴离子交换色谱偶联脉冲安培检测器法(HPAEC-PAD)建立并验证测定母乳及牛乳中总N-乙酰神经氨酸的方法。结果:方... 目的:母乳及动物乳汁中含有丰富的N-乙酰神经氨酸。本研究拟建立方法用于测定不同乳汁中N-乙酰神经氨酸。方法:本文采用高效阴离子交换色谱偶联脉冲安培检测器法(HPAEC-PAD)建立并验证测定母乳及牛乳中总N-乙酰神经氨酸的方法。结果:方法前处理简单,在较宽的分析范围(20.7~4000 mg/L)内线性良好,相关系数大于0.999,母乳样品中的检出及定量限分别为4.3 mg/L和20.7 mg/L,准确性和精密度良好,加标回收率在86.1%~99.3%之间,平均回收率92.7%,6次重复测量RSD低于1.9%。测定不同泌乳阶段的母乳及市售牛乳中N-乙酰神经氨酸的结果显示,产后1年内母乳中总N-乙酰神经氨酸含量在187.1~1334.7 mg/L,其随泌乳期的延长呈下降趋势。其中,游离态N-乙酰神经氨酸的比例在1.0%~2.5%。5种市售牛乳中总N-乙酰神经氨酸的含量范围为177.6~228.9 mg/L,其中游离态N-乙酰神经氨酸的比例在8.5%~11.2%。结论:该方法可用于快速准确地测定母乳及牛乳中总N-乙酰神经氨酸的含量。 展开更多
关键词 离子色谱法 n-乙酰神经氨酸 母乳 牛乳
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高效液相色谱-串联质谱法测定母乳中的N-乙酰神经氨酸 被引量：5
14
作者 李秀英 黄伟乾 +3 位作者 黄荣荣 周海练 陆晓雁 周之荣 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第5期1901-1907,共7页
目的建立高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）法测定母乳中N-乙酰神经氨酸的分析方法。方法用盐酸对样品进行酸水解释放出母乳中的结合态N-乙酰神经氨酸,高速离心后,采用C_（18）柱进行分离。以0.1%甲酸-乙腈溶液和0.1%甲酸-水溶液作... 目的建立高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）法测定母乳中N-乙酰神经氨酸的分析方法。方法用盐酸对样品进行酸水解释放出母乳中的结合态N-乙酰神经氨酸,高速离心后,采用C_（18）柱进行分离。以0.1%甲酸-乙腈溶液和0.1%甲酸-水溶液作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾质谱检测,正离子多反应监测模式（MRM）进行定性和定量分析。结果在优化的条件下,N-乙酰神经氨酸在0.01~0.5 mg/L范围线性关系良好（r=0.9997）。以10、50、100 mg/kg 3个添加水平进行加标回收试验,N-乙酰神经氨酸的平均回收率为95.0%~98.7%,相对标准偏差为11.6%~14.5%,N-乙酰神经氨酸的检出限为0.21μg/kg。结论该方法简单、快速、重复性好、灵敏度高,可广泛用于母乳中N-乙酰神经氨酸的测定。 展开更多
关键词 高效液相色谱-串联质谱法 n-乙酰神经氨酸 母乳
原文传递
奶粉中N-乙酰神经氨酸的检测 被引量：6
15
作者 李金慧 赵非 +3 位作者 刘璇 卢昊 李克峰 王旭 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2020年第1期47-50,共4页
建立一种高效液相色谱荧光测定奶粉中N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,Neu5Ac)含量的分析方法。该方法利用酸水解释放出奶粉中的Neu5Ac,用邻苯二胺盐(OPD)作为衍生化试剂,80℃避光衍生100 min,采用高效液相色谱荧光检测。色谱... 建立一种高效液相色谱荧光测定奶粉中N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,Neu5Ac)含量的分析方法。该方法利用酸水解释放出奶粉中的Neu5Ac,用邻苯二胺盐(OPD)作为衍生化试剂,80℃避光衍生100 min,采用高效液相色谱荧光检测。色谱条件为:用Thermo Hypersil GOLD柱(250mm×4.6mm, 5μm)分离;流动相选择超纯水-乙腈作为梯度洗脱,柱温为30℃,流速为1.0mL/min;进样体积为10μL;荧光检测器激发波长为337 nm,发射波长为448 nm。结果表明:N-乙酰神经氨酸在0.5~200μg/g范围内线性关系良好(R^2=0.9994),回收率为98%~119%,检出限为0.5μg/g。该方法具有灵敏度高,重复性好等特点,可准确测定市售奶粉中N-乙酰神经氨酸的含量。 展开更多
关键词 奶粉 n-乙酰神经氨酸 高效液相色谱荧光(HPLC-FLD)
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不同色谱技术测定乳制品中N-乙酰神经氨酸的比较研究 被引量：2
16
作者 宋戈 刘九阳 +1 位作者 苗晶 李博群 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2022年第12期49-54,共6页
通过稀酸水解法释放N-乙酰神经氨酸,调节pH值沉淀蛋白并提取,采用CarboPacTM PA10阴离子交换柱(4.6 mm×250 mm),以醋酸钠和氢氧化钠为淋洗液进行二元梯度洗脱,脉冲安培法进行检测。比较离子交换色谱法、超高效液相色谱串联质谱法... 通过稀酸水解法释放N-乙酰神经氨酸,调节pH值沉淀蛋白并提取,采用CarboPacTM PA10阴离子交换柱(4.6 mm×250 mm),以醋酸钠和氢氧化钠为淋洗液进行二元梯度洗脱,脉冲安培法进行检测。比较离子交换色谱法、超高效液相色谱串联质谱法和液相色谱法测定乳制品中N-乙酰神经氨酸,离子交换色谱法的重复性和线性关系较好,回收率在88.9%~102.4%,精密度(RSD)为3.45%~6.75%,检出限在5 mg/kg,可准确测定乳制品中N-乙酰神经氨酸的含量。 展开更多
关键词 n-乙酰神经氨酸 乳制品 离子交换 超高效液相色谱串联质谱
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草酸水解聚唾液酸分离提纯制备N-乙酰神经氨酸
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作者 吴志波 陈祥松 +3 位作者 吴金勇 孙立洁 袁丽霞 姚建铭 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期605-611,共7页
为了探究草酸水解聚唾液酸分离提纯制备高纯度N-乙酰神经氨酸的工艺条件,以期简化工艺步骤和降低生产成本;作者重点考察了草酸对聚唾液酸的水解,首先对比了草酸和其他常规水解酸的水解效果,确定了草酸为聚唾液酸的水解酸.然后通过正交... 为了探究草酸水解聚唾液酸分离提纯制备高纯度N-乙酰神经氨酸的工艺条件,以期简化工艺步骤和降低生产成本;作者重点考察了草酸对聚唾液酸的水解,首先对比了草酸和其他常规水解酸的水解效果,确定了草酸为聚唾液酸的水解酸.然后通过正交实验确定最佳草酸水解操作参数:水解温度为90℃、水解时间为3.5 h、水解酸浓度为0.1 mol/L和聚唾液酸稀释倍数为5倍,在此条件下,聚唾液酸的水解率平均可达94%以上,水解收率可达97%以上.通过实验条件及步骤优化,得到分离提纯制备高纯度N-乙酰神经氨酸的最佳工艺.在该工艺下,红外光谱及HPLC分析证实所得产品中主要成分是N-乙酰神经氨酸,其纯度为98.5%,收率为58.4%. 展开更多
关键词 聚唾液酸 n-乙酰神经氨酸 草酸 陶瓷膜 结晶
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生物转化合成N-乙酰神经氨酸的关键因素 被引量：1
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作者 朱德强 詹晓北 +3 位作者 吴剑荣 郑志永 赵忠胜 王永远 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期64-70,共7页
在前期工作中已构建了一株能以外源N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)和胞内磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)为底物,生物转化合成N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)的重组大肠杆菌,但其合成Neu5Ac的效率有待进一步提高。通过调整生物转化阶段培养基中氮源和碳源的组... 在前期工作中已构建了一株能以外源N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)和胞内磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)为底物,生物转化合成N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)的重组大肠杆菌,但其合成Neu5Ac的效率有待进一步提高。通过调整生物转化阶段培养基中氮源和碳源的组成,探寻Neu5Ac合成过程中的关键限制性因素。结果表明,增加唾液酸合成酶NeuB活性的措施没有提高Neu5Ac的产率,而底物之一胞内PEP的供给不足是限制Neu5Ac合成的关键性因素。通过限制转化培养基中的氮源,抑制重组大肠杆菌的生长,避免了PEP被用于细胞自身生长而更多地流向Neu5Ac合成方向;通过改用不依赖PTS跨膜转运系统的甘油作为碳源,在甘油/无氮转化培养基中Neu5Ac合成量最终达到(4.42±0.08) g/L,比初始合成条件高出10.3倍。 展开更多
关键词 唾液酸 n-乙酰神经氨酸 磷酸烯醇式丙酮酸 n-乙酰氨基葡萄糖 全细胞生物转化
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青霉素钠与氯化钠对N-乙酰神经氨酸发酵的影响
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作者 高兰兰 吴金勇 +4 位作者 袁丽霞 陈祥松 朱微微 孙立洁 姚建铭 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2018年第3期74-79,124,共7页
重组枯草芽孢杆菌生产N-乙酰神经氨酸的过程中,通过加入表面活性剂和抗生素等方法来改善细胞通透性,以减少产物和副产物所带来的反馈抑制,从而促进细胞生长和产物的合成.对比研究了吐温20、吐温60、吐温80及青霉素钠对重组枯草芽孢杆菌... 重组枯草芽孢杆菌生产N-乙酰神经氨酸的过程中,通过加入表面活性剂和抗生素等方法来改善细胞通透性,以减少产物和副产物所带来的反馈抑制,从而促进细胞生长和产物的合成.对比研究了吐温20、吐温60、吐温80及青霉素钠对重组枯草芽孢杆菌摇瓶和5L发酵罐发酵的影响,确定青霉素钠具有明显增强该菌种发酵产N-乙酰神经氨酸的效果.通过对青霉素钠的添加时间和添加量进行了优化,确定在10h和34h均添加200mg·L-1青霉素钠最优,使N-乙酰神经氨酸的产量达到7.17g·L-1,相比对照提高了38.42%.在利用青霉素钠提高目标产物的基础上,又通过在发酵培养基成分中添加0.75%氯化钠来改变细胞渗透压,从而增强细胞通透性.实验证明,N-乙酰神经氨酸的产量进一步增加,最终达到7.96g·L-1. 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 n-乙酰神经氨酸 青霉素钠 氯化钠
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枯草芽孢杆菌发酵产N-乙酰神经氨酸的分离提纯
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作者 高兰兰 袁丽霞 +4 位作者 吴金勇 陈祥松 孙立洁 朱微微 姚建铭 《安徽农业科学》 CAS 2017年第28期1-2,35,共3页
[目的]对GRAS认证的枯草芽孢杆菌发酵所得N-乙酰神经氨酸进行分离纯化,获得安全性高的目的产物。[方法]通过沸水浴破壁、菌液分离、活性炭脱色、乙醇分步沉淀除杂、乙酸结晶以及重结晶等工艺对枯草芽孢杆菌基因工程菌株经培养所得的N-... [目的]对GRAS认证的枯草芽孢杆菌发酵所得N-乙酰神经氨酸进行分离纯化,获得安全性高的目的产物。[方法]通过沸水浴破壁、菌液分离、活性炭脱色、乙醇分步沉淀除杂、乙酸结晶以及重结晶等工艺对枯草芽孢杆菌基因工程菌株经培养所得的N-乙酰神经氨酸发酵液进行分离纯化。[结果]分离纯化后,N-乙酰神经氨酸纯度在96.0%以上。[结论]研究结果为N-乙酰神经氨酸应用于食品、保健品等领域提供了质量保障。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 n-乙酰神经氨酸 纯化
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