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1p32缺失在初诊多发性骨髓瘤患者中的预后意义
1
作者 郭睿 沈旭星 +4 位作者 夏园 金媛媛 李建勇 陈丽娟 仇海荣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期768-773,共6页
目的:分析1p32缺失在初诊多发性骨髓瘤(MM)患者中的预后意义。方法:回顾性分析2017年4月至2022年12月在江苏省人民医院就诊的341例初诊MM患者的临床资料,结合遗传学特征,尤其是1号染色体遗传学异常中的1p32缺失,分析患者的生存及预后。... 目的:分析1p32缺失在初诊多发性骨髓瘤(MM)患者中的预后意义。方法:回顾性分析2017年4月至2022年12月在江苏省人民医院就诊的341例初诊MM患者的临床资料,结合遗传学特征,尤其是1号染色体遗传学异常中的1p32缺失,分析患者的生存及预后。结果:341例初诊MM患者中,1p32缺失阳性患者占7.0%(24/341),伴有1p32缺失的MM患者的无进展生存(PFS)显著短于不伴有1p32缺失患者(P<0.001),总生存(OS)同样更短(P<0.001)。COX风险回归分析显示,1p32缺失是影响MM患者生存的独立危险因素。同时伴有1q21扩增和1p32缺失,即“1号染色体双打击”MM患者的PFS及OS相较于仅有1q21扩增或仅有1p32缺失MM患者更差(PFS:P<0.001;OS:P<0.001)。结论:1p32缺失是影响MM患者PFS及OS的独立危险因素,1p32缺失应广泛应用于初诊MM的预后判断。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 1p32缺失 预后
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基于P32蛋白的山羊痘病毒抗体荧光微球检测方法的建立
2
作者 孟卫芹 王金良 +5 位作者 吴信明 唐娜 李通 石竞楠 董帅 沈志强 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第4期89-94,共6页
为建立一种山羊痘病毒(GTPV)抗体快速检测方法,试验将携带GTPV结构蛋白P32基因的重组质粒pET28a-P32转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后获得了重组蛋白,纯化后经Western blot鉴定表明该蛋白具有良好的特异性和反应原性... 为建立一种山羊痘病毒(GTPV)抗体快速检测方法,试验将携带GTPV结构蛋白P32基因的重组质粒pET28a-P32转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后获得了重组蛋白,纯化后经Western blot鉴定表明该蛋白具有良好的特异性和反应原性。以荧光微球为标记材料对P32蛋白进行标记,通过优化反应条件制备了快速检测GTPV抗体的荧光微球免疫层析试纸条,并对其性能进行评价。结果:该试纸条与山羊副流感病毒3型(CPIV3)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊口疮病毒(ORFV)的阳性血清均无交叉反应;阳性血清稀释至800倍仍能检出阳性,敏感性较高;批内变异系数小于10%,批间变异系数小于15%,稳定性较好;与ELISA检测方法对比的总符合率为92.5%。综上,本试验建立的荧光微球试纸条可用于GTPV抗体的快速检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 p32蛋白 荧光微球 抗体
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羊痘病毒P32蛋白编码基因的克隆及表达 被引量：13
3
作者 康文玉 徐自忠 +5 位作者 花群义 杨云庆 周晓黎 董俊 尹尚莲 高洪 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期454-459,共6页
为获得山羊痘病毒膜蛋白重组P32抗原,根据其基因序列设计合成了1对特异性引物, 对CaPV P32基因进行了PCR扩增,产物大小约为969 bp;产物回收纯化后,将其克隆至pBAD／ Thio-TOPO载体中,转化TOP10大肠埃希氏菌感受态细胞,与已报道的多株CaP... 为获得山羊痘病毒膜蛋白重组P32抗原,根据其基因序列设计合成了1对特异性引物, 对CaPV P32基因进行了PCR扩增,产物大小约为969 bp;产物回收纯化后,将其克隆至pBAD／ Thio-TOPO载体中,转化TOP10大肠埃希氏菌感受态细胞,与已报道的多株CaPV P32基因序列的同源性高达99％;相应地,氨基酸序列同源性为98％。经测序筛选出阳性克隆,该重组菌株经 L-arabinose诱导,可稳定、高效地表达CaPV P32抗原。表达蛋白为融合蛋白,分子质量约 51．53 ku。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 p32蛋白 克隆 表达
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羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建、表达及其免疫原性 被引量：13
4
作者 陈轶霞 才学鹏 +10 位作者 景志忠 丁军涛 王颖 蒙学莲 张燕 贾万忠 乔军 闫鸿斌 房永祥 陈国华 骆学农 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期133-137,共5页
通过PCR方法扩增全长P32基因和截去跨膜区的P32基因(MP32),将其分别克隆到真核表达载体pcDNA3·1(+)和已插入CpG序列的pcDNA3·1-CpG中,构建pcDNA3·1-P32、pcDNA3·1-CpG-P32和pcDNA3·1-CpG-MP32质粒;用脂质体法... 通过PCR方法扩增全长P32基因和截去跨膜区的P32基因(MP32),将其分别克隆到真核表达载体pcDNA3·1(+)和已插入CpG序列的pcDNA3·1-CpG中,构建pcDNA3·1-P32、pcDNA3·1-CpG-P32和pcDNA3·1-CpG-MP32质粒;用脂质体法转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光(IFA)试验验证其表达效果;经肌肉免疫注射健康BALB/c小鼠,用间接ELISA法检测抗体;在免疫后的第3、5周取免疫小鼠的脾细胞,用流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞亚群。结果所构建的真核表达载体在BHK-21细胞中都能表达P32蛋白;免疫小鼠血清在免疫第2周后均能检测到羊痘特异性IgG抗体;免疫组小鼠脾脏CD4+T细胞数目和CD4+/CD8+T细胞比值明显高于对照组。结果提示,所构建的真核载体可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,并能刺激小鼠产生较强的细胞免疫应答。 展开更多
关键词 羊痘病毒 p32基因 真核表达载体 表达 免疫原性
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羊痘病毒P32基因的克隆与原核表达 被引量：18
5
作者 陈轶霞 郑亚东 +3 位作者 窦永喜 乔军 景志忠 才学鹏 《动物医学进展》 CSCD 2007年第1期31-34,共4页
根据发表的羊痘病毒P32基因,设计一对特异性引物,PCR扩增P32全长基因,将其克隆入pMD-18-T载体,获得重组质粒pMD-P32。再将P32基因亚克隆入原核表达栽体pGEX-4T-1,获得重组表达质粒pGEX-P32,转化大肠埃希菌BL21后用IPTG诱导,表达产物经SD... 根据发表的羊痘病毒P32基因,设计一对特异性引物,PCR扩增P32全长基因,将其克隆入pMD-18-T载体,获得重组质粒pMD-P32。再将P32基因亚克隆入原核表达栽体pGEX-4T-1,获得重组表达质粒pGEX-P32,转化大肠埃希菌BL21后用IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE分析。结果表明,P32全长基因在大肠埃希菌中以融合形式成功表达,分子质量为58ku左右,与预期大小相符。 展开更多
关键词 羊痘病毒 p32基因 克隆 表达
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山羊痘病毒P32基因的克隆与序列分析 被引量：18
6
作者 马维民 刘湘涛 +5 位作者 张强 吴国华 颜新敏 李健 朱海霞 吴润 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第4期27-30,共4页
应用PCR技术,用特异性引物扩增出羊痘病毒结构蛋白P32基因,连接于pMD18-T载体,转化到JM109感受态细胞,对重组质粒双酶切、PCR鉴定与序列分析得出:P32结构蛋白基因全长969 bp,编码323个氨基酸.与山羊痘病毒和绵羊痘病毒P32基因序列同源... 应用PCR技术,用特异性引物扩增出羊痘病毒结构蛋白P32基因,连接于pMD18-T载体,转化到JM109感受态细胞,对重组质粒双酶切、PCR鉴定与序列分析得出:P32结构蛋白基因全长969 bp,编码323个氨基酸.与山羊痘病毒和绵羊痘病毒P32基因序列同源性分别达99%和97%;与山羊痘病毒和绵羊痘病毒P32基因编码的氨基酸同源性分别达98.9%和96%. 展开更多
关键词 羊痘病毒 p32基因 克隆 序列分析
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羊痘病毒P32蛋白基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建 被引量：9
7
作者 郭巍 陈杰 +4 位作者 李一经 李晓成 黄保续 张燕霞 吴发兴 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期270-272,共3页
应用PCR方法扩增羊痘病毒特异性蛋白P32蛋白的基因 ,将其克隆至pMD18_T载体 ,测定核酸序列后将P32基因克隆至Bac_to_Bac○R杆状病毒表达系统中转移载体pFastBac1和pFastBacHTa ,进而转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中 ,获得... 应用PCR方法扩增羊痘病毒特异性蛋白P32蛋白的基因 ,将其克隆至pMD18_T载体 ,测定核酸序列后将P32基因克隆至Bac_to_Bac○R杆状病毒表达系统中转移载体pFastBac1和pFastBacHTa ,进而转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中 ,获得两种携带P32基因的重组转染质粒 :Bacmid_Bac1_P32 ,Bacmid_BacHT_P32 ,经PCR试验鉴定 ,获得的这两种重组转染质粒是携带P32基因的杆状病毒表达载体 。 展开更多
关键词 羊痘病毒 p32蛋白 克隆 Bac-to-Bac○R状病毒表达系统
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羊痘病毒P32蛋白的研究进展 被引量：15
8
作者 赵志荀 王建科 张强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第10期129-132,共4页
P32蛋白是所有羊痘病毒具有的结构蛋白之一,含有重要的免疫原性决定簇。P32蛋白既是致病的关键因素,也是激发机体产生抗体并产生保护性免疫的主要成分。作者就羊痘病毒P32蛋白的基因组结构、抗原表位及P32蛋白应用于羊痘病毒诊断和免疫... P32蛋白是所有羊痘病毒具有的结构蛋白之一,含有重要的免疫原性决定簇。P32蛋白既是致病的关键因素,也是激发机体产生抗体并产生保护性免疫的主要成分。作者就羊痘病毒P32蛋白的基因组结构、抗原表位及P32蛋白应用于羊痘病毒诊断和免疫方面的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 羊痘病毒 p32蛋白 诊断 免疫
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山羊痘病毒p32基因原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：9
9
作者 王芳 雷震 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期945-948,共4页
为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPVp32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti)。表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV标准阳性血清具有良好... 为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPVp32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti)。表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV标准阳性血清具有良好的抗原性。以纯化的重组p32-opti蛋白作为ELISA包被抗原,建立间接ELISA抗体检测方法。该方法检测小反刍兽疫、蓝舌病和口蹄疫阳性血清均无交叉反应;与中和试验(VNT)比较,两者的符合率为95.7%;ELISA批内和批间重复性试验显示,OD值的变异系数小于10%。上述结果表明,该ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。对来自黑龙江、内蒙古和新疆自治区的390份山羊和绵羊血清进行检测,抗体阳性率为80.2%,表明这些地区的山羊和绵羊群普遍存在羊痘病毒抗体。本研究建立的间接ELISA方法可用于GPV感染的流行病学调查以及疫苗接种动物的抗体水平监测。 展开更多
关键词 GPV p32基因 大肠杆菌表达 ELISA
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山羊痘病毒P32基因序列分析及其B细胞表位预测 被引量：9
10
作者 文明 程振涛 +2 位作者 岳筠 李永明 周碧君 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第5期12-14,共3页
目的：比较山羊痘病毒不同分离株间P32基因的同源性,并对其B细胞表位进行预测。方法：选取GenBank上10株不同山羊痘毒株P32基因序列,采用DNAsis MAX序列分析软件对该基因序列进行同源性分析,并以B细胞表位分析参数及蛋白质二级结构分析... 目的：比较山羊痘病毒不同分离株间P32基因的同源性,并对其B细胞表位进行预测。方法：选取GenBank上10株不同山羊痘毒株P32基因序列,采用DNAsis MAX序列分析软件对该基因序列进行同源性分析,并以B细胞表位分析参数及蛋白质二级结构分析数据,综合预测P32蛋白B细胞表位。结果：10株不同山羊痘毒株P32基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为99.4%和98.4%;在P32蛋白的肽链中,19-60、64-80、98-118、138-182和214-275区段亲水性强,17-45、64-75、88-97、110-128、152-165和201-251区段柔韧性好,150-172、200-255区段抗原指数高,而31-59、101-119、142-145、165-172和215-252区段表面可及性高,42-56、159-181、200-208和227-259区段。结论：不同山羊痘病毒株间P32基因具有较高的同源性,P32蛋白227-251区段可能是B细胞表位优势区,为P32蛋白功能的深入研究与新型疫苗的设计提供一定的基础。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 p32基因 B细胞表位
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山羊痘病毒P32基因在杆状病毒中的表达 被引量：8
11
作者 郭建刚 郑敏 +5 位作者 刘棋 陆承平 李华明 邓朝阳 邹联斌 姚火春 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第12期950-953,共4页
采用PCR亚克隆了山羊痘病毒P32基因片段,将其插入杆状病毒转座载体质粒pFast-BacⅠ中,构建了重组质粒pFastBac-P32;再将该质粒转化DH10 Bac感受态细菌,进行体内重组,然后经三重抗性及蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-P32;将Bacmi... 采用PCR亚克隆了山羊痘病毒P32基因片段,将其插入杆状病毒转座载体质粒pFast-BacⅠ中,构建了重组质粒pFastBac-P32;再将该质粒转化DH10 Bac感受态细菌,进行体内重组,然后经三重抗性及蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-P32;将Bacmid-P32转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒;最后用SDS-PAGE和Western-blotting对P32基因的表达进行检测。结果表明,P32基因在重组杆状病毒中获得表达,且表达产物可以被多抗所识别。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 p32基因 杆状病毒 表达
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羊泰勒虫主要表面蛋白P32基因的克隆及真核表达载体的构建 被引量：6
12
作者 刘爱红 关贵全 +6 位作者 刘军龙 李有全 马米玲 牛庆丽 任巧云 殷宏 罗建勋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第12期17-20,共4页
提取羊泰勒虫裂殖子总RNA,用特异性引物扩增出其主要表面蛋白P32基因,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-TEasy载体上,经PCR和EcoRⅠ酶切鉴定均为阳性的重组质粒进行了测序和分析。随后将该基因从克隆载体上双酶切,与毕赤酵母分泌性表... 提取羊泰勒虫裂殖子总RNA,用特异性引物扩增出其主要表面蛋白P32基因,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-TEasy载体上,经PCR和EcoRⅠ酶切鉴定均为阳性的重组质粒进行了测序和分析。随后将该基因从克隆载体上双酶切,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-MPSP-P32,转化大肠埃希菌JM109,经测序证实,基因序列完全正确。 展开更多
关键词 羊泰勒虫 表面蛋白p32基因 真核表达载体
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羊痘病毒P32基因生物信息学分析 被引量：4
13
作者 程振涛 岳筠 +4 位作者 周碧君 许乐仁 王开功 文明 李永明 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期20-24,共5页
为获得羊痘病毒P32基因生物信息学资料,扩增山羊痘病毒贵州LD株的P32基因,并进行克隆、测序与序列分析;以P32基因的推导氨基酸序列为材料,应用计算机技术和生物学软件预测P32蛋白的跨膜结构、亲水性、抗原指数、柔韧性、表面可及性和二... 为获得羊痘病毒P32基因生物信息学资料,扩增山羊痘病毒贵州LD株的P32基因,并进行克隆、测序与序列分析;以P32基因的推导氨基酸序列为材料,应用计算机技术和生物学软件预测P32蛋白的跨膜结构、亲水性、抗原指数、柔韧性、表面可及性和二级结构,综合评价P32蛋白的抗原表位。结果表明,羊痘病毒P32基因核苷酸和氨基酸同源性分别达到97.8%和95.6%以上;P32蛋白为含有一个跨膜结构的膜蛋白;肽段227-251区域的各种预测指数均高,推断该区域为一个潜在的优势抗原表位。数据分析显示,P32蛋白具有较强的抗原性,该结果将为GPV P32基因工程疫苗的研究和体外表达产物的应用提供依据。 展开更多
关键词 羊痘病毒 p32基因 生物信息学
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以减毒沙门氏菌为载体山羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建与鉴定 被引量：3
14
作者 殷俊磊 周碧君 +3 位作者 文明 樊翠华 杨颖 杜海燕 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期3-5,共3页
目的:构建以减毒沙门氏菌为载体山羊痘病毒P32基因真核表达载体。方法:以pMD-18T-P32/LD为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增出山羊痘病毒P32基因片段,定向插入真核表达载体pVAX1中,再重组表达质粒pVAX1-P32/LD。转入DH5α,再转入减毒鼠... 目的:构建以减毒沙门氏菌为载体山羊痘病毒P32基因真核表达载体。方法:以pMD-18T-P32/LD为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增出山羊痘病毒P32基因片段,定向插入真核表达载体pVAX1中,再重组表达质粒pVAX1-P32/LD。转入DH5α,再转入减毒鼠伤寒沙门氏菌,通过双酶切、PCR及插入片段序列测序对质粒进行鉴定。结果:携带山羊痘病毒P32基因片段的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗S7207/pVAX1-P32/LD已成功构建。结论:为山羊痘基因工程疫苗的研制及诊断方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 p32基因 重组减毒鼠伤寒沙门氏菌 真核表达载体 PVAX1
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山羊痘病毒p32基因的克隆、表达及单克隆抗体制备 被引量：4
15
作者 王永志 苏颖 +4 位作者 米丽娟 付云红 范志强 扈荣良 赵玉民 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第9期101-105,共5页
本研究旨在表达山羊痘病毒p32蛋白、制备p32蛋白单克隆抗体。通过PCR克隆p32基因,连接到pMD18-T并测序;酶切、连接后将p32基因克隆到pET28a(+)中,将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,在IPTG诱导下成功表达p32蛋白;利用亲和层析法纯化p32蛋白... 本研究旨在表达山羊痘病毒p32蛋白、制备p32蛋白单克隆抗体。通过PCR克隆p32基因,连接到pMD18-T并测序;酶切、连接后将p32基因克隆到pET28a(+)中,将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,在IPTG诱导下成功表达p32蛋白;利用亲和层析法纯化p32蛋白,用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠后制备p32蛋白单克隆抗体,获得22株识别重组蛋白的单抗,通过间接免疫荧光鉴定,其中3株能识别病毒的p32蛋白。山羊痘病毒p32蛋白的表达和单克隆抗体的制备为山羊痘病毒抗原、抗体检测提供了生物材料。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 p32基因 单克隆抗体
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山羊痘病毒P32基因重组真核表达载体的构建与鉴定 被引量：2
16
作者 殷俊磊 周碧君 +4 位作者 文明 程振涛 樊翠华 杨颖 杜海燕 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第9期132-134,共3页
根据已发表的山羊痘病毒P32基因序列设计合成1对带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物,用PCR方法从分离的贵州山羊痘病毒LD毒株中扩增出含P32基因的DNA片段,纯化后,经BamHⅠ/HindⅢ双酶切,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),获得pcDNA3.1(+)-P... 根据已发表的山羊痘病毒P32基因序列设计合成1对带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物,用PCR方法从分离的贵州山羊痘病毒LD毒株中扩增出含P32基因的DNA片段,纯化后,经BamHⅠ/HindⅢ双酶切,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),获得pcDNA3.1(+)-P32/LD重组载体。通过PCR、双酶切及测序鉴定,证实重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-P32/LD构建成功。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 p32基因 真核表达载体 PCDNA3.1(+)
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牛东方泰勒虫P32主要表面蛋白基因的克隆与分析 被引量：2
17
作者 杨艳玲 张西臣 +2 位作者 张国才 白光彦 李建华 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2007年第4期204-207,共4页
通过PCR技术从感染吉林株东方泰勒虫的病牛血液中扩增出868bp的表面蛋白P32基因,经测序比较分析发现与韩国株核苷酸和氨基酸的同源性分别为99%和98%。和我国延边株核苷酸和氨基酸的同源性分别为99%和98%。将所得的吉林株东方泰勒虫P32... 通过PCR技术从感染吉林株东方泰勒虫的病牛血液中扩增出868bp的表面蛋白P32基因,经测序比较分析发现与韩国株核苷酸和氨基酸的同源性分别为99%和98%。和我国延边株核苷酸和氨基酸的同源性分别为99%和98%。将所得的吉林株东方泰勒虫P32蛋白基因序列提交GenBank,基因注册号为EU047751。 展开更多
关键词 东方泰勒虫 克隆 测序 p32表面蛋白 PCR
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山羊痘病毒贵州分离株P32基因的克隆及序列分析 被引量：3
18
作者 程振涛 岳筠 +4 位作者 徐春志 李永明 许乐仁 周碧君 文明 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第10期13-15,共3页
关键词 山羊痘病毒 克隆载体 p32 贵州株 序列分析 基因 分离株 接触性传染病
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山羊痘病毒结构蛋白P32基因的表达 被引量：2
19
作者 张强 马维民 +7 位作者 吴国华 颜新敏 李健 朱海霞 朱彩珠 吴润 刘湘涛 才学鹏 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第5期5-8,共4页
将山羊痘病毒结构蛋白P32基因从重组质粒pMD-P32中亚克隆至pGEX-4T-1原核表达载体上,用构建的重组表达质粒pGEX-P32转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,1 mmol/L IPTG诱导表达,细菌裂解物经SDS-PAGE检测到分子量约为58 ku的目的蛋白,与预... 将山羊痘病毒结构蛋白P32基因从重组质粒pMD-P32中亚克隆至pGEX-4T-1原核表达载体上,用构建的重组表达质粒pGEX-P32转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,1 mmol/L IPTG诱导表达,细菌裂解物经SDS-PAGE检测到分子量约为58 ku的目的蛋白,与预期的产物大小一致.Western-blotting表明该重组蛋白可被山羊痘阳性血清所识别. 展开更多
关键词 羊痘病毒 p32基因 原核表达
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抗山羊痘病毒P32蛋白杂交瘤细胞的构建及其单克隆抗体的制备 被引量：3
20
作者 陈伯祥 杨明 +1 位作者 贺泂杰 李杰 《中国动物检疫》 CAS 2015年第12期66-68,共3页
本研究旨在以纯化的山羊痘病毒P32蛋白为免疫原,构建杂交瘤细胞株,制备P32蛋白单克隆抗体。用纯化的P32蛋白免疫BALB/C小鼠后,按常规方法进行细胞融合,构建抗山羊痘病毒P32蛋白的杂交瘤细胞,制备P32蛋白单克隆抗体,获得4株能识别重组蛋... 本研究旨在以纯化的山羊痘病毒P32蛋白为免疫原,构建杂交瘤细胞株,制备P32蛋白单克隆抗体。用纯化的P32蛋白免疫BALB/C小鼠后,按常规方法进行细胞融合,构建抗山羊痘病毒P32蛋白的杂交瘤细胞,制备P32蛋白单克隆抗体,获得4株能识别重组蛋白且特异性强无交叉反应的杂交瘤细胞株,腹水抗体效价均在10^5以上。山羊痘病毒P32蛋白杂交瘤细胞株的构建及单克隆抗体的制备为进一步开展检测方法研究提供了材料。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 p32蛋白 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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