顺铂诱导TNF-α自分泌引发头颈部鳞状癌细胞RIP1/RIP3/MLKL的坏死性凋亡

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作者 汪虹晓 陶德韬 +4 位作者 马俊杰 张东林 沈左媛 邓超 周静萍 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1947-1954,共8页

目的探讨顺铂是否能够诱导头颈部鳞状癌细胞产生TNF-α,进而激活RIP1/RIP3/MLKL依赖性的坏死性凋亡通路,抑制鳞癌细胞的增殖,并探讨其分子机制。方法选取头颈部鳞状癌细胞系HN4和SCC4作为实验对象,分为对照组、顺铂组、caspases抑制组... 目的探讨顺铂是否能够诱导头颈部鳞状癌细胞产生TNF-α,进而激活RIP1/RIP3/MLKL依赖性的坏死性凋亡通路,抑制鳞癌细胞的增殖,并探讨其分子机制。方法选取头颈部鳞状癌细胞系HN4和SCC4作为实验对象,分为对照组、顺铂组、caspases抑制组、坏死性凋亡抑制组。利用CCK-8法检测顺铂刺激后24 h的细胞存活率。随后采用Western blotting检测caspase-8以及坏死性凋亡通路蛋白(RIP1/RIP3/MLKL)和NF-κB(p65)、TNF-α表达情况;结合细胞划痕实验和Western blotting检测上皮间充质转化相关蛋白(N-cadherin、Vimentin、E-cadherin)的表达情况,评估坏死性凋亡对头颈部鳞状癌细胞迁移能力的影响。结果顺铂对HN4、SCC4细胞毒性IC_(50)分别约为10μg/mL、15μg/mL。在顺铂刺激下,与坏死性凋亡抑制剂组相比,caspase-8表达降低(P<0.05),N-cadherin、Vimentin表达降低(P<0.05)、E-cadherin表达升高(P<0.05),坏死性凋亡通路蛋白(RIP1/RIP3/MLKL)表达升高(P<0.05),TNF-α和NF-κB(p65)蛋白表达均升高(P<0.05)。在顺铂组中,细胞愈合率显著降低于对照组和坏死性凋亡抑制剂组。结论顺铂作用可激活头颈部鳞状癌细胞NF-κB信号通路,并促进TNF-α自分泌,从而引发鳞癌细胞经由RIP1/RIP3/MLKL通路依赖性的坏死性凋亡反应,并抑制肿瘤细胞性增殖。 展开更多

关键词 头颈部鳞状癌细胞 顺铂 Z-VAD-FMK 坏死性凋亡 nec-1

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Necrostatin-1对大鼠慢性心肌缺血损伤的保护作用 被引量：8

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作者 王亮 王晓樑 +6 位作者 张睫 田珏 王叶红 郭勇 李晓宇 王英元 刘慧荣 《中国心血管病研究》 CAS 2008年第7期542-544,共3页

目的观察Necrostatin-1(Nec-1)对大鼠慢性心肌缺血后心功能和心肌反应性纤维化的影响。方法成年雄性SD大鼠被随机分为Nec-1处理组(7例)、溶剂对照组(例)和伪手术组(5例)。通过结扎冠状动脉左前降支建立心肌缺血模型,并于结扎的同时,给... 目的观察Necrostatin-1(Nec-1)对大鼠慢性心肌缺血后心功能和心肌反应性纤维化的影响。方法成年雄性SD大鼠被随机分为Nec-1处理组(7例)、溶剂对照组(例)和伪手术组(5例)。通过结扎冠状动脉左前降支建立心肌缺血模型,并于结扎的同时,给予大鼠尾静脉Nec-1(0.6mg/kg)或相应溶剂对照。在缺血2周后,观察左心室功能的改变,并用Masson氏染色法观察心肌反应性纤维化后心肌反应性纤维化的程度并测定相应的心肌梗死面积。结果应用Nec-1后与溶剂对照组比较,各项心功能指标如左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、最大收缩速率(+dp/dtmax)以及最大舒张速率(-dp/dtmax)均有明显改善;心肌反应性纤维化及心梗面积也显著减少[(3.5±1.0)%比(13.2±0.5)%,P<0.01)]。结论Nec-1可以明显地抑制慢性心肌缺血大鼠的心肌反应性纤维化并改善心功能,具有显著的心肌保护作用。 展开更多

关键词 慢性心肌缺血 necrostatin-1(nec-1) 程序性坏死 心功能 心肌反应性纤维化

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Necrostatin-1对雨蛙肽诱导的小鼠急性胰腺炎的保护作用 被引量：3

3

作者 胡国勇 沈杰 +5 位作者 熊杰 倪建波 赵严 汤茂春 万荣 王兴鹏 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2012年第2期180-184,共5页

目的观察Necrostatin-1(Nec-1)对雨蛙肽诱导的小鼠急性胰腺炎(AP)的影响。方法 C57BL/6小鼠予以50μg/kg的雨蛙肽腹腔注射7次,间隔1 h,建立AP模型。于第1次雨蛙肽注射后3 h、6 h、9 h和12 h,取出胰腺组织,HE染色。Western blot检测RIP1... 目的观察Necrostatin-1(Nec-1)对雨蛙肽诱导的小鼠急性胰腺炎(AP)的影响。方法 C57BL/6小鼠予以50μg/kg的雨蛙肽腹腔注射7次,间隔1 h,建立AP模型。于第1次雨蛙肽注射后3 h、6 h、9 h和12 h,取出胰腺组织,HE染色。Western blot检测RIP1和RIP3蛋白的表达;C57BL/6小鼠随机分为:Control组、Vehicle组、Nec-1组和Nec-1i组,予以50μg/kg的雨蛙肽腹腔注射10次,间隔1 h,第1次雨蛙肽注射2 h前,腹腔注射Nec-1(1 mg/kg,每6 h 1次)、Nec-1i或等体积溶剂和空白对照。于第1次雨蛙肽注射后12 h、18 h和24 h,收集血清和胰腺组织。检测血清淀粉酶和脂肪酶。HE染色评估胰腺损伤程度。Real-time RT-PCR检测胰腺组织IL-1β和TNF-αmRNA的表达。结果 RIP1和RIP3蛋白在雨蛙肽诱导的AP中逐渐升高,且与胰腺腺泡细胞的坏死呈正相关;应用Nec-1后,与Vehicle组和Nec-1i组比较,于12 h、18 h和24 h,小鼠血清淀粉酶和脂肪酶水平明显降低,胰腺组织病理评分也明显减少,同时胰腺组织中IL-1β和TNF-αmRNA的水平也明显降低。结论 Nec-1对实验性胰腺炎具有明显的保护作用;程序性坏死可能促进了急性胰腺炎的损伤。 展开更多

关键词 急性胰腺炎 程序性坏死 necrostatin-1

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Necrostatin-1对TNF-α诱导的胰岛细胞损伤的保护作用 被引量：4

4

作者 叶斌 容鹏飞 +2 位作者 刘亮 王维 张声旺 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期752-758,共7页

目的:研究necrostatin-1(Nec-1)是否对TNF-α介导的胰岛细胞损伤具有保护作用。方法:新生猪胰岛细胞分离纯化后分为3组:Nec-1组(在培养基中加入Nec-1+TNF-α)、TNF-α组(在培养基中加入TNF-α),以及纯培养基的对照组,每组均含胰岛10000 ... 目的:研究necrostatin-1(Nec-1)是否对TNF-α介导的胰岛细胞损伤具有保护作用。方法:新生猪胰岛细胞分离纯化后分为3组:Nec-1组(在培养基中加入Nec-1+TNF-α)、TNF-α组(在培养基中加入TNF-α),以及纯培养基的对照组,每组均含胰岛10000 IEQ,培养48 h后观察细胞数量的变化;通过吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色观察细胞的死亡状况;采用化学发光法检测胰岛素分泌量和核酸定量分析法检测胰岛细胞DNA含量;采用RT-PCR法检测胰岛素、胰高血糖素及生长抑素的mRNA表达水平;采用流式细胞术检测B细胞的活性。结果:Nec-1组、TNF-α组与对照组培养48 h后胰岛数量分别为(8425±2187),(4325±778)与(7122±1558)IEQ;AO/EB染色显示TNF-α组死亡的胰岛细胞较另外两组明显增多;Nec-1组、TNF-α组与对照组胰岛素/胰岛细胞DNA值分别为(13.21±3.15),(2.47±0.45)与(7.44±0.97)mIU/mg;与TNF-α组、对照组比较,Nec-1组胰岛素(6.73±1.07)、胰高血糖素(10.13±1.98)与生长抑素(8.57±1.11)基因的mRNA相对表达水平最高均(均P<0.05);Nec-1组活细胞比例(97.32±1.87)%、B细胞比例(90.86±3.68)%均较TNF-α组、对照组明显升高(均P<0.05)。结论:TNF-α可以诱导新生猪胰岛细胞的损伤,而Nec-1对TNF-α诱导的胰岛细胞损伤具有保护作用,Nec-1可能会提高新生猪胰岛细胞团中内分泌细胞的含量。 展开更多

关键词 糖尿病 胰岛 necrostatin-1 TNF-Α

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Necrostatin-1对大鼠肾缺血一再灌注损伤的保护作用 被引量：1

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作者 于金宝 崔尧丽 +4 位作者 王兵 王林林 张立亚 王玉亮 王勇强 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期44-47,I0003,共5页

目的探讨Necrostatin-l（Nec-1）对大鼠。肾缺血一再灌注损伤的保护作用及其机制。方法将90只雄性SD大鼠按随机数字表法分为三组：假手术组、DMSO对照组、Nec-1组，每组30只。DMSO对照组和Nec-1组采用夹闭双侧大鼠肾动脉45min再恢复血... 目的探讨Necrostatin-l（Nec-1）对大鼠。肾缺血一再灌注损伤的保护作用及其机制。方法将90只雄性SD大鼠按随机数字表法分为三组：假手术组、DMSO对照组、Nec-1组，每组30只。DMSO对照组和Nec-1组采用夹闭双侧大鼠肾动脉45min再恢复血流的方法制成肾缺血一再灌注模型，于模型完成前15min尾静脉给药。假手术组不夹闭双侧’肾动脉。模型制备成功后于再灌注后2、12、24h收集血清及肾组织；检测血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）；HE染色观察。肾组织病理改变；酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1B（IL-1p）浓度；Western blot方法检测受体相互作用蛋白1和3（RIPl、RIP3）的表达。结果Nec-1组Scr、BUN浓度各时间点均较DMSO对照组明显降低（P〈0．05，P〈0．01）；HE染色可见肾小管上皮细胞脱落坏死、问质水肿、炎细胞浸润明显减少；TNF-α、IL-18浓度亦均降低（P〈0．01，P〈0．05）。DMSO对照组及Nec-1组RIPl蛋白和RIP3蛋白表达均较假手术组明显升高（P〈0．01）。结论Nec-1能明显减轻大鼠肾缺血一再灌注损伤，其机制可能与抑制细胞程序性坏死有关。 展开更多

关键词 necrostatin-1(nec-1) 受体相互作用蛋白1(RIP1) 受体相互作用蛋白3(RIP3) 缺血-再灌注损伤 程序性坏死

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Nec-1在小鼠脑出血中通过抑制程序性坏死发挥神经保护作用 被引量：6

6

作者 常盼 于军 +5 位作者 张明阳 朱妙章 铁茹 张学策 赵海康 单海燕 《中风与神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2016年第3期196-199,共4页

目的研究程序性坏死的特异性抑制剂Nec-1对小鼠脑出血神经功能的保护作用,并探讨其机制。方法选取健康雄性ICR小鼠,体重25～30 g,采用在纹状体部位注射胶原酶Ⅳ或生理盐水的方法建立小鼠脑出血组或者脑出血对照组,在脑出血前15 min分别... 目的研究程序性坏死的特异性抑制剂Nec-1对小鼠脑出血神经功能的保护作用,并探讨其机制。方法选取健康雄性ICR小鼠,体重25～30 g,采用在纹状体部位注射胶原酶Ⅳ或生理盐水的方法建立小鼠脑出血组或者脑出血对照组,在脑出血前15 min分别在侧脑室注射Nec-1溶液或vehicle溶液。将实验随机分为：对照组、脑出血＋vehicle处理组、脑出血＋Nec-1处理组。分别利用干湿重法测定脑水肿程度,神经功能评分检测神经运动功能,Western blotting检测cleaved caspase-3,Bcl-2蛋白表达情况。结果脑出血加剧脑水肿程度,而Nec-1处理组减轻脑水肿程度（P〈0.05）。经Nec-1处理后,可以提高小鼠脑出血神经运动功能（P〈0.05）。脑出血可以增加cleaved caspase-3蛋白表达,抑制Bcl-2蛋白表达,经Nec-1处理后,抑制cleaved caspase-3的表达水平（P〈0.05）,增加Bcl-2的表达（P〈0.05）。结论 Nec-1对脑出血发挥重要神经保护作用,这种保护作用可能是通过抑制凋亡通路实现的,提示程序性坏死在脑出血中具有重要作用,将为脑出血的治疗提供新的思路。 展开更多

关键词 nec-1 脑出血 程序性坏死 cleaved CASPASE-3 BCL-2

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Necrostatin-1对阿尔茨海默病细胞模型的保护作用 被引量：3

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作者 杨吉平 费琳 +3 位作者 赵朝华 樊文科 成娟娟 苟兴春 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期399-403,共5页

目的:研究程序性坏死在阿尔茨海默病(AD)中的作用及Necrostatin-1(Nec-1)对其保护机制。方法:采用25μmol/L Aβ_(25-35)作用于原代培养的小鼠皮层神经元36 h,复制AD细胞模型,分别加入不同浓度的Nec-1进行干预,采用MTT法评价细胞的存活... 目的:研究程序性坏死在阿尔茨海默病(AD)中的作用及Necrostatin-1(Nec-1)对其保护机制。方法:采用25μmol/L Aβ_(25-35)作用于原代培养的小鼠皮层神经元36 h,复制AD细胞模型,分别加入不同浓度的Nec-1进行干预,采用MTT法评价细胞的存活率,试剂盒检测LDH的漏出量,用活细胞碘化丙啶(PI)染色观察细胞坏死的情况,用Western Blot检测细胞的RIPK1、RIPK3和磷酸化MLKL蛋白的表达情况。结果:与对照组相比,模型组细胞存活率明显降低(P<0.05),上清中LDH含量明显升高,PI阳性细胞数量明显增多,有聚集成团现象,细胞RIPK1、RIPK3和MLKL蛋白表达量水平均明显升高(P<0.01)。Nec-1处理后对Aβ细胞毒性作用有明显的减轻,RIPK1、RIPK3和磷酸化MLKL蛋白表达量较模型组明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:Aβ_(25-35)模拟的AD细胞模型中发生了程序性细胞坏死,Nec-1可能通过对抗程序性细胞坏死发挥神经保护作用。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 程序性坏死 necrostatin-1 细胞培养

原文传递

Necrostatin-1对脂多糖刺激的断奶仔猪血细胞分类计数和血液生化指标的影响 被引量：4

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作者 汪洋 王秀英 +3 位作者 汪龙梅 代兵 刘秀婷 刘玉兰 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2018年第8期80-86,共7页

本试验旨在研究程序性坏死阻断剂Necrostatin-1(Nec-1)对脂多糖(LPS)刺激断奶仔猪血细胞分类计数和血液生化指标的影响。选用25头断奶仔猪,分为对照组[10%二甲基亚砜(DMSO)+生理盐水]、LPS组(10%DMSO+LPS)、0.33Nec-1组[0.33 mg/kg体重(... 本试验旨在研究程序性坏死阻断剂Necrostatin-1(Nec-1)对脂多糖(LPS)刺激断奶仔猪血细胞分类计数和血液生化指标的影响。选用25头断奶仔猪,分为对照组[10%二甲基亚砜(DMSO)+生理盐水]、LPS组(10%DMSO+LPS)、0.33Nec-1组[0.33 mg/kg体重(BW)Nec-1+LPS]、1.0Nec-1组(1.0 mg/kg BW Nec-1+LPS)和3.3Nec-1组(3.3 mg/kg BW Nec-1+LPS)。注射10%DMSO或Nec-1 30 min后,对照组注射生理盐水,其他组注射100μg/kg BW LPS,分别在注射LPS或生理盐水4 h和24 h后采血液样品待测。结果表明:注射LPS 4 h后,0.33 mg/kg BW Nec-1、1.0 mg/kg BW Nec-1和3.3 mg/kg BW Nec-1显著缓解LPS刺激导致的血小板分布宽度升高(P<0.05);0.33 mg/kg BW Nec-1能显著缓解LPS刺激导致的血浆谷草转氨酶(AST)活性和AST/谷丙转氨酶(ALT)比例的升高(P<0.05),1.0 mg/kg BW Nec-1显著缓解血浆葡萄糖含量和肌酸激酶活性的降低(P<0.05);注射LPS 24 h后,0.33 mg/kg BW Nec-1、1.0 mg/kg BW Nec-1和3.3 mg/kg BW Nec-1可显著缓解LPS刺激导致的嗜酸性粒细胞比例的升高(P<0.05),并有缓解嗜酸性粒细胞绝对值升高的趋势(P<0.10);0.33 mg/kg BW Nec-1缓解了肌酸激酶活性的降低并提高了血浆总胆固醇和甘油三酯含量(P<0.05),1.0 mg/kg BW Nec-1有缓解LPS刺激导致的血浆AST/ALT升高的趋势(P<0.10),3.3 mg/kg BW Nec-1能显著缓解AST/ALT比例的升高(P<0.05)和葡萄糖的降低(P<0.05),并有缓解AST升高和总胆固醇降低的趋势(P<0.10)。以上结果表明,Nec-1对LPS刺激导致的免疫应激反应具有一定的缓解作用。 展开更多

关键词 nec-1 LPS 血细胞分类计数 血液生化指标 仔猪

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脑缺血后程序性坏死的形态学观察及necrostatin-1的保护作用 被引量：4

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作者 杨吉平 费琳 +2 位作者 赵朝华 李悦卓 苟兴春 《解剖学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期535-539,共5页

目的:观察脑缺血后损伤区发生程序性坏死(necroptosis)的细胞学变化规律,并探讨necrostatin-1(Nec-1)的保护作用。方法:雄性C57BL/6小鼠,随机分为假手术组、模型组和Nec-1给药组,建立小鼠永久性大脑中动脉阻塞模型,用在体碘化丙啶(PI)... 目的:观察脑缺血后损伤区发生程序性坏死(necroptosis)的细胞学变化规律,并探讨necrostatin-1(Nec-1)的保护作用。方法:雄性C57BL/6小鼠,随机分为假手术组、模型组和Nec-1给药组,建立小鼠永久性大脑中动脉阻塞模型,用在体碘化丙啶(PI)染色标记坏死细胞,并分别与NeuN、GFAP和Iba-1双标以判断坏死细胞类型,用免疫电镜观察磷酸化MLKL(pMLKL)的分布,用免疫印迹检测各组损伤区pMLKL的表达情况。结果:脑缺血模型后6h损伤区即出现PI阳性细胞,术后1～3d达到最多,80%与NeuN共标;术后7d时,PI阳性细胞明显减少,主要与GFAP和Iba-1共标;免疫电镜显示脑缺血后3d时pMLKL的胶体金颗粒主要沉积于神经元,而术后7d时主要分布在星形胶质细胞和小胶质细胞。免疫印迹结果显示,模型组损伤区pMLKL的表达较对照组明显升高;与模型组相比,Nec-1给药组pMLKL的表达量明显下降。结论:脑缺血后损伤区随时间变化有不同程度的细胞程序性坏死,Nec-1通过对抗程序性坏死发挥神经保护作用。 展开更多

关键词 脑缺血 程序性坏死 necrostatin-1 磷酸化MLKL

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Necrostatin-1对蛛网膜下腔出血后皮层细胞坏死状凋亡、坏死与自噬的影响 被引量：3

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作者 张斌飞 安吉洋 +5 位作者 宋锦宁 张明 罗显华 黄廷钦 翟海程 白立曦 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期740-743,753,共5页

目的研究necrostatin-1对蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后皮层细胞坏死状凋亡、自噬与坏死调节的作用。方法 72只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、赋形剂组、necrostatin-1组。赋形剂组经侧脑室给予二甲基亚砜2μL,necr... 目的研究necrostatin-1对蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后皮层细胞坏死状凋亡、自噬与坏死调节的作用。方法 72只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、赋形剂组、necrostatin-1组。赋形剂组经侧脑室给予二甲基亚砜2μL,necrostatin-1组给予necrostatin-1 5.2μg溶于2μL二甲基亚砜。血管内穿刺法制作SAH模型。每组9只观察皮质受体相互作用蛋白3和微管相关蛋白1轻链3的变化,检测坏死状凋亡与自噬;9只腹腔注射碘化丙啶观察细胞坏死。对所有大鼠进行6、12、24hLoeffler神经行为学评分。结果 Necrostatin-1下调皮质受体相互作用蛋白3和微管相关蛋白1轻链3的表达(P<0.05),减少皮层碘化丙啶阳性细胞数目(P<0.05),提高12、24h的Loeffler神经功能评分(P<0.05),有改善SAH预后的作用。结论 Necrostatin-1可能在抑制SAH后脑细胞坏死状凋亡时也下调了自噬与坏死水平。 展开更多

关键词 necrostatin-1 蛛网膜下腔出血 坏死状凋亡 坏死 自噬 脑皮质细胞 大鼠

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Necrostatin-1对输尿管梗阻小鼠肾脏炎症的影响 被引量：1

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作者 肖夏 张涛 +3 位作者 杨昕达 滕晴 侯佳 任韫卓 《临床与实验病理学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第8期863-867,共5页

目的探讨necroptosis(坏死性凋亡)抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)对单侧输尿管梗阻(unilateral ureter obstruction,UUO)小鼠肾脏炎症的影响。方法雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(Sham组)、左侧输尿管结扎组(UUO组)、UUO+Nec-1治疗组(UN... 目的探讨necroptosis(坏死性凋亡)抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)对单侧输尿管梗阻(unilateral ureter obstruction,UUO)小鼠肾脏炎症的影响。方法雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(Sham组)、左侧输尿管结扎组(UUO组)、UUO+Nec-1治疗组(UN组),术后7天处死小鼠取左肾。收集血清测定肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平;HE染色观察肾脏形态学改变;免疫组化法和Western blot法分别检测肾脏组织中坏死性凋亡相关指标RIP1、RIP3、MLKL以及炎症相关因子TNF-α、IL-1β、MCP-1的表达。结果与Sham组相比,UUO组小鼠RIP1、RIP3和MLKL蛋白表达明显升高,同时伴有TNF-α、IL-1β、MCP-1表达增多。Nec-1治疗显著降低了上述蛋白的表达水平,同时HE染色显示肾间质炎性反应和肾小管损伤程度有所减轻,Scr和BUN水平提示肾功能有所改善。结论 Nec-1通过抑制necroptosis减轻了单侧输尿管梗阻小鼠肾脏的炎症反应,这可能成为治疗肾脏继发炎症的新靶点。 展开更多

关键词 炎症 输尿管梗阻 necrostatin-1 NECROPTOSIS

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Nec-1对于环孢素A导致的细胞毒性的保护作用与机制研究 被引量：1

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作者 欧阳资章 刘晓萍 +3 位作者 江晟 钟志华 肖诚胤 邓惠容 《中国生化药物杂志》 CAS 2017年第7期34-36,39,共4页

目的探讨Nec-1对于环孢素A导致的细胞毒性的保护作用及其潜在的分子机制。方法以Nec-1和环孢素A共同作用于小鼠肾小管上皮细胞株MRTEpi C、肾小球内皮细胞MGEC、肾小球系膜细胞株MMC,然后采用MTT法、软琼脂克隆形成实验分别检测细胞的... 目的探讨Nec-1对于环孢素A导致的细胞毒性的保护作用及其潜在的分子机制。方法以Nec-1和环孢素A共同作用于小鼠肾小管上皮细胞株MRTEpi C、肾小球内皮细胞MGEC、肾小球系膜细胞株MMC,然后采用MTT法、软琼脂克隆形成实验分别检测细胞的生长曲线变化、克隆形成能力。采用流式细胞术检测细胞凋亡。采用Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK2、Cyclin E和细胞凋亡相关Caspase3。结果环孢素A作用后,细胞生长能力明显下降,克隆形成能力明显降低,具有统计学意义（P〈0.05）。细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK2、Cyclin E显著升高（P〈0.05）,细胞凋亡的比例和Caspase 3的表达无变化。结论 Nec-1通过上调细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK2、Cyclin E对肾小球和肾小管细胞产生细胞毒性作用,而Nec-1具有保护作用。 展开更多

关键词 程序性坏死特异性抑制剂-1(nec-1) 环孢素A 细胞周期相关蛋白

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z-VAD-FMK与Necrostatin-1联合对MODS大鼠器官的保护作用研究 被引量：1

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作者 张立亚 崔尧丽 +2 位作者 王兵 王勇强 王玉亮 《天津医科大学学报》 2014年第2期85-88,共4页

目的:探讨z-VAD-FMK与Necrostatin-1联合对MODS大鼠器官的保护作用。方法:采用失血性休克-内毒素"二次打击"建立大鼠MODS动物模型。将80只雄性SD大鼠随机分为4组:z-VAD-FMK组、Nec-1组、z-VAD-FMK+Nec-1组、模型组,每组20只,... 目的:探讨z-VAD-FMK与Necrostatin-1联合对MODS大鼠器官的保护作用。方法:采用失血性休克-内毒素"二次打击"建立大鼠MODS动物模型。将80只雄性SD大鼠随机分为4组:z-VAD-FMK组、Nec-1组、z-VAD-FMK+Nec-1组、模型组,每组20只,观察72 h死亡率。另取40只雄性SD大鼠随机分为5组:假手术组、z-VAD-FMK组、Nec-1组、z-VAD-FMK+Nec-1组、模型组,每组8只,分别于注射内毒素和生理盐水后24 h收集血清和肝、肺、肠组织。全自动生化仪检测血清ALT、AST的变化,血气分析仪检测PaO2的变化,ELISA检测血清TNF-α、IL-1β的变化,HE染色观察肝、肺、肠组织的病理学改变。结果:大鼠遭受失血性休克-内毒素"二次打击"后,血清ALT、AST明显升高(P<0.01),PaO2显著下降(P<0.01),血清炎性因子TNF-α、IL-1β水平明显升高(P<0.01)。光镜下见肝窦明显扩张、淤血,肝小叶结构紊乱,肝细胞部分变性、坏死;肺泡壁结构被破坏,肺间质充血,大量炎性细胞浸润;肠绒毛结构被破坏,部分绒毛顶部细胞、隐窝细胞变性、坏死,大量炎性细胞浸润。而z-VADFMK组、Nec-1组及z-VAD-FMK+Nec-1组ALT、AST升高程度、PaO2下降程度、TNF-α、IL-1β升高程度均显著低于模型组(P<0.01),以z-VAD-FMK+Nec-1组变化最明显。72 h死亡率均较模型组显著降低(P<0.05)。结论:z-VAD-FMK、Nec-1、z-VADFMK+Nec-1联合治疗均可显著减轻MODS大鼠的器官损伤,联合治疗效果更佳。 展开更多

关键词 多器官功能障碍综合征 Z-VAD-FMK necrostatin-1 大鼠

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Necrostatin-1对6-OHDA致PC12细胞氧化应激损伤的影响

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作者 周生奎 王杰 +2 位作者 程言博 徐兴顺 耿德勤 《徐州医学院学报》 CAS 2010年第8期491-494,共4页

目的研究Necrostatin-1(Nec-1)对帕金森病(Parkinson's disease,PD)细胞模型线粒体失能的影响,探讨Nec-1在帕金森病发病机制中的作用。方法经不同浓度Nec-1预处理的PC12细胞加入6-OHDA建立多巴胺能神经元损伤模型。用4-甲基偶氮唑蓝... 目的研究Necrostatin-1(Nec-1)对帕金森病(Parkinson's disease,PD)细胞模型线粒体失能的影响,探讨Nec-1在帕金森病发病机制中的作用。方法经不同浓度Nec-1预处理的PC12细胞加入6-OHDA建立多巴胺能神经元损伤模型。用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测PC12细胞活力,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,免疫印迹法检测Cathepsin B与Bcl-2蛋白表达。结果 100μmol/L的6-OHDA处理PC12细胞24h,细胞活力较正常对照组明显降低(P<0.05);与模型组比较,5、10、20、30、60μmol/L的Nec-1可明显减轻6-OHDA的毒性,90μmol/L的Nec-1可加重6-OHDA的毒性。Nec-1可阻抑线粒体膜电位下降。与正常对照组相比,模型组Cathepsin B表达明显增加而Bcl-2的表达显著降低(P<0.05)。与模型组相比,Nec-1与UTI可降低Cathepsin B表达并使Bcl-2的表达逐渐增加(P<0.05)。结论 Nec-1在一定的浓度范围内可提高PC12细胞存活力,通过稳定线粒体膜电位、抑制Cathepsin B的表达、上调Bcl-2的表达而发挥神经细胞保护作用。 展开更多

关键词 necrostatin-1 6-羟基多巴胺 PC12细胞 帕金森病 线粒体失能

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NEC-1在大鼠脑出血后继发性脑损伤中的作用研究

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作者 尹剑 金许洪 +2 位作者 吕庆平 张子彬 庞晓俊 《浙江中西医结合杂志》 2022年第3期213-216,共4页

目的探讨坏死性凋亡受体抑制剂1(NEC-1)对大鼠自发性脑出血(ICH)后继发性脑损伤的治疗作用及机制。方法采用随机数字表法将54只成年SD大鼠随机分为假手术(Sham)组,脑出血+生理盐水(ICH+NS)组和脑出血+NEC-1(ICH+NEC-1)组,每组18只。Sha... 目的探讨坏死性凋亡受体抑制剂1(NEC-1)对大鼠自发性脑出血(ICH)后继发性脑损伤的治疗作用及机制。方法采用随机数字表法将54只成年SD大鼠随机分为假手术(Sham)组,脑出血+生理盐水(ICH+NS)组和脑出血+NEC-1(ICH+NEC-1)组,每组18只。Sham组大鼠置于动物头颅立体定位仪下,仅切开头皮,开骨窗,不造成脑出血。其余组在动物头颅立体定位仪下,经微量注射器注射50μL自体动脉血至尾状核部制作大鼠ICH模型。ICH+NS组经侧脑室干预注射NS 1μL,ICH+NEC-1组经侧脑室干预注射NEC-1溶剂(80μmol/mL)1μL。在给药后24h断头取大脑标本,采用测大脑干湿重法检测大鼠脑组织含水量,TUNEL法检测脑组织神经细胞凋亡情况,Western blot法检测脑组织RIP1/RIP3、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平。结果与Sham组(79.76±0.84)%比较,ICH+NS组(83.65±0.82)%和ICH+NEC-1组(81.74±0.98)%大鼠脑组织含水量显著升高(P<0.05);与ICH+NS组比较,ICH+NEC-1组大鼠脑组织含水量明显减轻(P<0.05)。与Sham组(0.07±0.02)比较,ICH+NS组(0.58±0.06)和ICH+NEC-1组(0.23±0.07)神经细胞凋亡指数均升高(P<0.05);与ICH+NS组比较,ICH+NEC-1组神经细胞凋亡指数显著减少(P<0.05)。与Sham组比较,ICH+NS组和ICH+NEC-1组RIP1[(0.89±0.05)、(0.57±0.05)比(0.01±0.01)]、RIP3[(0.97±0.03)、(0.59±0.04)比(0.02±0.01)]、TNF-α[(0.35±0.06)、(0.19±0.07)比(0.07±0.02)]、IL-1β[(0.77±0.07)、(0.38±0.09)比(0.19±0.04)]蛋白表达显著升高(P<0.05)。与ICH+NS组比较,ICH+NEC-1组RIP1、RIP3、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论NEC-1能够减轻ICH后继发性脑损伤引起的脑水肿,具有显著的神经保护作用,可能与调节RIP1/RIP3有关。 展开更多

关键词 大鼠 nec-1 脑出血 脑水肿 RIP1/RIP3

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Nec-1对模拟缺氧条件下骨骼肌细胞损伤修复的作用研究 被引量：3

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作者 周珊瑶 陈睿 +2 位作者 谭夕 佘燕玲 雷斯 《新医学》 2018年第6期386-391,共6页

目的探讨Necrostatin-1(Nec-1)在二氯化钴(CoCl_2)诱导缺氧的条件下对骨骼肌细胞损伤修复的保护作用。方法采用小鼠骨骼肌C2C12成肌细胞为体外模型,CoCl_2诱导缺氧,Nec-1为缺氧保护剂。将培养分化72 h后的细胞分为4组,分别加入等量培养... 目的探讨Necrostatin-1(Nec-1)在二氯化钴(CoCl_2)诱导缺氧的条件下对骨骼肌细胞损伤修复的保护作用。方法采用小鼠骨骼肌C2C12成肌细胞为体外模型,CoCl_2诱导缺氧,Nec-1为缺氧保护剂。将培养分化72 h后的细胞分为4组,分别加入等量培养基(Control组)、200μM CoCl_2(CoCl_2组)、150μM Nec-1(Nec-1组)、200μM CoCl_2+150μM Nec-1(CoCl_2+Nec-1组),于光镜下观察不同处理组细胞的肌管形态,采用蛋白免疫印迹技术检测肌细胞生成素(Myog)、肌细胞增强因子2A(MEF2A)蛋白表达的变化,统计细胞周期S期比例,划痕实验观察细胞的损伤修复能力。结果 CoCl_2可诱导肌细胞形态异常,减少肌管分化,与Control组比较,CoCl_2组Myog、MEF2A蛋白表达量降低(P均<0.01),同时,S期细胞比例下降(P<0.01),划痕面积修复能力下降(P均<0.01)。加入Nec-1干预后,细胞形态恢复,肌管分化增多,与CoCl_2组比较,CoCl_2+Nec-1组Myog、MEF2A蛋白表达量及S期细胞比例上调(P均<0.05),细胞划痕面积恢复(P<0.05)。结论 CoCl_2模拟缺氧可抑制肌细胞增殖、分化功能,导致肌细胞损伤修复能力下降。Nec-1可增强缺氧条件下肌细胞的增殖和分化能力,对肌细胞的损伤修复有保护作用,可能通过抑制程序性坏死来促进肌细胞的损伤修复。 展开更多

关键词 二氯化钴 缺氧 C2C12 necrostatin-1 损伤修复

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Necrostatin-1通过抑制细胞凋亡及M1型小胶质/巨噬细胞极化促进小鼠脊髓损伤后运动功能恢复 被引量：2

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作者 唐海斌 宋玉红 +5 位作者 李涛 郑佳 蒋鹏鹏 赵莉莉 王小雅 樊洪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期775-780,共6页

目的研究坏死抑制蛋白1(necrostatin-1)对小鼠脊髓损伤(SCI)的保护作用,并探讨该作用与细胞凋亡及M1型小胶质/巨噬细胞介导的促炎性免疫的相关性。方法将雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、necrostatin-1对照组、脊髓损伤(SCI)模型组... 目的研究坏死抑制蛋白1(necrostatin-1)对小鼠脊髓损伤(SCI)的保护作用,并探讨该作用与细胞凋亡及M1型小胶质/巨噬细胞介导的促炎性免疫的相关性。方法将雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、necrostatin-1对照组、脊髓损伤(SCI)模型组、SCI后necrostatin-1治疗组,每组20只。各组小鼠在造模后1、3、5、7、10、14 d,进行旷场试验BMS评分及标准化尾高指数测定,以评价小鼠SCI后的运动功能恢复;于损伤后1、3、7、14 d,TUNEL染色观察脊髓组织的细胞凋亡情况;损伤后14 d,采用Western blot法及免疫组织化学染色检测脊髓组织中M1型小胶质/巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的水平,采用实时定量PCR检测脊髓组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、IL-4、IL-5及IL-10的mRNA水平。结果Necrostatin-1可明显促进小鼠SCI后运动功能恢复,减少SCI区周围细胞凋亡;降低M1型小胶质/巨噬细胞标志物iNOS的蛋白表达及iNOS阳性小胶质/巨噬细胞数量,下调促炎细胞因子TNF-α、IL-18及IL-1β的转录水平,同时促进抑炎性细胞因子IL-4、IL-5及IL-10的转录。结论Necrostatin-1可通过抑制细胞凋亡及抑制炎性免疫反应显著改善小鼠SCI后运动功能的恢复。 展开更多

关键词 脊髓损伤(SCI) 坏死抑制蛋白1(necrostatin-1) 小胶质/巨噬细胞 炎性因子

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Necrostatin-1在小鼠脊髓损伤后继发性损伤中的作用 被引量：5

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作者 刘明 杭春华 +3 位作者 蔡智基 刘美秋 李松 吴光辉 《中国临床神经外科杂志》 2018年第6期419-422,共4页

目的探讨Necrostatin-1(Nec-1)在小鼠脊髓损伤后继发性损伤中的作用及机制。方法将168只健康成年雌性LCR小鼠随机分为4组:对照组(48只)、脊髓损伤组(48只)、溶剂组(36只,鞘内注射4μl二甲基亚砜)和治疗组[36只,鞘内注射4μlNec-1(4 mmol... 目的探讨Necrostatin-1(Nec-1)在小鼠脊髓损伤后继发性损伤中的作用及机制。方法将168只健康成年雌性LCR小鼠随机分为4组:对照组(48只)、脊髓损伤组(48只)、溶剂组(36只,鞘内注射4μl二甲基亚砜)和治疗组[36只,鞘内注射4μlNec-1(4 mmol/L)]。采用血管夹钳夹小鼠脊髓建立脊髓损伤模型。伤后6、12、24、48 h采用免疫印迹法检测脊髓组织受体相互作用蛋白(RIP)1、3的表达;伤后24 h采用免疫共沉淀法评估RIP1和RIP3的相互作用;伤后24 h检测脊髓组织丙二醛(MDA)和活性氧簇(ROS)水平,电镜观察小鼠脊髓组织神经元线粒体损伤情况。结果伤后48 h内,小鼠脊髓RIP1表达水平无明显变化;伤后6 h,小鼠脊髓RIP3表达水平明显增高,持续到伤后48 h。伤后24 h,治疗组和溶剂组RIP1和RIP3的表达水平均无明显差异;正常脊髓组织RIP1和RIP3相互作用较弱,脊髓损伤后RIP1和RIP3相互作用加强,而Nec-1显著抑制RIP1和RIP3相互作用。伤后24 h,脊髓神经元线粒体不同程度受损,而治疗组小鼠脊髓神经元线粒体结构保存相对较好。伤后24 h,脊髓组织MDA和ROS含量明显升高,而Nec-1能明显减少小鼠脊髓MDA和ROS含量。结论小鼠脊髓损伤后,Nec-1通过抑制RIP1和RIP3的相互作用,进而抑制程序性坏死,减轻脊髓继发性损伤。Nec-1能降低ROS产物,减轻氧化应激损伤,保护线粒体功能。 展开更多

关键词 脊髓损伤 受体相互作用蛋白 活性氧簇 线粒体 necrostatin-1 成年小鼠

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Necrostatin-1对心肌梗死大鼠心梗面积的影响 被引量：2

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作者 陈珊 涂国胜 马战清 《临床合理用药杂志》 2017年第4期6-7,共2页

目的研究Necrostatin-1(Nec-1)对大鼠心肌梗死后心梗面积的影响。方法成年雄性SD大鼠共25只,随机分为Nec-1处理组(实验组,10例)、安慰剂对照组(对照组,10例)和假手术组(5例);通过结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,并于结扎的同时,... 目的研究Necrostatin-1(Nec-1)对大鼠心肌梗死后心梗面积的影响。方法成年雄性SD大鼠共25只,随机分为Nec-1处理组(实验组,10例)、安慰剂对照组(对照组,10例)和假手术组(5例);通过结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,并于结扎的同时,给予大鼠尾静脉Nec-1(0.6 mg/kg)或相应溶剂对照;在缺血2周后,处死大鼠,取出心脏,用Masson氏染色法观察并测定相应的心肌梗死面积。结果实验组大鼠心梗面积比对照组大鼠显著减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Nec-1可明显地抑制心肌缺血大鼠的心肌坏死,有确切的心肌保护作用。 展开更多

关键词 心肌梗死 necrostatin-1 程序性坏死 心梗面积

原文传递

Necrostatin-1对急性高眼压大鼠模型中视网膜神经节细胞程序性坏死的抑制作用 被引量：2

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作者 景原媛 马伊 +1 位作者 王凯 刘竹青 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期310-315,共6页

目的探讨程序性坏死特异性抑制剂necrostatin-1(Nec-1)对急性高眼压大鼠模型中视网膜神经节细胞(RGCs)程序性坏死的抑制作用。方法采用随机数表法将24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、Nec-1处理组和阴性对照组,每组6只。其... 目的探讨程序性坏死特异性抑制剂necrostatin-1(Nec-1)对急性高眼压大鼠模型中视网膜神经节细胞(RGCs)程序性坏死的抑制作用。方法采用随机数表法将24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、Nec-1处理组和阴性对照组,每组6只。其中,正常对照组大鼠不做任何处理;其余3个组大鼠左眼采用前房灌注质量分数0.9%氯化钠溶液的方法将眼压升至110 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),持续60 min,制备急性高眼压缺血-再灌注模型;Nec-1处理组和阴性对照组大鼠分别于造模后给予玻璃体腔内注射4 mmol/L Nec-1和二甲基亚砜各2μl。造模后7 d,摘取各组大鼠实验眼制备视网膜石蜡切片,采用苏木精-伊红染色法观察视网膜结构;采用免疫组织化学染色法检测胸腺细胞抗原1(Thy-1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果造模后7 d,与正常对照组大鼠比较,模型对照组和阴性对照组大鼠视网膜神经纤维层均变薄,RGCs层细胞排列疏松,内核层细胞减少、排列紊乱,外核层细胞正常或变大;与模型对照组和阴性对照组比较,Nec-1处理组大鼠神经纤维层厚度及RGCs数量均明显增多。免疫组织化学染色显示,模型对照组、阴性对照组和Nec-1处理组大鼠Thy-1染色阳性RGCs数量均较正常对照组减少,Nec-1处理组大鼠Thy-1染色阳性RGCs数量均较模型对照组和阴性对照组增多。正常对照组、模型对照组、阴性对照组和Nec-1处理组GFAP平均积分吸光度(A)值分别为47.209±15.311、116.220±18.194、116.382±19.020和92.818±10.236,总体比较差异有统计学意义(F=24.675,P<0.001),其中与正常对照组比较,模型对照组、阴性对照组和Nec-1处理组GFAP平均积分A值均明显升高;Nec-1处理组GFAP平均积分A值较模型对照组和阴性对照组明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Nec-1对急性高眼压大鼠RGCs的程序性坏死有抑制作用,可促进RGCs存活。 展开更多

关键词 高眼压 急性 视网膜神经节细胞 necrostatin-1 程序性坏死 胶质纤维酸性蛋白

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