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利用RNA介导的抗病性获得高度抗马铃薯Y病毒的转基因烟草 被引量:34
1
作者 郭兴启 吕士恩 +4 位作者 朱常香 宋云枝 孟祥兵 郑成超 温孚江 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期348-356,共9页
以马铃薯 Y病毒坏死株系 (PVYN)的 RNA为模板 ,应用反转录 -聚合酶链式反应 (RT- PCR)方法 ,扩增出长度为 80 1bp的非翻译的马铃薯 Y病毒外壳蛋白基因。将扩增的片段克隆到 p BSK的Bam HI和 Kpn I之间并进行了序列测定。用 Bam HI和 Kp... 以马铃薯 Y病毒坏死株系 (PVYN)的 RNA为模板 ,应用反转录 -聚合酶链式反应 (RT- PCR)方法 ,扩增出长度为 80 1bp的非翻译的马铃薯 Y病毒外壳蛋白基因。将扩增的片段克隆到 p BSK的Bam HI和 Kpn I之间并进行了序列测定。用 Bam HI和 Kpn I从重组克隆载体上切下该基因并插入到质粒 p ROKII内得到植物表达载体 p PVYCP。通过根癌农杆菌 (LBA4 40 4 )介导的方法转化烟草NC89,经卡那霉素抗性筛选、PCR和 Southern blot检测 ,获得 82株转基因植株。 Northern blot和Western blot分析表明 ,转基因植株只在 RNA水平上得到了表达。抗病性试验表明转基因植株之间抗性水平存在着差异 ,其中有 7株是对 PVYN高度抗病性的植株。转基因植株抗病特异性试验初步表明 ,对 PVYN 表现高度抗病的植株对 PVYO 也具有高度抗病性。 展开更多
关键词 rna介导 病毒抗性 马铃薯Y病毒 转基因烟草
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正向和反向重复RNA介导的抗马铃薯Y病毒基因工程比较研究 被引量:36
2
作者 朱俊华 朱常香 +1 位作者 温孚江 宋云枝 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期133-140,共8页
RNA介导的病毒抗性与RNA沉默现象密切相关。反向重复cDNA序列(IR)的转录产物往往形成双链RNA结构,而双链RNA是诱发RNA沉默的有效因子。据此,本研究通过体外合成马铃薯Y病毒坏死株系衣壳蛋白基因(PVYN-CP)5'端反向重复cDNA序列和正... RNA介导的病毒抗性与RNA沉默现象密切相关。反向重复cDNA序列(IR)的转录产物往往形成双链RNA结构,而双链RNA是诱发RNA沉默的有效因子。据此,本研究通过体外合成马铃薯Y病毒坏死株系衣壳蛋白基因(PVYN-CP)5'端反向重复cDNA序列和正向重复cDNA序列(DR),分别构建植物表达载体pROK-IR和pROK-DR,利用农杆菌介导方法转化烟草NC89,比较这2种转基因烟草在RNA介导抗病性方面的差异。抗病性检测表明,转化IR和DR的转基因烟草均可获得抗病程度达到免疫的植株,但转化IR序列可大大提高抗病植株在转基因植株中的比例。分析结果表明所获得的抗病性为RNA介导的抗病性,是RNA沉默的结果。这一研究结果为利用IR策略进行抗病毒遗传育种提供了理论依据,并为讲一步开展RNA介导抗病性的机制研究奠宗了基础。 展开更多
关键词 正向重复 反向重复 rna介导 抗马铃薯Y病毒 基因工程
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利用RNA介导的抗病性获得抗2种病毒的转基因烟草 被引量:17
3
作者 白庆荣 朱俊华 +3 位作者 刘晓玲 朱常香 宋云枝 温孚江 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期148-154,共7页
RNA介导的病毒抗性(RMVR)是近年发展起来的一种新的植物抗病毒基因工程策略,具有抗病性强、抗性持久、生物安全性高等特点。利用该策略培育多抗病毒植株具有广阔的应用前景和重要的实践意义。本研究将非翻译的马铃薯X病毒的衣壳蛋白(PVX... RNA介导的病毒抗性(RMVR)是近年发展起来的一种新的植物抗病毒基因工程策略,具有抗病性强、抗性持久、生物安全性高等特点。利用该策略培育多抗病毒植株具有广阔的应用前景和重要的实践意义。本研究将非翻译的马铃薯X病毒的衣壳蛋白(PVX-CP)基因和非翻译的马铃薯Y病毒的衣壳蛋白(PVY-CP)基因组成嵌合基因,构建植物表达载体pROKXY,利用农杆菌介导法转化烟草NC89,获得6株对PVX和PVY的混合侵染表现为免疫的转基因植株。分子分析表明,这种抗性为RNA介导的病毒抗性。这一研究结果为利用RMVR进行植物多抗病毒育种提供了重要数据和资料。 展开更多
关键词 rna介导的病毒抗性 马铃薯X病毒 马铃薯Y病毒坏死株系 嵌合基因 转基因烟草
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RNA介导的病毒抗性在转基因烟草中的遗传分析 被引量:13
4
作者 朱常香 刘红梅 +1 位作者 宋云枝 温孚江 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第1期94-103,共10页
以含非翻译马铃薯Y病毒外壳蛋白 (PVY MCP)基因的抗病和感病T0 代转基因烟草为材料 ,对转基因及RNA介导的病毒抗性在T1~T4代转基因植株中的遗传进行了研究。结果表明 ,在含低拷贝 (1~ 2个 )转基因的感病植株后代中 ,转基因是作为一个... 以含非翻译马铃薯Y病毒外壳蛋白 (PVY MCP)基因的抗病和感病T0 代转基因烟草为材料 ,对转基因及RNA介导的病毒抗性在T1~T4代转基因植株中的遗传进行了研究。结果表明 ,在含低拷贝 (1~ 2个 )转基因的感病植株后代中 ,转基因是作为一个单显性遗传位点 ,遵循孟德尔遗传分离规律 ,各世代转基因植株仍表现感病。含多拷贝 (4~ 6个 )转基因的抗病植株 ,转基因在T1代的分离虽符合多位点插入的 15∶1和 6 3∶1遗传规律 ,但转基因发生了重排 ,RNA介导的病毒抗性表现为不稳定遗传。从含多拷贝转基因的抗病植株的T1代株系中 ,分离获得了两株含 2个拷贝转基因的抗病植株 ;其后代中 ,转基因及抗性遗传遵循孟德尔遗传分离规律 ,可稳定遗传和表达 ,获得纯合的抗病转基因株系。对转基因在不同抗病类型植株中整合方式分析显示 。 展开更多
关键词 rna介导的病毒抗性的遗传 马铃薯Y病毒 转基因烟草 转基因整合方式
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转基因植物中RNA介导的病毒抗性研究进展 被引量:15
5
作者 郭兴启 温孚江 朱常香 《生命科学》 CSCD 2000年第4期166-169,161,共5页
利用病毒核酸序列培育抗病毒的转基因植物是一个重要的抗病毒基因工程策略。虽然很多种病毒的不同核酸序列已被使用并证明转基因植物有不同程度的抗病毒效果,但其抗病机制大多不清楚。目前至少有两种明显不同的抗病机制类型:一种是要... 利用病毒核酸序列培育抗病毒的转基因植物是一个重要的抗病毒基因工程策略。虽然很多种病毒的不同核酸序列已被使用并证明转基因植物有不同程度的抗病毒效果,但其抗病机制大多不清楚。目前至少有两种明显不同的抗病机制类型:一种是要求病毒编码的蛋白质的表达;另一种是仅仅依靠转基因的RNA转录。本文综述了这种RNA介导的抗性特点、分子生物学、抗病机制,以及与共抑制的相似性,并对RNA介导的病毒抗性的意义加以讨论。 展开更多
关键词 转基因植物 rna介导的病毒抗性 共抑制
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RNA介导的转录后基因沉默 被引量:2
6
作者 余有本 江昌俊 李叶云 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第2期259-267,共9页
RNA介导的转录后基因沉默 (post transcriptionalgenesilencing ,PTGS)指一种普遍存在于生物界的 ,由双链RNA (doublestrandedRNA ,dsRNA)引起同源mRNA降解进而导致基因不表达的的生物学现象。其最重要的特点是只会特异性抑制同源性mRN... RNA介导的转录后基因沉默 (post transcriptionalgenesilencing ,PTGS)指一种普遍存在于生物界的 ,由双链RNA (doublestrandedRNA ,dsRNA)引起同源mRNA降解进而导致基因不表达的的生物学现象。其最重要的特点是只会特异性抑制同源性mRNA的表达 ,而不影响其他基因的表达 ,并能稳定地遗传到后代中。RNA介导的PTGS具有多种生物学功能 ,如抵御外来遗传物质的侵犯和病毒的侵染 ,控制生物体的生长发育等。RNA介导的PTGS将是目前分子生物学领域的研究热点之一 ,并在研究基因功能、基因治疗、抗病毒基因工程、剖析和调控次生代谢途径等方面有着广阔的应用前景。本文对RNA介导的PTGS的历史、机制、特点、相关酶类、生物学功能及应用作了比较详尽的综述。 展开更多
关键词 转录后基因沉默 rna介导 生物学功能 发生机理 功能基因组研究 基因治疗 抗病毒基因工程
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RNA介导的植物DNA甲基化研究进展 被引量:1
7
作者 付丽娅 刘仲齐 白艳玲 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期891-896,共6页
RNA介导的DNA甲基化作用(RNA-directed DNA Methylation,RdDM)是首次在植物中发现的基因组表观修饰现象,RdDM通过RNA-DNA序列相互作用直接导致DNA甲基化。植物中的RdDM和siRNA介导的mRNA降解现象,都是通过RNA使序列特异性基因发生沉默,... RNA介导的DNA甲基化作用(RNA-directed DNA Methylation,RdDM)是首次在植物中发现的基因组表观修饰现象,RdDM通过RNA-DNA序列相互作用直接导致DNA甲基化。植物中的RdDM和siRNA介导的mRNA降解现象,都是通过RNA使序列特异性基因发生沉默,它们对于植物的染色体重排、抵御病毒感染、基因表达调控和发育的许多过程起到了非常重要的作用。在植物中有很多的文献报道RdDM现象,但是对于其具体调控机理还不是很清楚。这里对RNA介导的植物DNA甲基化的基本特征进行了简要概述,主要对RdDM机理的研究进展进行了综述,其中包括RdDM过程中的DNA甲基转移酶的种类及其作用机理,DNA甲基化与染色质修饰之间的关系,以及与RdDM相关的重要蛋白质的研究等。在植物中,转录和转录后水平都可能发生RdDM,诱发基因沉默,前者常涉及靶基因启动子的甲基化,后者则牵涉到编码区的甲基化。RdDM的发生依赖于RNAi途径中相似的siRNA和酶,如DCL3、RdR2、SDE4和AGO4。植物中至少含有三类DNA甲基转移酶DRM1/2、MET1和CMT3,其作用部位是与RNA同源的DNA区域中的所有胞嘧啶,而组蛋白H3第九位赖氨酸的甲基化影响着胞嘧啶的甲基化。 展开更多
关键词 植物 rna介导的DNA甲基化(RdDM) rna干扰
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昆虫中RNA介导的转座因子 被引量:2
8
作者 王金福 《杭州大学学报(自然科学版)》 CSCD 1999年第1期70-75,共6页
在昆虫中编码反转录酶的转座因子分为二大类:含长末端重复(LTRs)和不含长末端重复的转座因子.LTRs反转录转座子是具有两侧长正向重复末端序列的片段,中间部分序列包括一个或一个以上的ORFs(开放性阅读框架),其编码... 在昆虫中编码反转录酶的转座因子分为二大类:含长末端重复(LTRs)和不含长末端重复的转座因子.LTRs反转录转座子是具有两侧长正向重复末端序列的片段,中间部分序列包括一个或一个以上的ORFs(开放性阅读框架),其编码转座因子复制和转座所必需的蛋白质;包括GypsyTy3家族、CopiaTy1家族和Pao因子等.不含长末端重复的转座因子有时称为反转座子,能编码反转录酶但缺乏整合酶;包括I、F、G、Jockey、Doc和HetA等因子. 展开更多
关键词 昆虫 转座因子 rna介导 基因组
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RNA介导的转基因沉默:原理及应用 被引量:5
9
作者 陈文 王东 何弈昆 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期489-494,共6页
RNA介导的转基因沉默是有dsRNA参与指导的,以外源和内源mRNA为降解目标的转基因沉默现象。本文对植物中RNA介导的转基因沉默的机理做了详细的阐述,并且将各种生物中在此过程中起关键作用的蛋白及其功能进行了总结,最后介绍dsRNA作为一... RNA介导的转基因沉默是有dsRNA参与指导的,以外源和内源mRNA为降解目标的转基因沉默现象。本文对植物中RNA介导的转基因沉默的机理做了详细的阐述,并且将各种生物中在此过程中起关键作用的蛋白及其功能进行了总结,最后介绍dsRNA作为一种基因组学研究手段的优势和它实际的应用前景。 展开更多
关键词 转录后基因沉默 双链rna DNA甲基化 rna介导
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植物表观遗传中的RNA介导的DNA甲基化 被引量:5
10
作者 焦晓明 范云六 王磊 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第6期7-13,共7页
植物基因组对基因的表达调控不仅表现在转录水平上,也表现在染色质结构的变化上。在植物中存在着特有的RNA聚合酶Ⅳ(RNA PolⅣ)和RNA聚合酶Ⅴ(RNA PolⅤ),它们与RNA聚合酶Ⅱ(RNA PolⅡ)相似。RNAPolⅣ和RNAPolⅤ的转录产物包括参与表观... 植物基因组对基因的表达调控不仅表现在转录水平上,也表现在染色质结构的变化上。在植物中存在着特有的RNA聚合酶Ⅳ(RNA PolⅣ)和RNA聚合酶Ⅴ(RNA PolⅤ),它们与RNA聚合酶Ⅱ(RNA PolⅡ)相似。RNAPolⅣ和RNAPolⅤ的转录产物包括参与表观遗传调控的长链非编码RNA(lncRNAs)和干扰小RNA(siRNAs)。这类非编码RNA广泛地参与了基因组上发生的胞嘧啶甲基化,去甲基化以及甲基化扩散。近年来,研究已经发现RNA介导的染色质水平的基因沉默涉及植物的生长发育、胁迫应答、表观遗传多态性,并对植物的表型多样化、生理适应性以及植物进化具有显著影响。 展开更多
关键词 表观遗传 rna聚合酶 干扰小rna(sirna) rna介导的DNA甲基化(RdDM) DNA甲基化
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利用诱导因子Oct4、Sox2和SV40T的mRNA介导体细胞重编程研究
11
作者 潘传英 《中国畜牧兽医文摘》 2013年第12期76-76,共1页
为利用特定诱导因子Oct4、Sox2和SV40T的体外转录mRNA实现安全的成纤维细胞重编程,本研究成功构建了特定诱导因子Oct4、Sox2和SV40T的mRNA体外转录载体,并对体外转录mRNA进行了5’和3’端加工修饰;进行了诱导因子mRNA的293和IMR90细... 为利用特定诱导因子Oct4、Sox2和SV40T的体外转录mRNA实现安全的成纤维细胞重编程,本研究成功构建了特定诱导因子Oct4、Sox2和SV40T的mRNA体外转录载体,并对体外转录mRNA进行了5’和3’端加工修饰;进行了诱导因子mRNA的293和IMR90细胞转染试验,利用免疫细胞化学、 展开更多
关键词 诱导因子 OCT4 SOX2 重编程 rna介导 利用 体细胞 Mrna
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RNA介导的抗病性研究进展
12
作者 曹云侠 蒋士君 《河南科技》 2006年第6期56-56,共1页
关键词 rna介导 抗病性 基因工程技术 转基因植物 抗病毒育种 分子生物学 介导抗性 抗病机制
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miRNA介导mRNA翻译抑制与脱腺苷化
13
作者 章玲玲(译) 朱文奇(译) 《中国家禽》 北大核心 2011年第20期71-71,共1页
MicroRNAs(miRNAs)是由一类核苷酸长度约为22nt的内源性RNA分子,可以调控真核生物基因表达,但其作用机制尚未研究清楚。miRNA蛋白复合物(miRNPs)可以通过不完全配对与靶mRNA结合,下调基因表达。miRNA至少以两种机制下调mRNA的表达:
关键词 Mrna rna介导 MIrna 腺苷 翻译 基因表达 蛋白复合物 真核生物
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马铃薯Y病毒衣壳蛋白基因片段长度对RNA介导抗病性的影响 被引量:10
14
作者 朱俊华 竺晓平 +3 位作者 温孚江 白庆荣 朱常香 宋云枝 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2004年第1期23-30,共8页
在已证明转化马铃薯Y病毒(PVY)全长衣壳蛋白基因可获得高度抗病的转基因烟草、且这种抗病性为RNA介导抗病性的基础上,克隆了马铃薯Y病毒坏死株系衣壳蛋白基因(PVYN-CP)3'端202(1/4 CP),417(1/2 CP)和603 bp(3/4 CP)的部分基因片段(C... 在已证明转化马铃薯Y病毒(PVY)全长衣壳蛋白基因可获得高度抗病的转基因烟草、且这种抗病性为RNA介导抗病性的基础上,克隆了马铃薯Y病毒坏死株系衣壳蛋白基因(PVYN-CP)3'端202(1/4 CP),417(1/2 CP)和603 bp(3/4 CP)的部分基因片段(CP202,CP417和CP603),并分别构建植物表达载体pROKⅡ-CP202,pROKⅡ-CP417和pROKⅡ-CP603.利用农杆菌介导方法转化烟草NC89.抗病性鉴定表明,转化1/2 CP和3/4 CP基因片段的转基因烟草均可获得抗病程度达到免疫的植株,而转化1/4CP的基因片段没有获得抗病植株.分子分析结果表明这种抗病性为RNA介导的抗病性,是转录后基因沉默的结果.研究表明,能够诱发RNA介导抗病性所需的PVY-CP基因的最短有效片段长度可能介于202和417 bp之间.这一研究结果对改进利用转录后基因沉默策略来防治植物病毒病害以及研究转录后基因沉默机制具有意义. 展开更多
关键词 马铃薯 Y病毒 CP基因部分片段 转基因烟草 rna介导抗病性 基因沉默
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hpRNA的茎环比例对RNA介导的病毒抗性产生的影响 被引量:7
15
作者 李云 宋云枝 +1 位作者 朱常香 温孚江 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期468-477,共10页
以马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因3′端50bp片段为hpRNA的茎,以pUC19不同长度的序列为hpRNA的环,构建了茎环比例分别为4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4和1∶8的植物表达载体。利用农杆菌介导法转化烟草品种NC... 以马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因3′端50bp片段为hpRNA的茎,以pUC19不同长度的序列为hpRNA的环,构建了茎环比例分别为4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4和1∶8的植物表达载体。利用农杆菌介导法转化烟草品种NC89,获得了多种转基因植株。室内抗病性检测发现:不同茎环比例的hpRNA介导的病毒抗性效率不同;茎环比例为4∶1、2∶1和1∶1时效率较高,抗性植株的比例达60%左右;随着环长度的逐渐增加,抗性植株的比例逐渐降低;当茎环比例为1∶8时,抗性植株的比例仅为9.52%。Southern blot分析结果表明:外源基因已整合于烟草的基因组中,且转基因植株的抗病性与转基因的拷贝数之间无明显的相关性。Northern blot分析结果表明:目的片段转录产物的积累量与植株的抗病性呈负相关,证明所获得的抗病性是RNA介导的。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒坏死株系(PVY^N) rna介导的病毒抗性 HPrna 茎环比例
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最新应用siRNA介导的基因敲除
16
作者 Andreas Franke 《生物技术世界》 2009年第6期44-45,共2页
1研究背景及目的 FLT3(fms样酪氨酸激酶3)是已知的酪氨酸激酶受体,在常规的造血中起着非常重要的作用。由于它与大量的疾病有关,包括极性粒细胞白血病。因此它是肿瘤研究的一个非常重要的目标。目前研究的目的是通过RNA干扰来减少F... 1研究背景及目的 FLT3(fms样酪氨酸激酶3)是已知的酪氨酸激酶受体,在常规的造血中起着非常重要的作用。由于它与大量的疾病有关,包括极性粒细胞白血病。因此它是肿瘤研究的一个非常重要的目标。目前研究的目的是通过RNA干扰来减少FLT3的表达,使用FLT3基因表达的相对定量来证实FLT3被敲除并检测处理细胞中其他基因的效应。 展开更多
关键词 基因敲除 rna介导 酪氨酸激酶受体 SI 应用 rna干扰 相对定量 基因表达
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慢病毒介导的RNA干扰鉴定RIG-Ⅰ、MDA-5和TLR3在猪上皮细胞识别RNA病毒中的作用
17
作者 Linda Hüsser 于琳琳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第8期220-220,共1页
病原体识别受体是宿主抗病毒免疫反应所必需的,这些特异的受体能识别保守的病毒化合物并诱导Ⅰ型干扰素(IFN)和促炎细胞因子。本试验在猪细胞系PK-15中研究了RIG-Ⅰ、MDA-5和TLR3在IFN-β对古典猪瘟病毒(CSFV)、口蹄疫病毒(FMDV)、水泡... 病原体识别受体是宿主抗病毒免疫反应所必需的,这些特异的受体能识别保守的病毒化合物并诱导Ⅰ型干扰素(IFN)和促炎细胞因子。本试验在猪细胞系PK-15中研究了RIG-Ⅰ、MDA-5和TLR3在IFN-β对古典猪瘟病毒(CSFV)、口蹄疫病毒(FMDV)、水泡性口炎病毒(VSV)和A型流感病毒(IAV)的识别中的作用。本研究鉴定了猪基因特异性小干扰RNA序列,并用慢病毒(LV)系统来表达相应的短发夹RNA,构建了基因表达下调细胞系,并检测基因表达下调水平与时间和IFN-β刺激的相关性。试验细胞经多次传代,报告基因eGFP的表达和目的基因的RNA减少水平都是稳定的,而后者相对变化较大。IFN-β诱导干扰素应答基因(如RIG-Ⅰ)表达,但其水平在试验细胞系中仍低于对照细胞。病毒介导的IFN-βmRNA反应结果表明,在PK-15细胞中,口蹄疫病毒的识别完全是由MDA-5介导的,而VSV和IAV主要由RIG-Ⅰ检测到,MDA-5也起到一定作用,CSFV是通过MDA-5,RIG-Ⅰ和TLR3识别。 展开更多
关键词 古典猪瘟病毒 口蹄疫病毒 慢病毒介导rna干扰 IFN-Β 病原体识别受体
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翻译和非翻译马铃薯Y病毒外壳蛋白基因介导的抗病性比较 被引量:26
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作者 郭兴启 温孚江 +4 位作者 宋云枝 孟祥兵 吕士恩 郑成超 朱常香 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期360-367,共8页
利用RT PCR方法克隆获得马铃薯Y病毒烟草叶脉坏死株系 (PVYN)的可翻译和不可翻译外壳蛋白 (CP)基因 ,并分别插入 pROKⅡ质粒中获得重组双元表达载体。通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens) 介导的基因转化方法 ,将可翻译和不可翻译... 利用RT PCR方法克隆获得马铃薯Y病毒烟草叶脉坏死株系 (PVYN)的可翻译和不可翻译外壳蛋白 (CP)基因 ,并分别插入 pROKⅡ质粒中获得重组双元表达载体。通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens) 介导的基因转化方法 ,将可翻译和不可翻译的PVYN CP基因分别导入烟草栽培品种NC89叶片组织中 ,得到抗卡那霉素的再生植株。对所得到的抗卡那霉素的再生苗进行PCR检测表明 ,被导入可翻译和不可翻译CP基因的植株分别占卡那霉素抗性植株的 95 %和 98%。攻毒实验表明 ,两种类型的转基因烟草对PVYN 的抗病性具有相似性 ,其表现型为 :免疫、抗病和感病。免疫型转基因植株的抗病性不受接种物类型及其剂量的影响。Southern印迹杂交结果显示 ,目的基因已经整合到烟草基因组中。Northern印迹杂交证明 ,两种类型的CP基因都已在RNA水平上得到了表达 ,但细胞内RNA的积累量与转基因植株的抗病强度成负相关。Western印迹杂交表明 ,在表达不可翻译PVYN CP基因的转基因植株内未检测到CP蛋白 ,而在导入可翻译的PVYN CP基因的植株内检测到了CP蛋白 ,且CP蛋白含量与抗病性不存在正相关。本研究结果证明 ,表达可翻译与不可翻译PVYN CP基因的转基因烟草对PVYN 的抗病性均为RNA介导的抗病性。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 外壳蛋白基因 转基因烟草 rna介导 抗病性 CP 翻译
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基因沉默番木瓜环斑病毒复制酶基因(PRSV-Nib)获得抗病毒病番木瓜的研究
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作者 吴清铧 贾瑞宗 +5 位作者 郭静远 杨牧之 胡玉娟 郝志刚 赵辉 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期837-846,共10页
番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistanc... 番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistance,PDR)”的抗病育种策略获得成功广泛应用。然而依赖于序列同源性的抗病性与病毒突变导致多样性增加之间的矛盾成为番木瓜育种科学家的新挑战。本研究拟采用RNAi策略针对复制酶(nuclear inclusion b.Nib)获得广谱抗PRSV番木瓜新种质。通过团队已建立的胚性愈伤诱导-农杆菌介导转化-再生苗诱导的番木瓜遗传转化体系,共获得经过抗性筛选的再生苗52株,通过特异性PCR进行筛选共计获得24株转基因阳性植株。通过对T0代田间自然发病试验中,转基因番木瓜株系抗病性明显高于非转基因对照,其中NibB5-2田间抗病性最优。通过hiTAIL-PCR方法确定NibB5-2插入位点位于第2号染色体supercontig_30的1976766的位置。T1代接种试验中,无病毒积累且无发病症状,初步确认具有良好的病毒抗性,为番木瓜抗病育种提供新思路。 展开更多
关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 Nib基因 rna介导的病毒抗性
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CP基因3'端短片段介导的对马铃薯Y病毒的抗性 被引量:19
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作者 竺晓平 朱常香 +3 位作者 宋云枝 温孚江 刘红梅 李向东 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1153-1158,共6页
目的探明马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVYN)CP基因3′端序列短片段的不同结构转基因诱导转基因植物产生RNA介导抗性的有效性。方法以PVYN的CP基因cDNA3′端202bp片段构建非翻译的正向重复和反向重复结构的植物表达载体转化烟草。结果攻毒试... 目的探明马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVYN)CP基因3′端序列短片段的不同结构转基因诱导转基因植物产生RNA介导抗性的有效性。方法以PVYN的CP基因cDNA3′端202bp片段构建非翻译的正向重复和反向重复结构的植物表达载体转化烟草。结果攻毒试验表明前者没有一例转基因植株表现为抗病,而转化反向重复结构的转基因植株82.8%表现近似免疫的高度抗病型,Southern印迹杂交证明目的基因已整合到烟草基因组,Northern印迹杂交结果显示反向重复结构转基因植物的抗病性与RNA的表达量呈现负相关。结论抗病性是RNA介导的病毒抗性。3′端短片段诱导产生的转基因抗病株比例比5′端短片段诱导产生的高。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 rna介导的病毒抗性 DSrna rna沉默
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