文摘目的运用全外显子测序(whole exome sequencing,WES)技术检测我国视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)患者的关键突变基因,并通过生物学功能研究探索该基因在Rb进展中发挥的功能作用。方法对我国82例RB1基因突变阴性(RB1-/-)的Rb患者血液样本行WES筛选罕见突变基因;进一步检测基因罕见突变位点所引起的编码蛋白表达改变情况;构建敲低和过表达上述基因的体外、体内模型,观察其对Rb细胞增殖、迁移功能和肿瘤大小的影响。结果运用WES和罕见突变富集分析[SNP-set(sequence)kernel association test,SKAT],我们在RB1-/-的Rb患者中发现PLK3基因的罕见突变(Y318H),Y318H是一种致病性突变。转染突变质粒(Y318H)的Rb细胞株PLK3蛋白表达量减低。敲低PLK3促进Rb细胞的增殖和迁移,而过表达PLK3抑制Rb细胞的增殖和迁移。同时,PLK3表达改变可调控小鼠Rb皮下瘤的生长。结论PLK3基因罕见突变(Y318H)是我国患者Rb进展的重要致病因素,Y318H突变可介导PLK3蛋白表达减低,继而促进Rb细胞增殖和迁移,最终导致Rb的生长。上述研究表明PLK3基因突变可作为Rb早期筛查的分子标志物,为疾病的诊疗提供新靶点。
