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题名铜绿假单胞菌外膜蛋白OprM原核表达及抗体制备
被引量：2
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作者
向莉
郑亚婷
刘华
李娅
王玉明
段勇
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机构
昆明医学院第一附属医院检验科
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出处
《检验医学》
CAS
北大核心
2011年第5期291-294,共4页
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基金
云南省应用基础研究计划资助项目(2007C134M)
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文摘
目的制备铜绿假单胞菌(PA)主动外排系统外膜蛋白OprM及抗OprM多克隆抗体,为深入研究主动外排系统奠定基础。方法从PA基因组中克隆oprM基因,构建pET28 a-c-OprM表达载体,在大肠埃希菌中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并用免疫转印试验(W estern b lot)验证,建立重组OprM纯化方案,免疫动物制备多克隆抗体。结果扩增出带有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点及保护碱基的oprM基因序列,构建了pET28 a-c-OprM表达载体,诱导表达的重组OprM蛋白为带有H is标签的不可溶包涵体,建立并优化了重组OprM的纯化方法,免疫小鼠获得抗OprM蛋白的多克隆抗体。结论成功制备了OprM蛋白和抗OprM多克隆抗体,为深入研究该蛋白及相关的主动外排系统提供了有效手段。
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关键词
铜绿假单胞菌
oprm原核表达
oprm多克隆抗体
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Keywords
Pseudomonas aeruginosa
oprm prokaryotic expression
oprm polyclonal antibody
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分类号
R378.99
[医药卫生—病原生物学]
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