PttGA20-氧化酶基因dsRNA抑止载体的构建 被引量：2

1

作者 周冰彬 陈晓阳 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第32期14005-14007,共3页

[目的]通过基因工程手段抑止赤霉素调控基因PttGA20-氧化酶基因的表达,从而抑制植物高生长和节间伸长,达到培育矮化植株的目的。[方法]依据RNAi原理,设计引物扩增正义及反义PttGA20ox片段插入pBI121载体CaMV35S启动子下游区域,并在正义... [目的]通过基因工程手段抑止赤霉素调控基因PttGA20-氧化酶基因的表达,从而抑制植物高生长和节间伸长,达到培育矮化植株的目的。[方法]依据RNAi原理,设计引物扩增正义及反义PttGA20ox片段插入pBI121载体CaMV35S启动子下游区域,并在正义和反义片段间隔区插入茎环结构GUS基因片段,将npⅡt标记基因替换为抗除草剂基因bar,构建dsRNA抑止载体。[结果]所构建的抑止载体经经不同内切酶酶切鉴定后均可释放出与目的条带大小相同片段,表明已成功构建PttGA20-氧化酶基因dsRNA抑止载体。[结论]该研究为培育矮化植株提供了新的途径。 展开更多

关键词 赤霉素 pttga20-氧化酶基因 RNAI 载体构建

下载PDF 职称材料

梨矮化砧木中矮1号GA20-氧化酶基因克隆与表达分析 被引量：12

2

作者 宣利利 欧春青 +4 位作者 王斐 王志刚 程飞飞 李振茹 姜淑苓 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期883-887,共5页

中矮1号是中国农业科学院果树研究所选育的梨优良矮化砧木,为研究其矮化机理,利用RT-PCR结合RACE方法克隆了梨矮化砧木中矮1号的1个GA20-氧化酶基因,并对该基因及其氨基酸序列以及该基因在不同生长类型梨品种中不同时期新梢叶片中的表... 中矮1号是中国农业科学院果树研究所选育的梨优良矮化砧木,为研究其矮化机理,利用RT-PCR结合RACE方法克隆了梨矮化砧木中矮1号的1个GA20-氧化酶基因,并对该基因及其氨基酸序列以及该基因在不同生长类型梨品种中不同时期新梢叶片中的表达进行了分析。结果表明,该基因全长1 179 bp,推导编码392个氨基酸,其编码的蛋白质具有GA20-氧化酶基因家族所具有的功能活性位点和特征保守单元,该基因与苹果GA20-氧化酶基因氨基酸序列一致性达91.58%,因此确定该基因为中矮1号GA20-氧化酶基因,将其命名为PcGA20ox1(Gen-Bank登录号为HQ833589)。PcGA20ox1基因在中矮1号、亲本锦香和对照早酥3个品种不同发育阶段新梢叶片中的表达强度均为中矮1号<锦香<早酥,与植株高矮表现一致,表明PcGA20ox1基因的表达强弱与植株高矮相关。 展开更多

关键词 梨 矮化砧木 赤霉素 GA20-氧化酶基因 基因表达

下载PDF 职称材料

GA20-氧化酶基因转化豆科牧草百脉根的研究 被引量：13

3

作者 张振霞 储成才 符义坤 《草业学报》 CSCD 2002年第3期97-100,共4页

以豆科植物百脉根子叶为转化受体,通过根癌农杆菌介导方法将外源目的基因GA20-氧化酶(GA20-oxidase)和NPTII基因导入,经筛选分化、再生,得到具有卡那霉素抗性的转基因植物。在卡那霉素筛选浓度的选择中,25mg/L是百脉根较为适宜的筛选浓... 以豆科植物百脉根子叶为转化受体,通过根癌农杆菌介导方法将外源目的基因GA20-氧化酶(GA20-oxidase)和NPTII基因导入,经筛选分化、再生,得到具有卡那霉素抗性的转基因植物。在卡那霉素筛选浓度的选择中,25mg/L是百脉根较为适宜的筛选浓度。头孢霉素对农杆菌的抑制作用好于羧卞霉素。转基因植物移栽大田后生长良好。PCR检测证明外源目的基因已整合到百脉根基因组中。 展开更多

关键词 GA20-氧化酶 基因转化 豆科牧草 百脉根 根癌农杆菌 植物再生

下载PDF 职称材料

高等植物赤霉素20-氧化酶基因的克隆、表达及其调控技术的研究进展 被引量：2

4

作者 石海燕 张玉星 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第4期19-22,共4页

揭示赤霉素20-氧化酶基因的分子特征,通过转基因技术调控植物体内活性赤霉素的含量,可为改良品种提供新的思路。从赤霉素20-氧化酶基因的克隆、表达调控及其在植物基因工程中的应用等方面进行了综述。

关键词 赤霉素20-氧化酶 基因克隆 表达调控 高等植物

下载PDF 职称材料

梨品种中矮1号GA20-氧化酶基因正义和反义表达载体的构建 被引量：1

5

作者 宣利利 欧春青 +3 位作者 王斐 王志刚 姜淑苓 郭晓雷 《中国果树》 北大核心 2011年第3期11-13,共3页

通过对已获得的中矮1号GA20-氧化酶基因的cDNA序列全长进行分析,选取Spe I/Bst EⅡ双酶切位点、以pCAMBIA1305为载体构建质粒。成功构建了GA20-氧化酶基因的植物正义和反义表达载体pCAMBIA1305-GAF和pCAMBIA1305-GAR,并成功转入到了农杆... 通过对已获得的中矮1号GA20-氧化酶基因的cDNA序列全长进行分析,选取Spe I/Bst EⅡ双酶切位点、以pCAMBIA1305为载体构建质粒。成功构建了GA20-氧化酶基因的植物正义和反义表达载体pCAMBIA1305-GAF和pCAMBIA1305-GAR,并成功转入到了农杆菌EHA105菌株中;为GA20-氧化酶基因的遗传转化和梨品种中矮1号矮化机理研究奠定了基础。 展开更多

关键词 梨 品种 中矮1号 GA20-氧化酶基因 表达载体 构建

原文传递

棉花赤霉素氧化酶同源基因GhGA20ox1在烟草中的功能表达(英文) 被引量：7

6

作者 肖月华 叶应福 +6 位作者 冯怡 李先碧 罗明 侯磊 罗小英 李德谋 裴炎 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期563-569,共7页

为研究棉花GA20-氧化酶同源基因GhGA20ox1的功能,将该基因转入本明烟(N.benthamiana)中进行超量表达。RT-PCR分析表明GhGA20ox1基因在转基因植株中得到了不同水平的表达。GhGA20ox1基因的超量表达促进了本明烟中的GA4+7合成,并导致赤霉... 为研究棉花GA20-氧化酶同源基因GhGA20ox1的功能,将该基因转入本明烟(N.benthamiana)中进行超量表达。RT-PCR分析表明GhGA20ox1基因在转基因植株中得到了不同水平的表达。GhGA20ox1基因的超量表达促进了本明烟中的GA4+7合成,并导致赤霉素过量的表型出现。转基因本明烟的表型变化程度与GhGA20ox1基因的表达水平和GA4+7的含量一致。这些结果表明,GhGA20ox1基因编码一个有功能的GA20-氧化酶,能够在转基因烟草中促进活性GA(GA4+7)的合成。 展开更多

关键词 赤霉素 GA 20-氧化酶 棉花GA 20-氧化酶基因 GA合成 基因工程

下载PDF 职称材料

高等植物GA 20-氧化酶研究进展 被引量：13

7

作者 李伟 陈晓阳 丁霞 《生命科学》 CSCD 2003年第1期42-45,35,共5页

GA 20-氧化酶(GA 20-oxidase)是高等植物体内GA生物合成途径中最重要的限速酶,它能够催化从GA12到GA9及GA53到GA20一系列的氧化反应。作者对近年来有关GA 20-氧化酶的特征、GA 20-氧化酶基因及编码蛋白、GA 20-氧化酶基因表达调控进行... GA 20-氧化酶(GA 20-oxidase)是高等植物体内GA生物合成途径中最重要的限速酶,它能够催化从GA12到GA9及GA53到GA20一系列的氧化反应。作者对近年来有关GA 20-氧化酶的特征、GA 20-氧化酶基因及编码蛋白、GA 20-氧化酶基因表达调控进行了综合评述,并对GA20-氧化酶基因转化在农业、林业、园艺业方面的应用前景进行了展望。 展开更多

关键词 高等植物 GA20-氧化酶 基因转化

下载PDF 职称材料

赤霉素诱导甘蔗GA20-Oxidase基因实时荧光定量PCR分析 被引量：7

8

作者 吴建明 李杨瑞 +3 位作者 王爱勤 杨柳 杨丽涛 甘崇琨 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第5期922-927,共6页

本研究以喷清水甘蔗幼茎作为对照(即未处理),经过赤霉素处理后6h、12h、24h和48h的甘蔗幼茎为处理,分别进行取样并提取RNA,反转录获得cDNA作模板,利用SYBR GreenⅠ成功构建了目的基因(GA20-oxidase)和内参基因(GAPDH)的标准品和标准曲... 本研究以喷清水甘蔗幼茎作为对照(即未处理),经过赤霉素处理后6h、12h、24h和48h的甘蔗幼茎为处理,分别进行取样并提取RNA,反转录获得cDNA作模板,利用SYBR GreenⅠ成功构建了目的基因(GA20-oxidase)和内参基因(GAPDH)的标准品和标准曲线。结果表明:内参基因与目的基因的起始模板浓度与Ct之间呈良好线性关系,决定系数分别为r2=0.998、r2=0.995;溶解曲线均显单峰型,证明扩增的特异性比较好,可对基因表达进行相对定量。定量结果表明:目的基因未处理的表达量最大,赤霉素处理后表达量持续下降,在6h达到最低值,12h后逐渐上升,但到48h又明显下降,且所有处理的表达量均低于未处理,6h、12h、24h和48h比对照的表达量分别下降了24.75%、13.18%、10.23%和20.34%。本实验研究GA20-oxidase基因在赤霉素处理后的表达情况,为进一步克隆甘蔗GA20氧化酶基因全长序列、研究该基因在甘蔗节间伸长过程中的表达调控及甘蔗茎间伸长中的作用机理提供理论依据。 展开更多

关键词 甘蔗 GA20-氧化酶 赤霉素 定量PCR 基因表达

下载PDF 职称材料

小麦TaGA20ox2基因的克隆及分析 被引量：8

9

作者 武晶 孔秀英 +2 位作者 高丽峰 任正隆 贾继增 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期3405-3412,共8页

【目的】克隆小麦中的GA20-氧化酶基因并进行遗传定位,为深入研究小麦中的GA20-氧化酶基因作用机理奠定基础,同时为改良小麦的重要农艺性状提供理论依据。【方法】采用同源克隆结合BAC文库筛选的方法克隆基因,利用中国春缺失体以及国际... 【目的】克隆小麦中的GA20-氧化酶基因并进行遗传定位,为深入研究小麦中的GA20-氧化酶基因作用机理奠定基础,同时为改良小麦的重要农艺性状提供理论依据。【方法】采用同源克隆结合BAC文库筛选的方法克隆基因,利用中国春缺失体以及国际作图群体对该基因进行遗传定位。【结果】从普通小麦中国春中分离得到TaGA20ox2的gDNA与cDNA序列,利用中国春缺失体材料将TaGA20ox2定位于3A、3B、3D染色体上,序列分析表明分别位于3A、3B、3D染色体上的TaGA20ox2-A1、TaGA20ox2-B1和TaGA20ox2-D1与水稻GA20ox2为直向同源基因,具有GA20ox2家族保守结构域;利用国际作图群体W7984×Opata85将位于3D上的基因TaGA20ox2-3定位于xfba330与xgwm664标记之间。【结论】分离获得小麦中分布于第三同源群的GA20ox2;分子标记结果结合QTL作图信息可以初步推测TaGA20ox2-3在小麦中可能是控制株高的基因。 展开更多

关键词 小麦 GA20-氧化酶 基因克隆 遗传作图

下载PDF 职称材料

梨极矮化突变体与苹果梨GA20ox基因的克隆及植物表达载体的构建 被引量：3

10

作者 王满 金灿 +2 位作者 许雪 宗成文 曹后男 《北方园艺》 CAS 北大核心 2014年第2期89-94,共6页

以梨极矮化突变体和苹果梨为试材,应用RT-PCR技术对GA20ox基因进行克隆及序列分析。结果表明:克隆得到梨极矮化突变体和苹果梨GA20-氧化酶基因,依次命名为PuGA20ox和PbGA20ox,其全长均为1 179bp,分别包含1个完整编码392个氨基酸的开放... 以梨极矮化突变体和苹果梨为试材,应用RT-PCR技术对GA20ox基因进行克隆及序列分析。结果表明:克隆得到梨极矮化突变体和苹果梨GA20-氧化酶基因,依次命名为PuGA20ox和PbGA20ox,其全长均为1 179bp,分别包含1个完整编码392个氨基酸的开放阅读框(ORF);对其进行序列分析,并成功构建了植物表达载体,为进一步研究梨矮化突变体和GA20-氧化酶基因功能奠定了基础。 展开更多

关键词 梨极矮化突变体 GA20-氧化酶基因 克隆 序列分析 植物表达载体

原文传递

水稻赤霉素20-氧化酶基因(rga5)的正、反义转化对水稻生物学性状的影响 被引量：12

11

作者 严远鑫 安成才 +4 位作者 栗力 古佳玉 王莉江 米双利 陈章良 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期358-363,共6页

通过PCR方法从水稻“矮子占”和“南特号”的基因组DNA中分离出赤霉素20-氧化酶基因rga5,其编码区含1119 bp,其编码蛋白与已报道的水稻赤霉素20-氧化酶基因OsGA20ox相比有11个氨基酸不同,其中9个氨基酸为移码差异,通过基因枪法将该基因... 通过PCR方法从水稻“矮子占”和“南特号”的基因组DNA中分离出赤霉素20-氧化酶基因rga5,其编码区含1119 bp,其编码蛋白与已报道的水稻赤霉素20-氧化酶基因OsGA20ox相比有11个氨基酸不同,其中9个氨基酸为移码差异,通过基因枪法将该基因的正、反义表达质粒pSrga5和pArga5转化水稻“中花8号”,获得了生物学性状有明显变异的转基因植株,正义转化表现出植株增高、叶片和穗变长、穗粒数增加等特征,但花期未受明显的影响;而反义植株表现出明显的“矮化”和“早花”,且出现植株细弱、叶色加深、叶片和穗变短等特征,转基因水稻的分析结果表明,rga5正、反义外源基因已分别整合到水稻基因组中,并有效表达;正义植株体内的GA1平均增加约50％,反义则降低至对照组的约10％.结果表明,rga5是水稻赤霉素合成代谢途径中起关键作用的赤霉素20-氧化酶基因,该序列中11个氨基酸的变异并不影响其功能,正义表达可增强体内GA的合成,促使植株生长,增加株高;反义转化则抑制了内源GA的合成及植株生长,导致植株明显的矮化. 展开更多

关键词 水稻 赤霉素20-氧化酶基因 生物学性状 反义 正义 转基因植物 植物激素

原文传递

不同矮化砧木对苹果树体生长及矮化相关基因表达的影响 被引量：6

12

作者 郑伶杰 李方方 +1 位作者 杨利粉 徐继忠 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期64-69,共6页

以砧木Y系和SH40实生后代及嫁接的红富士苹果为试材,探讨了不同砧木对树体生长及矮化相关基因表达的影响,以期为深入研究苹果砧木致矮机理提供理论依据。结果表明:Y-1和2号砧木上品种树高分别为乔化对照的51%和65.5%。Y-1砧木在6-8月份... 以砧木Y系和SH40实生后代及嫁接的红富士苹果为试材,探讨了不同砧木对树体生长及矮化相关基因表达的影响,以期为深入研究苹果砧木致矮机理提供理论依据。结果表明:Y-1和2号砧木上品种树高分别为乔化对照的51%和65.5%。Y-1砧木在6-8月份的GA20ox1基因表达强度均显著低于对照,其上嫁接的品种8月份表达强度显著低于对照。NCED1基因在6月份的表达强度显著高于对照,7-8月份的显著低于对照;其上嫁接的品种7月份的表达强度显著高于对照,而8月份的显著低于对照。在7-8月份2号砧木及嫁接品种GA20ox1基因和NCED1基因的表达强度均显著低于对照。 展开更多

关键词 苹果 矮化砧木 赤霉素20氧化酶 9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶 基因表达

下载PDF 职称材料