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精氨酸甲基转移酶1调控铁死亡在肺癌细胞恶性生物学中的分子机制
1
作者 卢天龙 杨启英 +1 位作者 杨世闻 宋小龙 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第9期1098-1104,共7页
目的探讨精氨酸甲基转移酶1(CARM1)调控铁死亡在肺癌细胞恶性生物学中的分子机制。方法通过免疫印迹检测正常人支气管上皮细胞(HBE4)和肺癌系中(A549、H1299、H1640、HCC827)中CARM1的表达情况。将CARM1序列或载体对照(Vector)以及针对C... 目的探讨精氨酸甲基转移酶1(CARM1)调控铁死亡在肺癌细胞恶性生物学中的分子机制。方法通过免疫印迹检测正常人支气管上皮细胞(HBE4)和肺癌系中(A549、H1299、H1640、HCC827)中CARM1的表达情况。将CARM1序列或载体对照(Vector)以及针对CARM1(shCARM1)、Notch同源物2(shNotch2)的shRNA序列或阴性对照shRNA(shNC)转染到肺癌细胞中。分别通过CCK⁃8试验、Transwell试验测定细胞增殖、迁移和侵袭。利用RIP⁃PCR和MeRIP⁃qPCR分析探讨了CARM1的作用机制。采用经典的铁死亡诱导剂Erastin处理肺癌细胞以确定CARM1是否能影响细胞对铁死亡的敏感性。结果与人正常气道上皮细胞HBE4相比,CARM1在肺癌系中(A549、H1299、H1640、HCC827)显著上调(P<0.05)。与Vector组相比,CARM1过表达组A549细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增加(P<0.001),而shCARM1组HCC827细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著低于shNC组(P<0.001)。MeRIP⁃qPCR分析显示当CARM1过表达时Notch2 mRNA的m6A丰度显著增加(P<0.05)。RIP分析显示CARM1过表达显著促进CARM1和Notch2 mRNA之间的结合(P<0.05)。Notch2敲低减弱了CARM1上调的A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力(P<0.001)。结论CARM1在肺癌中显著升高,并通过激活Notch2发挥其致癌功能。此外,CARM1可以通过稳定Notch2使肺癌细胞对铁死亡不敏感。 展开更多
关键词 精氨酸甲基转移酶1 铁死亡 肺癌细胞 notch同源物2 恶性生物学
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微小RNA-296-3p靶向Notch2对非小细胞肺癌迁移及侵袭的影响
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作者 郑一凡 张福全 +3 位作者 马春辉 曹津铭 桑永华 龚怀君 《中华实验外科杂志》 CAS 2024年第1期66-69,共4页
目的探讨微小RNA(miR)-296-3p靶向Notch同源物2(Notch2)对非小细胞肺癌(NSCLC)迁移及侵袭的影响。方法收取南通市第一人民医院胸外科2022年4月至2023年3月间手术的50例,50~65岁间的肺腺癌患者的癌及癌旁组织,其中男30例,女20例,术后病... 目的探讨微小RNA(miR)-296-3p靶向Notch同源物2(Notch2)对非小细胞肺癌(NSCLC)迁移及侵袭的影响。方法收取南通市第一人民医院胸外科2022年4月至2023年3月间手术的50例,50~65岁间的肺腺癌患者的癌及癌旁组织,其中男30例,女20例,术后病理均无淋巴结及远处转移,应用荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测上述组织中miR-296-3p的表达。利用慢病毒构建miR-296-3p过表达的A549/miR-296-3p,对照组为A549/miRNA。利用Transwell实验检测miR-296-3p过表达对A549细胞迁移及侵袭的影响;通过蛋白质印迹法(Western blot)检测各组A549细胞中Notch2的表达。利用双荧光素酶报告实验验证Notch2是否为miR-296-3p的靶基因。组间数据比较采用t检验。结果qRT-PCR结果提示,miR-296-3p在非小细胞肺癌癌旁组织中的表达水平(4.215±1.600)显著高于癌组织(1.931±0.700),差异有统计学意义(t=9.539,P<0.01)。在细胞层面,miR-296-3p在支气管上皮细胞BEAS-2B中的表达水平(1.018±0.075)显著高于在A549细胞(0.581±0.014),差异有统计学意义(t=9.842,P<0.01)。对照组A549/miRNA细胞中miR-296-3p的表达水平(0.846±0.047)显著低于A549/miR-296-3p组(2.266±0.073),差异有统计学意义(t=28.200,P<0.01)。Transwell迁移实验结果,A549/miRNA对照组每视野A549迁移细胞数为(242.560±7.550),显著高于A549/miR-296-3p组为(86.120±5.570),差异有统计学意义(t=28.800,P<0.01)。A549/miRNA对照组,每视野A549侵袭细胞数为(114.700±6.510),显著高于A549/miR-296-3p组为(48.000±3.610),差异有统计学意义(t=15.520,P<0.01)。生物信息学结果提示Notch2可能为miR-296-3p的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验证实。结论miR-296-3p通过调节靶基因Notch2蛋白的表达水平,而调节非小细胞肺癌的迁移及侵袭能力。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 notch同源物2 迁移 侵袭
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