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METTL3介导的m^(6)A甲基化修饰经Notch通路调控血管内皮细胞生物学活性
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作者 唐韵 陈思 +4 位作者 叶巍 王文喆 高颖 葛轶睿 黄振平 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期723-730,共8页
目的:探索甲基转移酶3(METTL3)介导的N6-甲基腺苷(m6A)甲基化修饰在脉络膜新生血管发病中对血管内皮细胞生物学活性的调控作用及机制。方法:将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为:对照组(正常培养)、低密度脂蛋白(LDL)组、荧光标记L... 目的:探索甲基转移酶3(METTL3)介导的N6-甲基腺苷(m6A)甲基化修饰在脉络膜新生血管发病中对血管内皮细胞生物学活性的调控作用及机制。方法:将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为:对照组(正常培养)、低密度脂蛋白(LDL)组、荧光标记LDL(Dil-LDL)组、12.5μg/mL、25μg/mL氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组、12.5μg/mL、25μg/mL荧光标记ox-LDL(Dil-ox-LDL)组、DMSO组、STM2457(METTL3抑制剂)组、DAPT组;将体外培养的猴视网膜-脉络膜内皮细胞(RF/6A)分为:对照组、DMSO组、12.5μg/mL ox-LDL组、DAPT组。荧光显微镜观察细胞内吞脂蛋白水平,dot blot检测m6A甲基化水平,Western blot检测METTL3及血管形成相关蛋白的表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测METTL3及血管形成相关标志物的mRNA表达水平,免疫荧光检测METTL3表达水平及定位,transwell实验检测细胞迁移能力,体外成管实验检测细胞血管形成能力。结果:与对照组相比,Dil-LDL组、12.5μg/mL、25μg/mL Dil-ox-LDL组细胞内荧光标记的脂蛋白含量显著升高,12.5μg/mL、25μg/mL ox-LDL组m6A甲基化水平显著升高(均P<0.05),METTL3蛋白表达水平显著升高(均P<0.01),细胞迁移及血管形成能力显著上升(均P<0.01),12.5μg/mL ox-LDL组METTL3 mRNA表达水平显著上调(P<0.05);与DMSO组相比,STM2457组m6A甲基化水平显著降低(P<0.05),METTL3的蛋白及mRNA表达水平无显著差异(均P>0.05),血管内皮生长因子(VEGF)等血管形成相关标志物表达水平显著下降(均P<0.05),细胞迁移及血管形成能力显著下降(均P<0.01),NICD表达水平显著下降(P<0.05);与DMSO组相比,DAPT组NICD、VEGF表达水平显著下降(均P<0.05),HUVEC及RF/6A细胞迁移及血管形成能力显著下降(均P<0.01)。结论:METTL3介导的m6A甲基化修饰在脉络膜新生血管发病中可经Notch通路促进血管内皮细胞的血管形成。 展开更多
关键词 脉络膜新生血管 n6-甲基腺苷(m_(6)A)甲基化修饰 甲基转移酶3(mETTL3)
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