携带人NIS基因的重组腺病毒的构建 被引量：2

1

作者 黄蕤 匡安仁 +2 位作者 余海放 马超 唐恭顺 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第4期765-768,共4页

利用RT-PCR技术从Graves甲亢病人的甲状腺组织中扩增得到甲状腺钠/碘同向转运体(NIS)可编码区片段,并克隆到T载体,测序后亚克隆到腺病毒载体穿梭质粒pAdTrack-CMV上,再与含有骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183同源重组,经293细胞包装... 利用RT-PCR技术从Graves甲亢病人的甲状腺组织中扩增得到甲状腺钠/碘同向转运体(NIS)可编码区片段,并克隆到T载体,测序后亚克隆到腺病毒载体穿梭质粒pAdTrack-CMV上,再与含有骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183同源重组,经293细胞包装并扩增得到重组腺病毒AdNIS。结果显示重组腺病毒质粒经PmeI酶切鉴定,电泳中出现了诊断性片段;感染的293细胞出现了明显的细胞病变效应;PCR产物电泳证实了重组病毒的存在。病毒滴度为2.5～3×109efu/ml。表明成功构建了携带人NIS基因的重组腺病毒,这为基因转移NIS介导131I治疗非甲状腺肿瘤提供实验研究基础。 展开更多

关键词 甲状腺钠/碘同向转运体 重组腺病毒 放射性碘 nis基因 钠/碘同向转运体 ^131I治疗 甲状腺组织 293细胞 Graves 细胞病变效应

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重组NIS基因腺相关病毒的制备及其在甲状腺癌细胞系表达 被引量：1

2

作者 张一帆 李彪 +4 位作者 尤蓓 尹桂芝 贾世海 杨卉 朱承谟 《中华核医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期209-211,i0004,共4页

目的探讨钠碘同向转运体(NIs)基因介导的甲状腺癌基因治疗的可行性。方法构建腺相关病毒载体质粒pGA—NIS,并采用磷酸钙沉淀法制备重组NIs基因的腺相关病毒rAAV—NIs,体外感染甲状腺癌细胞系FTc—133、8505(:后,通过免疫荧光检测被感染... 目的探讨钠碘同向转运体(NIs)基因介导的甲状腺癌基因治疗的可行性。方法构建腺相关病毒载体质粒pGA—NIS,并采用磷酸钙沉淀法制备重组NIs基因的腺相关病毒rAAV—NIs,体外感染甲状腺癌细胞系FTc—133、8505(:后,通过免疫荧光检测被感染细胞的NIs蛋白表达,并通过摄碘实验及Na(;10。摄碘抑制实验验证其表达的NIs蛋白功能和特性。结果成功制备了重组NIs基因的rAAV—NIs,其感染肿瘤细胞所表达的NIS蛋白位于细胞膜上,且具有介导碘摄取的功能,以及被Na(:10。抑制的特性,表明与正常甲状腺细胞的NIS具有相同的功能和特性。感染细胞的碘摄取较未感染细胞明显增高。结论rAAV—NIs能介导甲状腺癌细胞的碘摄取.为甲状腺癌NIS基因介导的基因治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 甲状腺肿瘤 肿瘤细胞 培养的 钠碘转运体 基因疗法 碘放射性同位素 nis基因 甲状腺细胞 腺相关病毒 癌细胞系 制备

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hTERT启动子引导hNIS基因重组腺病毒介导放射性核素的裸鼠显像 被引量：2

3

作者 赵兴业 李玮 +2 位作者 谭建 王澎 李宁 《天津医科大学学报》 2012年第4期422-424,共3页

目的:在裸鼠体内实验中,观察使用人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子引导人钠碘转运体(hNIS)基因的重组腺病毒介导放射性核素显像的可行性。方法:扩增重组腺病毒,测定转染后U87细胞摄碘率,构建U87人胶质瘤荷瘤裸鼠模型,使用重组腺病毒Ad... 目的:在裸鼠体内实验中,观察使用人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子引导人钠碘转运体(hNIS)基因的重组腺病毒介导放射性核素显像的可行性。方法:扩增重组腺病毒,测定转染后U87细胞摄碘率,构建U87人胶质瘤荷瘤裸鼠模型,使用重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS进行体内转染,进行放射性核素99Tcm显像。结果:重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS转染端粒酶阳性的U87细胞后,hNIS基因能够介导胶质瘤细胞摄碘,并且该病毒能对U87胶质瘤荷瘤裸鼠进行体内转染;成功介导靶向性hNIS基因的表达,而转染后的荷瘤裸鼠模型能成功介导放射性核素99Tcm04-显像。结论:重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS能够实现裸鼠体内hNIS基因的靶向性表达,并能介导放射性核素99Tcm显像。 展开更多

关键词 nis基因 胶质瘤 重组腺病毒 放射性核素 裸鼠

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hTERT启动子引导的NIS基因重组腺病毒的构建 被引量：1

4

作者 董伟伟 谭建 +1 位作者 王澎 李玮 《天津医科大学学报》 2011年第3期313-316,共4页

目的:构建在人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子引导钠碘转运体(NIS)基因的重组腺病毒。方法:PCR扩增目的片断;通过荧光分析实验,选取启动效果最好的hTERT启动子片断;建立3个重组腺病毒:Ad-hTERT-NIS、Ad-CMV-NIS及Ad-CMV-TPO,培养胶质... 目的:构建在人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子引导钠碘转运体(NIS)基因的重组腺病毒。方法:PCR扩增目的片断;通过荧光分析实验,选取启动效果最好的hTERT启动子片断;建立3个重组腺病毒:Ad-hTERT-NIS、Ad-CMV-NIS及Ad-CMV-TPO,培养胶质瘤细胞系U87、U251及细胞系MRC-5(正常人胚胎成纤维细胞系),然后转染病毒并进行western bolt分析等实验。结果:胶质瘤细胞U87及U251中端粒酶为阳性,hTERT启动子片段204启动效率比较其他片段效率高,该启动子片段可以引导NIS基因的靶向性表达。结论:成功构建在hTERT核心启动子引导NIS基因的Ad-hTERT-NIS及重组腺病毒Ad-CMV-NIS和Ad-CMV-TPO,该重组腺病毒转染胶质细胞U87和U251后能成功表达NIS及TPO基因。 展开更多

关键词 nis基因 HTERT启动子 重组腺病毒 胶质瘤

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NIS基因转染对肝细胞癌NIS蛋白表达及摄碘功能的影响 被引量：1

5

作者 范义湘 易紫薇 +4 位作者 胡煜麟 张宏嘉 林美珍 陈洁芳 肖汉 《中国医学物理学杂志》 CSCD 2021年第10期1219-1222,共4页

目的:探讨肝细胞癌细胞核素靶向治疗方法。方法:提取NIS基因片段并构建重组质粒pcDNA3/NIS,将重组质粒导入肝细胞癌HepG2细胞。转染后24 h利用Western-Blot法检测HepG2细胞NIS蛋白表达,采用^(125)I结合试验评估转染后细胞的摄碘率,采用D... 目的:探讨肝细胞癌细胞核素靶向治疗方法。方法:提取NIS基因片段并构建重组质粒pcDNA3/NIS,将重组质粒导入肝细胞癌HepG2细胞。转染后24 h利用Western-Blot法检测HepG2细胞NIS蛋白表达,采用^(125)I结合试验评估转染后细胞的摄碘率,采用DAPI染色法评估HepG2细胞摄^(125)I后的凋亡情况。实验组与对照组之间NIS蛋白表达、摄碘率以及细胞凋亡率比较采用t检验。结果:蛋白电泳表明经NIS基因转染后,实验组HepG2细胞已表达NIS蛋白,表达强度显著高于对照组(t=2.693,P<0.05)。实验组HepG2细胞摄碘率B/T%平均为(18.4±5.8)%,显著高于对照组(t=36.842,P<0.05)。结合^(125)I后24 h,实验组凋亡细胞数多于对照组,平均凋亡率为(19.2±5.3)%,显著高于对照组(t=3.086,P<0.05)。结论:转染外源性NIS基因可上调肝细胞癌HepG2细胞NIS蛋白表达,使其具备摄碘功能,加快细胞凋亡,为放射性碘靶向治疗提供实验依据。 展开更多

关键词 肝细胞癌 钠碘转运体 放射性碘治疗 nis基因 摄碘功能 细胞凋亡

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维甲酸对人乳腺癌细胞NIS基因表达和摄碘功能的影响

6

作者 何小文 吴华 《中华核医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期278-281,共4页

目的探讨9-顺-维甲酸(9-cis—RA)对人乳腺癌细胞钠/碘同向转运体(NIS)基因功能表达的影响。方法应用9-cis—RA和全反式维甲酸(ATRA)分别在不同浓度下对雌激素受体(ER) 阳性的乳腺癌细胞(MCF-7)和ER阴性的乳腺癌细胞(MDA-MB-231)进行干预... 目的探讨9-顺-维甲酸(9-cis—RA)对人乳腺癌细胞钠/碘同向转运体(NIS)基因功能表达的影响。方法应用9-cis—RA和全反式维甲酸(ATRA)分别在不同浓度下对雌激素受体(ER) 阳性的乳腺癌细胞(MCF-7)和ER阴性的乳腺癌细胞(MDA-MB-231)进行干预,于不同时间点提取细胞总RNA,通过半定量逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测乳腺癌细胞NIS mRNA表达水平的变化;在体外培养条件下研究RA刺激后乳腺癌细胞对放射性碘的摄取情况。结果9-cis-RA处理后, MCF-7细胞NIS mRNA表达增强,呈浓度依赖性(F=114.17,P<0.001),在10-6mol/L浓度下NIS mRNA的表达随时间上调,16 h时达到最高,是对照组(0 h)的8.2倍(q=8.32,P<0.01),此后随时间逐渐下调;且9-cis-RA(10-6mol/L,24 h)的作用强于ATRA(t=6.572,P<0.01)。MDA-MB-231 基础状态下几乎无NIS表达,9-cis-RA刺激后可上调其表达(t=20.195,P<0.001),但表达量(NIS/ β-actin)远低于MCF-7(t=10.395,P<0.001)。碘摄取实验表明,10-6mol/L 9-cis-RA干预12 h后。MCF-17细胞摄碘开始增加,干预24 h时碘摄取达最大,是基础状态下的3.2倍.其摄碘能力可被KClO4抑制。结论9-cis—RA能明显增强ER阳性的MCF-7细胞NIS基因的表达及摄碘功能。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 肿瘤细胞 培养的 基因表达 维甲酸 聚合酶链反应 人乳腺癌细胞 9-顺-维甲酸 nis基因 摄碘功能 半定量逆转录-聚合酶链反应

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靶向性启动子携带报告基因NIS介导提高胶质瘤摄碘能力 被引量：1

7

作者 李承霞 李玮 谭建 《生物医学工程与临床》 CAS 2011年第4期374-376,共3页

目的在细胞实验中探讨靶向性人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子携带人类钠碘转运体(hNIS)基因能否提高胶质瘤的摄碘能力。方法检测在hTERT启动子引导下表达hNIS基因的腺病毒,使用该腺病毒转染U87和U251细胞系,然后使用γ记数仪检测转染后... 目的在细胞实验中探讨靶向性人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子携带人类钠碘转运体(hNIS)基因能否提高胶质瘤的摄碘能力。方法检测在hTERT启动子引导下表达hNIS基因的腺病毒,使用该腺病毒转染U87和U251细胞系,然后使用γ记数仪检测转染后细胞的摄碘能力。结果实验组肿瘤细胞在转染Ad-hTERT-hNIS后,相对于对照组细胞摄碘率提高约30～40倍。结论实验证明hTERT启动子能引导胶质瘤细胞系表现出肿瘤特异性的碘摄取。 展开更多

关键词 胶质瘤 nis基因 人端粒酶逆转录酶启动子 放射性碘

原文传递

甲状腺乳头状癌组织中NIS和RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化状态的研究 被引量：1

8

作者 唐建东 栗夏莲 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第21期3282-3285,共4页

目的探讨甲状腺乳头状癌及癌旁组织中,甲状腺功能基因钠碘转运体基因(NIS)和甲状腺抑癌基因RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)基因启动子甲基化改变的特点及其相关性。方法采用甲基化特异性PCR方法分别检测NIS和RASSF1A基因启动子的甲基... 目的探讨甲状腺乳头状癌及癌旁组织中,甲状腺功能基因钠碘转运体基因(NIS)和甲状腺抑癌基因RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)基因启动子甲基化改变的特点及其相关性。方法采用甲基化特异性PCR方法分别检测NIS和RASSF1A基因启动子的甲基化状况。结果①甲状腺乳头状癌组织中NIS基因启动子甲基化显著高于癌旁组织(P<0.05)。②甲状腺乳头状癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化显著高于癌旁组织(P<0.05)。③功能基因NIS启动子甲基化发生显著高于抑癌基因RASSF1A基因启动子的甲基化(P<0.05);功能基因NIS和抑癌基因RASSF1A的启动子的甲基化呈正相关(rs=0.41,P<0.05)。结论 RASSF1A基因和NIS基因启动子异常甲基化是甲状腺乳头状癌发生或发展过程中的分子事件,两者的基因甲基化提示呈一定正相关,可能相互影响共同参与了甲状腺乳头状癌发生、发展过程。 展开更多

关键词 甲状腺乳头状癌 nis基因 RASSF1A基因 甲基化特异性PCR

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绿藻ChlB基因和蓝藻NIES基因在溺死相关浮游生物检测中的应用 被引量：2

9

作者 李欢 徐曲毅 +6 位作者 刘超 肖成 赵建 余仲昊 杨幸怡 李越 万立华 《法医学杂志》 CAS CSCD 2021年第1期58-64,共7页

目的利用绿藻ChlB基因和蓝藻NIES基因,建立聚合酶链反应-毛细管电泳(polymerase chain reaction-capillary electrophoresis,PCR-CE)检测方法,验证该方法的特异性和灵敏度,并探讨其在溺死诊断中的应用价值。方法针对GenBank中绿藻ChlB... 目的利用绿藻ChlB基因和蓝藻NIES基因,建立聚合酶链反应-毛细管电泳(polymerase chain reaction-capillary electrophoresis,PCR-CE)检测方法,验证该方法的特异性和灵敏度,并探讨其在溺死诊断中的应用价值。方法针对GenBank中绿藻ChlB基因和蓝藻NIES基因的保守序列,设计特异性引物ChlB和引物NIES,以此构建PCR-CE检测方法。扩增50种标准样本DNA。阳性标准样本梯度浓度检测,确定灵敏度。检测25例尸体肺组织样本(溺死20例,自然死亡5例),同时比较微波消解-真空抽滤-自动扫描电镜法(microwave digestion-vacuum filtration-automated scanning electron microscopy,MD-VF-Auto SEM)的同步检测结果。结果引物ChlB和引物NIES最低检测DNA含量分别为0.161、0.109ng,可分别特异性扩增水体广泛存在的绿藻(蛋白核小球藻)和蓝藻[铜绿微囊藻(产毒及不产毒)],产物片段分别为156、182bp,非溺死器官组织检测结果均为阴性。结论构建的方法灵敏度高、特异性好,能很好地应用于溺死相关浮游生物检测,与MD-VF-Auto SEM法联用,可以增大溺死相关浮游生物的检测范围,提高溺死诊断的证据力。 展开更多

关键词 法医病理学 法医遗传学 溺水 聚合酶链反应 毛细管电泳 蓝藻 绿藻 ChlB基因 niES基因

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白细胞介素6对甲状腺细胞钠/碘转运体的基因调控 被引量：1

10

作者 袁庆新 刘超 +2 位作者 刘翠萍 覃又文 段宇 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期408-410,F005,共4页

目的研究白细胞介素6(IL-6)对甲状腺滤泡细胞膜上钠/碘转运体(NIS)基因表达的影响,探讨细胞因子在甲状腺生理功能调控和甲状腺疾病发病机制中的作用和地位。方法取Graves病(GD)患者的甲状腺组织,进行甲状腺细胞原代培养,培养5d后,吸去... 目的研究白细胞介素6(IL-6)对甲状腺滤泡细胞膜上钠/碘转运体(NIS)基因表达的影响,探讨细胞因子在甲状腺生理功能调控和甲状腺疾病发病机制中的作用和地位。方法取Graves病(GD)患者的甲状腺组织,进行甲状腺细胞原代培养,培养5d后,吸去培养液,换用含不同浓度IL6的试验液,与单层培养的滤泡上皮细胞共同孵育48h,运用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术检测NISmRNA表达的变化。结果IL-6浓度在0U/ml、1U/ml时,GD甲状腺滤泡上皮细胞膜上NISmRNA表达无明显差异;IL-6浓度在10U/ml、100U/ml时,NIS基因表达比前一浓度时明显受抑制(P<0.05),且高浓度比低浓度抑制更加明显;IL-6浓度为1000U/ml时,NIS基因表达量与前一浓度比较无统计学差别。结论IL6可抑制甲状腺滤泡细胞基底膜上NIS基因的表达,提示细胞因子IL-6的浓度不同在甲状腺生理功能调控中发挥的作用也不同。 展开更多

关键词 钠/碘转运体 白细胞介素6 甲状腺细胞 基因调控 半定量逆转录聚合酶链反应 Graves病(GD) 甲状腺滤泡细胞 甲状腺滤泡上皮细胞 mRNA表达 nis基因 6(IL-6) 细胞原代培养 功能调控 细胞因子 病发病机制 甲状腺组织 基因表达

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先天性甲状腺功能减退症钠碘转运体基因突变研究

11

作者 马绍刚 方佩华 +6 位作者 杨箐岩 刘戈力 马咸成 许静 李宁 陈慧 冯洁 《中华核医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期164-166,共3页

目的研究天津市区先天性甲状腺功能减退症(简称甲低)患者钠碘转运体(NIS)基因突变情况。方法用TKM法提取18例先天性甲低、35例随机正常对照者外周血DNA,分别聚合酶链反应(PCR)扩增NIS基因第1～15外显子,单链构象多态性分析(SSCP)筛查NI... 目的研究天津市区先天性甲状腺功能减退症(简称甲低)患者钠碘转运体(NIS)基因突变情况。方法用TKM法提取18例先天性甲低、35例随机正常对照者外周血DNA,分别聚合酶链反应(PCR)扩增NIS基因第1～15外显子,单链构象多态性分析(SSCP)筛查NIS基因15个外显子突变,突变经直接测序证实。结果所有研究对象NIS基因15个外显子均可以PCR扩增,经SSCP分析无异常电泳条带,表明18例先天性甲低无NIS基因突变。结论所研究的天津市区先天性甲低患者无NIS基因突变。 展开更多

关键词 先天性甲状腺功能减退症 转运体基因 突变研究 聚合酶链反应(PCR) 单链构象多态性分析 先天性甲低 nis基因 S基因突变 外周血DNA SSCP分析 天津市区 钠碘转运体 外显子突变 PCR扩增 正常对照 直接测序 研究对象 KM法 患者

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甲状腺乳头状癌中hMLH1、NIS和TSHR基因异常甲基化的相互关系及临床意义 被引量：5

12

作者 陆晓筱 葛明华 +5 位作者 凌志强 胡思思 许敬 郑传铭 谭卓 陈超 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期446-453,共8页

目的:探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中错配修复酶人类mutL同系物1(humanmutL homologue1,hMLH1)基因的异常甲基化状态,及其与钠碘同向转运体(sodium iodide symporter,NIS)、甲状腺激素受体(thyroid stimula... 目的:探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中错配修复酶人类mutL同系物1(humanmutL homologue1,hMLH1)基因的异常甲基化状态,及其与钠碘同向转运体(sodium iodide symporter,NIS)、甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)基因异常甲基化的相互关系。方法:采用实时荧光定量甲基化特异性聚合酶链反应分别检测152例PTC及对应癌旁正常组织中hMLH1、NIS和TSHR基因启动子甲基化状况。分析hMLH1基因甲基化与各临床病理特征参数之间的关系;hMLH1、NIS和TSHR基因甲基化之间的相关性;以及三者独立、协同作用对PTC进展的影响。结果:152例PTC组织中hMLH1基因的甲基化阳性率(37.5%)高于癌旁正常组织(5.3%)(P<0.05)。hMLH1甲基化与原发灶大小、数量、局部侵犯、T分期、淋巴转移有关(P值均<0.05),而与性别、年龄、病理分期、远处转移无关。hMLH1、NIS和TSHR基因异常甲基化之间存在较弱相关性(r均<0.400);三者的协同作用对PTC各临床病例参数亦无显著影响(P值均>0.05)。结论:hMLH1基因的异常甲基化存在于PTC组织中,可能与肿瘤的进展有关;hMLH1、NIS和TSHR基因的异常甲基化之间不存在相关性,并且它们的独立、协同效应与PTC进展亦不存在相关性。 展开更多

关键词 甲状腺肿瘤 DNA甲基化 HMLH1基因 nis基因 TSHR基因

原文传递

基础核医学

13

《中国医学文摘（基础医学）》 CSCD 2005年第4期251-254,共4页

电离辐射诱导细胞周期解偶联的实验研究；P糖蛋白抑制X射线诱导调亡及对线粒体膜电位的影响；辐射诱发肿瘤细胞旁效应的免疫学实验研究；腺病毒介导p53基因转染增加人胃癌细胞的放射敏感性；^60Co y射线对肝癌细胞株HepG2增殖和细胞周... 电离辐射诱导细胞周期解偶联的实验研究；P糖蛋白抑制X射线诱导调亡及对线粒体膜电位的影响；辐射诱发肿瘤细胞旁效应的免疫学实验研究；腺病毒介导p53基因转染增加人胃癌细胞的放射敏感性；^60Co y射线对肝癌细胞株HepG2增殖和细胞周期的影响；人非小细胞肺癌细胞受照射后肿瘤坏死因子水平的变化；X射线照射诱导小鼠junB基因的表达；氟伐他汀防治放射性肺损伤的病理形态学研究；^32P胶体局部给药防治H22移植瘤淋巴道转移的实验研究；电离辐射调控脂质体介导的p16基因在HeLa细胞中的表达；低剂量y射线全身照射对猴免疫功能的影响；^45Ca标记复合钙化合物示踪钙生物动力学观察；电离辐射致中国仓鼠卵巢（CHO）细胞凋亡的研究；用核素法探测宫颈癌前哨淋巴结；杆状病毒介导NIS基因放射治疗甲状腺癌的实验研究；全反式维甲酸对甲状腺癌细胞NIS基因表达及摄碘水平的影响；电子射线照射大鼠胶原及自由基改变的研究；全脑照射后海马组织内氨基酸类神经递质含量的变化；y射线诱发小鼠皮肤汗腺癌中p53、MDM2基因的表达；富勒醇对^60Co y射线致小鼠损伤的防护作用。 展开更多

关键词 P53基因转染 核医学 X射线照射 非小细胞肺癌细胞 放射性肺损伤 HEPG2增殖 腺病毒介导 ^60CO nis基因

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