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稳定表达野生型和突变型DNA聚合酶β的NIH3T3细胞系的建立及其生长特性 被引量:2
1
作者 金戈 杨洪艳 +6 位作者 赵继敏 黄幼田 郑智敏 赵国强 赵勤 吴景兰 董子明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第5期819-822,共4页
目的:建立稳定表达野生型及突变型DNA聚合酶β(polβ)的NIH3T3细胞系。方法:用脂质体转染法分别将野生型和突变型polβ真核表达载体pcDNA3.1-PW和pcDNA3.1-PM3转染入NIH3T3细胞,经G418筛选得到稳定转染细胞系。用RT-PCR、免疫印迹法检... 目的:建立稳定表达野生型及突变型DNA聚合酶β(polβ)的NIH3T3细胞系。方法:用脂质体转染法分别将野生型和突变型polβ真核表达载体pcDNA3.1-PW和pcDNA3.1-PM3转染入NIH3T3细胞,经G418筛选得到稳定转染细胞系。用RT-PCR、免疫印迹法检测转染细胞polβmRNA和POLB蛋白的表达水平,MTT法测转染细胞生长曲线,免疫组化法测增殖细胞核抗原(PCNA),并用流式细胞仪测细胞周期。结果与结论:成功建立了稳定表达野生型及突变型polβ的NIH3T3细胞系。野生型polβ对NIH3T3细胞生长无明显影响,突变型polβ则使NIH3T3细胞生长速度加快,细胞周期发生改变,细胞多被阻滞在S期。 展开更多
关键词 DNA聚合酶Β nih3t3细胞系 细胞转染
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稳定整合pMCLacI/Neo载体的NIH3T3细胞系的建立
2
作者 卢洋 黎怀星 傅继梁 《上海预防医学》 CAS 1998年第11期508-508,共1页
关键词 pMCLacI/Neo载体 nih3t3细胞系 质粒 基因表达
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人胰岛素原基因在体外培养的NIH3T3细胞系中的瞬时表达研究
3
作者 白然 谷玲 《中华国际医学杂志》 2002年第5期394-396,共3页
目的:研究人胰岛素原基因在体外培养的NIH3T3中的瞬时表达情况。方法:采用脂质体转染法将携带大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)启动子-人胰岛素原基因的质粒转染到体外培养的小鼠成纤维细胞系NIH3T3中,转染后48h,用放射免疫分... 目的:研究人胰岛素原基因在体外培养的NIH3T3中的瞬时表达情况。方法:采用脂质体转染法将携带大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)启动子-人胰岛素原基因的质粒转染到体外培养的小鼠成纤维细胞系NIH3T3中,转染后48h,用放射免疫分析方法(RIA)分别测定NIH3T3细胞内外的胰岛素水平。结果:NIH3T3细胞外的胰岛素水平于转染前后无显著性变化(P>0.05),而细胞内的胰岛素水平则于转染后明显升高(P<0.05)。结论:转染后48h的人胰岛素原基因在NIH3T3细胞内有较高的胰岛素表达水平,使I型糖尿病的基因治疗成为可能。 展开更多
关键词 人胰岛素原基因 体外培养 nih3t3细胞系 瞬时表达 脂质体转染 糖尿病
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小鼠NGF基因真核表达载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达 被引量:7
4
作者 宋玫 陈绍宗 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期124-126,129,共4页
目的 :构建小鼠 β NGF基因真核表达载体并观察其稳定转染的NIH 3T3细胞系中NGF的表达情况。方法 :用基因重组技术 ,将小鼠 β NGF的成熟cDNA序列及其前导序列 ,克隆到真核表达载体 pcDNA3.1+中 ,用限制性内切酶酶切鉴定重组体。利用脂... 目的 :构建小鼠 β NGF基因真核表达载体并观察其稳定转染的NIH 3T3细胞系中NGF的表达情况。方法 :用基因重组技术 ,将小鼠 β NGF的成熟cDNA序列及其前导序列 ,克隆到真核表达载体 pcDNA3.1+中 ,用限制性内切酶酶切鉴定重组体。利用脂质体FuGENETM6方法 ,转染NIH 3T3细胞。转染后 72h ,用G4 18筛选阳性克隆并培养至 2 0d。对阳性克隆培养上清中NGF的表达用Westernblot分析并观察该上清中NGF对PC12细胞突起生长的作用。结果 :β NGF基因在NIH 3T3细胞中获得表达。阳性克隆培养上清能促进PC12细胞突起生长。结论 :重组真核表达载体 pcDNA3.1+/NGF构建成功 ,NGF蛋白在NIH 3T3细胞中表达 ,并具有良好的生物学活性 。 展开更多
关键词 Β-神经生长因子 真核表达载体 nih3t3细胞系 基因转染 脂质体FuGENE^tM6
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人VEGF在NIH3T3细胞中的基因转移和表达 被引量:1
5
作者 王雅梅 李慎涛 +4 位作者 温铭杰 孙丽翠 司杨 闫豫东 祁雅慧 《首都医科大学学报》 CAS 2008年第6期737-740,共4页
目的研究人血管内皮细胞生长因子(human VEGF)在体外培养的小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)中的基因转移及表达,为血管化组织工程、缺血性疾病的治疗奠定实验基础。方法应用脂质体介导的基因转移技术,将含有人VEGF165编码序列的真核表达载体... 目的研究人血管内皮细胞生长因子(human VEGF)在体外培养的小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)中的基因转移及表达,为血管化组织工程、缺血性疾病的治疗奠定实验基础。方法应用脂质体介导的基因转移技术,将含有人VEGF165编码序列的真核表达载体pcDNA/V转染至体外培养的NIH3T3细胞系中。G418筛选出稳定表达重组质粒的细胞克隆,转接于细胞瓶中,培养72 h,同时以G418筛选的pcDNA3.1(+)阳性细胞克隆和未转染的NIH3T3细胞为阴性对照,取细胞培养上清及细胞裂解液样品进行Western blotting检测。用细胞免疫组织化学染色检测人VEGF165基因在NIH3T3细胞中的表达情况,不着色者为阴性,细胞胞质着色呈棕黄(褐)色者为阳性。结果Western blotting结果显示在转染pcDNA/V质粒的NIH3T3细胞培养上清中,可以检测到相对分子质量为22 000的反应条带,与预计的人VEGF165单体蛋白的相对分子质量相符。细胞免疫组织化学染色检测结果显示,转染pcDNA/V质粒的NIH3T3细胞呈阳性。结论人VEGF165能够在NIH3T3细胞中有效表达,并获得了稳定表达人VEGF165基因的NIH3T3细胞株。 展开更多
关键词 血管内皮细胞生长因子 真核表达载体 nih3t3细胞系 基因表达
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Senescence—like changes induced by expression of p21^Waf1/Cip1 in NIH3T3 cell line 被引量:3
6
作者 X1CHEN WEIZHANG 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2002年第3期229-233,共5页
P21Waf1/Cip1 is a potent cyclin-dependent kinase inhibitor. As a downstream mediator of p53, p21Waf1/cip1involves in cell cycle arrest, differentiation and apoptosis. Previous studies in human cells provided evidencef... P21Waf1/Cip1 is a potent cyclin-dependent kinase inhibitor. As a downstream mediator of p53, p21Waf1/cip1involves in cell cycle arrest, differentiation and apoptosis. Previous studies in human cells provided evidencefor a link between p21Waf1/cip1 and cellular senescence. While in murine cells, the role of p21Waf1/Cip1is indefinite. We explored this issue using NIH3T3 cells with inducible p21Waf1/cip1 expression. Induc-tion of p21Waf1/Cip1 triggered G1 growth arrest, and NIH3T3-p21 cells exhibited morphologic features,such as enlarged and flattened cellular shape, specific to the senescence phenotype. We also showed thatp21Waf1/Cip1-transduced NIH3T3 cells expressedβ-galactosidase activity at pH 6.0, which is known to bea marker of senescence. Our results suggest that p21Waf1/cipx can also induce senescence-like changes inmurine cells. 展开更多
关键词 nih3t3细胞系 基因表达 细胞衰老 P21^WAF1/CIP1
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一种快捷可靠评价链霉菌噬菌体准ФC31整合酶功能的双荧光报告系统(英文)
7
作者 徐焕宇 马晴雯 +4 位作者 任兆瑞 巩芷娟 黄淑帧 曾凡一 曾溢滔 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第7期929-933,共5页
在NIH3T3细胞中构建了一种链霉菌噬菌体准ФC31整合酶报告系统.该报告载体同时编码红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白,与编码准ФC31整合酶的载体共转染可以反映准ФC31整合酶的活性.细胞中从红色荧光到绿色荧光的变化和百分比的变化可经流式... 在NIH3T3细胞中构建了一种链霉菌噬菌体准ФC31整合酶报告系统.该报告载体同时编码红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白,与编码准ФC31整合酶的载体共转染可以反映准ФC31整合酶的活性.细胞中从红色荧光到绿色荧光的变化和百分比的变化可经流式细胞仪检出.随着转染中准ФC31整合酶表达载体的比例升高,表达绿色荧光的细胞比例上升.准ФC31整合酶表达载体和报告系统载体比例在10∶1时,可达最高约90%的红绿荧光转变率.这表明该准ФC31整合酶报告系统提供了一种在细胞中快捷可靠的评价准ФC31整合酶功能的方法. 展开更多
关键词 ФC31整合酶 报告系统 位点特异性重组 nih3t3细胞系
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小鼠Dnmt1启动子荧光素酶报告基因的构建及活性分析 被引量:1
8
作者 张远 杨旬旬 +5 位作者 吴风瑞 刘勇 丁彪 王彩红 黄继昌 李文雍 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期109-112,共4页
为研究小鼠Dnmt1基因启动子5'端缺失片段活性,以小鼠基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增4条不同长度的小鼠Dnmt1基因启动子5'端系列缺失片段,双酶切后克隆入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体,构建Dnmt1启动子-pGL3-Ba... 为研究小鼠Dnmt1基因启动子5'端缺失片段活性,以小鼠基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增4条不同长度的小鼠Dnmt1基因启动子5'端系列缺失片段,双酶切后克隆入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体,构建Dnmt1启动子-pGL3-Basic重组质粒。随后经脂质体转染入NIH/3T3细胞并检测各缺失片段荧光素酶活性。结果表明,成功构建Dnmt1启动子5'端系列缺失片段-pGL3-Basic荧光报告基因重组质粒。经双荧光素酶报告基因检测后发现,所有的重组质粒均表现出荧光素酶活性,且最长缺失片段Dnmt1-1-pGL3-Basic活性最强,约为其他的3倍左右。结果初步证明小鼠Dnmt1启动子在-1 866-+57 bp区域具有较强转录活性。 展开更多
关键词 小鼠 Dnmt1启动子 nih/3t3细胞系 活性分析
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反义四环素转录激活子表达细胞系的构建及鉴定
9
作者 侯德富 贺智敏 +1 位作者 余艳辉 陈主初 《湖南师范大学学报(医学版)》 2009年第1期14-16,22,共4页
目的:构建反义四环素转录激活子(reverse Tc-controlled transactivator,rtTA)表达细胞系。方法:将RevTet-On基因表达系统中调控载体pRevTet-On转染NIH3T3细胞,经G418筛选及RT-PCR鉴定。结果:获得7个rtTA不同表达水平的细胞克隆。结论:... 目的:构建反义四环素转录激活子(reverse Tc-controlled transactivator,rtTA)表达细胞系。方法:将RevTet-On基因表达系统中调控载体pRevTet-On转染NIH3T3细胞,经G418筛选及RT-PCR鉴定。结果:获得7个rtTA不同表达水平的细胞克隆。结论:成功构建rtTA表达细胞模型,为进一步研究特定外源基因的功能提供一个理想实验平台。 展开更多
关键词 反义四环素转录激活子 Rt-PCR nih3t3细胞系
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丙型肝炎
10
《传染病网络动态》 2005年第12期108-110,共3页
丙型肝炎病毒NS3不同末端在COS、NIH3T3细胞中的转录与表达——彭向欣(北京中日友好医院感染疾病科100029);《中日友好医院学报》,2005,19(1):31-34[目的:建立丙型肝炎病毒NS3区不同末端的COS和NIH 3T3的细胞系表达系统。以探... 丙型肝炎病毒NS3不同末端在COS、NIH3T3细胞中的转录与表达——彭向欣(北京中日友好医院感染疾病科100029);《中日友好医院学报》,2005,19(1):31-34[目的:建立丙型肝炎病毒NS3区不同末端的COS和NIH 3T3的细胞系表达系统。以探讨其慢性化及肝癌的发病机理。方法:用脂质体共转录法,将含有丙型肝炎病毒NS3区不同末端的重组质粒pSG 5 neo转录至COS和NIH3T3细胞系中表达,并用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和Southern blot法在DNA水平检测。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 nih3t3细胞系 中日友好医院 NS3 聚合酶链反应 医院感染
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Comparison of Structure and Biological Activity of Natural Polypeptide from Velvet Antlers of Cervus elaphus with Those of Synthesized Polypeptide 被引量:1
11
作者 XIN Ji-le ZHANG Yang +2 位作者 ZHANG Lian-zhu LIN Yong ZHOU Qiu-li 《Chemical Research in Chinese Universities》 SCIE CAS CSCD 2013年第5期924-928,共5页
关键词 生物活性物质 活性多肽 一级结构 人工合成 鹿茸 马鹿 MALDI-tOF-MS nih3t3细胞系
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