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Open AccessAmplifying colorectal cancer progression:impact of a PDIA4/SP1 positive feedback loop by circPDIA4 sponging miR-9-5p
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作者 Yan Zhuang Yiding Ai +6 位作者 Peng Li Xin Yue Yue Li Luling Shan Tongtong Wang Peng Zhao Xun Jin 《Cancer Biology & Medicine》 SCIE CAS CSCD 2024年第10期916-933,共18页
Objective:Colorectal cancer(CRC)is a prevalent malignant tumor with a high fatality rate.CircPDIA4 has been shown to have a vital role in cancer development by acting as a facilitator.Nevertheless,the impact of the ci... Objective:Colorectal cancer(CRC)is a prevalent malignant tumor with a high fatality rate.CircPDIA4 has been shown to have a vital role in cancer development by acting as a facilitator.Nevertheless,the impact of the circPDIA4/miR-9-5p/SP1 axis on development of CRC has not been studied.Methods:Western blot,immunohistochemistry,and reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction assays were used to analyze gene expression.The CCK-8 assay was used to assess cell growth.The Transwell assay was used to detect invasion and migration of cells.The luciferase reporter and RNA immunoprecipitation tests were used to determine if miR-9-5p and circPDIA4(or SP1)bind to one another.An in vivo assay was used to measure tumor growth.Results:It was shown that circPDIA4 expression was greater in CRC cell lines and tissues than healthy cell lines and tissues.CircPDIA4 knockdown prevented the invasion,migration,and proliferation of cells in CRC.Additionally,the combination of circPDIA4 and miR-9-5p was confirmed,as well as miR-9-5p binding to SP1.Rescue experiments also showed that the circPDIA4/miR-9-5p/SP1 axis accelerated the development of CRC.In addition,SP1 combined with the promoter region of circPDIA4 and induced circPDIA4 transcription.CircPDIA4 was shown to facilitate tumor growth in an in vivo assay.Conclusions:The circPDIA4/miR-9-5p/SP1 feedback loop was shown to aggravate CRC progression.This finding suggests that the ceRNA axis may be a promising biomarker for CRC patient treatment. 展开更多
关键词 CircRNA positive feedback loop colorectal cancer pdia4 SP1
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PDIA4基因沉默对胶质瘤细胞凋亡的影响 被引量:1
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作者 朱传华 谢琳 刘安民 《岭南现代临床外科》 2021年第2期177-181,共5页
目的探讨蛋白二硫键异构酶家族成员4(PDIA4)基因在胶质瘤细胞中的表达及对细胞凋亡的影响。方法下载并分析CGGA数据库RNAseq数据;收集人脑胶质瘤细胞系U251、U87和星形胶质细胞HA1800,用RT-qPCR法检测细胞系中的PDIA4表达水平;用siRNA转... 目的探讨蛋白二硫键异构酶家族成员4(PDIA4)基因在胶质瘤细胞中的表达及对细胞凋亡的影响。方法下载并分析CGGA数据库RNAseq数据;收集人脑胶质瘤细胞系U251、U87和星形胶质细胞HA1800,用RT-qPCR法检测细胞系中的PDIA4表达水平;用siRNA转染U251细胞,沉默PDIA4的细胞株为si#768组和si#1829组,未转染为阴性对照组,转染siNC为空白对照组;用阿尔玛蓝(alarma blue)法、克隆形成实验检测转染细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率;用蛋白免疫印记实验检测细胞中的cleaved-caspase3、cleaved-caspase 7蛋白表达水平。结果CGGA数据库中,PDIA4在不同级别胶质瘤中的表达水平不同(P<0.05),PDIA4高表达组较低表达组生存预后较差(Log-rank=264.32,P<0.001);与HA1800相比,PDIA4在U251和U87中相对表达量升高(F=58.44,P<0.05);与空白组、阴性对照组相比,si#768组和si#1829组增殖和克隆集落形成能力受到抑制(均P<0.01),凋亡率(17.67±0.11%、19.50±9.30%vs.3.72±7.11%、6.53±0.13%,F=51.06,P<0.05)明显升高;与阴性对照组相比,si#768组和si#1829组cleaved-caspase 7蛋白表达分别上调218.53%与169.68%,差异具有统计学意义(F=12.61,P<0.05)。结论沉默PDIA4基因可能通过激活caspase通路促进胶质瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 蛋白二硫键异构酶家族成员4 胶质瘤 凋亡
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PDIA4在肾癌细胞舒尼替尼耐药中的作用研究
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作者 唐麒麟 柯波亮 +3 位作者 何雏江 徐子杰 陈磊 邵怡 《现代生物医学进展》 CAS 2024年第13期2408-2416,共9页
目的:建立肾癌舒尼替尼耐药细胞株,探讨蛋白二硫键异构酶A成员4(PDIA4)调控肾细胞癌舒尼替尼耐药的机制。方法:采用小剂量间歇诱导法建立786-O和OS-RC-2耐药细胞株(786-OR和OS-RC-2R),采用实时荧光定量PCR法、蛋白免疫印迹法检测PDIA4... 目的:建立肾癌舒尼替尼耐药细胞株,探讨蛋白二硫键异构酶A成员4(PDIA4)调控肾细胞癌舒尼替尼耐药的机制。方法:采用小剂量间歇诱导法建立786-O和OS-RC-2耐药细胞株(786-OR和OS-RC-2R),采用实时荧光定量PCR法、蛋白免疫印迹法检测PDIA4在耐药肾癌细胞株与非耐药肾癌细胞株中的表达情况,通过慢病毒感染构建PDIA4稳定过表达或敲减肾癌细胞系,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测PDIA4对肾癌细胞增殖影响;通过qRT-PCR和Western blot检测凋亡相关蛋白BCL2、BAX、Caspase3、Cleaved-Caspase3、Caspase9表达。结果:与对照组亲本细胞株786-O和OS-RC-2相比,耐药细胞株786-OR和OS-RC-2R的PDIA4表达水平明显升高(P<0.05)。过表达PDIA4可促进肾癌细胞的生长和活力以及降低肾癌细胞对舒尼替尼的敏感性(P<0.05);而敲低PDIA4能抑制肾癌细胞的生长和活力以及升高肾癌细胞对舒尼替尼的敏感性(P<0.05)。此外,过表达PDIA4能抑制促凋亡蛋白的表达(P<0.05),而敲低PDIA4能促进促凋亡蛋白的表达(P<0.05)。结论:PDIA4与肾细胞癌舒尼替尼耐药有关,其机制是抑制细胞凋亡引起肾癌细胞癌舒尼替尼耐药,靶向PDIA4则可以逆转耐药。 展开更多
关键词 pdia4 肾细胞癌 舒尼替尼耐药 凋亡
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热应激对虹鳟CRT基因和PDIA4基因mRNA表达的影响 被引量:2
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作者 刘晓霞 刘哲 +4 位作者 王永杰 康玉军 马芳 王建福 黄进强 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期3967-3972,共6页
在转录组测序研究中,筛选出了与虹鳟热应激相关的钙网蛋白基因CRT和蛋白二硫键异构酶基因PDIA4。为研究其在热应激过程的表达变化规律及应答机制,本试验以全同胞虹鳟为研究对象,通过持续升温,分别在18℃(对照组)、21℃、23℃、24℃、25... 在转录组测序研究中,筛选出了与虹鳟热应激相关的钙网蛋白基因CRT和蛋白二硫键异构酶基因PDIA4。为研究其在热应激过程的表达变化规律及应答机制,本试验以全同胞虹鳟为研究对象,通过持续升温,分别在18℃(对照组)、21℃、23℃、24℃、25℃和26℃下随机挑选3尾虹鳟,采用实时荧光定量(Real-timeFQ-PCR)方法测定并分析了肝脏和头肾CRT和PDIA4mRNA的表达变化特征。结果显示,与18℃相比,肝脏、头肾CRT表达量分别在24℃、26℃时显著上调且达到最高(19.16倍和2.76倍,p<0.05);PDIA4mRNA表达量分别在25℃、26℃显著上调且达到最高(57.45倍和188.68倍,p<0.05)。肝脏CRT的表达量在24℃和25℃时显著高于头肾(10.89倍和8.46倍,p<0.05),而PDIA4表达量在24℃、25℃和26℃时显著低于头肾(p<0.05)。因此认为,热应激诱导虹鳟肝脏、头肾中CRT和PDIA4mRNA的表达上调,25℃以上时,虹鳟热应激反应强烈,且对基因表达水平的影响存在组织特异性,肝脏对热刺激的反应比头肾更敏感。本研究为阐述鱼类在热应激下适应性保护机制提供指导。 展开更多
关键词 虹鳟 热应激 CRT pdia4 MRNA
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猪蛋白质二硫化物异构酶A4基因克隆及密码子偏好性分析 被引量:4
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作者 张小丹 牛熙 +8 位作者 许瑶 阮亦麒 李大鹏 冉雪琴 王嘉福 吴娟 杨镜 田兰 龙艳霞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第4期1074-1085,共12页
试验旨在研究猪蛋白质二硫化物异构酶(protein disulfide isomerase A4,PDIA4)基因的密码子使用特性及其与其他物种密码子使用的差异。试验以香猪子宫组织为试验材料,采用RT-PCR方法扩增获得猪PDIA4基因,参考从NCBI数据库中下载的18个... 试验旨在研究猪蛋白质二硫化物异构酶(protein disulfide isomerase A4,PDIA4)基因的密码子使用特性及其与其他物种密码子使用的差异。试验以香猪子宫组织为试验材料,采用RT-PCR方法扩增获得猪PDIA4基因,参考从NCBI数据库中下载的18个不同物种PDIA4基因序列,对猪PDIA4基因的密码子使用特性及其与其他物种密码子的使用差异和进化关系进行分析,同时对猪PDIA4基因与4个模式生物密码子使用偏性进行比较。结果表明,猪PDIA4基因编码区长1 941 bp,共编码646个氨基酸。与NCBI数据库公布的野猪PDIA4基因(GenBank登录号:NM_001267834.1)的相似性达99%。猪PDIA4基因偏好使用G/C结尾的密码子,27种密码子为猪PDIA4基因的偏好密码子(RSCU>1),其中使用频率最高的前3个密码子分别为CTG(RSCU=3.69)、GCC(RSCU=2.31)和CGC(RSCU=2.29)。比较19个物种PDIA4基因发现,不同物种间PDIA4基因的有效密码子数(ENc)、密码子适应指数(CAI)、GC含量以及T、C、A、G、G+C在密码子第3位含量(T3s、C3s、A3s、G3s、GC3s)均存在差异,且密码子偏好以G/C结尾;聚类分析发现,基于CDS序列的系统进化树更符合19个物种的真实分类系统。在密码子使用频率上,猪PDIA4基因与小鼠基因组间密码子使用偏好程度更为接近,故小鼠更适合作为猪PDIA4基因的遗传转化和异源表达的受体系统。 展开更多
关键词 pdia4基因 克隆 密码子偏好性
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香猪5个单核苷酸位点的多态性与产仔数的关联分析 被引量:1
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作者 梅子凌 王洋 +5 位作者 刘畅 牛秋锦 谢玲玲 牛熙 王嘉福 冉雪琴 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1129-1136,共8页
为了寻找影响猪产仔数的功能基因,本研究选取5个候选SNP位点CASI0003452、DIAS0001380、ALGA0071919、MARC0052565和ALGA0045832,采用等位基因特异PCR方法对候选位点的多态性变化进行群体研究。结果表明:香猪群体中C^(452)位点以BB基因... 为了寻找影响猪产仔数的功能基因,本研究选取5个候选SNP位点CASI0003452、DIAS0001380、ALGA0071919、MARC0052565和ALGA0045832,采用等位基因特异PCR方法对候选位点的多态性变化进行群体研究。结果表明:香猪群体中C^(452)位点以BB基因型为主,低产群的B等位基因频率明显高于高产群(p<0.05),两个香猪群体的B等位基因频率明显高于大白猪(p<0.05)。D^(380)位点,两个香猪群的A等位基因频率低于于大白猪,且与乳头数呈弱的正相关;香猪和大白猪群体中A^(919)和M^(565)位点在香猪和大白猪群体中的基因型均为CC型,没有多态性;A^(832)位点两个香猪群A等位基因频率明显低于大白猪(p<0.05)。经测序证实D^(380)位点处于C1GALT1基因外显子1中,属于同义密码子突变(GCC→GCU),存在密码子偏好性,可能影响香猪C1GALT1基因的表达,可能与香猪的性早熟有关。C^(452)位于PDIA4基因内含子4中,已知PDIA4基因直接影响繁殖的主效基因ER的结构和功能,推测C^(452)位点的多态性有可能影响PDIA4蛋白的表达,进而干扰卵母细胞成熟、受精及胚胎的早期发育等生理过程。 展开更多
关键词 香猪 产仔数 单核苷酸多态性 C1GALT1基因 pdia4基因
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