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Gentier96全自动医用PCR分析系统检测HBV-DNA及HCV-RNA的性能验证
1
作者 耿见忠 张军会 +3 位作者 刘江 尤珊 陈兰 郝家明 《标记免疫分析与临床》 CAS 2023年第4期680-684,689,共6页
目的 对实验室新购入设备Gentier96全自动医用PCR分析系统使用HBV-DNA及HCV-RNA定量检测项目进行性能验证。方法 通过检测HBV-DNA及HCV-RNA定量检测项目,对精密度、正确度、线性范围及抗干扰能力进行验证和评价。结果 该系统检测低水平... 目的 对实验室新购入设备Gentier96全自动医用PCR分析系统使用HBV-DNA及HCV-RNA定量检测项目进行性能验证。方法 通过检测HBV-DNA及HCV-RNA定量检测项目,对精密度、正确度、线性范围及抗干扰能力进行验证和评价。结果 该系统检测低水平和高水平HBV-DNA的实验室变异系数(CV)分别为4.12%、1.27%。低水平和高水平HCV-RNA的实验室变异系数(CV)分别为4.75%、1.46%。HBV-DNA国家标准物质GBW(E)090137(浓度编号S5)靶值的对数值3.15、GBW(E)090139(浓度编号S2)靶值的对数值6.66。HCV-RNA国家标准物质GBW(E)090140(浓度编号S5)靶值的对数值3.34、GBW(E)090142(浓度编号S3)靶值的对数值5.64,实测值与靶值的差异均在±0.4对数值范围内。该分析系统HBV-DNA定量检测在4.69×10~2.04×109范围内呈线性,线性回归方程为Y=0.9884X+0.1452,R2=0.9994。HCV-RNA定量检测在3.47×10~2.33×107范围内呈线性,线性回归方程为Y=0.9548X+0.3302,R2=0.9997。干扰物质血红蛋白(Hb)样本与对照组样本偏倚<±7.5%,表明常见抗干扰物质血红蛋白(Hb)浓度≤2g/dL时对HBV-DNA和HCV-RNA定量检测结果无影响。结论 Gentier96全自动医用PCR分析系统检测HBV-DNA及HCV-RNA已达到相关标准要求,可用于样本检测。 展开更多
关键词 pcr分析系统 HBV-DNA HCV-RNA 性能验证
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转基因花卉的DNA提取与多重PCR分析 被引量：29
2
作者 邵碧英 陈文炳 +3 位作者 李寿崧 李世成 叶文飚 陈亮 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期674-678,共5页
分别以CTAB法、DNA提取试剂盒提取菊花、矮牵牛、非洲菊 3种花卉的基因组DNA ,凝胶电泳结果表明试剂盒提取的效果较好 .设计合成了 3对引物 ,分别扩增花椰菜花叶病毒 (Cauliflowermosaicvirus,CaMV) 35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶... 分别以CTAB法、DNA提取试剂盒提取菊花、矮牵牛、非洲菊 3种花卉的基因组DNA ,凝胶电泳结果表明试剂盒提取的效果较好 .设计合成了 3对引物 ,分别扩增花椰菜花叶病毒 (Cauliflowermosaicvirus,CaMV) 35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因 (nos)终止子、大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶II(nptⅡ )基因 .普通PCR检测结果表明 ,3种花卉 6个样品中仅矮牵牛的 1个样品含有这 3种转基因成分 ,酶切鉴定结果验证了PCR产物为非假阳性 .尝试以多重PCR同时检测转基因矮牵牛与对照阳性质粒中的 2个或 3个转基因成分 。 展开更多
关键词 转基因花卉 DNA提取 多重pcr分析 35S启动子 nos终止子 nptⅡ基因 转基因检测方法
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微量法提取高质量小麦DNA供大规模PCR分析 被引量：7
3
作者 张志清 郑有良 +3 位作者 王丕武 魏育明 颜泽洪 刘虹 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期83-86,共4页
介绍了一种在提取小麦DNA实验中常用的CTAB提取方法基础上改良的微量DNA提取方法。通过提取多个材料的DNA并经分光光度计检测,琼脂精电泳结果表明,这种方法提取的DNAOD260/280在2．00- 1．8间波动,较常规大量法提取DNA的质量高,能满足10... 介绍了一种在提取小麦DNA实验中常用的CTAB提取方法基础上改良的微量DNA提取方法。通过提取多个材料的DNA并经分光光度计检测,琼脂精电泳结果表明,这种方法提取的DNAOD260/280在2．00- 1．8间波动,较常规大量法提取DNA的质量高,能满足100-200余次的PCR反应的需要。采用该法对提取的普通小麦DNA以及转抗除草剂基因Bar-的转基因值株DNA分别进行SSR标记检测和PCR扩增,结果表明 SSR标记扩增效果与大量法无明显的差异,抗性植株DNA能扩增出Bar基因的特征带。 展开更多
关键词 小麦 微量提取 DNA pcr分析
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大豆及腐竹中转基因成分的多重PCR分析 被引量：16
4
作者 邵碧英 陈文炳 +1 位作者 江树勋 李寿崧 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第1期117-121,共5页
采用CTAB法提取大豆干样、新鲜毛豆及腐竹中的总DNA,内源LECTIN基因扩增结果均为阳性,表明提取到的DNA中不存在抑制PCR的物质.应用花椰菜花叶病毒(Cauliflowermosaicvirus,CaMV)35S启动子和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因(NOS)终止子的二重... 采用CTAB法提取大豆干样、新鲜毛豆及腐竹中的总DNA,内源LECTIN基因扩增结果均为阳性,表明提取到的DNA中不存在抑制PCR的物质.应用花椰菜花叶病毒(Cauliflowermosaicvirus,CaMV)35S启动子和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因(NOS)终止子的二重PCR分析,筛选到7个含转基因成分的样品.半嵌套式PCR检测结果表明阳性样品中的外源目的基因为来自根癌农杆菌CP4菌株的EPSPS基因.最后成功进行了扩增内源LECTIN基因、CaMV35S启动子和NOS终止子的三重PCR分析,以及内源LECTIN基因和EPSPS基因的二重PCR分析,得到预期结果.多重PCR方法具有快速、简便、准确等特点,在植物产品的转基因成分检测上具有重要的应用价值. 展开更多
关键词 大豆 多重pcr分析 根癌农杆菌 终止子 套式pcr检测 外源 转基因成分 NOS 阳性 MV
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苏云金杆菌4.0718质粒上杀虫晶体蛋白基因的PCR分析 被引量：4
5
作者 夏立秋 张何 +2 位作者 刘全兰 陈宇 莫湘涛 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第2期35-37,46,共4页
苏云金杆菌 (BacillusThuringiensis) 4 .0 718由本实验室选育是对鳞翅目 (Lepidopteran)昆虫有高毒性的菌株。采用SDS温和提取方法提取此菌株的质粒 ,电泳纯化后获得了其 4种不同分子量的质粒P1,P2 ,P3,P4。利用序列分析软件对已知的c... 苏云金杆菌 (BacillusThuringiensis) 4 .0 718由本实验室选育是对鳞翅目 (Lepidopteran)昆虫有高毒性的菌株。采用SDS温和提取方法提取此菌株的质粒 ,电泳纯化后获得了其 4种不同分子量的质粒P1,P2 ,P3,P4。利用序列分析软件对已知的cryI类型基因进行阵列比较 ,根据其高度保守区域设计了 1对通用引物 ,对cryI类型基因的扩增产物为 2 77bp左右的片段 ,用此引物对Bacillusthuringiensis 4.0 718的 4种不同质粒进行了PCR分析 ,发现质粒P1,P2 ,P3扩增阳性 ,都产生了 2 77bp的扩增片段 ,而质粒P4没有扩增产物 ,这为进一步的基因定位打下了基础。 展开更多
关键词 苏云金杆菌4.0718 质粒 杀虫晶体蛋白 pcr分析 cryⅠ基因
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罗氏COBAS AmpliPrep全自动PCR分析仪的应用与维护 被引量：5
6
作者 陈科 马洪滨 +6 位作者 李珺 徐军 刘立明 李永利 王雪飞 王海滨 庄英杰 《中国医学装备》 2013年第11期125-126,共2页
了解罗氏COBAS AmpliPrep全自动PCR分析仪的应用及维护保养,通过分析该设备常见故障的排除与维护,使仪器设备处于最佳的工作状态,保障检验结果的准确可靠。
关键词 pcr分析仪 应用 维护
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超甜玉米转基因稳定高效再生体系的建立及转化植株PCR分析 被引量：2
7
作者 李余良 胡建广 +1 位作者 苏菁 刘建华 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第3期70-74,共5页
为了通过对影响超甜玉米再生因素的研究,建立超甜玉米转基因再生技术体系,获得抗虫资源。以超甜玉米幼胚为愈伤组织诱导外植体,利用基因枪法将苏云金杆菌杀虫蛋白基因转化胚性愈伤组织,通过优化再生和生根培养条件建立了稳定、高效的超... 为了通过对影响超甜玉米再生因素的研究,建立超甜玉米转基因再生技术体系,获得抗虫资源。以超甜玉米幼胚为愈伤组织诱导外植体,利用基因枪法将苏云金杆菌杀虫蛋白基因转化胚性愈伤组织,通过优化再生和生根培养条件建立了稳定、高效的超甜玉米转基因再生成株体系。结果表明,随着愈伤组织继代时间的延长,再生成苗率降低,再生成苗越难;除草剂Basta对愈伤组织筛选的最适质量浓度为8 mg/L,愈伤组织预分化的最适培养基为MS+40 g/L蔗糖+20 g/L甘露醇+5.0 mg/L ABA,最适的再生培养基为MS+20 g/L蔗糖+2.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA,生根培养基为1/2 MS+0.1 mg/L NAA,对生根不好的小苗附加0.1 mg/L NAA+2.0mg/L IBA或0.2 mg/L NAA+3.0 mg/L IBA可以促进生根,生根率达93%以上。对部分再生转化植株进行PCR分析,部分植株能够扩增出426 bp片段,与阳性对照大小相同。试验结果初步证明Bt基因已经导入到玉米植株中。 展开更多
关键词 超甜玉米 转基因 幼胚 植株再生 再生体系pcr分析
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长期直接冻存猪肉样中基因组DNA提取方法的改进与PCR分析 被引量：4
8
作者 王存芳 苑存忠 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2003年第2期43-46,共4页
以新鲜猪耳组织作为对照 ,比较了用经典方法从新鲜猪耳组织和长期直接冻存猪肉样中提取的DNA ,提出了从长期直接冻存肉样中提取高质量DNA的改进方法。结果表明 ,采用改进方法可得到大量的、较完整的基因组DNA ,即对于基因组DNA降解较严... 以新鲜猪耳组织作为对照 ,比较了用经典方法从新鲜猪耳组织和长期直接冻存猪肉样中提取的DNA ,提出了从长期直接冻存肉样中提取高质量DNA的改进方法。结果表明 ,采用改进方法可得到大量的、较完整的基因组DNA ,即对于基因组DNA降解较严重的样品是行之有效的方法。对提取到的DNA进行扩增 ,并分析了影响PCR反应的因素。 展开更多
关键词 基因组DNA 提取方法 猪 长期冻存肉样 改进方法 pcr分析
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迪卡配套系猪RYR1的PCR分析及其利用的研究 被引量：1
9
作者 李馨 耿忠诚 +2 位作者 袁子国 李晓敏 刘太红 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2003年第7期15-16,共2页
试验从鸡东县永安猪扬随机抽取迪卡配套系猪B系和E系 4 2头 ,通过PCR扩增技术和酶切鉴定 ,采用克隆技术进行测序 ,来检测是否含有氟烷基因序列。经过以上技术检测这 4 2头猪均没有氟烷基因。
关键词 迪卡配套系猪 RYRl pcr分析 氟烷基因 应激综合征
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脑脊液中TB-DNA实时荧光定量PCR分析的临床应用价值评价 被引量：3
10
作者 李素华 陈莉 王欢 《西南国防医药》 CAS 2010年第6期641-642,共2页
目的探讨实时荧光定量PCR法检测脑脊液中TB-DNA的临床应用价值。方法收集具有神经系统症状患者的脑脊液标本106例,应用实时荧光定量PCR法检测TB-DNA。结果 106例中检测出TB-DNA阳性8例,总阳性率7.5%。检出的TB-DNA拷贝数最低为1.62e+001... 目的探讨实时荧光定量PCR法检测脑脊液中TB-DNA的临床应用价值。方法收集具有神经系统症状患者的脑脊液标本106例,应用实时荧光定量PCR法检测TB-DNA。结果 106例中检测出TB-DNA阳性8例,总阳性率7.5%。检出的TB-DNA拷贝数最低为1.62e+001,最高为7.51e+002。结论实时荧光定量PCR法检测脑脊液中TB-DNA对结核性脑膜炎的诊断有决定意义,具有较高临床应用价值。 展开更多
关键词 脑脊液标本 实时荧光定量 pcr分析 临床应用价值 价值评价 quantitative time CEREBROSPINAL fluid DNA Analysis clinical value pcr法检测 神经系统症状 结核性脑膜炎 阳性率 拷贝数 诊断 结果 患者 方法
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高龋儿童口腔中变形链球菌基因型与传播来源的AP-PCR分析 被引量：1
11
作者 胡晓燕 李颂 梅陵宣 《现代口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期328-329,244,共3页
关键词 基因型分布 儿童口腔 垂直传播 pcr分析 变形链球菌 儿童龋病 基因多态性 口腔疾病
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实时定量PCR分析ST13基因在肿瘤细胞株中的表达 被引量：5
12
作者 陈功星 张佳炜 +2 位作者 董庆华 丁佳逸 郑树 《国外医学（临床生物化学与检验学分册）》 2004年第4期301-302,305,共3页
目的　利用实时定量PCR(real timequantitativePCR)相对定量ST1 3基因在不同肿瘤细胞株的表达情况。方法　提取肿瘤细胞株SW 6 2 0、A5 4 9、Bxpc 3、SMMC 772 1、RKO和Bcap 37细胞总RNA ,经寡聚脱氧胸腺嘧啶逆转录 ,实时定量PCR扩增 ,... 目的　利用实时定量PCR(real timequantitativePCR)相对定量ST1 3基因在不同肿瘤细胞株的表达情况。方法　提取肿瘤细胞株SW 6 2 0、A5 4 9、Bxpc 3、SMMC 772 1、RKO和Bcap 37细胞总RNA ,经寡聚脱氧胸腺嘧啶逆转录 ,实时定量PCR扩增 ,针对内参照GAPDH基因相对定量ST1 3基因的表达 ,比较ST1 3基因在不同组织癌细胞株中的表达。结果　ST1 3基因在 6种肿瘤细胞株中表达高 ,相当于GAPDH基因表达的 1 %～ 2 0 % ,细胞株之间ST1 3基因表达量分高、中、低三类 (P <0 .0 5 ) ,呈现Bcap 37、RKO >SMMC 772 1和Bxpc 3>A5 4 9、SW6 2 0。 结论　本方法简便、快速、高效地反映了ST1 3基因在细胞株中的表达情况 。 展开更多
关键词 实时定量 pcr分析 STL 3基因 肿瘤细胞株 基因表达 GAPDH 逆转录
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限制片段差异显示PCR分析金属基质蛋白酶家族在乳腺癌表达的差异 被引量：1
13
作者 周鸿鹰 梅妍 +3 位作者 卢友光 蒋吉英 李爱冬 羊惠君 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期267-269,共3页
目的:建立乳腺癌差异表达谱,以筛选乳腺癌相关候选基因;比较金属基质蛋白酶家族(matrixmetalloproteinases,MMPs)在乳腺癌中的表达差异。方法:采集乳腺癌组织、转移淋巴结及正常乳腺组织,用限制片段差异显示PCR技术(Restrictionfragment... 目的:建立乳腺癌差异表达谱,以筛选乳腺癌相关候选基因;比较金属基质蛋白酶家族(matrixmetalloproteinases,MMPs)在乳腺癌中的表达差异。方法:采集乳腺癌组织、转移淋巴结及正常乳腺组织,用限制片段差异显示PCR技术(RestrictionfragmentsdifferentialdisplayPCR,RFDD-PCR)建立表达谱。以电泳和荧光扫描成像对表达谱片段进行分离、显示。筛选分析MMPs及其相关基因的表达差异。结果:共获得5407个基因片段,差异片段占30%以上;共显示13个MMPs基因及其相关基因金属蛋白酶组织抑制因子和转化生长因子β。其中除MMP20外,其余均有量或质的差异。结论:有多个MMPs基因参与了乳腺癌的发生、发展过程,其中MMP2、MMP10、MMP11、MMP14、MMP15、MMP28基因的开启可能为肿瘤进程的早期事件。 展开更多
关键词 金属基质蛋白酶 差异显示 pcr分析 金属蛋白酶组织抑制因子 家族 限制 display 转化生长因子β 相关候选基因 正常乳腺组织 表达差异 相关基因 Ps基因 乳腺癌组织 转移淋巴结 pcr技术 MMP20 表达谱 扫描成像 MMPS 筛选分析
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用于PCR分析的芥菜型油菜总DNA的快速提取 被引量：3
14
作者 严明理 刘忠松 +1 位作者 官春云 刘丽莉 《现代农业科技》 2008年第16期172-173,共2页
通过对所提DNA质量、效率和PCR检测,建立和优化了可用于PCR分析的芥菜型油菜总DNA的提取方法,这一方法快速,所提的DNA质量好,可在芥菜型油菜生长发育早期进行。
关键词 芥菜型油菜 快速提取DNA pcr分析
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用于PCR分析的水稻DNA简易提取法——CS法 被引量：3
15
作者 陈文岳 韩利红 宋亮 《杭州农业科技》 2004年第2期5-7,14,共4页
以PCR技术为基础的DNA分子标记是迄今在作物转基因检测、标记辅助选择、农作物品种纯度鉴定等方面最具应用前景的分子标记技术，而快速、简易、低成本的DNA提取方法是其中的关键因素之一。本实验以水稻黄化苗为材料，用NaOH溶液抽提DNA... 以PCR技术为基础的DNA分子标记是迄今在作物转基因检测、标记辅助选择、农作物品种纯度鉴定等方面最具应用前景的分子标记技术，而快速、简易、低成本的DNA提取方法是其中的关键因素之一。本实验以水稻黄化苗为材料，用NaOH溶液抽提DNA，对其用于PCR技术的DNA标记的效果进行了分析。结果发现，用O．5M．NaOH对黄化苗进行直接处理，并用等量1M Tris—HCI进行稀释、中和，离心所得的上清液即可直接用于各种：PCR扩增和随后的DNA标记鉴别，包括转基因PCR片段检测、微卫星标记多态性分析(琼脂糖电泳法或毛细管电泳法)，这样提取的DNA可以在短期内保存，在PCR分析中其效果与用常规CTAB法提取的DNA相当。 展开更多
关键词 水稻 DNA提取方法 pcr分析 CS法 DNA分子标记技术 转基因片段检测 Wx微卫星标记检测
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国内首台“风浴”型定量PCR分析仪用于乙型肝炎病毒临床检测
16
作者 朱凌 韩熹 《现代科学仪器》 2005年第6期5-6,共2页
介绍国内首台获得药监局审批合格的“风浴”型定量PCR分析仪的实际临床使用情况,并且对进行乙型肝炎病毒临床检测的实际效果进行评述,为今后国内定量PCR分析仪技术革新提供帮助。
关键词 实时荧光定量pcr分析技术 临床检测 国产定量pcr分析仪 专利技术
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正常人及肿瘤组织中rb1基因的PCR分析
17
作者 王新娟 徐斌 +2 位作者 孙宪丽 王润田 顾源 《中华临床医学杂志》 2004年第5期1-4,共4页
目的 研究人视网膜母细胞瘤(Rb)及其它肿瘤组织中视网膜母细胞瘤易感基因(rb1)的缺失或突变。方法 应用PER和PER-RFLP法分析人多种正常组织及肿瘤组织中rb1基因的第14～16和第20外显子。结果在9种正常组织中都检测到了正常rb1基因片段，... 目的 研究人视网膜母细胞瘤(Rb)及其它肿瘤组织中视网膜母细胞瘤易感基因(rb1)的缺失或突变。方法 应用PER和PER-RFLP法分析人多种正常组织及肿瘤组织中rb1基因的第14～16和第20外显子。结果在9种正常组织中都检测到了正常rb1基因片段，而32例Rb患者第14～16外显子全部缺失，第20外显子缺失率为65％(21／32)。乳腺癌和胃癌组织中第14～16外显子的异常率分别为9、5％和33％。结论 rb1的缺失与Rb的发生直接相关，与其它肿瘤的发生也有一定关系。 展开更多
关键词 肿瘤组织 RB1基因 pcr分析 聚合酶链式反应 视网膜母细胞瘤 胃癌 乳腺癌
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分离胶真空采血管在HBV-DNA实时荧光定量PCR分析中的应用
18
作者 李朝晖 郑锦利 刘洁 《医学检验与临床》 2010年第5期128-129,共2页
分离胶真空采血管由于分离胶界于血清与血细胞之间,可有效保护血清成分以及其分离血清效果优于无任何添加剂的真空采血管的优点,广泛应用于血清生化学试验、免疫检测、药物检测等,但分离胶真空采血管用于HBV-DNA实时荧光定量PCR检测是... 分离胶真空采血管由于分离胶界于血清与血细胞之间,可有效保护血清成分以及其分离血清效果优于无任何添加剂的真空采血管的优点,广泛应用于血清生化学试验、免疫检测、药物检测等,但分离胶真空采血管用于HBV-DNA实时荧光定量PCR检测是否适用,Donald S.Young,MD,PhD主编、李艳等主译的〈分析前因素对临床检验结果影响〉中也未提及[1],因此我们用无任何添加剂的真空采血管（A组）和分离胶促凝剂真空采血管（B组）采集51名门诊患者空腹静脉血样,然后对两种试管HBV-DNA结果进行统计分析,以探讨分离胶促凝管对HBV-DNA实时荧光定量PCR的检测是否有影响和在核酸检测中应用价值. 展开更多
关键词 分离胶真空采血管 实时荧光定量pcr HBV-DNA pcr分析 应用 荧光定量pcr检测 免疫检测 临床检验结果
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证明HBV核酸灭活效果的高灵敏度抑制性PCR分析方法的研究进展
19
作者 叶兵 《国外医学（输血及血液学分册）》 2004年第5期475-475,共1页
关键词 HBV核酸 灭活效果 高灵敏度抑制性 pcr分析 研究进展
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定量PCR分析仪的临床应用前景——AG-9900 Robo Master全自动荧光定量PCR分析仪
20
作者 毛远丽 《引进国外医药技术与设备》 1999年第11期60-61,共2页
荧光探针杂交定量PCR技术和全自动定量PCR分析仪的出现,使PCR扩增和产物分析整个过程完全在同一个封闭系统下完成,并在分析软件支持下实现对PCR扩增产物进行实时动态监测和自动得出定量结果。彻底解决了PCR技术中扩增产物污染和不能定... 荧光探针杂交定量PCR技术和全自动定量PCR分析仪的出现,使PCR扩增和产物分析整个过程完全在同一个封闭系统下完成,并在分析软件支持下实现对PCR扩增产物进行实时动态监测和自动得出定量结果。彻底解决了PCR技术中扩增产物污染和不能定量的问题,为PCR技术作为常规检测技术应用于临床开辟了广阔的前景。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 pcr分析仪 荧光定量分析
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