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补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠线粒体氧化损伤和PKCε-Nampt通路的影响
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作者 尹美娟 刘真一 +4 位作者 靳晓飞 周晓红 高钰 赵月眸 高维娟 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期79-86,共8页
目的探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注(I/R)大鼠线粒体氧化损伤及PKCε-Nampt通路的影响。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组(14.3 g/kg)和依达拉奉组(3 mg/kg),除假手术组外均采用MCAO法建立脑I/R损伤模型,术后24 h各组给... 目的探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注(I/R)大鼠线粒体氧化损伤及PKCε-Nampt通路的影响。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组(14.3 g/kg)和依达拉奉组(3 mg/kg),除假手术组外均采用MCAO法建立脑I/R损伤模型,术后24 h各组给予相应剂量药物,给药7 d后通过神经功能评分评估神经功能缺损情况,免疫荧光检测神经元标志物MAP-2表达,观察神经元损伤情况,检测ROS、MDA水平和SOD活性评价氧化损伤情况,荧光探针JC-1检测线粒体膜电位变化,修饰酶循环法检测NAD^(+)/NADH比值,Western blot法检测PKCε、p-PKCε、Nampt蛋白表达,免疫组化法检测p-PKCε、Nampt蛋白阳性表达。结果与模型组比较,补阳还五汤组脑梗死体积、神经功能评分降低(P<0.05),脑组织MAP-2荧光强度增强(P<0.05),神经元损伤减轻,脑组织ROS、MDA水平降低(P<0.05),SOD活性、线粒体膜电位、NAD^(+)/NADH比值升高(P<0.05),p-PKCε、Nampt蛋白表达升高(P<0.05)。结论补阳还五汤可通过激活PKCε-Nampt信号通路、提高线粒体功能来减轻大鼠脑I/R损伤。 展开更多
关键词 补阳还五汤 脑缺血再灌注损伤 线粒体 pkcε NAMPT
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腹部推拿调控Tryptase-PAR2-PKCε通路防治IBS-D内脏痛的机制研究 被引量:1
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作者 李华南 王毓岩 +4 位作者 张小凡 张玮 马菲 董桦 王金贵 《天津中医药》 CAS 2023年第1期75-81,共7页
[目的]验证腹部推拿防治腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠内脏高敏感的效果,阐明其作用途径与机制。[方法]40只SD雄性大鼠,随机分为空白组、模型组、腹部推拿组、西药组,每组10只。采用母婴分离结合慢性应激法制备IBS-D大鼠模型。应... [目的]验证腹部推拿防治腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠内脏高敏感的效果,阐明其作用途径与机制。[方法]40只SD雄性大鼠,随机分为空白组、模型组、腹部推拿组、西药组,每组10只。采用母婴分离结合慢性应激法制备IBS-D大鼠模型。应用腹壁撤退评分评价干预效果。采用甲苯胺蓝染色观察结肠组织肥大细胞(MC)聚集数量及状态。利用免疫组化及蛋白质印迹法(Western blot)法分别检测胰蛋白酶(Tryptase)颗粒分布、结肠组织中蛋白酶激活受体2(PAR2)和蛋白激酶Cε(PKCε)蛋白表达。[结果]与模型组比较,腹部推拿组和西药组腹壁撤退反射评分(AWR)明显降低(P<0.05)。镜下显示,模型组MC形态不规则,计数及密度显著高于空白组;腹部推拿组、西药组与模型组相比,MC计数降低、密度减少(P<0.01)。免疫组化检测发现与模型组相比,腹部推拿组、西药组MC Tryptase颗粒分布明显降低(P<0.01);Western blot检测发现与模型组相比,腹部推拿组和西药组的PAR2、PKCε表达量均显著降低(P<0.01)。[结论]腹部推拿作用于腹部,可能通过活化肠道MC,调控其脱颗粒,降低Tryptase释放,并借助Tryptase-PAR2-PKCε通路,进而改善IBS-D模型大鼠肠道高敏感性作用机制。 展开更多
关键词 腹部推拿 腹泻型肠易激综合征 内脏高敏感 TRYPTASE PAR2 pkcε
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Simiao Wan alleviates obesity-associated insulin resistance via PKCε/IRS-1/PI3K/Akt signaling pathway based on network pharmacology analysis and experimental validation
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作者 Jing Jin Yin-Yue Xu +3 位作者 Wen-Ping Liu Ke-Hua Hu Ning Xue Zu-Guo Zheng 《Traditional Medicine Research》 2023年第10期56-68,共13页
Background:The purpose of the study was to investigatethe active ingredients and potential biochemicalmechanisms of Simiao Wan(SMW)in obesity-associated insulin resistance.Methods:An integrated network pharmacology me... Background:The purpose of the study was to investigatethe active ingredients and potential biochemicalmechanisms of Simiao Wan(SMW)in obesity-associated insulin resistance.Methods:An integrated network pharmacology method to screen the active compoundsand candidate targets,construct the protein-protein-interaction network,and ingredients-targets-pathways network was constructed for topological analysis to identify core targets and main ingredients.To find the possible signaling pathways,enrichment analysis was performed.Further,a model of insulin resistance in HL-7702 cells was established to verify the impact of SMW and the regulatory processes.Results:An overall of 63 active components and 151 candidate targets were obtained,in which flavonoids were the main ingredients.Enrichment analysis indicated that the PI3K-Akt signaling pathway was the potential pathway regulated by SMW in obesity-associated insulin resistance treatment.The result showed that SMW could significantly ameliorate insulin sensitivity,increase glucose synthesis and glucose utilization and reduce intracellular lipids accumulation in hepatocytes.Also,SMW inhibited diacylglycerols accumulation-induced PKCεactivity and decreased its translocation to the membrane.Conclusion:SMW ameliorated obesity-associated insulin resistance through PKCε/IRS-1/PI3K/Akt signaling axis in hepatocytes,providing a new strategy for metabolic disease treatment. 展开更多
关键词 Simiao Wan insulin resistance pkcε/IRS-1/PI3K/Akt signaling pathway network pharmacology DAG
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大鼠福尔马林内脏炎症痛过程中脊髓PKC、PKCε膜转位的变化 被引量:16
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作者 张颜波 高翠英 +1 位作者 李菁锦 吕国蔚 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期91-95,共5页
目的:初步探讨PKC、PKCε在内脏炎症痛过程中的作用。方法:本实验用福尔马林(F)直肠粘膜下注射的内脏炎症痛模型,经脊髓蛛网膜下腔插管分别给予PKC、PKCε激动剂PMA(phorbol12 myristate13 acetate)和抑制剂H 7(1 (5 isoquinolinesulfon... 目的:初步探讨PKC、PKCε在内脏炎症痛过程中的作用。方法:本实验用福尔马林(F)直肠粘膜下注射的内脏炎症痛模型,经脊髓蛛网膜下腔插管分别给予PKC、PKCε激动剂PMA(phorbol12 myristate13 acetate)和抑制剂H 7(1 (5 isoquinolinesulfonyl)2 methylpiperazinedihydrochloride),结合SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)、蛋白印迹 (Western blot)等生化技术。选用成年健康Wistar大鼠,随机分 4组: 正常对照组N,内脏痛组(F+NaCl),PMA组(F+PMA)和H 7组(F+H 7)。共分福尔马林直肠内致炎后 30min、60min和 120min三个时间段。结果:在福尔马林直肠致炎后 60min内,F+NaCl组与N组PKC、PKCε膜转位相比分别明显增高 (P<0. 01);F+PMA组与F+NaCl组PKC、PKCε相比分别明显增高(P<0. 05);F+IT+H 7组与F+IT+NaCl组PKC、PKCε相比分别明显降低 (P<0. 05 )。结论: 福尔马林致内脏炎症痛过程中PKC、PKCε被激活,提示PKC、PKCε可能参与了内脏炎症痛的发生。 展开更多
关键词 pkcε 福尔马林 炎症痛 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 脊髓 转位 Wistar大鼠 直肠粘膜下注射 蛛网膜下腔插管 正常对照组 初步探讨 蛋白印迹 痛模型 激动剂 抑制剂 内脏痛 PMA 直肠内 时间段 比分 致炎 增高
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宫颈癌组织中PKCα、PKCε、PKCδ表达及与化疗药物敏感性的机制研究 被引量:1
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作者 郭庆枝 李丽 +3 位作者 薄其美 陈莉 孙莉 石洪堂 《海南医学院学报》 CAS 2019年第2期120-124,共5页
目的:探讨宫颈癌组织中PKCα、PKCε、PKCδ表达及其与化疗药物敏感性的关系。方法:选择本院收治的确诊宫颈癌患者38例,三维彩色多普勒超声检测血管形成指数(VI)、血流指数(FI)、血管血流指数(VFI),取化疗前后病灶组织各100mg左右,采用R... 目的:探讨宫颈癌组织中PKCα、PKCε、PKCδ表达及其与化疗药物敏感性的关系。方法:选择本院收治的确诊宫颈癌患者38例,三维彩色多普勒超声检测血管形成指数(VI)、血流指数(FI)、血管血流指数(VFI),取化疗前后病灶组织各100mg左右,采用RT-PCR检测组织中PKCα、PKCε、PKCδmRNA表达水平,Western blot检测组织中PKCα、PKCε、PKCδ蛋白的表达,Spearman相关分析PKCα、PKCε、PKCδmRNA表达水平与化药敏感性的关系,Logisitic回归分析影响化疗敏感性的相关因素。结果:化疗后PKCα、PKCεmRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),PKCδmRNA和蛋白的表达均显著升高(P<0.05);化疗后有效组PKCα、PKCεmRNA和蛋白表达水平较化疗前均显著降低(P<0.05),PKCδmRNA和蛋白的表达较化疗前均显著升高(P<0.05);Spearman分析化疗前宫颈癌组织中PKCα与PKCε的mRNA表达水平与VI、FI和化疗后残余肿瘤体积百分比呈显著正相关,PKCδ与VI、FI和化疗后残余肿瘤体积百分比呈显著负相关,而与VFI和化疗前肿瘤的体积大小无明显相关性;Logisitic回归分析显示PKCα、PKCε、PKCδmRNA、VI、FI为化疗敏感性的独立危险因素,淋巴结转移、肿瘤体积与化疗敏感性无关。结论:PKCα、PKCε在宫颈癌组织中高表达,PKCδ在宫颈癌组织中低表达,三者均与化疗敏感性具有密切关系。 展开更多
关键词 宫颈癌 pkcΑ pkcε pkcΔ 化疗敏感性
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MLC20磷酸化在PKCα、PKCε调节失血性休克大鼠血管钙敏感性中的作用 被引量:1
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作者 徐竞 杨光明 +4 位作者 李涛 明佳 陈玮 张瑗 刘良明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第21期1972-1975,共4页
目的观察肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化在蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)、蛋白激酶Cε(protein kinase Cε,PKCε)调节大鼠失血性休克后血管钙敏感性中的作用,进一步探讨休克血管钙失敏的发生机制。方法采用缺氧大鼠血管平滑肌细... 目的观察肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化在蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)、蛋白激酶Cε(protein kinase Cε,PKCε)调节大鼠失血性休克后血管钙敏感性中的作用,进一步探讨休克血管钙失敏的发生机制。方法采用缺氧大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)和失血性休克后大鼠肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA),运用Western blot、底物磷酸化等技术方法,观察PKCα、PKCε激动剂作用下,以及抑制CPI-17、ILK、ZIPK后再给予PKCα、PKCε激动剂时,肌球蛋白轻链磷酸酶(myosin light chain phosphatase,MLCP)活性和MLC20磷酸化的变化。结果①缺氧2h后VSMC中MLCP活性增高至正常对照的150.1%(P<0.01),PKCα、PKCε激动剂可显著抑制其增高,使其分别降低至正常对照的103.0%和96.3%(P<0.01),抑制CPI-17、ILK、ZIPK,可显著抑制PKCα激动剂降低MLCP活性的作用,使其分别增高至正常对照的136.7%、127.6%和116.7%(P<0.01);抑制CPI-17、ILK、ZIPK,也可显著抑制PKCε激动剂降低MLCP活性的作用,使其分别增高至134.0%、128.5%和126.0%(P<0.01)。②失血性休克2h后SMA中MLC20磷酸化水平由32.4%显著降低至10.4%(P<0.01),PKCα、PKCε激动剂可显著抑制其降低,使其分别增高至26.4%和25.6%(P<0.01),抑制CPI-17、ILK、ZIPK,可显著削弱PKCα激动剂的增高MLC20磷酸化的作用,使其分别降低至12.7%、10.0%和15.7%(P<0.01);也可显著削弱PKCε激动剂增高MLC20磷酸化的作用,使其分别降低至10.1%、12.5%和10.3%(P<0.01)。结论PKCα、PKCε可能通过CPI-17、ILK、ZIPK调节MLCP活性和MLC20磷酸化,调节失血性休克血管平滑肌的钙敏感性。 展开更多
关键词 钙敏感性 pkcΑ pkcε MLCP MLC20
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肠吉泰对肠易激综合征内脏高敏感大鼠PAR2、PKCε、TRPV1蛋白表达的影响 被引量:3
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作者 耿琦 丛军 《西部中医药》 2022年第4期60-63,共4页
目的:探讨肠吉泰对内脏高敏感模型大鼠的调节作用。方法:选择新生SD大鼠40只,按照随机数字表法随机分为空白组、模型对照组、阳性对照组及肠吉泰组,每组10只。参照Alchaer直肠醋酸刺激法建立IBS内脏高敏感大鼠模型。造模期间阳性对照组... 目的:探讨肠吉泰对内脏高敏感模型大鼠的调节作用。方法:选择新生SD大鼠40只,按照随机数字表法随机分为空白组、模型对照组、阳性对照组及肠吉泰组,每组10只。参照Alchaer直肠醋酸刺激法建立IBS内脏高敏感大鼠模型。造模期间阳性对照组大鼠给予腹腔注射Capsazepine,其余各组除空白组外均给予相同体积的溶剂腹腔注射。从第8周开始,肠吉泰组每日给予0.423 g/mL的剂量中药灌胃,空白组、模型对照组和阳性对照组每日予以等量去离子水灌胃,各组均持续灌胃4周。干预4周后,采用结直肠气囊扩张法测定并记录大鼠腹壁反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)评分,进行肠道敏感性评估;使用Western blot法检测大鼠结肠黏膜组织蛋白酶激活受体2(proteinase-activated receptors 2,PAR2)、下游物质蛋白激酶Cε(protein kinaseCε,PKCε)、瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid1,TRPV1)、磷酸化TRPV1(p-TRPV1)的表达。结果:当气囊压力为40、60 mm Hg(1 mm Hg≈0.133 kPa)时,模型对照组大鼠AWR评分较空白组明显升高(P<0.01);肠吉泰组和阳性对照组AWR评分与模型组比较均明显降低(P<0.05)。与模型对照组比较,阳性对照组及肠吉泰组PAR2、PKCε、TRPV1、p-TRPV1的表达显著降低(P<0.05)。结论:肠吉泰可能是通过下调PAR2、PKCε、TRPV1、p-TRPV1的表达,抑制其活化,从而改善IBS内脏高敏感。 展开更多
关键词 肠易激综合征 肠吉泰 内脏高敏感 PAR2 pkcε TRPV1 动物实验
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过表达PKCε和PKCη在HCC1806细胞中的抗凋亡作用 被引量:2
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作者 苏湘鄂 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期559-564,共6页
为探讨PKCε、PKCη对乳腺癌细胞中TNFα诱导凋亡的影响,采用PCR技术,从人肌肉cDNA文库中克隆了全长PKCε和PKCη序列,亚克隆至pcDNA3,转化HCC1806细胞,并选择出稳定的转化细胞株.然后用流式细胞仪检测了PKCε、PKCη过表达对DNA断裂的... 为探讨PKCε、PKCη对乳腺癌细胞中TNFα诱导凋亡的影响,采用PCR技术,从人肌肉cDNA文库中克隆了全长PKCε和PKCη序列,亚克隆至pcDNA3,转化HCC1806细胞,并选择出稳定的转化细胞株.然后用流式细胞仪检测了PKCε、PKCη过表达对DNA断裂的影响,用Western印迹方法检测了PKCε、PKCη过表达对PARP、caspase3和caspase8水解的影响,以及对Bcl-2,Bax表达的影响,和对MAPK磷酸化的影响.流式细胞仪分析DNA含量的结果表明:TNFα处理后,HCC1806/PC、HCC1806/ε、HCC1806/η的sub-G1状态的DNA含量分别为:57·7%、23·3%、14·6%.Western印迹结果表明,当用0·01nmol/LTNFα处理,HCC1806/η中PARP、caspase3、caspase8的水解程度最低,HCC1806/ε中次之,HCC1806/PC最严重;与HCC1806/PC比较,无论用不用TNFα处理,HCC1806/ε都表达更高的Bcl-2,而HCC1806/η不影响Bcl-2的表达.过表达PKCη而不是PKCε抑制了由TNFα引起的p38和JNK的磷酸化,并且是JNK的抑制剂SP600125而不是p38的抑制剂SB220025抑制了PARP的裂解.以上结果显示,过表达PKCε、PKCη可能通过不同的信号途径在HCC1806中起抗凋亡作用,PKCε上调了bcl-2的表达,而PKCη抑制了JNK的磷酸化. 展开更多
关键词 pkcε pkcη HCC1806 抗凋亡
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兔心肌细胞蛋白质中可能的PKCε直接底物的鉴定 被引量:1
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作者 曹西南 杨远和 +2 位作者 孔德瀛 李长宣 平佩佩 《昆明医学院学报》 2003年第3期5-9,共5页
目的 :利用PKCε酶促放射性磷酸化标记兔心肌细胞蛋白质 ,鉴定出其可能的直接底物 ,为进一步研究奠定基础 .结果 :通过PKCε特异底物竞争抑制、PKCε特异抑制剂Ro 31- 82 2 0、兔心肌细胞蛋白质热变性等分析措施 ,初步用PKCε酶促放射... 目的 :利用PKCε酶促放射性磷酸化标记兔心肌细胞蛋白质 ,鉴定出其可能的直接底物 ,为进一步研究奠定基础 .结果 :通过PKCε特异底物竞争抑制、PKCε特异抑制剂Ro 31- 82 2 0、兔心肌细胞蛋白质热变性等分析措施 ,初步用PKCε酶促放射性磷酸化标记 ,从兔心肌细胞蛋白质中鉴定出表观分子量为 5 7kd ,35kd ,2 3kd和 2 0kd的蛋白质的磷酸化与PKCε酶活性相关 ,其中 5 7kd ,2 3kd和 2 0kd 3种蛋白质可被PKCε在体外直接磷酸化 ,并且其磷酸化不受蛋白激酶抑制剂PD980 5 9和SB2 0 35 8的影响 .结论 :5 7kd ,2 3kd和2 0kd 3种蛋白质有可能是PKCε直接底物 . 展开更多
关键词 心肌细胞 蛋白质 pkcε直接底物 鉴定 蛋白激酶C 心肌缺血
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PKCε与Lck在细胞内直接相互作用的荧光共振能量转移证据 被引量:1
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作者 曹西南 平佩佩 宋昌旭 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期529-534,共6页
蛋白激酶Cε亚型 (PKCε)和蛋白酪氨酸激酸Lck均在心肌缺血预适应的信号转导中起着十分重要的作用 .构建PKCε和Lck与绿色荧光蛋白的融合蛋白的真核细胞表达载体 .将其共转染H2 93细胞进行表达 .用荧光显微镜观察到荧光共振能量转移现象 。
关键词 pkcε LCK 直接相互作用 荧光共振能量转移 缺血预适应 蛋白质相互作用 心肌缺血 HELA细胞
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人参皂苷Rg1保护心肌细胞免于缺氧-复养损伤涉及PKCε-activatedERK1/2径路 被引量:2
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作者 朱丹 黄秀兰 《中国药理通讯》 2009年第2期46-47,共2页
目的:人参皂苷Rg1是人参、三七等人参属药材的主要活性成分。众多研究表明人参总皂苷和三七总皂苷具有心血管方面的活性及治疗作用。本研究旨在观察人参皂苷Rg1单体心肌保护作用及作用机制。方法:培养大鼠乳鼠心肌细胞,缺氧3小时复养... 目的:人参皂苷Rg1是人参、三七等人参属药材的主要活性成分。众多研究表明人参总皂苷和三七总皂苷具有心血管方面的活性及治疗作用。本研究旨在观察人参皂苷Rg1单体心肌保护作用及作用机制。方法:培养大鼠乳鼠心肌细胞,缺氧3小时复养1小时后检测心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)的渗漏,心肌细胞内总超氧化物歧化酶(T-SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性,还原型谷胱甘肽的含量。利用DFH为探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,Fluo-4探针检测细胞内钙水平。采用WesternBlot技术检测细胞PKCe在细胞膜和细胞浆的分布,以及ERK1/2、P38和JNK的蛋白磷酸化水平,选择PMA为PKCε的激动剂,PD98059、SP600125、SB203580为ERK1/2、P38和JNK的抑制剂。结果:人参皂苷Rg1具有缺氧一复氧损伤保护作用,可明显降低乳酸脱氢酶的渗漏。人参皂苷Rg1可抑制ROS的产生,并可升高细胞内的抗氧化酶活性。与模型组比较Rg1 120μM处理组T-SOD、CAT、GSH分别升高85.8%、73.1%和36.9%,细胞内ROS水平下降了63.8%。 展开更多
关键词 人参皂苷RG1 保护心肌细胞 pkcε 复氧损伤 ERK1/2 缺氧 WesternBlot 总超氧化物歧化酶
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芎芷地龙汤不同时间预防给药对偏头痛动物模型PKCγ、PKCε mRNA的影响
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作者 胡坤 王永丽 +1 位作者 赵永烈 岳广欣 《中国中医急症》 2017年第7期1134-1136,1144,共4页
目的观察芎芷地龙汤不同时间预给药对偏头痛动物模型PKCγ、PKCε mRNA表达的影响。方法将健康雄性SD大鼠36只,随机分为生理盐水组、模型组、舒马普坦组、芎芷地龙汤1 d、3 d、7 d预给药组,每组6只。按照预定给药,造模结束后2 h取材,rea... 目的观察芎芷地龙汤不同时间预给药对偏头痛动物模型PKCγ、PKCε mRNA表达的影响。方法将健康雄性SD大鼠36只,随机分为生理盐水组、模型组、舒马普坦组、芎芷地龙汤1 d、3 d、7 d预给药组,每组6只。按照预定给药,造模结束后2 h取材,real-time PCR法测定三叉神经节、三叉神经脊束核丘脑、硬脑膜PKCγ、PKCε mRNA表达情况。结果与生理盐水组比较,模型组PKCγ mRNA在三叉神经节、三叉神经脊束核、硬脑膜表达水平明显升高,在丘脑表达水平明显降低(P<0.01),给药干预后,三叉神经节、三叉神经脊束核、硬脑膜PKCγ mRNA表达水平均降低,其中以预防给药7 d组和舒马普坦组降低明显(P<0.01);丘脑PKCγ mRNA表达水平有所升高,以1 d组、3 d组、舒马普坦组明显((P<0.05或P<0.01)。与生理盐水组比较,模型组PKCε mRNA在硬脑膜、三叉神经节、三叉神经脊束核表达水平明显升高(P<0.01),在丘脑表达水平降低(P<0.01);给药干预后,PKCε mRNA在三叉神经节、三叉神经脊束核表达水平降低,以预防给药7 d组和舒马普坦组降低明显(P<0.01),在硬脑膜表达水平降低,以3 d组和舒马普坦组(均P<0.01)较1 d组和7 d组(均P<0.05)明显;PKCε mRNA在丘脑表达水平升高,各组升高水平均有统计学意义(P<0.01)。结论芎芷地龙汤预防给药可以减少NTG诱发的三叉神经节、三叉神经脊束核PKCγ mRNA、PKCε mRNA表达,而以预防给药7 d效果好于预防给药3 d、1 d。 展开更多
关键词 偏头痛 芎芷地龙汤 预防给药 pkcΓ MRNA pkcε MRNA
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兔PKCε催化功能域在大肠杆菌中表达与部分纯化
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作者 王芳 曹西南 《热带医学杂志》 CAS 2004年第5期509-512,517,共5页
目的通过构建蛋白激酶Cε原核表达载体以获得纯化的PKCε蛋白。方法将PKCε催化功能域(野生型和突变型)构建至原核表达载体pUC18上形成重组质粒pUC-CK和pUC-CR,将其转化至大肠杆菌DH5α细胞中诱导其高效表达。结果表达产物的SDS-PAGE电... 目的通过构建蛋白激酶Cε原核表达载体以获得纯化的PKCε蛋白。方法将PKCε催化功能域(野生型和突变型)构建至原核表达载体pUC18上形成重组质粒pUC-CK和pUC-CR,将其转化至大肠杆菌DH5α细胞中诱导其高效表达。结果表达产物的SDS-PAGE电泳及Westernblot检测表明,催化功能域在大肠杆菌中成功表达,并对其进行了部分纯化。结论获得纯化的PKCε蛋白,为今后大量表达、纯化该酶蛋白作了前期铺垫。 展开更多
关键词 pkcε 催化结构域 大肠杆菌 表达与纯化
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脊髓PKCε和μ阿片受体参与瑞芬太尼诱导大鼠痛觉过敏 被引量:8
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作者 于萍 王晓娥 +1 位作者 崔宇 陈元 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期850-857,共8页
【目的】在瑞芬太尼诱导痛觉过敏的大鼠脊髓组织中观察PKCε和μ阿片受体(MOR)的表达水平变化,探讨PKCε和MOR两者之间的关系。【方法】18只成年雄性SD大鼠随机平均分为3组(每组6只),分为空白对照组(C组)、生理盐水对照组(S组)和瑞芬太... 【目的】在瑞芬太尼诱导痛觉过敏的大鼠脊髓组织中观察PKCε和μ阿片受体(MOR)的表达水平变化,探讨PKCε和MOR两者之间的关系。【方法】18只成年雄性SD大鼠随机平均分为3组(每组6只),分为空白对照组(C组)、生理盐水对照组(S组)和瑞芬太尼组(R组)。通过大鼠尾静脉输注瑞芬太尼4μg/(kg·min)给药2 h建立瑞芬太尼诱导的大鼠痛觉过敏模型。采用Hargreaves法观察瑞芬太尼输注后6、24 h的大鼠热刺激撤足阈值。通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测大鼠脊髓组织中的PKCε和MOR的表达水平,并用免疫荧光观察PKCε和MOR在大鼠脊髓组织中的分布情况。瑞芬太尼输注前30 min预先鞘内注射不同的PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I(BIS,PKC广谱抑制剂)和Gö6983(抑制PKC的亚型不包括PKCε),观察不同的PKC抑制剂预处理对瑞芬太尼诱导的大鼠痛觉过敏的影响以及检测大鼠脊髓组织MOR蛋白表达变化。【结果】输注瑞芬太尼24 h后可显著引起大鼠热痛阈值降低[PWTL=(5.31±0.87)s,P<0.01]。同时,蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR结果表明,PKCε表达上调(P<0.001)、MOR表达下降(P<0.001)。免疫荧光结果表明,在大鼠脊髓背角PKCε和MOR均与神经元存在共定位。预先鞘内注射BIS可以缓解大鼠痛觉过敏以及抑制MOR表达上调(P<0.001),而注射Gö6983则无影响(P>0.05)。【结论】脊髓背角神经元PKCε和MOR参与瑞芬太尼诱导大鼠痛觉过敏,且PKCε可能调控MOR表达水平变化,本研究将为探明瑞芬太尼诱导痛觉过敏机制提供新的理论依据。 展开更多
关键词 瑞芬太尼 痛觉过敏 pkcε Μ阿片受体
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温运清利法对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织DAG-PKCε信号通路的作用研究 被引量:8
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作者 毛堂友 高康丽 +7 位作者 赵唯含 王允亮 郭一 谢添弘 陈晨 谭祥 韩亚飞 李军祥 《环球中医药》 CAS 2016年第8期908-913,共6页
目的探讨温运清利法对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠肝组织甘油二酯(diacylglycerol,DAG)/蛋白激酶Cε(protein kinase Cε,PKCε)信号通路的影响。方法高脂饮食饲养SD大鼠8周制备NASH模型,造模成功后,... 目的探讨温运清利法对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠肝组织甘油二酯(diacylglycerol,DAG)/蛋白激酶Cε(protein kinase Cε,PKCε)信号通路的影响。方法高脂饮食饲养SD大鼠8周制备NASH模型,造模成功后,将大鼠随机分为模型组、苓桂术甘汤组、茵陈蒿汤组、合方组(苓桂术等与茵陈蒿汤)、罗格列酮组,共5组,每组10只;另有空白组10只。药物治疗4周后,运用自动生化分析仪检测血清生化指标,HE染色、油红O染色观察肝组织病理,ELISA法检测肝组织DAG,RT-PCR检测PKCεmRNA、TNF-αmRNA,Western blot检测PKCε和TNF-α蛋白的表达。结果 (1)各给药组大鼠一般状况、肝组织脂肪变性和炎症反应程度、血清生化指标等均较模型组有一定的减轻;(2)苓桂术甘汤、合方组、罗格列酮组大鼠肝组织DAG较模型组明显降低(P<0.05,P<0.01);(3)各治疗组大鼠肝组织PKCεmRNA和蛋白含量均显著降低(P<0.05,P<0.01),茵陈蒿汤组、合方组及罗格列酮组大鼠肝组织TNF-αmRNA和蛋白含量显著降低(P<0.05)。结论温运清利法可能是通过下调肝组织DAG,抑制PKCε表达,降低TNF-α水平,从而对肝内脂质代谢、胰岛素抵抗、炎症损伤起到了调节作用,DAG/PKCε通路有可能成为治疗NASH的新靶点。 展开更多
关键词 温运清利法 非酒精性脂肪性肝炎 DAG-pkcε信号通路 作用研究
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外周神经元PKCε-TRPV1通路在痛转化中的作用及中间信号分子 被引量:2
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作者 王思思 孙海榉 +2 位作者 杜俊英 方剑乔 房军帆 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期528-532,共5页
痛转化指疼痛由急性向慢性转化的过程。干预痛转化的发生,有助于缓解慢性痛的发生与发展。蛋白激酶Cε(protein kinase C epsilon,PKCε)是重要的细胞内信号传导分子,参与多种生理病理状态过程。瞬时受体亚型1(transient receptor poten... 痛转化指疼痛由急性向慢性转化的过程。干预痛转化的发生,有助于缓解慢性痛的发生与发展。蛋白激酶Cε(protein kinase C epsilon,PKCε)是重要的细胞内信号传导分子,参与多种生理病理状态过程。瞬时受体亚型1(transient receptor potential Vanilloid 1,TRPV1)是其主要下游信号分子之一,也被证实参与各类慢性疼痛的形成与维持。最新研究表明,外周神经元PKCε-TRPV1信号通路是痛转化产生的关键环节。本文将进一步明确PKCε-TRPV1信号通路及可能的中间信号分子在痛转化中的作用,为慢性疼痛的治疗提供新的思路。 展开更多
关键词 痛转化 pkcε TRPV1 信号转导通路 中间信号分子
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益气健脾抗癌法对结肠癌组织PKC及亚型PKCδ、PKCε蛋白表达的影响 被引量:15
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作者 唐广义 韩涛 +2 位作者 殷东风 李秋华 刘兆喆 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期366-370,共5页
目的:探索益气健脾抗癌法对大肠癌组织蛋白激酶C(protein kinase C;PKC)及亚型PKCδ、PKCε表达的影响及其作用机制。方法:建立人大肠癌细胞HT-29裸鼠皮下移植瘤模型后,随机分为模型组、益气健脾组和益气健脾抗癌组。益气健脾中药由太... 目的:探索益气健脾抗癌法对大肠癌组织蛋白激酶C(protein kinase C;PKC)及亚型PKCδ、PKCε表达的影响及其作用机制。方法:建立人大肠癌细胞HT-29裸鼠皮下移植瘤模型后,随机分为模型组、益气健脾组和益气健脾抗癌组。益气健脾中药由太子参、茯苓、白术、甘草、半夏、陈皮等组成,益气健脾抗癌中药由益气健脾中药加山慈菇、土茯苓、浙贝母和白花蛇舌草等组成。给药14 d后,应用Real-time PCR和Western blotting法检测肿瘤组织PKC及其亚型PKCδ、PKCε的mRNA及蛋白的表达。结果:益气健脾抗癌法治疗后,移植瘤组织中:(1)PKC mRNA和PKC蛋白表达低于模型组和益气健脾组[(0.412±0.040)vs(0.596±0.021)、(0.540±0.015)和(0.261±0.019)vs(0.665±0.016)、(0.498±0.018),P<0.05或P<0.01];(2)PKCδ mRNA和PKCδ蛋白表达高于模型组和益气健脾组[(0.410±0.030)vs(0.233±0.025)、(0.261±0.034)和(0.516±0.029)vs(0.301±0.041)、(0.361±0.044),均P<0.01];(3)PKCε mRNA和PKCε蛋白表达低于模型组和益气健脾组[(0.215±0.021)vs(0.362±0.021)、(0.314±0.031)和(0.224±0.029)vs(0.368±0.044)、(0.359±0.029),均P<0.01)。结论:益气健脾抗癌法对大肠癌组织PKC、PKCε的抑制及PKCδ的促进作用,可能是益气健脾抗癌法治疗大肠癌的作用机制之一。 展开更多
关键词 结肠癌 益气健脾 蛋白激酶C 蛋白激酶Cδ 蛋白激酶CΕ
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灯盏花乙素对人心脏微血管内皮细胞中PKCε表达的调控作用 被引量:2
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作者 陈晨 王友兰 +5 位作者 刘伟军 饶嫱 杜庭彦 杜晓华 杨为民 朱秀芬 《昆明医科大学学报》 CAS 2018年第4期11-15,共5页
目的探讨灯盏花乙素(scutellarin,SCU)对正常及缺氧再给氧(hypoxia reoxygenation,HR)处理时人心脏微血管内皮细胞(human cardiac microvascular endothelial cells,HCMECs)中PKCε蛋白及m RNA表达的调控作用.方法以正常与缺氧再给氧2... 目的探讨灯盏花乙素(scutellarin,SCU)对正常及缺氧再给氧(hypoxia reoxygenation,HR)处理时人心脏微血管内皮细胞(human cardiac microvascular endothelial cells,HCMECs)中PKCε蛋白及m RNA表达的调控作用.方法以正常与缺氧再给氧2种方式培养HCMECs,实验分组为:在正常培养实验中分为正常对照(Control)组、SCU(0.1μM,1μM,10μM)3种剂量组;HR培养实验中分为Control组、Model(HR)组、HR处理的SCU(0.1μM,1μM,10μM)3种剂量组.分别以Western blot与RT-PCR方法检测HCMECs中p-PKCε与PKCε蛋白与m RNA表达的变化.结果在正常培养的HCMECs中,SCU(0.1μM,1μM,10μM)剂量组均可显著上调PKCε的蛋白及m RNA的表达(P<0.05),对p-PKCε也有上调趋势;在HR培养的细胞实验中,Model组PKCε有下调趋势,而SCU 10μM组可显著上调PKCε的蛋白及m RNA的表达(P<0.05),并且SCU 10μM亦可显著上调p-PKCε(P<0.05).结论 SCU对正常及HR处理时HCMECs中PKCε蛋白及m RNA的表达有明显的上调作用. 展开更多
关键词 灯盏花乙素 人心脏微血管内皮细胞 缺氧再给氧 pkcε
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PKCε在脑卒中的作用
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作者 李楚彦 董瓅瑾 +1 位作者 李玲 张赛 《武警医学院学报》 CAS 2009年第3期263-265,共3页
关键词 pkcε 脑卒中 缺血预适应
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Expressions of PKCα, PKCε and PKCδ in cervical cancer and their relationships with chemosensitivity
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作者 Qing-Zhi Guo Li Li +3 位作者 Qi-Mei Bo Li Chen Li Sun Hong-Tang Shi 《Journal of Hainan Medical University》 2019年第2期43-48,共6页
Objective:To investigate the expressions of PKC , PKC and PKC in cervical cancer and their relationships with chemosensitivity.Methods: A total of 38 cases of patients with cervical cancer diagnosed in our hospital fr... Objective:To investigate the expressions of PKC , PKC and PKC in cervical cancer and their relationships with chemosensitivity.Methods: A total of 38 cases of patients with cervical cancer diagnosed in our hospital from November 2015 to November 2016 were selected, and the vascularization index (VI), flow index (FI) and vascular flow index (VFI) were measured by three-dimensional color Doppler ultrasound, then the expression levels of PKC , PKC and PKC mRNAs were detected by RT-PCR before and after chemotherapy. Western blot was used to detect the expression of PKC , PKC and PKC proteins in tissues, Spearman correlation analysis was performed to investigate the relationships between PKC , PKC and PKC mRNAs with chemosensitivity, Logisitic regression analysis was used to analyze the related factors affecting the sensitivity of chemotherapy.Results: After chemotherapy, the expression levels of PKC and PKC mRNAs and proteins were significantly decreased, the expressions of PKC mRNA and protein were significantly increased;the expression levels of PKC and PKC mRNAs and proteins in the effective group after chemotherapy were significantly lower than those before chemotherapy, the expressions of PKC mRNA and protein were significantly higher than those before chemotherapy;Spearman analysis showed that the expression levels of PKC and PKC mRNAs in cervical cancer tissues before chemotherapy were positively correlated with VI, FI and the percentage of residual tumor volume after chemotherapy, PKC was negatively correlated with VI, FI and residual tumor volume percentage after chemotherapy, and was not significantly correlated with VFI and tumor size before chemotherapy;Logistic regression analysis showed that PKC , PKC , PKC mRNAs, VI and FI were independent risk factors for chemosensitivity, lymph node metastasis and tumor volume were independent of chemosensitivity.Conclusion: PKC and PKC are highly expressed in cervical cancer tissues, and PKC is low expressed in cervical cancer tissues, they are closely related to chemosensitivity. 展开更多
关键词 Cervical cancer pkcΑ pkcε pkcΔ CHEMOSENSITIVITY
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