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PRRSV BZ4-19株的分离鉴定及其全基因序列分析
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作者 李思琪 刘莹 +5 位作者 刘濮毓 任晓祥 李岩岩 王文钊 左玉柱 范京惠 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期200-207,共8页
为了解山东滨州某猪场PRRSV的流行及变异情况,将该猪场采集的疑似PRRSV阳性病料进行RT-PCR检测,检测出的阳性样品用Marc-145细胞进行分离,设计了9对扩增引物用于分离株(BZ4-19)的全基因扩增,将扩增出的全基因序列进行核苷酸及其推导的... 为了解山东滨州某猪场PRRSV的流行及变异情况,将该猪场采集的疑似PRRSV阳性病料进行RT-PCR检测,检测出的阳性样品用Marc-145细胞进行分离,设计了9对扩增引物用于分离株(BZ4-19)的全基因扩增,将扩增出的全基因序列进行核苷酸及其推导的氨基酸序列分析。最终成功在Marc-145细胞上分离到1株RespPRRS MLV-like毒株,全基因扩增结果显示其全长为15412 bp(不含polyA尾);核苷酸同源性分析说明,其与美洲经典株VR2332及RespPRRS MLV(疫苗株)同源性最高,分别为99.4%和99.8%。将BZ4-19分离株与VR2332、RespPRRS MLV的氨基酸序列进行比较分析揭示,VR2332与RespPRRS MLV共有30处氨基酸差异,在这30处差异中,分离株与VR2332有7处一致,与RespPRRS MLV有23处一致。在鉴别VR2332与RespPRRS MLV的9处可能与毒力相关的氨基酸位点时,分离株有7处与VR2332相同,由此推测本研究分离到的毒株属于疫苗株RespPRRS MLV返强毒株,我国具有上述分子变化的PRRSV的流行应被关注。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(prrsv) 经典美洲株 RespPRRS MLV株 病毒分离鉴定 流行病学
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2021—2023年湖南省无害化处理场CSFV、PRV、PRRSV污染情况调查
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作者 唐亚新 胡巧云 +8 位作者 唐小明 王卫国 彭志 谢怡灵 张坤 王昌建 鲁杏华 范仲鑫 黎满香 《中国动物检疫》 CAS 2024年第3期5-9,47,共6页
为了解湖南省2021—2023年无害化处理场猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)污染情况,采用RT-qPCR方法对采集的1825份淋巴结、脾脏、耳尖等组织样品进行CSFV、PRV、PRRSV核酸检测,并对2022年衡南县PRRSV... 为了解湖南省2021—2023年无害化处理场猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)污染情况,采用RT-qPCR方法对采集的1825份淋巴结、脾脏、耳尖等组织样品进行CSFV、PRV、PRRSV核酸检测,并对2022年衡南县PRRSV阳性样品进行分型检测及Nsp2基因测序。结果显示:CSFV、PRV、PRRSV的阳性检出率分别为3.01%、1.81%、30.14%;双重污染率为2.52%,以PRRSV与其他2种病原双重污染为主,三重污染率较低,为0.05%。2022年衡南县无害化处理场的PRRSV阳性检出率为24.12%,以春、冬季阳性率较高;北美型(NA-PRRSV)、高致病型(HP-PRRSV)、类NADC30毒株(NADC30-like)阳性检出率分别为98.39%、20.97%、43.55%;经Nsp2基因测序,1条序列存在“1+29”个不连续氨基酸缺失,为HP-PRRSV毒株,17条序列存在“111+1+19”个不连续氨基酸缺失,为类NADC30毒株。结果表明:2021—2023年,湖南省无害化处理场CSFV、PRV污染率维持在较低水平,PRRSV污染率较高,呈逐年上升趋势,其中类NADC30毒株为优势流行毒株,建议持续做好猪瘟及猪伪狂犬病的免疫接种及效果评估工作,加强PRRSV的遗传变异监测及养殖场的饲养管理和生物安全管理,以保障猪群生产安全。 展开更多
关键词 无害化处理场 prrsv PRV CSFV 混合污染
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中国新发L1A PRRSV变异株的出现与流行状况分析
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作者 许浒 龚帮俊 +17 位作者 李超 孙琪 李宛生 赵静 郭镇洋 李金昊 张思钰 相丽润 彭金美 王倩 周国辉 冷超粮 汤艳东 赵鸿远 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期779-786,共8页
2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV,该类病毒属于L1A(Sublineage1.5)亚型。近年来,新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异,已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征,本研究从2021年~2023年37份新发类N... 2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV,该类病毒属于L1A(Sublineage1.5)亚型。近年来,新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异,已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征,本研究从2021年~2023年37份新发类NADC34 PRRSV阳性病料样品中选择4份样品经PCR分段扩增PRRSV全基因组序列并测序,利用SeqMan软件拼接,获得了4株完整的PRRSV全基因组序列,相应的病毒分别命名为TZJ2165、TZJ2451、TZJ2756、WK621株。下载GenBank中所有中国类NADC34 PRRSV和美国L1C变异株的ORF5基因及NSP2基因序列,利用MEGA7.0构建上述PRRSV ORF5基因序列的遗传进化树,分析其遗传变异情况。利用Megalign软件分析各分支内ORF5基因序列的相似性,以及新发类NADC34 PRRSV NSP2氨基酸序列,分析其是否存在一致的氨基酸缺失特征。根据PRRSV ORF5基因的限制性片段多态性(RFLP)分类方法,对新发类NADC34 PRRSV的ORF5基因序列分类。利用Simplot软件分析新发类NADC34 PRRSV和L1C变异株全基因组序列中的重组事件。基于ORF5基因进化树结果显示,这4株新发类NADC34 PRRSV与之前分离的TZJ2007、BJ-20-06等12株PRRSV均属于L1A亚型,与早期类NADC34 PRRSV相比,这些病毒株形成了一个独立分支,将其命名为L1A变异株,且其ORF5基因序列的相似性≥93%。NSP2氨基酸序列比对分析发现,L1A变异株具有一致的131个氨基酸不连续缺失的分子特征。ORF5基因的RFLP模式分析结果显示,L1A变异株RFLP模式分为1-4-2、1-4-4、1-5-4、1-7-4和1-6-4,模式并不一致。重组分析结果显示,L1A变异株存在相似的重组模式,它们均是以NADC30株(类NADC30 PRRSV)为主要亲本,JXA1株(类HP-PRRSV)提供部分非结构蛋白基因区域、IA/2014/NADC34株(类NADC34 PRRSV)提供ORF2a~ORF6区域的重组病毒。目前L1A变异株已经在黑龙江、内蒙古、辽宁、北京、广西、江苏、四川、福建、山东、广东和山西等11个省份检出。通过与美国L1C变异株比较,发现二者流行特征有诸多相似性,鉴于L1C变异株对美国养猪业造成严重影响,加大对L1A变异株的监测力度至关重要。本研究聚焦新发类NADC34 PRRSV的流行及变化特征,对了解我国PRRSV流行现状以及对PRRS的防控均具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 L1A prrsv变异株 类NADC30 prrsv 类NADC34 prrsv HP-prrsv 重组 出现与流行
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2020—2022年闽粤赣地区PRRSV ORF5基因的分子流行病学调查
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作者 吕紫欣 张鑫杰 +7 位作者 薛少华 金艳冬 陈林熙 黄喜荣 罗国清 蒙宁 陈瑶 戴爱玲 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期235-242,共8页
【目的】了解闽粤赣地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的分子流行动态,为该疫病的科学防控提供参考。【方法】采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对2020—2022年闽粤赣地区1475份临床猪组织和血清样品进行检测,对PRRSV阳性样品进行ORF5... 【目的】了解闽粤赣地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的分子流行动态,为该疫病的科学防控提供参考。【方法】采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对2020—2022年闽粤赣地区1475份临床猪组织和血清样品进行检测,对PRRSV阳性样品进行ORF5基因扩增和测序,并对ORF5基因的序列进行系统发育分析。【结果】2020、2021、2022年闽粤赣地区发病猪PRRSV的阳性率分别为24.23%(95/392)、27.69%(162/585)、18.07%(90/498),2020—2022年福建、广东、江西地区PRRSV的阳性率分别为23.20%(272/1172)、23.96%(52/217)、26.44%(23/87)。挑选来自不同猪场的86份阳性样品进行PCR扩增,成功获得62株PRRSV ORF5基因序列,并下载GenBank已发布的18株2020—2022年闽粤赣地区PRRSV的ORF5基因序列,与127株PRRSV国内外参考株ORF5基因序列构建系统发育树。系统发育树显示,80株闽粤赣PRRSV分离株均属美洲株。其中,40株分布在谱系1(NADC30-like株、NADC34-like株)上,12株分布在谱系3(GM2-like株、QYYZ-like株)上,7株分布在谱系5(VR2332-like株、BJ-4-like株)上,21株分布在谱系8(JXA1-like株、CH-1a-like株)上。对核苷酸和氨基酸序列的同源性进行分析,结果显示,80株PRRSV ORF5基因编码的核苷酸序列同源性为81.2%~100%,氨基酸序列同源性为78.6%~100%。33株PRRSV ORF5基因编码的GP5蛋白氨基酸序列在中和表位区第39氨基酸残基处存在变异。【结论】2020—2022年闽粤赣地区PRRSV流行株以谱系1为主(50.00%),并存在谱系1、3、5、8的混合流行。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv) ORF5基因 遗传变异
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2013—2021年云南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行与混合感染状况调查
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作者 邓珺文 毕峻龙 +4 位作者 李永能 程美玲 沈学文 杨贵树 尹革芬 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期95-100,共6页
【目的】调查云南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行规律和混合感染情况。【方法】采用分子生物学方法对2013—2021年间的3112份血液样品进行PRRSV核酸检测,并进一步分析其... 【目的】调查云南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行规律和混合感染情况。【方法】采用分子生物学方法对2013—2021年间的3112份血液样品进行PRRSV核酸检测,并进一步分析其流行和混合感染情况。【结果】检测样品中,有801份样品为PPRSV阳性,阳性率为25.74%,二重、三重和四重混合感染率分别为41.20%、12.48%和1.87%;不同生长阶段猪群的PRRSV感染程度差异较大,生长育肥猪感染最严重(33.24%);相对于育肥场和散养户,种猪场的感染程度较轻,三者的感染率分别为27.94%、28.94%和14.29%。对不同毒株类型分析发现:高致病性毒株和经典毒株仍是主要的流行毒株,分别占毒株数的58.49%和22.64%,但占比呈逐年下降趋势。于2019年和2021年在云南省内分别发现了类NADC30毒株和类NADC34毒株,分别占毒株数的15.09%和3.77%,其感染率呈逐渐上升趋势。【结论】猪繁殖与呼吸综合征仍是影响云南省生猪产业健康发展最重要的疫病之一,表现形式以和其他疾病混合感染为主。随着新毒株的发现,云南省PRRSV基因更加多样,防控形势愈加复杂。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv) 流行情况 混合感染 新发毒株
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脂质代谢和糖代谢在PRRSV感染宿主细胞中作用研究进展
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作者 罗琴 刘宝玲 +6 位作者 乔常宏 陈翔宇 刘丁语 王晓虎 王刚 刘昊 蔡汝健 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1686-1695,共10页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染可引起母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道疾病及公猪精液质量下降,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV不能自主复制,其生命周期的各个阶段均依赖... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染可引起母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道疾病及公猪精液质量下降,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV不能自主复制,其生命周期的各个阶段均依赖于宿主的代谢系统。宿主细胞也可调节其代谢过程,以防止PRRSV复制和维持其正常生理功能。脂质代谢和糖代谢在PRRSV感染中均扮演了重要角色,PRRSV作为一种囊膜病毒对脂质代谢系统的依赖性较其他代谢系统更强。脂质参与了PRRSV生命周期的各个阶段,包括吸附、进入、复制、组装和释放,此外还与细胞炎症、免疫和凋亡有关。糖代谢也可干扰PRRSV的生命活动,从而促进或抑制PRRSV复制。文章综述了脂质代谢中脂肪酸、胆固醇、磷脂、脂滴和脂筏以及糖代谢中糖酵解和三羧酸循环在PRRSV感染宿主细胞中的作用,以期为阐明PRRSV的致病机制以及疫苗和抗PRRSV药物的研发提供基本理论依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv) 宿主细胞 脂质代谢 糖代谢
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Pig Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV) Does Not Attach to Boar Sperm;It Affects Only the Velocity Pattern and the Mobility Pattern
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作者 Néstor Méndez Palacios Netzi Naidí Mendez Palacios +3 位作者 Felicitas Vázquez Flores José Alfredo Galicia Domínguez Edgar Guadalupe Beltrán Rosas Maximino Méndez Mendoza 《Journal of Biosciences and Medicines》 2024年第4期216-228,共13页
The purpose of the study was to evaluate the sperm viability of semen infected with PRRSV viral particles, observing the effect of the Virus on the motility of boar sperm. The work was carried out at the FMVZ-BUAP Gen... The purpose of the study was to evaluate the sperm viability of semen infected with PRRSV viral particles, observing the effect of the Virus on the motility of boar sperm. The work was carried out at the FMVZ-BUAP Genetics and Reproduction Laboratory. 5 stallions were used. Each sample contained 1 × 10<sup>6</sup> sperm, the PRRS virus strain was ATCC-VR-2332 (0, 10<sup>2</sup>, 10<sup>4</sup> and 10<sup>6</sup> copies of RNA/mL in triplicate), it was observed daily at the CASA;Hamilton Thorne<sup>®</sup>. Cells with MT (P < 0.05) on days 1, 3, 5, 7 and 10 of evaluation with 201 ± 7.3, 167 ± 10.1, 165 ± 14.6, 134 ± 8.2 and 120 ± 8.8, respectively. The % MP between control and virus concentrations (P ≥ 0.05). The LCV on day 1 and 7 PI at 10X<sup>2</sup> and 10X<sup>6</sup> (P < 0.05) vs control. In the Correlation Matrix, where it is observed that there is a correlation between VSL and VAP, VSL and VCL, VCL and ALH, VAP with ALH. There is a correlation of VSL and ALH, STR and ALH. In this study there were (P ≤ 0.01) in the VCL, in the concentrations (10<sup>2</sup>) 162.81 ± 10.65 and (10<sup>6</sup>) 177.12 ± 5.77 vs 193.04 ± 4.62 of control. This indicates that altering these parameters would be related to fertility and the PRRS virus affects the LCV. Regarding the VSL, it was observed that the sperm infected with viruses 10<sup>2</sup>, 10<sup>4</sup> and 10<sup>6</sup> of 48.00 ± 3.38, 49.88 ± 1.83 and 50.55 ± 2.24 Vs. 56.66 ± 1.68 of control respectively, the control would have greater possibilities of fertilizing the oocyte. In this study, it was found (P ≤ 0.01) in the VAP with 102 of 77.26 ± 5.16, 10<sup>4</sup> with 83.35 ± 2.41 and 10<sup>6</sup> with 81.29 ± 3.14 vs the control with 90.56 ± 2.07. Regarding the ALH there is (P < 0.05) a 10<sup>4</sup> with 8.70 ± .26 and 10<sup>6</sup> with 9.64 ± 0.23 vs control 8.50 ± 0.27. The presence of different concentrations of PRRSV in boar semen induces changes in different types of sperm motility. Infection of ejaculates with the PRRS virus affects sperm motility on days 1, 3, 5, 7, and 10 post-infections. 展开更多
关键词 prrsv Boar Sperms Velocity Pattern and Mobility Pattern
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规模化猪场PRRSV不同感染状态下防控实践探讨
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作者 张欣 崔敏 +3 位作者 杨雷 赵立伟 王云龙 尉成鑫 《国外畜牧学(猪与禽)》 2024年第1期28-31,共4页
本文针对猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)不同感染状态,通过不同防控措施(接种疫苗、药物保健和生产组织优化),探讨了猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respirat... 本文针对猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)不同感染状态,通过不同防控措施(接种疫苗、药物保健和生产组织优化),探讨了猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)的防控经验。试验结果:PRRSV阳性不稳定猪群,接种PRRS灭活疫苗连续2次,1个月可实现猪群抗原阴性,阴性维持时间大约100d;PRRSV阴性猪群采用PRRS弱毒活疫苗半数低剂量免疫,排毒时间约28 d,免疫猪群100%转阳,而未免疫猪转阳率为30%~40%。 展开更多
关键词 prrsv 疫苗 半数低剂量
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检测PRRSV及鉴别HP-PRRSV毒株的二重PCR与二重TaqMan荧光定量PCR方法
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作者 陈旭 汤德元 +6 位作者 曾智勇 王彬 袁盛林 廖正波 何松 周飘 毛茵茗 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期316-324,共9页
为了实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)早期检测及快速鉴别高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)变异株,利用HP-PRRSV Nsp2蛋白第481位和532~560位氨基酸缺失的特性设计2对引物,优化反应条件建立二重PCR检测方法,同时针对PRRSV M... 为了实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)早期检测及快速鉴别高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)变异株,利用HP-PRRSV Nsp2蛋白第481位和532~560位氨基酸缺失的特性设计2对引物,优化反应条件建立二重PCR检测方法,同时针对PRRSV M基因和HP-PRRSV Nsp2基因设计特异性引物和探针,优化反应条件建立二重TaqMan荧光定量PCR方法,并评估这2种方法的敏感性、特异性、重复性。敏感性试验结果显示:二重PCR方法的检测下限分别为0.058 ng/μL(PRRSV)和4.7 ng/μL(HP-PRRSV);二重TaqMan荧光PCR方法的检测下限分别为10 copies/μL(PRRSV)和100 copies/μL(HP-PRRSV)。这2种方法与其他猪病病原均不发生非特异性反应,重复性试验结果良好。经131份临床样品检测,可得到PRRSV的阳性率约12.2%(16/131)、HP-PRRSV的阳性率约17.6%(23/131)、二者的混合感染率约8.4%(11/131)。证实,本研究成功建立了二重PCR和二重TaqMan荧光定量PCR检测方法,可为临床上猪繁殖与呼吸综合征的防控提供技术支持。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 二重PCR 二重TaqMan荧光定量PCR 鉴别检测
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我国PRRSV流行情况及防控策略 被引量:1
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作者 张留君 范红结 +4 位作者 贺绍君 邹前明 赵磊 冯星 刘德义 《畜牧兽医科技信息》 2023年第1期25-28,共4页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)已在中国流行近30年,当前仍是严重危害我国养猪业的头号疫病。目前,美洲型NADC30-样毒株已成为国内的优势流行毒株,并与经典毒株、高致病性毒株、最新发现的NADC34-样毒株及各种变异和重组毒株共存。当前广泛... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)已在中国流行近30年,当前仍是严重危害我国养猪业的头号疫病。目前,美洲型NADC30-样毒株已成为国内的优势流行毒株,并与经典毒株、高致病性毒株、最新发现的NADC34-样毒株及各种变异和重组毒株共存。当前广泛使用的PRRS商品疫苗不能提供令人满意的防控效果。为了有效防控PRRS,在加强饲养管理和强化生物安全控制的同时,新型疫苗研制或新型抗病毒药物开发也迫在眉睫。总之,本文系统阐述了我国的PRRS流行情况及防控策略,以期为控制PRRS提供指导。 展开更多
关键词 prrsv NADC30 NADC34
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PAMs免疫粘附受体CR 1-like对PRRSV感染的影响
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作者 张峥 孙雨晨 +5 位作者 范阔海 孙娜 孙盼盼 孙耀贵 李宏全 尹伟 《山西农业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2023年第2期100-110,共11页
[目的]本试验旨在探讨猪肺泡巨噬细胞(Porcine alveolar macrophages,PAMs)表面天然免疫粘附受体—猪I型补体受体(Porcine complement receptor 1⁃like,CR1⁃like)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respi⁃ratory syndr... [目的]本试验旨在探讨猪肺泡巨噬细胞(Porcine alveolar macrophages,PAMs)表面天然免疫粘附受体—猪I型补体受体(Porcine complement receptor 1⁃like,CR1⁃like)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respi⁃ratory syndrome virus,PRRSV)感染PAMs的影响,为阐述CR1⁃like在PRRSV免疫应答中的生物学功能提供理论数据。[方法]采取PRRSV减毒活疫苗免疫接种PRRSV抗体为阴性的长白仔猪20~28 d后,提取分离抗病毒血清并检测抗PRRSV血清中和效价;将抗PRRSV血清进行不同倍比稀释,制备各类PRRSV抗原抗体复合物并接种于PAMs上,建立抗体依赖性增强(Antibody⁃dependent enhancement,ADE)模型,qRT⁃PCR技术检测各时间点PRRSV N基因拷贝数变化;PRRSV感染PAMs 9 h后,将抗血清和猪新鲜血清共处理细胞,运用ELISA测定不同时间点细胞上清液中猪新鲜血清C3b、C4b、CH50总活性;将PAMs分为试验组(PRRSV感染PAMs 9 h后同时加入抗血清和猪新鲜血清)和6个对照组,采用qRT⁃PCR技术检测各组不同时间点胞内和上清中PRRSV N基因的拷贝数,确定猪新鲜血清对PRRSV感染PAMs的作用;采用免疫阻断技术将PAMs分为FcR McAb阻断组、CR1⁃like McAb阻断组、共阻断组及3个对照组,qRT⁃PCR技术检测PRRSV N基因拷贝数变化,确定免疫粘附受体CR1⁃like对PRRSV感染PAMs的影响。[结果]抗PRRSV血清在PAMs上的中和抗体效价为1∶5.37;qRT⁃PCR结果成功筛选出1:20稀释度的抗PRRSV血清对病毒的复制具有促进作用;ELISA检测猪新鲜血清C3b、C4b和CH50浓度随PRRSV感染时间延长呈降低趋势;qRT⁃PCR结果显示,猪新鲜血清可以与1∶20稀释度抗PRRSV血清协同促进PRRSV的复制;qRT⁃PCR、免疫阻断技术得出1∶20稀释度抗PRRSV血清、猪新鲜血清协同促进PRRSV感染增强不只依赖于FcR,还与CR1⁃like有关。[结论]体外条件下,PAMs表面的CR1⁃like是介导PRRSV感染PAMs过程中产生ADE效应的分子之一,可与FcR协同促进PRRSV感染PAMs。 展开更多
关键词 猪CR1⁃like 猪新鲜血清 免疫粘附 prrsv PAMs
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猪PCSK9单克隆抗体的制备及其在PRRSV感染过程中的应用
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作者 张玉娇 刘长龙 +7 位作者 姜一峰 虞凌雪 周艳君 赵款 李丽薇 曹云雷 童光志 高飞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第1期106-112,共7页
实验室前期shot-gun质谱结果表明PCSK9在PAM空细胞和PRRSV感染组PAM细胞间存在差异表达。为了深入研究PCSK9与PRRSV间的相互作用机制,本实验在体外合成猪PCSK9基因并克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28aPCSK9。利用该... 实验室前期shot-gun质谱结果表明PCSK9在PAM空细胞和PRRSV感染组PAM细胞间存在差异表达。为了深入研究PCSK9与PRRSV间的相互作用机制,本实验在体外合成猪PCSK9基因并克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28aPCSK9。利用该原核表达系统获得了高效表达的重组蛋白PCSK9(约75kDa),进一步通过镍柱亲和层析技术纯化重组蛋白PCSK9作为免疫原,皮下免疫5-6周龄的BALB/c小鼠(100ng/只),获得了1株产生PCSK9特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2A2B12)。应用此单克隆抗体对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染PAM细胞后的内源性PCSK9变化情况进行了检测。Western blot和IFA结果表明本实验制备的PCSK9单克隆抗体具有良好的特异性,抗体针对的表位位于PCSK9的C端结构域(463-705 aa);此外,Western blot结果表明PRRSV感染可抑制PCSK9蛋白的表达,过表达PCSK9对PRRSV的复制有明显的抑制作用。本研究中研制的抗体可为今后猪源PCSK9与PRRSV的相互作用研究提供工具支持。 展开更多
关键词 PCSK9 单克隆抗体 prrsv
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CD163单等位基因表达的iPAMs细胞系的构建及其介导PRRSV感染的特征分析
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作者 王慧 冯保亮 +4 位作者 向光明 黄雷 刘志国 李奎 牟玉莲 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期2617-2628,共12页
【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得CD 163(cluster of differentiation 163)单等位基因表达的永生化猪肺泡巨噬细胞系(immortalized porcine alveolar macrophages,iPAMs),并探究其介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine r... 【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得CD 163(cluster of differentiation 163)单等位基因表达的永生化猪肺泡巨噬细胞系(immortalized porcine alveolar macrophages,iPAMs),并探究其介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染的特征,为深入研究CD 163基因在PRRSV感染中的作用机制奠定基础。【方法】在猪CD 163基因外显子1区域设计8条向导RNA(single guide RNA,sgRNA),并将其连接到pX458载体中,通过T7E1酶切试验检测不同sgRNA载体的活性;将活性较高的3条sgRNAs表达载体电转染到iPAMs中,通过流式细胞术分选单克隆细胞,对获得的单克隆细胞进行基因型鉴定、蛋白表达检测、脱靶分析以及PRRSV感染分析。【结果】在设计的8条sgRNAs中有3条基因编辑效率在28%以上。基因型鉴定结果表明,50株片段敲除的单克隆细胞中有4株符合预期的CD 163单等位基因表达的iPAMs,效率为8%。蛋白表达检测和脱靶分析结果显示,CD 163单等位基因表达的iPAMs中CD163蛋白表达量显著下降(P<0.05),且在预测位置未发生脱靶现象。PRRSV感染分析显示,CD 163单等位基因表达的iPAMs可以正常感染PRRSV,病毒拷贝数和PRRSV-N蛋白表达量与野生型细胞无显著差异(P>0.05)。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9编辑系统构建了可以正常感染PPRSV的CD 163单等位基因表达的iPAMs,为阐明CD163在猪繁殖与呼吸综合征传染病中所起的作用以及培育抗病猪新品种奠定了基础。 展开更多
关键词 CD163 猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv) CRISPR/Cas9 永生化猪肺泡巨噬细胞系(iPAMs)
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HP-PRRSV对4种消毒剂的敏感性试验
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作者 杨慧莹 刘稳 +2 位作者 张丽杰 高云航 徐凤宇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第8期35-40,共6页
为了研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)CHC001毒株对不同消毒剂的敏感性,本试验选取浓戊二醛、5%聚维酮碘、复方新洁尔灭和过硫酸氢钾复合粉4种消毒剂,依照2002年版《消毒技术规范》,分别采用悬液滴定法、中和剂鉴定试验和... 为了研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)CHC001毒株对不同消毒剂的敏感性,本试验选取浓戊二醛、5%聚维酮碘、复方新洁尔灭和过硫酸氢钾复合粉4种消毒剂,依照2002年版《消毒技术规范》,分别采用悬液滴定法、中和剂鉴定试验和细胞培养法,在不同浓度和温度下检测消毒剂作用1、3、10和20 min后CHC001的滴度,以及CHC001对消毒剂的敏感性。结果显示,4种消毒剂按照使用说明要求配制浓度,在4℃和26℃环境下与病毒作用10 min后,CHC001均可被彻底灭活。结果表明,HP-PRRSV CHC001毒株对所选消毒剂均有较高敏感性。 展开更多
关键词 消毒剂 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-prrsv) 敏感性 灭活效果
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广东历年PRRSV流行毒株与疫苗株的重组分析
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作者 康溥 陈强 +4 位作者 林牧 王晓虎 王刚 吕宗吉 陈晶 《广东畜牧兽医科技》 2023年第1期57-62,共6页
从GenBank上可查的全部424株猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)全基因序列中筛选出了42株来源于广东的PRRSV毒株全基因组序列与6株PRRSV疫苗株全基因序列,用RDP4(Recombination detec... 从GenBank上可查的全部424株猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)全基因序列中筛选出了42株来源于广东的PRRSV毒株全基因组序列与6株PRRSV疫苗株全基因序列,用RDP4(Recombination detecting program 4,RDP4)软件进行重组分析。发现广东株之间的重组事件集中在2010年、2011年和2015年。JXA1-RCN-2009作为亲本毒株出现在12个重组事件中,重组体的年份从2010年延续到2018年。疫苗株Ingelvac ATP-US-2006与CH-1R-CN-2008作为次要亲本毒株出现在事件10中,该事件的重组体为广东2018年的毒株。在事件18和25中可以见到疫苗株之间的重组,但软件同时显示该事件可能是自然进化而非重组。该研究对广东猪场科学规范的使用弱毒疫苗有着一定指导意义。 展开更多
关键词 广东prrsv毒株 疫苗株 重组分析
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2021—2022年湖南省PRRSV流行病学调查及基因组特征分析
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作者 周宇骏 龙明英 +5 位作者 孟芳 王文梅 邹玖零 廖淑玲 杜雅萍 禹思宇 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期3748-3756,共9页
【目的】了解当前湖南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行特点及主要流行基因型的占比情况,并明确其遗传进化关系及重组特征,为湖南省PRRS的科学防控提供参考依据。【方法】2021年3月—2022年10月,从湖南省14个市(州)396个疑似暴发PRR... 【目的】了解当前湖南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行特点及主要流行基因型的占比情况,并明确其遗传进化关系及重组特征,为湖南省PRRS的科学防控提供参考依据。【方法】2021年3月—2022年10月,从湖南省14个市(州)396个疑似暴发PRRS的猪场采集1184份病料样品,采用荧光定量PCR检测PRRSV阳性率,统计不同季节和不同地区的感染情况;利用RT-PCR扩增部分阳性病料样品ORF5序列后进行序列相似性及遗传进化分析;将部分病料接种Marc-145细胞进行病毒分离,采用二代测序技术完成全基因组测序后进行遗传进化分析,并以SimPlot分析是否发生组重组事件。【结果】共有167份病料样品检测结果呈PRRSV阳性(检出率14.11%),湖南省不同地区和不同季节的PRRSV样品阳性检出率分别为0~46.43%和6.95%~19.67%;高致病性PRRSV(HP-PRRSV)株、经典株和类NADC30株的占比分别为43.11%、15.57%和41.32%。共扩增获得21株PRRSV的完整ORF5序列(600~603 bp),其中,7株与HP-PRRSV参考株的GP5氨基酸序列相似性较高(92.1%~98.9%),13株与类NADC30株的相似性较高(91.3%~93.4%);1株与PRRSV经典株的相似性较高(98.6%~99.1%)。不同PRRSV的GP5氨基酸序列变异程度高,其中2株类NADC30株GP5氨基酸序列高变区存在氨基酸位点缺失,且部分病毒株氨基酸变异区域位于GP5氨基酸序列的细胞表位区域。共分离获得2株PRRSV(HuN-A和HuN-B),其中,HuN-A株属于类NADC30株,且以类NADC30株为主要亲本株,以HP-PRRSV株为次要亲本株;HuN-B株属于类HP-PRRSV株。【结论】湖南省PRRSV流行情况较严重,且基因型繁多,其中类NADC30株和HP-PRRSV株属于主要流行基因型。分离获得的2株PRRSV中,HuN-A株是类NADC30株与HP-PRRSV株(JXA1)发生重组变异而来,HuN-B株可能是JXA1弱毒疫苗株出现毒力返祖而产生。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv) 流行病学调查 ORF5序列 重组分析 湖南省
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2014年~2019年PRRSV主要流行毒株在我国的变化 被引量:39
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作者 张洪亮 张文立 +14 位作者 许浒 宋帅杰 赵静 相丽润 冷超粮 李真 刘春晓 汤艳东 陈家锃 彭金美 王倩 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期512-516,共5页
为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株n... 为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株nsp2基因和122株全基因组序列。遗传演化分析显示,2014年~2019年共检测到6种基因亚型的PRRSV,分别是I型PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like PRRSV、NADC34-like PRRSV、QYYZ-like PRRSV和RespPRRS MLV-like PRRSV。经统计分析显示,2016年以前除检测到1株NADC30-like PRRSV外,其余全部是HP-PRRSV;2016年后HP-PRRSV检出比率逐渐降低,NADC30-like PRRSV检出比率逐渐升高,且2016年后已超过HP-PRRSV,成为我国主要的流行株。QYYZ-like PRRSV的检出数量增多,其广泛流行于我国的华南地区。其它类型的PRRSV检出比率较低,呈现散发或局部流行。此外,近年来,PRRSV的细胞嗜性已经发生明显变化,绝大多数的病毒株无法在体外分离培养。因此,我国养殖企业针对PRRSV流行株的变化应及时调整防控策略,同时加大对PRRSV生物学特性变化机制的研究。本研究对了解我国PRRSV的流行状况及防控具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 prrsv NADC30-like prrsv 主要流行毒株 细胞嗜性
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PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗免疫特性的研究 被引量:16
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作者 李丽琴 蔡雪辉 +8 位作者 刘永刚 王淑杰 石文达 徐敏 荣福龙 武佳斌 徐明明 田志军 胡守萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期468-472,共5页
为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株疫苗的免疫机理和明确PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗各自的免疫特性,本实验分别采用PRRSV变异株(HuN4)活疫苗和PRRSV变异株(JXA1)灭活苗免疫PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫后21... 为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株疫苗的免疫机理和明确PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗各自的免疫特性,本实验分别采用PRRSV变异株(HuN4)活疫苗和PRRSV变异株(JXA1)灭活苗免疫PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫后21d用PRRSV变异株HuN4强毒攻毒,ELISA方法检测血清中PRRSV特异的抗体水平及TNF-α、IFN-α、IL-1、IL-6和CRP细胞因子水平,荧光定量RT-PCR方法检测病毒血症的发生和持续情况,并取主要器官进行病理组织学观察。结果表明:HuN4活疫苗组免疫后14d便可检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d各细胞因子水平升高,攻毒后21d病毒血症完全消失,免疫后各器官没有明显病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化轻微;JXA1株灭活苗组免疫期间没有检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d~9d各细胞因子水平升高,攻毒后病毒血症持续存在,免疫后各器官有轻微病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化比HuN4活疫苗组严重,但比对照组明显减轻。本实验表明,HuN4活疫苗能够快速有效的激发机体的体液免疫反应,在抵抗PRRSV变异株HuN4强毒攻毒时,临床症状明显优于JXA1灭活苗。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 prrsv变异株(HuN4)活疫苗 prrsv变异株(JXA1)灭活苗
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多重RT-PCR同时检测CSFV、PRRSV、HP-PRRSV方法的建立及其临床应用 被引量:5
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作者 韦正吉 严斯刚 +5 位作者 黄小武 李志源 蒋柳平 黄溢泓 盘美妮 邱新第 《广西农业科学》 CSCD 2009年第11期1476-1480,共5页
根据猪瘟病毒(CSFV)P120基因及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp2基因缺失区两端的保守区分别设计合成1对特异性引物,建立了一种简便、快速、同时鉴别检测CSFV、PRRSV、HP-PRRSV的多重RT-PCR方法。该方法扩增CSFV基因组时... 根据猪瘟病毒(CSFV)P120基因及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp2基因缺失区两端的保守区分别设计合成1对特异性引物,建立了一种简便、快速、同时鉴别检测CSFV、PRRSV、HP-PRRSV的多重RT-PCR方法。该方法扩增CSFV基因组时可获得508bp的片段,扩增PRRSV时可获得320bp的片段,扩增HP-PRRSV基因组时可获得230bp的片段,因此,根据多重RT-PCR产物大小可将三者区分开来。利用建立的多重RT-PCR方法,对50份临床可疑病料进行检测,结果发现,CSFV阳性率为8%,PRRSV阳性率为18%,HP-PRRSV阳性率为22%,而CSFV和HP-PRRSV混合感染阳性率达2%,PRRSV和HP-PRRSV混合感染阳性率达16%,说明所建立的多重RT-PCR方法简便、快速、特异,可同时鉴别CSFV、PRRSV及HP-PRRSV,亦可用于感染这3种病毒的临床病料的快速鉴定和分子流行病学调查。 展开更多
关键词 多重RT-PCR CSFV prrsv HP-prrsv 鉴别诊断
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1例仔猪混合感染PRRSV、PCV与大肠杆菌的诊断及基因组比较分析
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作者 李剑静 《养殖与饲料》 2023年第2期13-20,共8页
[目的]了解2021年10月广西某猪场引进仔猪的死亡原因。[方法]采用细菌学和分子生物学方法进行诊断,并对猪蓝耳病病毒与猪圆环病毒进行基因组层面的比较分析。[结果]本次疫病为猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪圆环病毒(PCV2、PCV3)型与大肠杆菌... [目的]了解2021年10月广西某猪场引进仔猪的死亡原因。[方法]采用细菌学和分子生物学方法进行诊断,并对猪蓝耳病病毒与猪圆环病毒进行基因组层面的比较分析。[结果]本次疫病为猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪圆环病毒(PCV2、PCV3)型与大肠杆菌混合感染引起。对基因组比较发现,PRRSV病毒编码GP2~GP5蛋白对应的基因区域易发生突变,但编码ORF区蛋白的基因较为保守;对NCBI数据库中2022年1-5月62份PCV基因组进行分析发现,我国出现3个变种。[结论]PRRSV病毒结构更复杂,对其ORF1a、ORF1b 2个高度保守与稳定的核心区域进行PCR检测,同时相对保守的GP5糖基化包膜蛋白区域可以设计快检试剂的开发;而PCV病毒在全基因组上容易发生变异,这增加了对新型PCV变异毒株的检测难度。 展开更多
关键词 prrsv PCV 基因组 共线性分析 变异分析
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