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题名牛种与非牛种布鲁氏菌ELISA鉴别检测方法的建立
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作者
王姝懿
赵学亮
孙珂
呼和巴特尔
王文龙
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机构
内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室
内蒙古自治区综合疾病预防控制中心
西北农林科技大学动物医学院
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出处
《动物医学进展》
北大核心
2023年第3期26-31,共6页
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基金
内蒙古自治区高等学校科学研究项目(NJZZ19041)
内蒙古自治区应用技术研究与开发资金计划项目(20140174)。
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文摘
为建立鉴别不同种布鲁氏菌的ELISA检测方法,筛选出牛种和非牛种布鲁氏菌差异基因NC-017250,并将其克隆至原核表达载体pET-30a中,并诱导表达。以纯化的NC-017250重组蛋白为包被抗原,通过优化反应条件建立NC-017250重组蛋白的间接ELISA检测方法。结果优化后最适血清稀释度为1∶100,兔抗牛HRP-IgG酶标二抗的最佳稀释度1∶5000,阴、阳性临界值为0.390。用该方法对布鲁氏菌S2免疫血清、A19免疫血清、PPD、FMD、BVD及IBR等阳性血清样品进行检测,除了布鲁氏菌S2免疫血清检出阳性外,其他均为阴性,特异性良好;该方法检测S2和A19免疫血清,并用SPSS软件分析敏感性达95.2%,敏感性较高。重复性试验结果显示,批内变异系数和批间变异系数均<5%。用该方法检测80份牛源临床布鲁氏菌血清样品,结果阳性率为21.3%(17/80)。建立的ELISA方法可用于区分牛种和非牛种布鲁氏菌抗体,为布鲁氏菌不同种鉴定试剂盒的研发奠定了基础。
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关键词
布鲁氏菌
布鲁氏菌A19疫苗株
nc-017250基因
间接ELISA
鉴别检测
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Keywords
Brucella
Brucella vaccine strain A19
nc-017250 gene
indirect ELISA
differential test
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分类号
S852.614
[农业科学—基础兽医学]
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