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抗NDVF蛋白单克隆抗体在鹅源新城疫病毒感染快速检测中的应用 被引量：1
1
作者 金文杰 王倩倩 +2 位作者 崔平福 邵红霞 秦爱建 《中国家禽》 北大核心 2012年第20期29-32,共4页
自1997年以来,鹅源新城疫病毒(GNDV)的感染已经成为养鹅业最重要的疾病之一。本研究以抗新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体为介导,建立了快速检测鹅源新城疫病毒感染的间接免疫荧光技术(IFA)。所建立的方法特异性强,与传染性法氏囊病病毒、... 自1997年以来,鹅源新城疫病毒(GNDV)的感染已经成为养鹅业最重要的疾病之一。本研究以抗新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体为介导,建立了快速检测鹅源新城疫病毒感染的间接免疫荧光技术(IFA)。所建立的方法特异性强,与传染性法氏囊病病毒、马立克氏病病毒及小鹅瘟病毒等均不出现交叉反应;用100TCID50GNDV感染鸡胚成纤维细胞,结果显示在感染后18h就可以检测到GNDV。与技术要求高、操作繁琐的RT-PCR以及病毒分离鉴定相比,IFA检测鹅源新城疫病毒感染具有快速、简单、特异等优点,具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 抗ndv F蛋白单克隆抗体 鹅源新城疫病毒(Gndv) IFA
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新城疫病毒TS09耐热株在BHK细胞上的传代培养 被引量：7
2
作者 温国元 商雨 +5 位作者 郭静 杨峻 王红琳 罗青平 张蓉蓉 邵华斌 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第23期5424-5427,5435,共5页
以新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)TS09耐热株为研究对象,研究了该毒株在幼仓鼠肾传代细胞(BHK细胞)上的培养适应性。通过培养条件的优化、连续传代培养和极限稀释法纯化,获得了一株新的、纯化的、适应BHK细胞的NDV耐热株,命名... 以新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)TS09耐热株为研究对象,研究了该毒株在幼仓鼠肾传代细胞(BHK细胞)上的培养适应性。通过培养条件的优化、连续传代培养和极限稀释法纯化,获得了一株新的、纯化的、适应BHK细胞的NDV耐热株,命名为TS09-C株。TS09-C株的生物学特性测定结果表明,TS09-C株在BHK细胞中的增殖滴度为107.9TCID50/mL,平均鸡胚致死时间(MDT)大于120 h,脑内致病指数(ICPI)为0。与亲本株TS09株相比,TS09-C株的基因序列发生了较为明显的改变,但TS09-C株与亲本株仍保持着较近的遗传进化关系。 展开更多
关键词 新城疫病毒(Newcastle Disease Virus ndv) 耐热 BHK细胞 传代
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单抗标记检测新城疫病毒免疫胶体金试纸条的研制 被引量：5
3
作者 李希友 田夫林 +2 位作者 张秀娥 李建亮 崔言顺 《西南农业学报》 CSCD 2006年第6期1162-1165,共4页
利用柠檬酸钠还原氯金酸,形成胶体金颗粒,选择直径20 nm的胶体金颗粒标记单克隆抗体4E8,用兔抗鼠二抗喷洒在硝酸纤维素膜上作为对照线,用另一株单抗5E6作为检测线,制备成胶体金试纸条。用试纸条检测120份泄殖腔样品,结果与病毒增殖后HA... 利用柠檬酸钠还原氯金酸,形成胶体金颗粒,选择直径20 nm的胶体金颗粒标记单克隆抗体4E8,用兔抗鼠二抗喷洒在硝酸纤维素膜上作为对照线,用另一株单抗5E6作为检测线,制备成胶体金试纸条。用试纸条检测120份泄殖腔样品,结果与病毒增殖后HA法测得的结果符合率为95.8%,HA效价在1∶2以上,试纸条均能检测为阳性,与其他病毒的阳性血清没有交叉反应,且室温下可有效保存6个月。试纸条应用方便、快速,适合临床推广以及流行病学调查。 展开更多
关键词 新城疫病毒(ndv) 试纸条 胶体金 单克隆抗体
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新城疫病毒F和HN蛋白的原核表达 被引量：6
4
作者 冉旭华 闻晓波 +1 位作者 赵喜红 刘长凤 《生物技术》 CAS CSCD 2008年第3期11-13,共3页
目的:高水平表达新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)标准强毒F48E8株的F基因和HN基因。方法:利用PCR方法扩增出新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)标准强毒F48E8株的去掉N端信号肽和C端跨膜区的F基因和HN基因并将其克隆到... 目的:高水平表达新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)标准强毒F48E8株的F基因和HN基因。方法:利用PCR方法扩增出新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)标准强毒F48E8株的去掉N端信号肽和C端跨膜区的F基因和HN基因并将其克隆到原核表达载pET30a上,得到重组质粒rpET30a-NDV/F和rpET30a-NDV/HN,转化到受体菌Rosetta-gamiTM2感受态细胞中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot检测。结果:表达的F蛋白大小约为40kD,HN蛋白大小约为51kD左右,符合预期结果。Western blot分析表明,能与抗His-tag单克隆抗体发生特异性反应。结论:重组蛋白在原核表达系统内得到了高水平的表达。说明了去除F和HN基因N端信号肽和C端跨膜区的必要性。 展开更多
关键词 新城疫病毒(ndv) F蛋白 HN蛋白 原核表达
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新城疫病毒和禽流感病毒复合型胶体金免疫层析试纸条的制备 被引量：11
5
作者 李蓓蓓 薛强 +3 位作者 李锦丰 张帆 邹明强 杨屹 《畜牧与兽医》 北大核心 2009年第8期33-37,共5页
为了建立一种简便、快速而且能同时检测新城疫病毒(NDV)和禽流感病毒(AIV)的方法,本试验采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,分别标记NDV单克隆抗体6C4和AIV单克隆抗体制备免疫检测探针。在硝酸纤维素膜上,用微定量喷头喷好2条病毒检测... 为了建立一种简便、快速而且能同时检测新城疫病毒(NDV)和禽流感病毒(AIV)的方法,本试验采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,分别标记NDV单克隆抗体6C4和AIV单克隆抗体制备免疫检测探针。在硝酸纤维素膜上,用微定量喷头喷好2条病毒检测线(T线)和1条羊抗鼠抗体质控线(C线),制备复合型免疫层析检测试纸条。结果在10 min内,可同时检测出两种病毒。试纸条检测NDV的灵敏度比HA试验结果提高8倍;AIV重组抗原的检测灵敏度为1.7μg/mL。两种病毒互相测试,未出现交叉反应。用缓冲液对照测试结果为阴性。在密封、干燥、低温的条件下,试纸条的灵敏性与特异性没有明显变化。说明本研究建立的NDV和AIV免疫层析检测法具有特异、灵敏、稳定、操作简单等特点,符合现场快速检测的要求。 展开更多
关键词 新城疫病毒(ndv) 禽流感病毒(AIV) 金标试纸条 胶体金
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人工感染鸭源新城疫病毒对绍鸭β-防御素和细胞因子基因表达的影响 被引量：5
6
作者 许丽文 王秋玲 +2 位作者 王芳芳 刘诚刚 马得莹 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第2期536-547,共12页
试验旨在探讨人工感染鸭源新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)对绍鸭β-防御素(avianβ-defensins,AvBDs)和细胞因子基因表达的影响。选用45只20日龄SPF绍鸭,随机分为攻毒组(27只)和对照组(18只),攻毒组采用滴鼻点眼的途径(108.38... 试验旨在探讨人工感染鸭源新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)对绍鸭β-防御素(avianβ-defensins,AvBDs)和细胞因子基因表达的影响。选用45只20日龄SPF绍鸭,随机分为攻毒组(27只)和对照组(18只),攻毒组采用滴鼻点眼的途径(108.38 EID50)接种鸭源NDV强毒株(Md/CH/LGD/1/2005),对照组接种磷酸盐缓冲液。在攻毒后24和48h,从对照组及攻毒组各随机取6只鸭屠宰,分别采集肾脏、肺脏、气管、腺胃、骨髓、脾脏、盲肠扁桃体、哈德氏腺、法氏囊9个组织,运用实时荧光定量PCR法检测组织样品中9种AvBDs和细胞因子的表达量;剩余鸭每天持续观察,每隔4d采血1次,直至24d,检测血清抗体水平;于攻毒后24、48、72和120h采集咽喉及泄殖腔拭子,以确定排毒周期。结果表明,感染该NDV毒株后,鸭没有临床发病症状和死亡情况发生;感染后鸭排毒开始于攻毒后第1天,到第5天停止,在攻毒组咽喉及泄殖腔拭子中均检测到NDV。抗体水平检测结果显示,该NDV能够诱导鸭体内产生抗NDV特异抗体。实时荧光定量PCR结果发现,与对照组相比,感染后24h,部分鸭组织中AvBD1、AvBD2、AvBD5、AvBD6、AvBD9和AvBD16表达量均显著升高(P<0.05);感染后48h,AvBD1和AvBD6在部分鸭组织中表达量均显著上调(P<0.05);感染后48h法氏囊中白细胞介素6(IL-6)和脾脏中干扰素γ(IFN-γ)的表达量明显低于感染后24h的表达量。综上所述,该鸭源NDV毒株感染可诱导绍鸭体内在早期产生天然免疫反应,这些反应可能与病毒在机体内复制有关。 展开更多
关键词 绍鸭 新城疫病毒(ndv) 禽β-防御素(AvBDs) 细胞因子
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新城疫病毒HN基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：4
7
作者 刘铀 毕英佐 曹永长 《西南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期785-788,共4页
用RT-PCR方法扩增新城疫病毒HN基因并将其克隆至T载体,测定其核苷酸序列。尔后用PCR扩增球状头部编码区,并将其克隆至pSOC质粒soc基因3'端EcoRⅠ位点,重组质粒pSOC-HN转化E.coliBL-21(DE3)感受态细胞,以终浓度1mmol/L的IPTG诱导表达... 用RT-PCR方法扩增新城疫病毒HN基因并将其克隆至T载体,测定其核苷酸序列。尔后用PCR扩增球状头部编码区,并将其克隆至pSOC质粒soc基因3'端EcoRⅠ位点,重组质粒pSOC-HN转化E.coliBL-21(DE3)感受态细胞,以终浓度1mmol/L的IPTG诱导表达,在SDS-PAGE凝胶上可检测到分子量约67KD的融合蛋白特异条带,west-blot证实表达产物与NDV抗血清具有良好的反应性。 展开更多
关键词 新城疫病毒(ndv) HN基因 克隆 表达
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五味消毒饮加味体外抑菌和抑制新城疫病毒试验 被引量：3
8
作者 张为民 邢福珊 +3 位作者 张彦明 徐永平 张伟玲 张德刚 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期7-11,共5页
为了解五味消毒饮及加味对临床分离致病菌的体外抑制作用及对新城疫病毒(NDV)在鸡胚内增殖的抑制作用,采用水煎醇沉法得到五味消毒饮及加味的供试水煎液,琼脂扩散法和试管倍比稀释法测定对11株分离菌的体外抑制作用;鸡胚法测定五味消毒... 为了解五味消毒饮及加味对临床分离致病菌的体外抑制作用及对新城疫病毒(NDV)在鸡胚内增殖的抑制作用,采用水煎醇沉法得到五味消毒饮及加味的供试水煎液,琼脂扩散法和试管倍比稀释法测定对11株分离菌的体外抑制作用;鸡胚法测定五味消毒饮加味对新城疫病毒(NDV)在鸡胚内增殖的抑制作用。结果表明,五味消毒饮对沙门菌(鸡)、链球菌(猪)、无乳链球菌(奶牛)、2株表皮葡萄球菌(奶牛)、绿脓杆菌(奶牛)和金黄色葡萄球菌(奶牛)的最小杀菌质量浓度(MBC)分别为大于1、1、0.5、0.5(0.5)、0.5和1 g/mL,五味消毒饮加味的MBC分别为1、0.5、0.25、0.25(0.25)、0.5和1 g/mL;五味消毒饮加味0.2、0.1和0.05g/mL对NDV在鸡胚内增殖与对照组比较具有显著的抑制作用(P<0.05或P<0.01),药毒混合组>预防组>治疗组。五味消毒饮加味抑菌作用优于原方,并对NDV在鸡胚内增殖具有抑制作用。 展开更多
关键词 五味消毒饮 体外抑菌 新城疫病毒(ndv)
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金线莲提取物体外抑菌及抑制鸡新城疫病毒在CEF上的增殖 被引量：3
9
作者 何玉琴 林标声 +2 位作者 邱龙新 戴爱玲 杨小燕 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第4期520-523,共4页
采用滤纸片扩散法和二倍稀释法测定金线莲不同方法提取物对6种供试菌的体外抑菌效果,并利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定金线莲水提取物对NDV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖的影响.结果表明:3种提取方法所获得的金线莲提取物均对链球菌有较... 采用滤纸片扩散法和二倍稀释法测定金线莲不同方法提取物对6种供试菌的体外抑菌效果,并利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定金线莲水提取物对NDV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖的影响.结果表明:3种提取方法所获得的金线莲提取物均对链球菌有较强抑制作用,表现为高敏;对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌表现为中敏;对酵母菌和普通变形杆菌的抑制作用不明显,表现为低敏.最小抑菌浓度均不高于12.5 g.L-1.药物与病毒混合组对NDV的抑制率显著高于先病毒后药物组和先药物后病毒组(P<0.05).药物浓度与NDV抑制率存在明显的正相关(P<0.05).在先药物后病毒组和药物与病毒混合组中,15.62-31.25 g.L-1金线莲水提取物具有显著的抗NDV效果;1.95-3.90 g.L-1金线莲水提取物抗NDV效果不明显. 展开更多
关键词 金线莲 提取物 体外抑菌 新城疫病毒(ndv)
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免疫鸡群新城疫病毒的分离与分子鉴定 被引量：3
10
作者 刘铀 刘艳芬 +2 位作者 陈绍红 谢为天 马龙 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期597-599,共3页
从免疫鸡群中分离到9株新城疫病毒（NDV），其中5株为强毒株，4株为中强毒株。用RT—PCR扩增F基因cDNA片段，并将其分别克隆到pGEM—Teasy载体中。序列分析结果表明，上述分离株F基因长度为1662bp，编码553个氨基酸，其F蛋白的氨基酸序... 从免疫鸡群中分离到9株新城疫病毒（NDV），其中5株为强毒株，4株为中强毒株。用RT—PCR扩增F基因cDNA片段，并将其分别克隆到pGEM—Teasy载体中。序列分析结果表明，上述分离株F基因长度为1662bp，编码553个氨基酸，其F蛋白的氨基酸序列同源性为96．0％～99．8％；但与常见疫苗株的氨基酸同源性仅为87.6％～92.2％，F蛋白裂解位点序列为^112R-R-Q／R—K—R—FI—G^119,均属于基因Ⅶ型NDV。 展开更多
关键词 新城疫病毒(ndv) 分子鉴定 RT—PCR
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禽肉产品中禽流感与新城疫病毒多重RT-PCR检测方法的建立 被引量：4
11
作者 单松华 汪敏 +4 位作者 金维荣 刘俊平 秦红友 陶琦 吴徐华 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2006年第6期507-512,共6页
根据禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,经优化单项RT-PCR(sRT-PCR)反应体系,建立的多重RT-PCR(mRT-PCR)同时检测禽流感、新城疫的极限分别为10-2.5 EID50/0.1 mL和10-3.75 EID50/0.1 mL,mRT-PCR检测禽流感的敏感性与sRT-... 根据禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,经优化单项RT-PCR(sRT-PCR)反应体系,建立的多重RT-PCR(mRT-PCR)同时检测禽流感、新城疫的极限分别为10-2.5 EID50/0.1 mL和10-3.75 EID50/0.1 mL,mRT-PCR检测禽流感的敏感性与sRT-PCR一致,mRT-PCR检测新城疫的敏感性较sRT-PCR敏感性下降2个数量级。特异性试验表明,mRT-PCR仅检测到不同亚型(H1、H3、H5、H6和H9)禽流感、不同毒力新城疫病毒,对其他9种禽病原体和SPF鸡尿囊液均未扩增出片断。mRT-PCR检测39株禽流感H1、H5和H9亚型病毒、41株不同宿主源新城疫病毒,结果与sRT-PCR、HI试验完全一致;mRT-PCR和病原分离法同时检测人工感染鸡的组织脏器,2种方法检测禽流感的符合率为93.8%(30/32),检测新城疫的符合率为95.2%(20/21);采用mRT-PCR和病原分离法同时对35份进口禽产品、32份鸡粪拭子检测,2种方法检测禽流感的符合率为100%(67/67),对新城疫的符合率为97.1%(65/67)。病原分离法的检出率虽高于mRT-PCR,经统计学分析,两者差异不显著。 展开更多
关键词 禽流感(AIV) 新城疫病毒(ndv) 多重RT-PCR 禽产品 检测
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鸡新城疫病毒和禽肺炎病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：2
12
作者 谢志勤 谢芝勋 +11 位作者 邓显文 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 张艳芳 王盛 刘加波 庞耀珊 梁亮 冯务玲 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期546-551,共6页
【目的】建立一次性可同时扩增鉴别鸡新城疫病毒(NDV)和禽肺炎病毒(APV)的二重RT-PCR,为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供技术支持。【方法】根据Gen Bank已发表NDV的F基因序列(Gen Bank登录号JX840454)和APV的F基因序列(Gene Bank... 【目的】建立一次性可同时扩增鉴别鸡新城疫病毒(NDV)和禽肺炎病毒(APV)的二重RT-PCR,为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供技术支持。【方法】根据Gen Bank已发表NDV的F基因序列(Gen Bank登录号JX840454)和APV的F基因序列(Gene Bank登录号AF187154)分别设计2对特异性引物,应用这2对引物建立可同时检测鉴别NDV和APV的二重RT-PCR,对扩增条件进行优化,并通过特异性试验、敏感性试验和临床样品检测等验证其实用性。【结果】优化后的二重RT-PCR可特异性扩增出参试NDV毒株(La Sota株、F48E9株、I株)及APV/MN-10毒株的目的条带,其大小分别为247和424 bp,而其他对照参试毒株在247和424 bp处均无特异条带出现。二重RT-PCR针对NDV和APV的最低检出限均为10 pg的RNA。应用建立的二重RT-PCR对132份从广西采集的病鸡样品进行检测,结果得到NDV阳性样品26份、APV阳性样品2份,与血清学方法的鉴定结果一致。随机选取的2份NDV阳性PCR产物与NDV(Gen Bank登录号JX840454)的F基因序列一致,同源性达100%;2份APV阳性PCR产物与APV(Gen Bank登录号AF187154)的F基因序列也完全一致,同源性达100%。【结论】针对NDV和APV建立的二重RT-PCR具有特异性好、灵敏度高、简便快速的特点,可用于临床快速鉴别诊断,为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供了技术支持。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒(ndv) 禽肺炎病毒(APV) 二重RT-PCR 检测
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新城疫病毒耐热弱毒TS09-C株反向遗传操作系统的建立 被引量：3
13
作者 温国元 郭静 +9 位作者 商雨 陈晨 王红琳 罗青平 张蓉蓉 王宏才 张腾飞 杨峻 程国富 邵华斌 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第24期6075-6078,6081,共5页
为了建立新城疫病毒(NDV)耐热弱毒株的反向遗传操作平台,以NDV TS09-C耐热弱毒株为研究对象,构建了TS09-C株的全长c DNA克隆质粒和3个分别表达NP、P和L的辅助质粒。通过4个质粒共转染预感染有表达T7 RNA聚合酶的痘病毒的BHK-21细胞,拯... 为了建立新城疫病毒(NDV)耐热弱毒株的反向遗传操作平台,以NDV TS09-C耐热弱毒株为研究对象,构建了TS09-C株的全长c DNA克隆质粒和3个分别表达NP、P和L的辅助质粒。通过4个质粒共转染预感染有表达T7 RNA聚合酶的痘病毒的BHK-21细胞,拯救出了重组病毒r TS09-C株。生物学特性试验结果表明,重组病毒r TS09-C株具有与亲本株相似的耐热、弱毒和细胞增殖特性。NDV耐热毒株反向遗传操作系统的建立为耐热活疫苗载体的研究,进一步研发新型多联(多价)耐热禽用活疫苗提供了技术平台,也为耐热机理的研究打下基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒(ndv) 耐热 反向遗传操作
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新城疫病毒Ⅳ系活疫苗辅助治疗鼻咽癌患者的临床效果观察研究 被引量：8
14
作者 岳惠芬 刘名光 +2 位作者 梁新强 崔英 陈军 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2006年第16期1219-1221,共3页
目的:考察鸡新城疫病毒Ⅳ系(NewcastlediseasevirusⅣ,NDVⅣ)活疫苗作为辅助治疗手段用于人类鼻咽癌患者的安全性、免疫学效应和临床效果。方法:以NDVLaSota株制备活疫苗,以喷雾吸入途径接种于家兔,得到了安全、有效的结果之后,再以相... 目的:考察鸡新城疫病毒Ⅳ系(NewcastlediseasevirusⅣ,NDVⅣ)活疫苗作为辅助治疗手段用于人类鼻咽癌患者的安全性、免疫学效应和临床效果。方法:以NDVLaSota株制备活疫苗,以喷雾吸入途径接种于家兔,得到了安全、有效的结果之后,再以相同途径接种于放射治疗后的鼻咽癌患者,观察其安全性、免疫学效果和辅助治疗的临床效果。结果:该疫苗接种于实验动物和肿瘤患者的近期毒副发应都属轻微,未见严重肝肾功能损害;血清均可测出相应的抗体,其几何平均滴度随接种程序的推进而相应升高;鼻咽癌患者接种该疫苗之后,3年复发率低于对照组(4·00%vs26·00%),差异有统计学意义;5年复发率亦低于对照组(14·00%vs28·00%),但差异无统计学意义。结论:鸡新城疫病毒Ⅳ系活疫苗接种于实验动物(家兔)和人,都具有良好的安全性;都能产生明显的免疫学效应;用于放射治疗后的鼻咽癌患者,能明显减少其治疗后3年复发率;因而,适宜作为一种辅助治疗手段,在临床上推广应用。5年或更长期的效果,尚待研究。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤/免疫学 病毒疫苗/药理学 新城疫病毒/免疫学
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鹅新城疫病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立 被引量：6
15
作者 刘文俊 黄运茂 +4 位作者 阳佑天 许丹宁 曹楠 周德荣 田允波 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第1期22-31,共10页
本研究拟建立一种能在基层实时、便捷诊断鹅新城疫病毒(goose Newcastle disease virus,GNDV)的检测方法。根据GenBank中公布的GNDVF基因的高度同源保守序列设计特异性引物,并在反应体系中添加钙黄绿素/氯化锰指示剂,建立可视化RT-LAMP... 本研究拟建立一种能在基层实时、便捷诊断鹅新城疫病毒(goose Newcastle disease virus,GNDV)的检测方法。根据GenBank中公布的GNDVF基因的高度同源保守序列设计特异性引物,并在反应体系中添加钙黄绿素/氯化锰指示剂,建立可视化RT-LAMP检测方法。结果显示,建立的方法能特异地检测出GNDV及NDV Lasota疫苗株,而小鹅瘟病毒(GPV)、禽流感病毒(AIV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)等其他病毒均为阴性。所建立的GNDV可视化RT-LAMP检测方法对RNA的最低检测限为10pg,反应过程不需PCR仪等复杂的仪器,50min即可完成反应,可经肉眼观察反应体系颜色判定结果。该方法特异性强、灵敏度高,且操作安全、简便、快捷,可满足基层筛查GNDV的需求。 展开更多
关键词 鹅新城疫病毒(Gndv) 环介导等温扩增(LAMP) 钙黄绿素
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表达禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白的重组耐热新城疫病毒的构建及免疫效果评估 被引量：2
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作者 商雨 李林涛 +9 位作者 李丽 徐英英 冯贺龙 汪宏才 张蓉蓉 曾哲 王红琳 罗青平 邵华斌 温国元 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期650-659,共10页
【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus sero... 【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)的Fiber2基因插入到其基因组上,构建表达Fiber2蛋白的重组耐热NDV质粒pTS-HN-Fiber2。通过病毒拯救技术拯救重组NDV rTS-HN-Fiber2,并测定其生物学特性和作为疫苗候选株的免疫原性和攻毒保护性。【结果】rTS-HN-Fiber2的鸡胚平均致死时间>168 h,且脑内接种致病指数为0,属于弱毒的范畴;在细胞上的生长曲线结果表明,rTS-HN-Fiber2与亲本LaSota株有相似的生长曲线,但最终的生长滴度略低于LaSota株;rTS-HN-Fiber2在56℃处理15 min后,病毒滴度下降约10^(3) TCID_(50)/mL,而LaSota株56℃处理5 min几乎无感染性;间接免疫荧光试验结果表明,rTS-HN-Fiber2能表达Fiber2蛋白。免疫和攻毒试验结果显示,rTS-HN-Fiber2能产生NDV抗体,且能显著提高雏鸡在FAdV-4强毒下的存活率,减轻FAdV-4强毒引起的组织病变,降低组织中的病毒载量。【结论】本研究成功构建了表达FAdV-4 Fiber2蛋白的重组耐热NDV,该病毒保持了亲本LaSota株的弱毒生物学特性,但热稳定性有显著提升;重组NDV免疫雏鸡可产生针对NDV和FAdV-4强毒的保护,该重组NDV可作为开发针对FAdV-4和NDV二联基因工程疫苗的候选病毒株。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型(FAdV-4) 新城疫病毒(ndv) Fiber2蛋白 重组病毒 耐热
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新城疫病毒洛阳分离株HN基因真核表达载体的构建 被引量：1
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作者 余祖华 程相朝 +4 位作者 丁轲 张春杰 李银聚 吴庭才 刘河冰 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第8期133-135,共3页
采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从新城疫病毒洛阳分离株中扩增出HN基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3真核表达载体上,构建pcDNA3-HN重组质粒。通过用PCR扩增、酶切电泳分析的方法对重组DNA进行鉴定,成功构建了... 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从新城疫病毒洛阳分离株中扩增出HN基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3真核表达载体上,构建pcDNA3-HN重组质粒。通过用PCR扩增、酶切电泳分析的方法对重组DNA进行鉴定,成功构建了新城疫病毒洛阳分离株HN基因真核表达载体。 展开更多
关键词 新城疫病毒(ndv) HN基因 真核表达载体
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基于量子点标记技术的鸡新城疫病毒sFLISA检测技术研究 被引量：3
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作者 房保海 孙涛 +5 位作者 贾俊涛 岳志芹 姜英辉 赵玉然 梁成珠 徐彪 《山东农业科学》 2014年第5期118-121,共4页
本研究建立了基于量子点的鸡新城疫病毒(NDV)sFLISA检测方法。该方法以抗NDV多克隆抗体为捕捉抗体、以生物素标记抗NDV单克隆抗体为检测抗体、以量子点标记的链霉亲和素为荧光探针。该方法与其它有关禽类病毒(产蛋下降综合征病毒、鸡传... 本研究建立了基于量子点的鸡新城疫病毒(NDV)sFLISA检测方法。该方法以抗NDV多克隆抗体为捕捉抗体、以生物素标记抗NDV单克隆抗体为检测抗体、以量子点标记的链霉亲和素为荧光探针。该方法与其它有关禽类病毒(产蛋下降综合征病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、禽白血病病毒)无交叉反应,比血凝试验灵敏,为临床早期快速检测NDV提供了行之有效的方法。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒(ndv) 量子点 双抗夹心荧光免疫分析(sFLISA)
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鸭源新城疫病毒的生物学特性 被引量：4
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作者 钱忠明 宋红芹 +1 位作者 钱晨 陈义平 《中国家禽》 北大核心 2005年第6期15-17,共3页
用鸡胚尿囊腔传代法从23个鸭泄殖腔拭子中分离到1株病毒,经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验鉴定为新城疫病毒。该毒株的ELD50为5.85log10,鸡胚平均致死时间(MDT)为92.5h,1日龄鸡脑内致病指数(ICPI)为0.5,6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)为0.3... 用鸡胚尿囊腔传代法从23个鸭泄殖腔拭子中分离到1株病毒,经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验鉴定为新城疫病毒。该毒株的ELD50为5.85log10,鸡胚平均致死时间(MDT)为92.5h,1日龄鸡脑内致病指数(ICPI)为0.5,6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)为0.3,属于中等偏弱毒力的毒株。该毒株不引起6周龄雏鸡发病。结果表明家鸭也能感染NDV。 展开更多
关键词 新城疫病毒 生物学特性 鸭源 脑内致病指数 ELD50 试验鉴定 血凝抑制 致死时间 泄殖腔 毒株 ndv 鸡胚 周龄 日龄 接种 毒力 发病 雏鸡 家鸭
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2004年黑龙江省新城疫病毒分子流行病学分析 被引量：9
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作者 连宏军 刘培欣 +5 位作者 闫丽辉 曹殿军 孙建宏 梁宏志 韩正博 冉多良 《动物医学进展》 CSCD 2005年第7期91-97,共7页
2004年从黑龙江省部分鸡场疑似新城疫(ND)病死鸡和鸽体内分离到9株NDV。对这9株NDV生物学特性进行测定,并对其F基因包括裂解位点在内的540bp片段进行了克隆、测序和同源性分析。结果表明,9株NDV鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接... 2004年从黑龙江省部分鸡场疑似新城疫(ND)病死鸡和鸽体内分离到9株NDV。对这9株NDV生物学特性进行测定,并对其F基因包括裂解位点在内的540bp片段进行了克隆、测序和同源性分析。结果表明,9株NDV鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)分别在47.8h～78.4h和1.51～2.00之间;8个分离株在F蛋白裂解位点氨基酸顺序为112RRQKRF117,1个分离株F蛋白裂解位点氨基酸顺序为112RRQRRF117,表明了它们全为ND中、强毒株。同源性分析显示,9株NDV分离株之间核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为79.7%～99.7%和79.8%～100%;系统发生树分析表明,6株分离株与台湾株(TW98、TW99和TW2000等)遗传距离较近,可能有共同的起源,为基因Ⅶe型NDV,2株为鸽源NDV基因Ⅵ型,1株与我国特有的F48E9遗传距离最近,为基因Ⅸ型NDV。 展开更多
关键词 2004年 黑龙江省 流行病学分析 新城疫 病毒分子 同源性分析 裂解位点 氨基酸同源性 遗传距离 ndv 生物学特性 系统发生树 分离株 死亡时间 F蛋白 病死鸡 F基因 强毒株 核苷酸 分析表 顺序 鸡场 接种 日龄 鸡胚 鸽源
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