基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路探讨苓桂气化方改善射血分数保留心力衰竭早期舒张功能的分子机制 被引量：1

1

作者 杨晨光 石玉姣 +6 位作者 乔文博 刘永成 刘思雨 梁小雨 李知轩 张贺 董国菊 《环球中医药》 CAS 2024年第6期999-1006,共8页

目的观察苓桂气化方对射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)早期模型大鼠心脏舒张功能的干预效应,基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NOD-like receptor thermal protein domain associated pr... 目的观察苓桂气化方对射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)早期模型大鼠心脏舒张功能的干预效应,基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteine-containing aspartate-specific proteases-1,Caspase-1)/消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)通路探讨其潜在的分子作用机制。方法40只自发性高血压大鼠高盐高脂高糖饮食联合腹腔注射链脲佐菌素溶液建立HFpEF早期大鼠模型,分为HFpEF组、恩格列净组(1.8 mg/kg)、苓桂气化方低剂量组(4.96 g/kg)、苓桂气化方高剂量组(9.92 g/kg),予相应药物灌胃;正常血压组、空白组予等剂量生理盐水灌胃,连续干预9周。采用超声心动图检测大鼠左心房内径(left atrial diameter,LAD)、舒张早期二尖瓣血流速度(left ventricular early diastolic filling peak velocity,E)与舒张晚期二尖瓣血流速度(atrial systolic left ventricular filling peak velocity,A)比值、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF);酶联免疫吸附测定法检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)含量;苏木精—伊红染色观察心肌组织病理变化;蛋白质印迹(Western Blot,WB)法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD和白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果与正常血压组相比,HFpEF组LAD和E/A增加(P<0.05),LVEF无明显变化(P>0.05);血清ANP含量升高(P<0.05);病理观察显示心肌炎症浸润;WB结果示NLRP3、Caspase-1、GSDMD和IL-1β蛋白含量升高(P<0.05),表明建模成功。与HFpEF组比,恩格列净组和苓桂气化方低、高剂量组的LAD和E/A减小(P<0.05),血清ANP含量降低(P<0.05),病理观察显示心肌炎症浸润减轻,WB结果示恩格列净组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),苓桂气化方低剂量组NLRP3、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),苓桂气化方高剂量组NLRP3、GSDMD、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),其余蛋白含量有下降趋势。结论苓桂气化方能改善HFpEF早期模型大鼠心脏舒张功能,其机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路、减轻心肌炎症浸润、抑制心房重构相关。 展开更多

关键词 射血分数保留心力衰竭 前临床心衰 射血分数保留心力衰竭早期 核苷酸结合寡聚化结构域样受体3/胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1/消皮素d信号通路 苓桂气化方

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瑞马唑仑调节NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路对LPS诱导的神经元焦亡的影响

2

作者 耿长振 王利 叶兰 《检验医学与临床》 CAS 2024年第16期2436-2441,共6页

目的 探讨瑞马唑仑(REM)调节Nod样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的神经元焦亡的影响。方法 将对数期小鼠海马神经元HT22细胞随机分为正常对照组(Ctrl组)、LPS诱导... 目的 探讨瑞马唑仑(REM)调节Nod样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的神经元焦亡的影响。方法 将对数期小鼠海马神经元HT22细胞随机分为正常对照组(Ctrl组)、LPS诱导组(LPS组,10 mg/L LPS)、低浓度REM组(REM-低组,160μmol/L REM)、高浓度REM组(REM-高组,320μmol/L REM)和REM-高+NLRP3激活剂尼日利亚菌素组(REM-高+尼日利亚菌素组,320μmol/L REM+10μmol/L尼日利亚菌素)。除Ctrl组外,其余各组HT22细胞均使用LPS进行诱导。各组加药处理后,采用细胞计数试剂盒8测定HT22细胞的吸光度(A值)。采用Hoechst33342/碘化吡啶(PI)染色检测HT22细胞焦亡率。采用酶联免疫吸附试验检测HT22细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HT22细胞中NLRP3信使RNA(mRNA)、Caspase-1 mRNA、GSDMD mRNA表达水平。采用蛋白质印迹法检测HT22细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达水平。结果 LPS组HT22细胞48、72 h的A_(450)值显著低于Ctrl组(P<0.05),而细胞焦亡率、上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,以及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平、ASC蛋白表达水平均显著高于Ctrl组(P<0.05)。REM-低组和REM-高组HT22细胞48、72 h的A_(450)值显著高于LPS组,且REM-高组高于REM-低组,差异均有统计学意义(P<0.05),而REM-低组和REM-高组HT22细胞焦亡率、上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,以及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平、ASC蛋白表达水平显著低于LPS组,且REM-高组低于REM-低组,差异均有统计学意义(P<0.05)。REM-高+尼日利亚菌素组HT22细胞48、72 h的A_(450)值显著低于REM-高组(P<0.05),而细胞焦亡率、上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,以及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平、ASC蛋白表达水平均显著高于REM-高组(P<0.05)。结论 REM可能通过下调NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路减轻LPS诱导的神经元焦亡。 展开更多

关键词 瑞马唑仑 nod样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1/消皮素d信号通路 脂多糖 神经元 焦亡

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芪地糖肾方调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导高糖刺激肾小球内皮细胞焦亡的研究 被引量：1

3

作者 史扬 董昭熙 +5 位作者 周盈 谢惠迪 郭燕 宿家铭 郑毅成 柳红芳 《现代中西医结合杂志》 CAS 2024年第1期1-7,共7页

目的 探究芪地糖肾方通过NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1/消皮素D蛋白(NLRP3/Caspase-1/GSDMD)通路介导高糖刺激的肾小球内皮细胞焦亡的作用。方法 将肾小球内皮细胞分为正常组、高糖组、芪地糖肾方组,... 目的 探究芪地糖肾方通过NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1/消皮素D蛋白(NLRP3/Caspase-1/GSDMD)通路介导高糖刺激的肾小球内皮细胞焦亡的作用。方法 将肾小球内皮细胞分为正常组、高糖组、芪地糖肾方组,分别予完全培养基、30 mmol/L高糖培养基、30 mmol/L高糖培养基+芪地糖肾方100μg/mL培养48 h,采用细胞免疫荧光染色法观察细胞中NLRP3表达情况及细胞骨架情况,采用Western blot法检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D蛋白(GSDMD)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)表达情况。结果 与正常组比较,高糖组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),NLRP3荧光表达信号增强,细胞骨架损伤明显;与高糖组比较,芪地糖肾方组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),NLRP3荧光表达信号减弱,细胞骨架损伤状态改善。结论 芪地糖肾方可通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡相关通路激活改善高糖诱导的肾小球内皮细胞损伤。 展开更多

关键词 糖尿病肾脏病 肾小球内皮细胞 芪地糖肾方 焦亡 nod样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1 消皮素d蛋白

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艾司洛尔通过阻断NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路抑制早期脓毒症大鼠心脏炎症反应及焦亡 被引量：8

4

作者 李盼 张欣桐 +2 位作者 刘景卓 马德胜 马莉 《中国急救医学》 CAS CSCD 2021年第9期790-796,共7页

目的研究艾司洛尔(Esmolol,ES)是否可通过抑制焦亡的经典通路进而发挥心脏保护作用。方法 72只大鼠随机分为假手术(sham operation,Sham)组、盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)组和ES组,每组24只。每组随机抽取8只大鼠观... 目的研究艾司洛尔(Esmolol,ES)是否可通过抑制焦亡的经典通路进而发挥心脏保护作用。方法 72只大鼠随机分为假手术(sham operation,Sham)组、盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)组和ES组,每组24只。每组随机抽取8只大鼠观察生存情况,剩余16只大鼠根据处理时间分为6 h和24 h两个亚组,每组8只。Sham组仅给予开腹,翻动盲肠处理;CLP组和ES组采用CLP法建立脓毒症大鼠模型。Sham组、CLP组持续经大鼠左颈内静脉泵入生理盐水6 h;ES组持续泵入艾司洛尔稀释液6 h。分别于相应时间点处死大鼠,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清IL-1β、IL-18水平,采用免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织NLRP3、Caspase-1及GSDMD蛋白表达水平;光学显微镜下观察心肌病理改变;荧光显微镜下观察心肌细胞焦亡情况。结果 (1)ELISA结果显示,与各时间点的Sham组比较,ES组大鼠血清IL-1β及IL-18水平均明显升高,24 h组最高;而与CLP组比较,上述因子水平在6 h与24 h均明显下降(P <0.05)。(2)Western blot结果显示,术后各时间点,大鼠心肌组织中焦亡经典通路相关蛋白[NOD样受体蛋白3(nucleotide-binding domain(NOD)-like receptor protein 3,NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1 (cysteinyl aspartate-specific proteases-1,Caspase-1)、消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)]在CLP组均显示出高表达状态,较Sham组明显升高(P <0.05),24 h组表达量最高,而ES组各时间点上述蛋白表达水平均较CLP组有所减少,且差异统计学意义(P <0.05)。(3)病理结果显示,Sham组大鼠心肌组织可见轻微的病理损伤,CLP组心肌细胞损伤最重,ES组大鼠的心肌细胞破坏较CLP组减轻程度多,各组24 h损伤程度均较6 h重。(4)24 h Tunel与DAPI染色显示,与Sham组可见的少量阳性细胞比较,CLP组可见大量被染色的阳性细胞,且差异有统计学意义(P <0.05);而与CLP组比较,ES组心肌细胞阳性染色数量明显减少(P <0.05)。(5) 7 d生存分析显示,CLP组大鼠死亡率最高,ES组大鼠生存天数较CLP组明显延长,差异有统计学意义(P <0.01)。结论 ES能减轻心肌损伤,提高脓毒症大鼠生存率,其机制可能与抑制焦亡经典通路中NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白表达及减少炎症因子释放有关。 展开更多

关键词 脓毒症 心功能障碍 艾司洛尔(ES) 细胞焦亡 信号通路 消皮素d(GSdMd) 天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1) nod样受体蛋白3(NLRP3)

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清热消癥方对db/db糖尿病肾脏病小鼠NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡通路的影响

5

作者 高亚斌 王峥 +3 位作者 曹博宁 李丹婷 王耀献 王珍 《中华中医药杂志》 北大核心 2025年第1期159-163,共5页

目的:研究清热消癥方对db/db糖尿病肾脏病小鼠NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)焦亡通路的影响。方法:7周龄雄性db/db小鼠20只按体质量随机分为模型组及清热消癥方组,每组10只;另取雄... 目的:研究清热消癥方对db/db糖尿病肾脏病小鼠NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)焦亡通路的影响。方法:7周龄雄性db/db小鼠20只按体质量随机分为模型组及清热消癥方组,每组10只;另取雄性db/m小鼠8只为正常组。连续灌胃8周,监测小鼠体质量、血糖,ELISA法检测尿液尿微量白蛋白及肾损伤分子1(KIM-1)、血总胆固醇(TC)、血甘油三酯(TG)、血游离脂肪酸(NEFA)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、血谷丙转氨酶(ALT)及血谷草转氨酶(AST);肾脏切片行HE及PAS染色;Western Blot及免疫组化检测肾组织NLRP3、GSDMD-N、Cleaved-Caspase1、IL-18及IL-1β蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组血糖、体质量、8 h尿微量白蛋白定量、尿KIM-1、TC、TG、NEFA、Scr、ALT及AST均显著升高(P<0.01,P<0.05),肾脏病理表现为肾小球体积增大,系膜细胞增加及系膜基质增多,肾小管出现空泡变性及扩张,肾脏NLRP3、Cleaved-Caspase1及GSDMD-N蛋白表达均显著升高(P<0.01),免疫组化提示肾脏NLRP3、IL-18及IL-1β蛋白表达显著增加(P<0.01)。与模型组比较,清热消癥方组8 h尿微量白蛋白定量、KIM-1、TC、TG及NEFA均显著降低(P<0.05),肾脏病理损伤改善,NLRP3、Cleaved-Caspase1及GSDMD-N蛋白表达均显著下降(P<0.05),免疫组化提示NLRP3、IL-18及IL-1β蛋白表达均显著减少(P<0.05)。结论:清热消癥方可减轻db/db糖尿病肾脏病小鼠肾损伤,其机制可能与抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡通路相关。 展开更多

关键词 清热消癥方 糖尿病肾脏病 nod样受体热蛋白结构域3 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1 消皮素d 细胞焦亡

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褪黑素调控NLRP3/caspase-1通路减轻脂多糖诱导的人肺泡上皮细胞损伤 被引量：2

6

作者 王齐 罗松 李亮 《河北医药》 CAS 2022年第14期2120-2123,2128,共5页

目的探讨褪黑素通过调节核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)通路对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞(A549)损伤的影响。方法体外培养A549细胞,分为对照组、LPS组(10 mg/L LPS)、LPS+... 目的探讨褪黑素通过调节核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)通路对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞(A549)损伤的影响。方法体外培养A549细胞,分为对照组、LPS组(10 mg/L LPS)、LPS+褪黑素组(LPS+MT组,10 mg/L LPS+800μmol/L褪黑素)、LPS+抑制剂组(10 mg/L LPS+10μmol/L MCC950)。应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)水平;RT-qPCR法检测细胞中NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平;Western blot法检测细胞中NLRP3、caspase-1蛋白表达水平。结果与对照组比较,LPS组A549细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例降低,细胞凋亡率、G0/G1期比例、TNF-α、IL-1β、IL-6水平和NLRP3、caspase-1 mRNA及蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与LPS组比较,LPS+MT组与LPS+抑制剂组A549细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例显著升高,细胞凋亡率、G0/G1期比例、TNF-α、IL-1β、IL-6水平和NLRP3、caspase-1 mRNA及蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论褪黑素可减轻LPS诱导的A549细胞损伤,其作用机制可能与抑制NLRP3/caspase-1信号通路有关。 展开更多

关键词 褪黑素 脂多糖 人肺泡上皮细胞 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1通路

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氟、铝单独及联合暴露对NG108-15细胞焦亡及NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路的影响

7

作者 夏娅 蒋鸿霜 +1 位作者 钱晓玲 谢春 《中华地方病学杂志》 2025年第4期272-278,共7页

目的探讨氟、铝单独及联合暴露对NG108-15细胞焦亡及NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)/消皮素D(gasdermin D,GSDMD)信号通路... 目的探讨氟、铝单独及联合暴露对NG108-15细胞焦亡及NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)/消皮素D(gasdermin D,GSDMD)信号通路的影响。方法采用析因设计,将体外培养的NG108-15细胞按照氟化钠(sodium fluoride,NaF)和三氯化铝(aluminium trichloride,AlCl 3)浓度分为对照组(0 mg/L NaF+0 mg/L AlCl 3)、氟组(40 mg/L NaF+0 mg/L AlCl 3)、铝组(0 mg/L NaF+160 mg/L AlCl 3)和氟+铝组(40 mg/L NaF+160 mg/L AlCl 3),培养24 h后收集细胞用于后续实验。采用免疫荧光法检测各组细胞焦亡指标GSDMD的荧光强度;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis associated speck-like protein,ASC)、Caspase-1及GSDMD mRNA表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、消皮素D氮端(gasdermin D N-terminus,GSDMD-N)及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)蛋白表达水平。结果免疫荧光结果显示,与对照组(1.00±0.02)比较,氟、铝、氟+铝组GSDMD荧光强度(1.49±0.02、1.22±0.04、1.25±0.03)均较高(均P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与对照组(1.00±0.02、1.00±0.01、1.00±0.08、1.00±0.06)比较,氟、铝、氟+铝组NLRP3(1.21±0.06、1.60±0.07、1.42±0.02)、ASC(2.61±0.07、1.53±0.01、2.12±0.03)、Caspase-1(1.32±0.05、1.53±0.04、2.07±0.05)及GSDMD(1.60±0.03、1.65±0.04、2.23±0.05)mRNA表达水平均较高(均P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组(1.00±0.04、1.00±0.08、1.00±0.05、1.00±0.02、1.00±0.03、1.00±0.06)比较,氟、铝、氟+铝组NLRP3(1.55±0.06、1.40±0.07、1.24±0.05)、ASC(1.66±0.05、1.48±0.06、1.32±0.06)、Caspase-1(1.51±0.02、1.40±0.01、1.28±0.03)、GSDMD(1.24±0.03、1.31±0.06、1.18±0.03)、GSDMD-N(1.18±0.04、1.27±0.03、1.27±0.03)及IL-1β(1.81±0.03、1.70±0.08、1.52±0.05)蛋白表达水平均较高(均P<0.05)。结论氟、铝单独及联合暴露均可引起NG108-15细胞焦亡,其机制可能与上调NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路相关分子的表达有关。 展开更多

关键词 氟 铝 NG108-15细胞 细胞焦亡 nod样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1/消皮素d信号通路

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基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路探讨木犀草素对LPS/ATP诱导的细胞焦亡的保护机制

8

作者 刘双慧 张衍坤 +1 位作者 赵毅 贺常亮 《中草药》 北大核心 2025年第6期1989-1998,共10页

目的基于NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cystein-asparate protease-1,Caspase-1)/消皮素D(gasdermin D,GSDMD)通路研究木犀草素对... 目的基于NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cystein-asparate protease-1,Caspase-1)/消皮素D(gasdermin D,GSDMD)通路研究木犀草素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)联合三磷腺苷(adenosine triphosphate,ATP)诱导的小鼠单核巨噬细胞J774A.1焦亡的作用及其机制。方法利用分子对接技术预测木犀草素与焦亡相关蛋白结合的可能性。将对数生长期的小鼠单核巨噬细胞J774A.1细胞分为对照组、LPS+ATP组、木犀草素(8μmol/L)组和木犀草素低、中、高(2、4、8μmol/L)+LPS+ATP组。采用LPS+ATP诱导J774A.1细胞焦亡,采用木犀草素预防治疗12 h。通过碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放和细胞计数(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活力和细胞膜损伤,利用ELISA法测定白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18的水平。采用Western blotting检测细胞中NLRP3、凋亡相关颗粒样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、Caspase-1、GSDMD的蛋白表达。同时,将ICR雄性小鼠随机分为对照组、LPS(50 mg/kg)组、木犀草素(80 mg/kg)组和木犀草素低、中、高剂量(40、60、80 mg/kg)+LPS(50 mg/kg)组,进行木犀草素干预LPS诱导小鼠脾脏细胞焦亡的体内实验,检测血清中IL-1β、IL-18的水平和脾脏中NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD的表达。结果分子对接结果表明,木犀草素与细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、NLRP3、ASC、GSDMD的结合良好,结合能均小于−5 kcal/mol。体外实验表明,经过木犀草素预处理(2~8μmol/L)12 h能显著提高LPS+ATP诱导的J774A.1细胞活力(P<0.05),显著减少PI染色阳性率和LDH释放(P<0.05),显著降低IL-1β和IL-18水平(P<0.01),并显著下调NLRP3、Caspase-1 p10及GSDMD p30的蛋白表达(P<0.01)。体内实验表明,木犀草素可以显著降低小鼠血清中IL-1β和IL-18水平(P<0.01),并显著下调NLRP3、Caspase-1 p20及GSDMD p30的蛋白表达(P<0.01)。结论木犀草素能够显著改善LPS+ATP诱导的J774A.1细胞焦亡模型的形态学损伤,抑制促炎性细胞因子IL-1β和IL-18的释放,并通过NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路抑制细胞焦亡的发生。 展开更多

关键词 细胞焦亡 木犀草素 nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1 消皮素d

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丁苯酞通过NLRP3炎性小体信号通路对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞焦亡的影响 被引量：13

9

作者 张玮 马静萍 《中西医结合心脑血管病杂志》 2020年第6期898-902,共5页

目的探讨不同剂量丁苯酞通过NLRP3炎性小体信号通路对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素-1(IL-1)蛋白表达的影响。方法将健康雄性SD大鼠50只根据随机分组法分... 目的探讨不同剂量丁苯酞通过NLRP3炎性小体信号通路对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素-1(IL-1)蛋白表达的影响。方法将健康雄性SD大鼠50只根据随机分组法分为5组:假手术组、丁苯酞低剂量治疗组、丁苯酞中剂量治疗组、丁苯酞高剂量治疗组和模型组,各10只。采用Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血2 h行再灌注,再灌注24 h后行神经功能缺损评分,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测各组大鼠的脑梗死体积,苏木素-伊红(HE)染色镜下观察各组大鼠的脑梗死病理变化,免疫组化法检测各组大鼠caspase-1、NLRP3、IL-1蛋白表达情况。结果假手术组无神经功能缺损及脑梗死。与模型组相比,丁苯酞各剂量治疗组神经功能缺损评分及脑梗死体积均减少(P<0.05)。HE染色可见假手术组核膜清晰,细胞膜完整,余各组均可见神经元数量减少,胞核溶解、固缩,胞质染色较浅,细胞水肿,但治疗组均较模型组程度轻。丁苯酞各剂量治疗组caspase-1、NLRP3、IL-1蛋白表达水平均较假手术组高(P<0.05),较模型组低(P<0.05),且存在剂量依赖性。结论丁苯酞能够通过NLRP3炎性小体信号通路改善大鼠脑缺血再灌注损伤。 展开更多

关键词 脑缺血 再灌注损伤 丁苯酞 nod样受体蛋白3炎性小体 细胞焦亡 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1 白细胞介素-1

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银杏素对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜病变及NLRP3/caspase-1/GSDMD焦亡通路的影响

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作者 李彬彬 李少君 +3 位作者 陈贵尚 唐薇 胡莉群 刘锦荣 《中国老年学杂志》 北大核心 2024年第20期5054-5058,共5页

目的探究银杏素对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜病变及NOD样受体蛋白(NLRP)3/半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase)-1/消皮素(GSDM)D焦亡通路的影响。方法将SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组、DR模型(DR)组、低剂量银杏素组(50 mg/kg银杏素)、... 目的探究银杏素对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜病变及NOD样受体蛋白(NLRP)3/半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase)-1/消皮素(GSDM)D焦亡通路的影响。方法将SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组、DR模型(DR)组、低剂量银杏素组(50 mg/kg银杏素)、高剂量银杏素组(100 mg/kg银杏素)和高剂量银杏素+NLRP3激活剂二乙基二硫代氨基甲酸酯(DDC)组(100 mg/kg银杏素+30 mg/kg DDC)各15只。高脂饲料诱导合并腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建大鼠DR模型,苏木素-伊红(HE)染色观察DR大鼠视网膜病理学变化。伊文斯蓝(EB)试验检测视网膜组织血管渗漏。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠视网膜组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)表达和血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平。TUNEL染色观察视网膜组织神经节细胞焦亡。Western印迹检测视网膜组织NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路相关蛋白表达。结果与正常组比较,DR组玻璃体EB含量、视网膜组织MDA水平、血清IL-1β、IL-18水平、视网膜组织神经节细胞焦亡率及NLRP3、caspase-1、GSDMD-N蛋白相对表达显著上升,视网膜组织SOD、GSH-Px水平显著降低(P<0.05),视网膜组织细胞排列紊乱疏松,出现水肿等严重病理学损伤。低、高剂量银杏素组较DR组各指标变化与上述相反(P<0.05),视网膜组织细胞均有不同程度的结构恢复,水肿等病理损伤有所减轻。DDC减弱了银杏素对DR大鼠视网膜细胞焦亡和病变的抑制作用。结论银杏素可能通过下调NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路抑制焦亡,减轻DR大鼠的视网膜病变。 展开更多

关键词 银杏素 nod样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸酶-1/消皮素d焦亡通路 焦亡 视网膜病变 糖尿病

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探讨延胡索乙素调控miR-22介导NLRP3/Caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路对老年急性胃炎大鼠炎症及胃黏膜的影响

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作者 徐燕 张平英 +2 位作者 陈静 邓润钧 毕宏伟 《中国老年学杂志》 北大核心 2024年第20期5031-5035,共5页

目的研究延胡索乙素(THP)调控微小RNA(miR)-22介导NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白(NLRP)3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-1/消皮素(GSDM)D细胞焦亡通路对老年急性胃炎大鼠炎症及胃黏膜的影响。方法将40只大鼠随机分为空白对照(NC... 目的研究延胡索乙素(THP)调控微小RNA(miR)-22介导NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白(NLRP)3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-1/消皮素(GSDM)D细胞焦亡通路对老年急性胃炎大鼠炎症及胃黏膜的影响。方法将40只大鼠随机分为空白对照(NC)组、模型(Model)组、THP(20 mg/kg THP)组、THP+miR-22 inhibitor组,每组10只。除NC组外,其余各组采用乙醇、水杨酸混合液灌胃法构建急性胃炎模型。记录胃炎发生计分及溃疡指数;苏木素-伊红(HE)染色法观察胃组织病理学状态;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、表皮生长因子(EGF)水平;硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)水平;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-qPCR)检测miR-22 mRNA表达水平;荧光原位杂交(FISH)检测miR-22表达水平;Western印迹检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达水平。结果NC组胃组织结构正常;与NC组相比,Model组可见胃黏膜部分上皮坏死脱落、固有层腺体部分消失、炎性细胞浸润等病理损伤、胃炎发生计分、溃疡指数、炎症分子TNF-α、IL-1β水平及氧化应激因子MDA、EGF含量、NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达水平明显升高,SOD、NO含量及miR-22表达水平明显降低(P<0.05);与Model组相比,THP组胃组织病理损伤程度均减轻、胃炎发生计分、溃疡指数、TNF-α、IL-1β水平及MDA、EGF含量、NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达水平明显降低,SOD、NO含量及miR-22表达水平明显升高(P<0.05);与THP组相比,THP+miR-22 inhibitor组MDA、EGF含量、NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达水平明显升高,SOD、NO含量明显降低(P<0.05)。结论THP能够减轻急性胃炎老年大鼠的胃黏膜损伤,抑制炎症反应和氧化应激反应,可能与其调控miR-22介导NLRP3/Caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路有关。 展开更多

关键词 急性胃炎 延胡索乙素 微小RNA-22 细胞焦亡 nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1/消皮素d信号通路

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阿司匹林调控NLRP3/caspase-1/GSDMD通路介导的焦亡途径减轻脂多糖诱导的急性肺损伤研究 被引量：5

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作者 杨迪 郭越 +2 位作者 张鹏 刘琦 任明芬 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期347-355,共9页

目的探究阿司匹林(aspirin)对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)时细胞焦亡的影响及机制。方法动物实验将SD大鼠分为对照组(control)、模型组(model)、模型+阿司匹林组(model+aspirin),每组各10只。采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS... 目的探究阿司匹林(aspirin)对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)时细胞焦亡的影响及机制。方法动物实验将SD大鼠分为对照组(control)、模型组(model)、模型+阿司匹林组(model+aspirin),每组各10只。采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)腹腔注射复制ALI大鼠模型。细胞实验将人支气管上皮细胞(BEAS-2B)分为control组、LPS组及LPS+aspirin组。HE染色观察肺组织形态、测定肺湿/干质量比(W/D)、酶联免疫吸附法(ELISA)测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)含量、碘化丙啶(PI)染色检测细胞焦亡率、Western blot检测NLRP3/caspase-1/GSDMD通路蛋白表达。利用Lipofectamine®2000构建NLRP3过表达,检测过表达对aspirin抑制LPS诱导BEAS-2B细胞焦亡及NLRP3/caspase-1/GSDMD通路的影响。结果与control组相比,model组大鼠肺组织出现明显病理损伤,W/D,IL-1β、IL-18含量以及NLRP3、cleaved-caspase-1、GSDMD-N蛋白表达均明显增加。Aspirin处理后能够改善ALI大鼠肺组织损伤,降低上述指标。与动物实验结果一致,LPS能够激活NLRP3/caspase-1/GSDMD通路诱导的BEAS-2B焦亡。Aspirin处理后能够抑制LPS对BEAS-2B细胞焦亡作用。与LPS+aspirin组相比,过表达NLRP3能够逆转aspirin对LPS诱导BEAS-2B细胞焦亡作用,促进NLRP3、cleaved-caspase-1、GSDMD-N蛋白表达。结论Aspirin能够通过调控NLRP3/caspase-1/GSDMD通路并抑制LPS诱导的ALI细胞焦亡,改善肺损伤。 展开更多

关键词 急性肺损伤 阿司匹林 焦亡 nod样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1/消皮素d通路

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化瘀解毒方对梗阻性肾病大鼠肾脏NLRP3、Caspase1、IL-1β表达的影响 被引量：11

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作者 梁文杰 马雪莲 +3 位作者 王萱 熊云昭 王香婷 许庆友 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期470-475,共6页

目的观察化瘀解毒方对梗阻性肾病大鼠肾脏核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3[NOD(nucleotide-binding oligomerization domain)-like receptor protein 3,NLRP3]、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β表达的影响。方法将4... 目的观察化瘀解毒方对梗阻性肾病大鼠肾脏核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3[NOD(nucleotide-binding oligomerization domain)-like receptor protein 3,NLRP3]、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β表达的影响。方法将40只清洁级SD大鼠随机分为假手术组(10只)、造模组(30只),采用单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)手术复制梗阻性肾病模型,成功后随机分为模型组、西药组和中药组,每组各10只。西药组给予依普利酮100 mg/(kg·d),中药组给予化瘀解毒方13.7 g/(kg·d),假手术组和模型组给予等量生理盐水,连续给药10天。检测各组血清IL-1β含量,检测肾脏NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达,检测肾脏TUNEL阳性细胞率。结果假手术组NLRP3表达不明显,Caspase-1及IL-1β呈弱表达,仅见少量TUNEL阳性细胞。与假手术组比较,模型组血清IL-1β含量升高(P<0.01),肾组织NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白及mRNA表达升高(P<0.01);NLRP3主要表达于肾间质巨噬细胞及肾小管上皮细胞,Caspase-1及IL-1β主要见于肾小管上皮细胞胞浆;TUNEL阳性细胞增多,以间质扩张的远端小管上皮细胞为主(P<0.01)。与模型组比较,两个给药组血清IL-1β含量降低(P<0.01),NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白及mRNA表达降低,TUNEL阳性细胞率降低(P<0.05,P<0.01)。结论化瘀解毒方可下调NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达,减轻肾组织炎症损伤。 展开更多

关键词 化瘀解毒方 梗阻性肾病 nod样受体蛋白3 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1 白细胞介素-1Β

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细胞焦亡在急性肾损伤中的研究进展 被引量：3

14

作者 王敏 张利鹏 《中国中西医结合急救杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期117-120,共4页

急性肾损伤(AKI)的主要病理特征是肾脏毛细血管内皮损伤引起的血管功能障碍、强烈的炎症反应和肾小管上皮细胞(TEC)损伤。细胞焦亡是由内源性细胞损伤〔损伤相关分子模式(DAMPs)〕或外源性细菌、病毒〔病原体相关分子模式(PAMPs)〕激活... 急性肾损伤(AKI)的主要病理特征是肾脏毛细血管内皮损伤引起的血管功能障碍、强烈的炎症反应和肾小管上皮细胞(TEC)损伤。细胞焦亡是由内源性细胞损伤〔损伤相关分子模式(DAMPs)〕或外源性细菌、病毒〔病原体相关分子模式(PAMPs)〕激活炎症小体相继引发下游信号活跃度增加的级联放大反应,是可导致细胞膜破坏且内容物大量释放的一种区别于凋亡的细胞死亡方式。近年来焦亡与AKI的关系也不断被报道且广受关注。现重点对细胞焦亡的分子机制及细胞焦亡与AKI关系的相关研究成果进行综述,以期为今后临床医生防治AKI提供帮助。 展开更多

关键词 焦亡 急性肾损伤 nod样受体蛋白3 Gasdermin d 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1/11

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尿酸刺激对前列腺上皮细胞的影响及其作用机制 被引量：1

15

作者 张坤 胡建鹏 +3 位作者 徐致鹏 谈建 汤华明 崔飞伦 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期698-701,共4页

目的探讨尿酸在诱导前列腺上皮RWPE-1细胞发生炎性反应中的作用及其作用机制。方法浓度分别为0、8、12、16 mg/dl的尿酸处理前列腺上皮细胞RWPE-1细胞,倒置显微镜观察RWPE-1细胞的生长及形态学变化;Western blot方法检测RWPE-1细胞内Tol... 目的探讨尿酸在诱导前列腺上皮RWPE-1细胞发生炎性反应中的作用及其作用机制。方法浓度分别为0、8、12、16 mg/dl的尿酸处理前列腺上皮细胞RWPE-1细胞,倒置显微镜观察RWPE-1细胞的生长及形态学变化;Western blot方法检测RWPE-1细胞内Toll样受体4(TLR- 4)、核转录因子-κBp65(NF-κBp65)、κB抑制蛋白激酶α(IKKα)、κB抑制蛋白激酶β(IKKβ)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性蛋白的表达变化;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测IKKα、IKKβ、NLRP3、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)的mRNA表达变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化。结果倒置显微镜观察显示,RWPE-1细胞形态学变化与尿酸作用具有浓度依赖关系;RWPE-1细胞中TLR4、NF-κBp65、IKKα、IKKβ、NLRP3炎性蛋白的表达水平随尿酸浓度的增高而增高,呈正相关(P<0.05);随着尿酸的浓度升高,IKKα、IKKβ、NLRP3、Caspase-1基因的表达呈上调趋势,呈正相关(P<0.05);尿酸刺激RWPE-1细胞12 h后,各组(0、8、12、16 mg/dl)TNF-α含量分别为:(9.69±0.22)、(9.56±0.47)、(9.63±0.51)、(10.08±0.11) ng/L,IL-1β分别为:(7.75±0.52)、(7.85±0.87)、(9.27±1.11)、(9.62±0.44) ng/L,差异无统计学意义(P>0.05);24 h后各组TNF-α分别为:(24.86±0.61)、(25.14±0.83)、(30.34±0.61)、(30.77±1.84) ng/L,IL-1β分别为:(14.81±0.23)、(15.53±0.30)、(22.87±0.65)、(25.60±0.70) ng/L;48 h后各组TNF-α分别为:(26.72±0.37)、(26.80±1.14)、(31.60±0.76)、(42.98±1.49) ng/L,IL-1β分别为:(25.36±0.70)、(30.29±0.62)、(38.91±1.52)、(40.97±1.17) ng/L,尿酸处理24、48 h后,高浓度尿酸促进了RWPE-1细胞中IL-1β和TNF-α的分泌(P<0.05)。结论尿酸可以诱导前列腺上皮RWPE-1细胞发生炎性反应,而激活TLR4/NF-κB和NLRP3/Caspase- 1信号通路是其机制之一。 展开更多

关键词 尿酸 RWPE-1细胞 炎性反应 Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路 nod样受体蛋白3/半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-1信号通路

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基于肺脏生理特性的络通纤溶饮调节细胞焦亡抑制肺纤维化机制研究 被引量：6

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作者 王杰鹏 王浩 +4 位作者 方朝义 李伟 王硕 鲁辰希 刘娜 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期2349-2354,共6页

目的:观察络通纤溶饮干预肺纤维化机制,揭示肺脏生理特性[肺用主降(升已而降),肺体喜润]的科学性和适用性。方法:48只健康雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、模型+络通纤溶饮组(简称络通纤溶饮组)、模型+泼尼松组(简称泼尼松组... 目的:观察络通纤溶饮干预肺纤维化机制,揭示肺脏生理特性[肺用主降(升已而降),肺体喜润]的科学性和适用性。方法:48只健康雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、模型+络通纤溶饮组(简称络通纤溶饮组)、模型+泼尼松组(简称泼尼松组)。气管内滴注博莱霉素(5mg/kg)建立肺纤维化大鼠模型。检测大鼠肺功能及肺组织病理形态学改变,以Szapiel和Ashcroft评分评估大鼠肺组织损伤情况,并根据Masson染色情况测量胶原容积分数;测定肺组织羟脯胺酸(HYP)和白介素-1β(IL-1β)含量,并检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达情况及NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠呼吸系统阻力(Rrs)、主气道阻力(Rn)、呼吸系统弹性(Ers)、组织弹性(H)增加,组织衰减(G)、呼吸系统顺应性(Crs)降低(P<0.01),Szapiel评分、Ashcroft评分和胶原容积分数升高(P<0.01),肺组织中HYP、IL-1β含量升高(P<0.01),NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及α-SMA mRNA表达增高(P<0.01)。与模型组比较,各用药组大鼠Rrs、Rn、Ers、H、Szapiel评分、Ashcroft评分、胶原容积分数下降(P<0.01,P<0.05),G、Crs升高(P<0.01),肺组织中HYP、IL-1β含量减少(P<0.01,P<0.05),NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及α-SMA mRNA表达降低(P<0.01)。结论:从肺脏生理特性立方的络通纤溶饮可改善肺纤维化大鼠肺功能、延缓病理进展,其机制可能与调节细胞焦亡有关,证实"肺用主降(升已而降),肺体喜润"这一理论在治疗肺纤维化中具有科学性和适用性。 展开更多

关键词 肺纤维化 “肺用主降(升已而降) 肺体喜润”理论 络通纤溶饮 细胞焦亡 机制 羟脯胺酸 白介素-1β nod样受体蛋白3/凋亡相关斑点样蛋白/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1信号通路

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大电导钙依赖性钾通道参与脓毒症炎症应答的机制研究

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作者 武坤 赵凌峰 +5 位作者 王雨平 刘盼 程沈菊 杨潇 王英 祝艳翠 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期469-475,共7页

目的探讨大电导钙依赖性钾通道(BKCa)参与脓毒症发病的机制。方法收集脓毒症患者(28例)、普通感染者(25例)和健康体检者(25例)血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BKCa水平;并分析脓毒症患者血清BKCa水平与急性生理学与慢性健康状况... 目的探讨大电导钙依赖性钾通道(BKCa)参与脓毒症发病的机制。方法收集脓毒症患者(28例)、普通感染者(25例)和健康体检者(25例)血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BKCa水平;并分析脓毒症患者血清BKCa水平与急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)的相关性。培养RAW 264.7细胞,用脂多糖(LPS)刺激,部分实验以尼日尼亚菌素(Nigericin)作为第二刺激信号构建脓毒症细胞模型;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)测定不同浓度LPS(0、50、100、1000μg/L)刺激后细胞BKCa的mRNA和蛋白表达。RAW 264.7细胞转染BKCa的小干扰RNA(siRNA-BKCa),用Western blotting测定细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1前体(pro-caspase-1)、白细胞介素-1β前体(pro-IL-1β),细胞培养液中caspase-1 p20、IL-1βp17,以及NOD样受体蛋白3(NLRP3)、核转录因子-κB(NF-κB)水平。碘化丙啶(PI)染色后荧光显微镜下观察凋亡情况,测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率,Western blotting测定细胞凋亡蛋白Gasdermin D(GSDMD)表达以评估沉默BKCa对细胞焦亡的影响。结果脓毒症患者血清BKCa明显高于普通感染者和健康体检者(ng/L:165.2±25.9比102.5±25.9、98.8±20.0,均P<0.05),且脓毒症患者血清BKCa水平与APACHEⅡ评分呈显著正相关(r=0.453,P=0.013)。用LPS构建脓毒症细胞模型,显示LPS呈浓度依赖地促进BKCα的mRNA和蛋白表达,1000μg/L刺激后细胞BKCa的mRNA和蛋白表达水平均较空白组(0μg/L)明显增加〔BKCa mRNA(2^(-ΔΔCt)):3.00±0.36比1.00±0.16,BKCa/β-actin:1.30±0.16比0.37±0.09,均P<0.05〕。与对照组比较,模型组细胞caspase-1 p20/pro-caspase-1比值、IL-1βp17/pro-IL-1β比值均明显升高(caspase-1 p20/pro-caspase-1比值:0.83±0.12比0.27±0.05,IL-1βp17/pro-IL-1β比值:0.77±0.12比0.23±0.12,均P<0.05);但转染siRNA-BKCa后二者均较模型组明显下降(caspase-1 p20/pro-caspase-1比值:0.23±0.12比0.83±0.12,IL-1βp17/pro-IL-1β比值:0.13±0.05比0.77±0.12,均P<0.05)。与对照组比较,镜下观察模型组凋亡细胞明显增多,LDH释放率、GSDMD表达明显增加〔LDH释放率:(30.60±8.40)%比(15.20±7.10)%,GSDMD-N/GSDMD-FL:2.10±0.16比1.00±0.16,均P<0.05〕;但转染siRNA-BKCa后上述指标均较模型组明显下降〔LDH释放率:(15.60±7.30)%比(30.60±8.40)%,GSDMD-N/GSDMD-FL:1.13±0.17比2.10±0.16,均P<0.05〕。脓毒症细胞NLRP3的mRNA和蛋白表达水平均较对照组明显增加〔NLRP3 mRNA(2^(-ΔΔCt)):2.06±0.17比1.00±0.24,NLRP3/GAPDH:0.46±0.05比0.15±0.04,均P<0.05〕;但转染siRNA-BKCa后NLRP3表达较模型组明显下降〔NLRP3 mRNA(2^(-ΔΔCt)):1.57±0.09比2.06±0.17,NLRP3/GAPDH:0.19±0.02比0.46±0.05,均P<0.05〕。与对照组比较,脓毒症细胞NF-κB p65核转移明显增加(NF-κB p65/Histone:0.73±0.12比0.23±0.09,P<0.05);而转染siRNA-BKCa后细胞核中NF-κB p65表达明显下降(NF-κB p65/Histone:0.20±0.03比0.73±0.12,P<0.05)。结论BKCa参与脓毒症发病,其可能机制是激活NF-κB/NLRP3/caspase-1信号通路诱导炎症因子生成和细胞焦亡。 展开更多

关键词 大电导钙依赖性钾通道 脓毒症 核转录因子-ΚB nod样受体蛋白3 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1

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