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应用PCR及Nested-PCR技术检测柑橘黄龙病病原研究 被引量:35
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作者 丁芳 易干军 王国平 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期803-806,共4页
以采自田间和广东省农业科学院果树研究所防虫隔离网室内嫁接并感染黄龙病的5个柑橘品种叶片为材料,以草本指示植物长春花(Catharanthusroseas)和木本指示植物柑(CitrusreticulataBlanco)鉴定为基础,采用改良的CTAB法提取总DNA,在此... 以采自田间和广东省农业科学院果树研究所防虫隔离网室内嫁接并感染黄龙病的5个柑橘品种叶片为材料,以草本指示植物长春花(Catharanthusroseas)和木本指示植物柑(CitrusreticulataBlanco)鉴定为基础,采用改良的CTAB法提取总DNA,在此基础上进行常规PCR与NestedPCR检测,并对特异目的片段进行克隆、测序。试验证明NestedPCR比常规PCR的灵敏度更高。这两种方法均可以检测出未显症的黄龙病材料,但NestedPCR可以在木本指示植物嫁接后40d左右、草本指示植物摩擦接种1个月左右检测到病原;而常规PCR在木本植物嫁接后60d左右、草本植物摩擦接种近2个月左右才能检测到病原。常规PCR所能检测到的最低DNA的量为pg数量级;NestedPCR检测病原DNA灵敏度约为常规PCR的104倍。 展开更多
关键词 柑橘 黄龙病 pcr nestedpcr 检测
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广西砂糖橘黄龙病亚洲种的Nested-PCR检测 被引量:8
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作者 黄宏明 王茜 +2 位作者 徐宁 韦宗便 廖惠红 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1997-2000,共4页
【目的】利用柑橘黄龙病病原亚洲种16S rDNA序列的特异引物检测疑似黄龙病的砂糖橘叶片样品,为砂糖橘黄龙病的综合防控提供理论依据。【方法】选取采自广西9市17个采样点的214份疑似黄龙病及无症状砂糖橘叶片样品,用试剂盒法提取叶脉基... 【目的】利用柑橘黄龙病病原亚洲种16S rDNA序列的特异引物检测疑似黄龙病的砂糖橘叶片样品,为砂糖橘黄龙病的综合防控提供理论依据。【方法】选取采自广西9市17个采样点的214份疑似黄龙病及无症状砂糖橘叶片样品,用试剂盒法提取叶脉基因组DNA,采用柑橘黄龙病亚洲种16S rDNA特异引物进行PCR扩增,扩增结果在1%琼脂糖凝胶电泳上检测,统计待检样品柑橘黄龙病病原菌亚洲种的带菌率。【结果】对214份样品的Nested-PCR扩增结果,部分样品可得到1160 bp左右的特异条带,与预期大小相符但条带明暗不同。来自广西9市17个采样点的砂糖橘叶片样品均检测出黄龙病亚洲种病原,平均检出率均在66.0%以上,其中检出率最高的是来自东兴市的样品,检出率为100.0%,检出率最低的是来自南宁市的样品,检出率为66.9%;斑驳、缺素型黄化、叶脉黄化、小叶和无症状叶片样品中均可检测出黄龙病亚洲种。【结论】Nested-PCR技术具有灵敏度高、特异性强的特点,能够快速、准确检测出各种症状样品的黄龙病病原,可用于柑橘黄龙病的早期诊断。 展开更多
关键词 砂糖橘 黄龙病病原 检测率 nestedpcr 广西
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One tube nested-PCR在SNP基因型分型中的应用
3
作者 张羽 张晓娟 +2 位作者 王胜宝 宋晓利 李小刚 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期136-142,共7页
nested–PCR是一种在普通PCR基础上发展起来的专门用于检测单核苷酸多态性(SNP)的技术。结合nested–PCR技术在水稻中检测SNP的研究,以1个水稻香味基因Fgr和3个稻瘟病基因Pi–ta、Pi9、Pigm为例,把nested–PCR的4条引物同时加在一管PCR... nested–PCR是一种在普通PCR基础上发展起来的专门用于检测单核苷酸多态性(SNP)的技术。结合nested–PCR技术在水稻中检测SNP的研究,以1个水稻香味基因Fgr和3个稻瘟病基因Pi–ta、Pi9、Pigm为例,把nested–PCR的4条引物同时加在一管PCR反应中进行扩增,在其序列内针对SNP位点设计功能标记,用来扩增含有突变位点的DNA片段。通过优化引物浓度梯度和改良反应程序,达到了一步快速检测SNP基因型的目的。 展开更多
关键词 nestedpcr 单核苷酸多态性 基因型分型
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The potential utility of nested PCR for investigation of Coxiella burnetii in Iranian snails
4
作者 Mina Dehghani-Samani Abbas Doosti Asghar Arshi 《Journal of Coastal Life Medicine》 2016年第3期193-196,共4页
Objective:To detect the prevalence of Coxiella burnetii(C.burnetii)in two species of snails consisted of Lymnaea palustris(L.palustris)and Pomacea canaliculata(P.canaliculata)by using nested PCR method in Chaharmahel ... Objective:To detect the prevalence of Coxiella burnetii(C.burnetii)in two species of snails consisted of Lymnaea palustris(L.palustris)and Pomacea canaliculata(P.canaliculata)by using nested PCR method in Chaharmahel Va Bakhtiari Province which is located in the southwest of Iran.Methods:A total of 160 snail samples consisted of 100 L.palustris and 60 P.canaliculata were collected from 4 rice paddy fields in the southwest of Iran between June and August 2014.Snails'DNA was extracted by a genomic DNA purification kit according to the manufacturer's instructions.Detection of the presence of C.burnetii's DNA was carried out by using a nested PCR assay with[specific primers outer membrane protein 1(OMP1)-OMP2 and OMP3-OMP4]targeting the com1 gene.Results:In this study,a total of 160 snail samples were tested and 15(9.37%)samples were found positive for C.burnetii,15 samples were positive from the L.palustris and there were no positive samples from P.canaliculata.Conclusions:Snails are kind of gastropods which seem to be harmless in life,but these small gastropods can be very dangerous for farmers,especially in humid climates.Also,C.burnetii in snails showed that this bacterium can be a factor of transmission of contamination to human beings and animals. 展开更多
关键词 Coxiella burnetii nested pcr SNAILS Iran
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禽弱毒疫苗中鸡传染性贫血病病毒nested-PCR检测方法的建立 被引量:1
5
作者 李晓晗 房立春 +3 位作者 李阳 崔治中 常爽 赵鹏 《中国家禽》 北大核心 2017年第10期18-22,共5页
疫苗中污染鸡传染性贫血病毒(CIAV)是造成CIAV感染的途径之一,而通常疫苗中CIAV污染剂量较低,应用一般的技术难以检测到。为了更灵敏地检测禽弱毒疫苗中CIAV的污染,根据Gen Bank已发表的CIAV基因序列,针对其保守区设计了外用引物和内用... 疫苗中污染鸡传染性贫血病毒(CIAV)是造成CIAV感染的途径之一,而通常疫苗中CIAV污染剂量较低,应用一般的技术难以检测到。为了更灵敏地检测禽弱毒疫苗中CIAV的污染,根据Gen Bank已发表的CIAV基因序列,针对其保守区设计了外用引物和内用引物,通过优化反应体系和反应条件建立了检测CIAV的nested-PCR检测方法。结果显示,所建立的检测方法灵敏度比常规PCR高100倍,该方法可以检测到1 000羽份弱毒疫苗中1 EID_(50)的低剂量CIAV污染,应用该方法从送检的50个疫苗样品中检测出4个样品为CIAV阳性。该方法与禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒以及马立克氏病病毒等的基因均无交叉反应,具有很好的特异性。提示所建立的nested-PCR灵敏度高、特异性强,可用于检测禽弱毒疫苗中CIAV低剂量的污染。 展开更多
关键词 CIAV nestedpcr 灵敏性 特异性 污染
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泰泽病原体nested-PCR检测方法的优化及应用研究 被引量:3
6
作者 冯洁 谢建云 +1 位作者 胡建华 高诚 《实验动物与比较医学》 CAS 2010年第3期183-187,共5页
目的对泰泽病原体nested—PCR检测方法进行优化和应用研究。方法以感染泰泽病原体RJ株的大鼠肝组织作为阳性对照,按国标GB/T 14926.10—2008《实验动物泰泽病原体检测方法》间接免疫荧光检测fIFA)呈阳性的上海地区大鼠肝组织为材料... 目的对泰泽病原体nested—PCR检测方法进行优化和应用研究。方法以感染泰泽病原体RJ株的大鼠肝组织作为阳性对照,按国标GB/T 14926.10—2008《实验动物泰泽病原体检测方法》间接免疫荧光检测fIFA)呈阳性的上海地区大鼠肝组织为材料,对本室已建立的泰泽病原体nested—PCR检测方法中的DNA抽提方法和PCR过程进行优化,并应用于22只免疫抑制实验动物的泰泽病原体检测。结果肝脏组织DNA以酚/氯仿抽提法为好;nested—PCR出现196bp的特异性条带,此方法的敏感性达1pg;产物纯化后进行测序比对分析显示,上海地区实验大鼠感染样品以及RJ株感染样品的序列均与Genbank中泰泽病原体16S rRNA(Genbank D14638.1)的同源性为100%。应用研究表明,22个样品中IFA检测阳性样品8个,阳性率为36.4%;Nested-PCR检测阳性样品13个,包含所有的IFA阳性样品,阳性率为59.1%。结论本方法灵敏度高,特异性强,经进一步应用改进后,可用于泰泽病原体的检测。 展开更多
关键词 泰泽病原体 nestedpcr IFA
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Nested multiplex PCR for identification and detection of human Plasmodium species including Plasmodium knowlesi
7
作者 Maria Miguel-Oteo Adela I Jiram +3 位作者 Thuy H Ta-Tang Marta Lanza Shamilah Hisam José Miguel Rubio 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2017年第3期280-284,共5页
Objective:To develop a new technique for diagnosis of Plasmodium knowlesi and at the same time to be able to discriminate among the diverse species of Plasmodium causing human malaria.Methods:In this study the nested ... Objective:To develop a new technique for diagnosis of Plasmodium knowlesi and at the same time to be able to discriminate among the diverse species of Plasmodium causing human malaria.Methods:In this study the nested multiplex malaria PCR was redesigned,targeting the 18S rR NA gene,to identify the fifth human Plasmodium species,Plasmodium knowlesi,together with the other human Plasmodium(Plasmodium falciparum,Plasmodium vivax,Plasmodium ovale and Plasmodium malariae)by amplified fragment size using only two amplification processes and including an internal reaction control to avoid false negatives.Results:The technique was validated with 91 clinical samples obtained from patients with malaria compatible symptoms.The technique showed high sensitivity(100%)and specificity(96%)when it was compared to the reference method employed for malaria diagnosis in the Instituto de Salud Carlos栿and a published real-time PCR malaria assay.Conclusions:The technique designed is an economical,sensitive and specific alternative to current diagnosis methods.Furthermore,the method might be tested in knowlesi-malaria endemic areas with a higher number of samples to confirm the quality of the method. 展开更多
关键词 MALARIA Plasmodium knowlesi nested multiplex pcr Molecular diagnosis
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黄檗丛枝菌根(AM)真菌PCR-DGGE条件研究 被引量:10
8
作者 接伟光 蔡柏岩 +1 位作者 葛菁萍 阎秀峰 《黑龙江大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2008年第4期534-538,共5页
从东北林业大学林场采集黄檗根际土壤及菌根,采用Nested—PCR技术分别扩增黄檗菌根及根际土壤AM真菌18SrDNANS31/Glol区域,利用该扩增产物对AM真菌DGGE条件进行优化。表明Nested—PCR技术具有较高的灵敏性,可有效的从微量DNA中扩增... 从东北林业大学林场采集黄檗根际土壤及菌根,采用Nested—PCR技术分别扩增黄檗菌根及根际土壤AM真菌18SrDNANS31/Glol区域,利用该扩增产物对AM真菌DGGE条件进行优化。表明Nested—PCR技术具有较高的灵敏性,可有效的从微量DNA中扩增出约230bp的目标片段;经DGGE条件优化,确定AM真菌最佳DGGE条件为丙烯酰胺浓度8.0%,纯化后的PCR产物作为DGGE上样样品,凝胶变性梯度范围30%~60%,电泳电压130V,电泳时间8h,电泳温度60℃。 展开更多
关键词 黄檗 丛枝菌根真菌 nestedpcr 变性梯度凝胶电泳
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蜜蜂囊状幼虫病毒病的Nest-PCR检测 被引量:23
9
作者 许益鹏 章奕卿 +2 位作者 李江红 邢丽苹 张传溪 《科技通报》 2007年第6期824-827,共4页
蜜蜂的囊状幼虫病是中华蜜蜂常见且危害严重的疾病,病原为一小正链RNA病毒。如何尽早鉴别蜂群的感染在养蜂业生产上具有重要的意义。本文报道一种利用RNA反转录结合巢式PCR检测鉴定蜜蜂的囊状幼虫病毒病的方法。
关键词 中华蜜蜂 囊状幼虫病毒病 反转录 Nest—pcr 检测
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血清登革热病毒NEST-PCR检测 被引量:3
10
作者 蒋力云 吴新伟 +4 位作者 何丽娟 鲁恩洁 刘远 熊远 狄飚 《预防医学情报杂志》 CAS 2006年第3期265-266,共2页
目的 建立用NEST—PCR快速检测登革热病毒的方法。方法 通用引物对样本进行RT—PCR扩增,然后用分型引物进行NEST—PCR,根据产物条带的位置分型。结果 标准毒株的扩增结果与预期结果相同,血清登革热病毒在病程2~5d的阳性率高于6~9d... 目的 建立用NEST—PCR快速检测登革热病毒的方法。方法 通用引物对样本进行RT—PCR扩增,然后用分型引物进行NEST—PCR,根据产物条带的位置分型。结果 标准毒株的扩增结果与预期结果相同,血清登革热病毒在病程2~5d的阳性率高于6~9d的阳性率,分别为6/7和2/6。结论 NEST—PCR方法是一个快速、准确检测登革热的方法,但它更适用于早期临床检测。 展开更多
关键词 登革热病毒 NEST—pcr RT—pcr
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套式实时荧光定量PCR检测人外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA 被引量:6
11
作者 曹新国 王礼文 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期289-291,共3页
目的建立检测人外周血单个核细胞(PBMC)中FOXP3mRNA的方法。方法跨内含子设计外引物,并根据扩增的片段,设计一对内引物和TaqM an探针,采用套式实时荧光定量PCR(nested-real-tim e-PCR)方法。首次PCR扩增用减少引物浓度及循环次数的方法... 目的建立检测人外周血单个核细胞(PBMC)中FOXP3mRNA的方法。方法跨内含子设计外引物,并根据扩增的片段,设计一对内引物和TaqM an探针,采用套式实时荧光定量PCR(nested-real-tim e-PCR)方法。首次PCR扩增用减少引物浓度及循环次数的方法以增加其模板的特异性,再行第二次PCR扩增作实时荧光定量检测,用FOXP3和β-actin标准品作标准曲线,以二者比值作为FOXP3mRNA表达水平指标。结果重复6次PCR,6次试验C t的总平均值为14.66,平均变异系数为5.81%。C t值和模板起始浓度对数值之间具有较好的线性关系(R2=0.999);检测最低浓度可达100拷贝。结论nested-re-al-tim e-PCR检测PBMC中FOXP3mRNA的方法简单且重复性好,高度敏感且特异,可作为评价免疫功能及某些疾病治疗效果观察的临床常用方法。 展开更多
关键词 FOXP3 nested—real—time—pcr 基因表达
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湛江农垦红江橙主产区2个果园黄龙病的巢式PCR检测分析 被引量:1
12
作者 赵丽宏 刘建荣 +3 位作者 张曼其 刘伟清 吴凡 冯学娟 《热带农业科学》 2020年第1期67-71,共5页
柑橘黄龙病(HLB)是柑橘生产上的一种毁灭性病害,对柑橘生产为害较重。为了明确柑橘黄龙病在红江橙果园中的分布及危害情况,进一步为柑橘黄龙病的综合防控提供有价值的参考,采用Nested PCR分子检测技术,于2016~2018年对湛江农垦红江橙主... 柑橘黄龙病(HLB)是柑橘生产上的一种毁灭性病害,对柑橘生产为害较重。为了明确柑橘黄龙病在红江橙果园中的分布及危害情况,进一步为柑橘黄龙病的综合防控提供有价值的参考,采用Nested PCR分子检测技术,于2016~2018年对湛江农垦红江橙主产区具有黄化、斑驳等症状的305个红江橙样本进行检测。结果表明,305个红江橙叶片样本中,HLB的阳性检出率为53.1%;其中红江农场38队红江橙果园黄龙病的阳性检出率为55.6%,广垦(湛江)红江橙农业科技有限公司横江红江橙果园黄龙病的阳性检出率为48.6%。柑橘黄龙病已在湛江农垦红江橙果园普遍发生,生产上应引起重视。 展开更多
关键词 红江橙 黄龙病 nested pcr
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传染性法氏囊病快速诊断技术的建立及其应用 被引量:13
13
作者 龙进学 韦平 阳秀英 《广西大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2003年第2期103-108,共6页
根据已发表的IBDV各致病型毒株的序列,在病毒结构蛋白VP2编码基因的高变区(VP2variabledo-main,vVP2)两端外侧的保守序列内设计合成了2条寡核苷酸引物,对各种不同致病型的12株参考毒株进行逆转录酶—聚合酶链式反应(RT-PCR)的检测.结果1... 根据已发表的IBDV各致病型毒株的序列,在病毒结构蛋白VP2编码基因的高变区(VP2variabledo-main,vVP2)两端外侧的保守序列内设计合成了2条寡核苷酸引物,对各种不同致病型的12株参考毒株进行逆转录酶—聚合酶链式反应(RT-PCR)的检测.结果12个参考毒株均能扩增出约679bp的目的片段,而对作为阴性对照的常见5种鸡病病原NDV、IBV、CAIV、E.coli、pM均没有扩增出任何片段;应用建立的技术对疑似IBD的34份临床病料进行检测,并同时在基础RT-PCR扩增的片段内设计另一对引物进行Nested-PCR检测.结果基础RT-PCR方法检测到11份阳性,Nested-PCR检测到23份阳性.研究的结果表明建立的IBD的RT-PCR诊断技术具有特异、快捷、敏感的特点.在此基础上设计的Nested-PCR则大大提高了阳性检出率(提高52.1%). 展开更多
关键词 IBDV vVP2 RT—pcr nestedpcr 快速诊断
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黄檗丛枝菌根真菌鉴定 被引量:7
14
作者 接伟光 蔡柏岩 +1 位作者 葛菁萍 阎秀峰 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第6期32-35,共4页
目的:利用形态学特征与Nested-PCR技术鉴定黄檗丛枝菌根真菌。方法:采用酸性品红染色法挑选黄檗丛枝菌根。同时,利用湿筛法获得AM真菌孢子,进行形态学鉴定。运用Nested-PCR技术,对黄檗粗提DNA进行特异性扩增,采用blastn进行序列相似性比... 目的:利用形态学特征与Nested-PCR技术鉴定黄檗丛枝菌根真菌。方法:采用酸性品红染色法挑选黄檗丛枝菌根。同时,利用湿筛法获得AM真菌孢子,进行形态学鉴定。运用Nested-PCR技术,对黄檗粗提DNA进行特异性扩增,采用blastn进行序列相似性比较,并构建系统进化树,确定侵染黄檗根系的AM真菌。结果:编号为HDAM-1的AM真菌孢子,形态特征与G.intraradices的特征描述一致。Nested-PCR检测到约455bp的目的片段,其序列与G.intraradices(DQ469118)相似性最高,达97.8%,有11个碱基的差异。系统进化树显示该序列在基于25SrDNA的进化树中与G.intraradices(DQ469118.1)处于同一分支,确定G.intraradices侵染黄檗根系。结论:将形态学特征与Nested-PCR技术相结合鉴定AM真菌,不仅简易、经济,而且能够提高研究结果的可靠性。 展开更多
关键词 黄檗 丛枝菌根真菌 酸性品红染色 湿筛法 鉴定 nestedpcr
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大豆根围丛枝菌根真菌鉴定 被引量:5
15
作者 蔡柏岩 接伟光 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期483-486,共4页
通过对大豆根围丛枝菌根(arbuscular mycorrhiza,AM)真菌鉴定和分子检测,为大豆菌根深入研究奠定基础。采集大豆根系和根围土壤,采用湿筛倾析法分离大豆根围土壤AM真菌孢子。依据AM真菌孢子形态特征及25S rDNA D1/D2区域序列分析对其进... 通过对大豆根围丛枝菌根(arbuscular mycorrhiza,AM)真菌鉴定和分子检测,为大豆菌根深入研究奠定基础。采集大豆根系和根围土壤,采用湿筛倾析法分离大豆根围土壤AM真菌孢子。依据AM真菌孢子形态特征及25S rDNA D1/D2区域序列分析对其进行分类鉴定,并应用Nested-PCR技术检测根围土壤AM真菌侵染大豆根系情况。结果表明:大豆根围土壤中存在2种AM真菌:根内球囊霉(Glomus intraradices)、摩西球囊霉(Glomus mosse-ae),并且两者均侵染大豆根系。 展开更多
关键词 大豆 丛枝菌根真菌 25S RDNA nestedpcr
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上海地区HTLV—Ⅰ相关高危人群病毒感染的检测 被引量:1
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作者 伍晓菲 王华 +3 位作者 梁辉 刘晓颖 郑岚 王迅 《现代检验医学杂志》 CAS 2009年第3期25-28,共4页
目的建立人类T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ(HTLV—Ⅰ)前病毒的核酸检测方法,对HTLV—Ⅰ相关高危标本进行检测,初步了解上海地区HTLV-1在相关疾病和高危人群中的流行特点,探讨核酸检测法在HTLV—Ⅰ高危人群中的检测意义。方法实验收集了6... 目的建立人类T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ(HTLV—Ⅰ)前病毒的核酸检测方法,对HTLV—Ⅰ相关高危标本进行检测,初步了解上海地区HTLV-1在相关疾病和高危人群中的流行特点,探讨核酸检测法在HTLV—Ⅰ高危人群中的检测意义。方法实验收集了69例淋巴瘤/白血病患者,72例有多次输血史的其他血液病患者以及1例HTLV—Ⅰ相关脊髓病(HAM)/热带痉挛性下肢瘫痪(TSP)疑诊患者血液标本。采用荧光定量PCR筛查HTLV-1前病毒tax基因,酶联免疫法检测血清HTLV—Ⅰ/Ⅱ抗体,对上述2种检测中出现任一阳性结果的标本进一步采用nest—PCR检测HTLV-1前病毒env基因以确定HTLV—Ⅰ的感染。结果仅HAM/TSP疑诊患者tax基因扩增出现阳性曲线;ELISA检测标本血清HTLV—Ⅰ/Ⅱ抗体均为阴性;nest—PCR扩增env基因未见特异性条带。结论上海地区小样本HTLV—Ⅰ相关高危人群中未检出HTLV—Ⅰ感染;建立的核酸检测方法能对HTLV—Ⅰ病毒感染进行有效的筛查和确认。 展开更多
关键词 T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ tax基因 荧光定量pcr ENV基因 nest—pcr
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甜菜根际土壤AM真菌分离与分子鉴定 被引量:2
17
作者 接伟光 蔡柏岩 白莉 《中国糖料》 2010年第2期12-14,共3页
为了揭示丛枝菌根(arbuscular mycorrhiza,AM)真菌与甜菜的共生关系,收集甜菜根系及根际土壤,采用湿筛倾析-蔗糖离心法分离甜菜根围土壤AM真菌孢子。利用形态学和分子生物学方法对分离得到的AM真菌孢子进行分类鉴定,并应用Nested-PCR技... 为了揭示丛枝菌根(arbuscular mycorrhiza,AM)真菌与甜菜的共生关系,收集甜菜根系及根际土壤,采用湿筛倾析-蔗糖离心法分离甜菜根围土壤AM真菌孢子。利用形态学和分子生物学方法对分离得到的AM真菌孢子进行分类鉴定,并应用Nested-PCR技术检测甜菜根际土壤AM真菌侵染甜菜根系情况。依据AM真菌孢子形态特征及25S rDNA D1/D2区域序列分析,鉴定出甜菜根围土壤中具有摩西球囊霉(Glomus mosseae),并且应用Nested-PCR技术从甜菜根内检测到了G.mosseae,表明G.mosseae侵染甜菜根系。 展开更多
关键词 甜菜 丛枝菌根真菌 根际土壤 25S RDNA nestedpcr
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First molecular identification of Cryptosporidium by 18S rRNA in goats and association with farm management in Terengganu 被引量:1
18
作者 Afzan Mat Yusof Najat Hashim Muhammad Lokman Md Isa 《Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine》 SCIE CAS 2017年第5期385-388,共4页
Objective:To identify the prevalence of Cryptosporidium from goats in three types of farm management systems in Terengganu,Malaysia and to determine the Cryptosporidium species infecting goats by using 18 S r RNA.Meth... Objective:To identify the prevalence of Cryptosporidium from goats in three types of farm management systems in Terengganu,Malaysia and to determine the Cryptosporidium species infecting goats by using 18 S r RNA.Methods:A total of 478 fecal samples were randomly collected from goats in three farms;199 samples were collected from intensive farm,179 samples from semi-intensive farm and 100 samples from extensive farm.The samples were processed by using formolether concentration technique and stained by using modified Ziehl–Neelsen.Positive samples were performed by using nested PCR analysis by using 18 S r RNA.Results:Out of 478 goats,207(43.3%) were found to be infected with Cryptosporidium.Goats reared under the intensive farm management system reported the highest prevalence of infection(49.7%),followed by intensive farm management system(41%) and the lowest prevalence was reported in the goats reared under semi-intensive management system(37.4%).Conclusions:The identified species found in goat was Cryptosporidium parvum.Future study on the zoonotic transmission of Cryptosporidium parvum in goats needs to be done in order to find the source of transmission of this parasite. 展开更多
关键词 CRYPTOSPORIDIUM GOAT 18S rRNA gene nested pcr Terengganu
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无症状携带献血者HTLV-Ⅰ病毒的前病毒长末端核酸序列分析
19
作者 孙淑君 杨洋 +2 位作者 刘丽华 叶贤林 孔令魁 《医学研究杂志》 2012年第11期127-129,共3页
目的了解本地区检出的无症状献血人群携带人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)株亚型。方法对3份HTLV-Ⅰ/Ⅱ血清阳性标本,采用Nested-PCR方法检测前病毒长末端重复序列(1ong terminal repeat,LTR)并测序分析。结果从1名有多次合格献血经历,但抗... 目的了解本地区检出的无症状献血人群携带人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)株亚型。方法对3份HTLV-Ⅰ/Ⅱ血清阳性标本,采用Nested-PCR方法检测前病毒长末端重复序列(1ong terminal repeat,LTR)并测序分析。结果从1名有多次合格献血经历,但抗体筛查强阳性(OD=3.000)血样中提取到HTLV-Ⅰ前病毒DNA。核苷酸序列分析提示,与日本原型ATK株比较其序列一致性为98.4%(738/750)。结论试验认定该HTLV病毒为世界群b型日本型毒株,并提示无症状携带HTLV-Ⅰ病毒的献血者具有潜在经血传播的风险。 展开更多
关键词 HTLV nestedpcr 核酸序列分析 无症状献血者
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The Possibilities of Chronic Renal Failure Patients Contracting Occult Hepatitis B Virus Infection, Sudan 被引量:1
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作者 Elhadi Abdalla Ahmed Abdelrahman Eldaw Mohammed +5 位作者 Bakri Yousif Mohamed Nour Albadawi Abdelbagi Talha Zienab Hamid Mubarak Ahmed Elshafia Mubarak Ahmed Elshafia Mohamed Elamin Salih 《Advances in Microbiology》 2022年第3期91-102,共12页
Introduction: Chronic kidney disease (CKD) is a major cause of death in sub-Saharan Africa. The effects of the CKD on the host and the continuous therapeutic measures increase the hypothesis of blood-borne diseases tr... Introduction: Chronic kidney disease (CKD) is a major cause of death in sub-Saharan Africa. The effects of the CKD on the host and the continuous therapeutic measures increase the hypothesis of blood-borne diseases transmission. Objective: This study aimed to find the frequency of occult hepatitis B virus (OBI) in patients of chronic renal failure (CRF) and to study the possibilities of infection acquisition. Methods: During 2017 and 2019, two hundred CRF patients under regular haemodialysis and attending Gezira Hospital for Renal Diseases and Surgery were recruited. Plasma specimens were collected and used for detection of hepatitis B surface antigens (HbsAg), total hepatitis B core antibodies (anti-HBc) and hepatitis B virus DNA isolation. Nested PCR reaction was followed to identify HBV. Socio-clinical data for each participant was obtained. Results: Male patients represented 64% (128/200), most frequent age group was from 41 to 60 years with percentage of 56.5% (113/200), 86% (172/200) of CRF patients were received blood while 42% (84/200) get HBV vaccination. Hepatitis B core antibodies were found in 54% (108/200) of studied cases, and 22% (42/188) of tested DNA were positively amplified for target gene. Detection of Hepatitis B core antibodies was significantly associated with marital status while absence of vaccination significantly associated with the detection of both hepatitis B core antibodies and HBV DNA. Conclusion: This study found high frequency of OBI in CRF patients, to reduce the transmission of the disease, possible hypotheses should be studied, including blood transfusion, haemodialysis process and HBV vaccination status. 展开更多
关键词 Chronic Renal Failure OBI nested pcr SUDAN
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