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植物RNA沉默抗病机制与应用研究进展
1
作者 田文 谌婷 +3 位作者 刘清艳 张博森 郭惠珊 赵建华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期266-278,共13页
RNA沉默是真核生物基因表达调控的保守机制,在植物生长发育以及响应生物和非生物胁迫过程中发挥着非常重要的作用。跨界RNA沉默与种间RNA沉默为开发基于RNA沉默的作物病害防控体系提供了理论基础。本文概括了植物RNA沉默保守途径,归纳了... RNA沉默是真核生物基因表达调控的保守机制,在植物生长发育以及响应生物和非生物胁迫过程中发挥着非常重要的作用。跨界RNA沉默与种间RNA沉默为开发基于RNA沉默的作物病害防控体系提供了理论基础。本文概括了植物RNA沉默保守途径,归纳了RNA沉默在植物-病原互作研究中的代表性研究,阐述了基于RNA沉默开发的宿主诱导基因沉默、喷施诱导基因沉默和微生物诱导基因沉默技术的原理,以及应用研究现状,以期为开发基于RNA沉默的新型作物病害防控技术提供参考。 展开更多
关键词 rna沉默 跨界rna沉默 种间rna沉默 宿主诱导的基因沉默 喷施诱导的基因沉默 微生物诱导的基因沉默
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RNA结构对RNA沉默效率的影响
2
作者 赵建华 高峰 +1 位作者 刘清艳 郭惠珊 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期19-29,共11页
小RNA(small RNA,sRNA)介导的RNA沉默或RNA干扰(RNA silencing or RNA interference,RNAi)是真核生物基因表达调控的保守机制。内源或外源双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)被加工成sRNA,sRNA通过碱基互补配对识别靶标基因mRNA或DNA,... 小RNA(small RNA,sRNA)介导的RNA沉默或RNA干扰(RNA silencing or RNA interference,RNAi)是真核生物基因表达调控的保守机制。内源或外源双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)被加工成sRNA,sRNA通过碱基互补配对识别靶标基因mRNA或DNA,通过降解mRNA、抑制翻译或者DNA甲基化在转录后或者转录水平调控基因表达。由于sRNA作用靶标特异性,RNAi技术被广泛地应用于基因功能研究、生物医药、作物分子设计育种以及开发新型农药等领域。自然界中sRNA能够在不同物种间传递并发挥作用,这一现象为RNAi应用技术的开发提供了理论基础。研究发现,dsRNA诱导RNAi的效率受多种因素影响,例如长度、剂量以及施用方式等。在细胞中,RNA结构的复杂性决定了其功能的多样性。本文概述了基于RNAi的作物病害防控技术的原理,包括宿主诱导的基因沉默(host-induced gene silencing,HIGS)技术、喷施诱导的基因沉默(spray-induced gene silencing,SIGS)技术和微生物诱导的基因沉默(microbe-induced gene silencing,MIGS)技术;总结了靶标RNA和sRNA结构影响RNAi效率的实验证据,以期加深对RNA结构影响RNAi效率地理解,为靶标筛选以及dsRNA设计提供经验,为开发高效RNAi技术提供参考;最后归纳了RNA结构检测和预测的代表性方法,为辅助设计高效诱导RNAi的dsRNA提供方法。 展开更多
关键词 小rna rna沉默 双链rna rna结构
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抑制RNA沉默现象的机理及其在生物医学领域内的应用 被引量：1
3
作者 张义玲 魏旭斌 +1 位作者 蔡荣 钱程 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1246-1254,共9页
RNA沉默在机体防御病毒入侵和调控基因表达中发挥着重要的作用,目前已成为一种有效的工具应用于基因功能研究和疾病治疗等领域.RNA沉默现象普遍存在于真核细胞中,然而在宿主与病毒漫长的进化过程中,病毒已经演化出一系列逃逸或抑制RNA... RNA沉默在机体防御病毒入侵和调控基因表达中发挥着重要的作用,目前已成为一种有效的工具应用于基因功能研究和疾病治疗等领域.RNA沉默现象普遍存在于真核细胞中,然而在宿主与病毒漫长的进化过程中,病毒已经演化出一系列逃逸或抑制RNA沉默作用的方法和途径,使RNA沉默效果显著降低,另一方面,哺乳动物体细胞自身也存在调节RNA沉默功能从而使生命活动的调节更加精细完善.为了使RNA沉默发挥它的潜在效应,人们设计出一系列的策略针对抑制RNA沉默效应以达到弱化抑制的目的.全面总结抑制RNA沉默机制及其应用,从而使人们充分认识到使用RNA沉默技术时应考虑到存在的不利因素. 展开更多
关键词 rna沉默抑制现象 rna沉默 病毒 基因治疗
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植物RNA沉默的分子机制研究进展 被引量：2
4
作者 王鹏 赵旵军 朱国萍 《生命科学》 CSCD 2008年第5期784-789,共6页
RNA沉默(RNA silencing)是真核生物中的一种抵抗外源遗传因子(病毒、转座子或转基因)及调控基因表达的防御机制。参与植物RNA沉默的酶及蛋白质主要包括6种RNA依赖的RNA聚合酶、4种Dicer-like(DCL)核酸内切酶和10种Argonautes蛋白。植物... RNA沉默(RNA silencing)是真核生物中的一种抵抗外源遗传因子(病毒、转座子或转基因)及调控基因表达的防御机制。参与植物RNA沉默的酶及蛋白质主要包括6种RNA依赖的RNA聚合酶、4种Dicer-like(DCL)核酸内切酶和10种Argonautes蛋白。植物中4条RNA沉默途径分别由微小RNA (miRNAs)和3种小干扰RNA(siRNAs)介导,包括反式作用siRNAs(ta-siRNAs)、天然反义siRNAs(nat- siRNAs)和异染色质siRNAs(hc-siRNAs)。在植物RNA沉默的系统性传播中,由DCL4或DCL2将dsRNAs裁剪为次级siRNAs,以放大RNA沉默信号和增强沉默效应。 展开更多
关键词 rna沉默 rna依赖的rna聚合酶 Dicer-like核酸内切酶 Argonaute蛋白 微小rna 小干扰rna 沉默途径 系统性rna沉默
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真菌RNA沉默机制研究进展 被引量：1
5
作者 李彦鹏 邱立友 《生命科学研究》 CAS CSCD 2015年第6期547-553,共7页
RNA沉默(RNA silencing)或者RNA干扰(RNA interference)是由dsRNA(double-stranded RNA)介导的序列特异性降解或者抑制与起始dsRNA一样或者高度相似RNA的一种机制,在进化上存在保守性,具有基因调控、防御外源核苷酸入侵的功能。真菌RNA... RNA沉默(RNA silencing)或者RNA干扰(RNA interference)是由dsRNA(double-stranded RNA)介导的序列特异性降解或者抑制与起始dsRNA一样或者高度相似RNA的一种机制,在进化上存在保守性,具有基因调控、防御外源核苷酸入侵的功能。真菌RNA沉默依据sRNA来源不同,分为多种途径,主要有quelling、qiRNA、MSUD。参与不同途径的主要有Argonaute、Dicer、RdRP3种核心蛋白质,并且在不同真菌中数目变化很大,反映出真菌RNA沉默的多样性。有些真菌的RNA沉默在进化的过程中丢失,在抗病毒机制上进化出"互换"的killer系统。 展开更多
关键词 真菌rna沉默 小rna 异染色质形成 rna沉默蛋白质 抗病毒
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非编码RNA和RNA沉默 被引量：1
6
作者 毛新国 董玉琛 《生物技术通报》 CAS CSCD 2004年第1期6-12,22,共8页
生物体内存在大量的非编码RNA ,它们形态各异 ,功能也千差万别 ,在生物的生长、发育、分化进程中扮演着不同的角色 ,尤其是siRNA ,它是RNA沉默的诱因。RNA沉默是真核生物特有的现象 ,它需要一系列因子的参与 ,其中RNA依赖性的RNA聚合酶... 生物体内存在大量的非编码RNA ,它们形态各异 ,功能也千差万别 ,在生物的生长、发育、分化进程中扮演着不同的角色 ,尤其是siRNA ,它是RNA沉默的诱因。RNA沉默是真核生物特有的现象 ,它需要一系列因子的参与 ,其中RNA依赖性的RNA聚合酶是沉默起始的关键 ,Dicer酶是形成siRNA的基础 ,而RNA沉默诱导复合体 (RSIC)等是发生RNA沉默“链式反应” 展开更多
关键词 非编码rna rna沉默 小干扰rna rna依赖性rna聚合酶 rna沉默诱导复合体
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应用RNA沉默技术获取抗黄瓜花叶病毒(CMV)和烟草花叶病毒(TMV)转基因烟草 被引量：10
7
作者 牛颜冰 王德富 +2 位作者 姚敏 闫钊 由文鑫 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期484-488,共5页
RNA沉默是迄今最为有效的抗病毒策略,利用该策略不但能获得免疫转基因植株,且所得植株不易与其他病毒基因重组或异源包壳、生物安全性较高。将本实验室已构建的携带有烟草花叶病毒(TMV)部分移动蛋白基因(ΔMP)和黄瓜花叶病毒(CMV)部分... RNA沉默是迄今最为有效的抗病毒策略,利用该策略不但能获得免疫转基因植株,且所得植株不易与其他病毒基因重组或异源包壳、生物安全性较高。将本实验室已构建的携带有烟草花叶病毒(TMV)部分移动蛋白基因(ΔMP)和黄瓜花叶病毒(CMV)部分复制酶基因(ΔRep)反向重复结构的植物表达载体pBIN438-MP-Rep(i/r),用农杆菌浸润法转化普通烟草品种K326,共得196株转化植株,经卡那霉素筛选和PCR检测发现128株为阳性转基因植株;PCR-Southern和RT-PCR分析表明外源基因已整合到烟草基因组并在转录水平上得到表达;ELISA结果显示20.3%的转基因植株对CMV和TMV复合侵染表现免疫性。本结果为利用RNA沉默技术进行植物抗多种病毒育种提供重要数据,为防治其他多种病毒复合侵染提供借鉴。 展开更多
关键词 rna沉默 黄瓜花叶病毒 烟草花叶病毒 双病毒抗性
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RNA沉默机制及其抗病毒应用 被引量：25
8
作者 牛颜冰 青玲 周雪平 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第2期76-79,共4页
RNA沉默是发生在植物 (转录后基因沉默或共抑制 )、动物 (RNA干扰 )和真菌 (消除作用 )等真核生物细胞中的一种对外源遗传因子 (转座子、转基因或病毒 )的特异性和高效率的降解机制。随着对植物病毒分子遗传学认识的加深和对寄主防御系... RNA沉默是发生在植物 (转录后基因沉默或共抑制 )、动物 (RNA干扰 )和真菌 (消除作用 )等真核生物细胞中的一种对外源遗传因子 (转座子、转基因或病毒 )的特异性和高效率的降解机制。随着对植物病毒分子遗传学认识的加深和对寄主防御系统研究的深入 ,发现了许多控制植物病毒病的方法 ,不过迄今为止最为成功的是通过RNA沉默机制获取抗病毒工程植株。在陈述了RNA沉默机制的研究最新进展基础上 ,提出了如何充分利用该机制进行植物抗病毒转基因研究。 展开更多
关键词 rna沉默 植物 抗病毒 基因沉默 rna干扰
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RNA沉默—新型的植物病毒病害防治策略 被引量：8
9
作者 牛颜冰 郭失迷 +2 位作者 宋艳波 雷万钧 申林炎 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 2005年第2期47-50,共4页
植物RNA沉默(RNAsilencing)是植物本身固有的一种抗病毒防御系统,是对病毒在复制过程中形成双链RNA(dsRNA)的特殊反应。RNA沉默介导的dsRNA干涉病毒侵染转基因抗病毒有其不足,几种体外生产dsRNA的抗病毒体系能弥补这一不足,它们与转基... 植物RNA沉默(RNAsilencing)是植物本身固有的一种抗病毒防御系统,是对病毒在复制过程中形成双链RNA(dsRNA)的特殊反应。RNA沉默介导的dsRNA干涉病毒侵染转基因抗病毒有其不足,几种体外生产dsRNA的抗病毒体系能弥补这一不足,它们与转基因表达病原RNA不同,但仍然依赖RNA沉默机制来获取病原抗性。综述了近年来发展起来的各种启动RNA沉默的dsRNA产生策略。 展开更多
关键词 rna沉默 双链rna 抗病毒
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植物病毒编码RNA沉默抑制子的研究进展 被引量：5
10
作者 王献兵 张凌娣 +2 位作者 李大伟 韩成贵 于嘉林 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期31-38,共8页
RNA沉默是真核生物用来抵抗病毒入侵的一种普遍而又古老的防御机制,而病毒在进化过程中也相应地产生了一些与之抗衡的功能,其中编码沉默抑制子就是对抗RNA沉默的有效策略。它们分别能够在不同阶段,以不同的方式干扰来自于寄主的RNA沉默... RNA沉默是真核生物用来抵抗病毒入侵的一种普遍而又古老的防御机制,而病毒在进化过程中也相应地产生了一些与之抗衡的功能,其中编码沉默抑制子就是对抗RNA沉默的有效策略。它们分别能够在不同阶段,以不同的方式干扰来自于寄主的RNA沉默,从而有效地建立侵染。本文主要针对目前已经发现的由植物病毒编码RNA沉默抑制子的作用特征、鉴定方法以及作用副效应进行综述,并讨论了RNA沉默抑制子的研究及应用前景。 展开更多
关键词 rna沉默 抗病毒 抑制子 进化
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瞬时表达比较马铃薯X病毒CP基因3种结构对RNA沉默的诱导效果 被引量：5
11
作者 竺晓平 刘金亮 +3 位作者 田延平 于晓庆 李向东 刘红梅 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期1-4,共4页
RNA沉默是植物抵御病毒侵染的一种防卫机制,病原来源的抗性(pathogen-derived resistance,PDR)被认为是通过RNA沉默起作用的.转化的核酸片段在基因组中的位置、长短和不同排列结构等均影响RNA沉默的效率.用全长马铃薯X病毒(PVX)CP基因... RNA沉默是植物抵御病毒侵染的一种防卫机制,病原来源的抗性(pathogen-derived resistance,PDR)被认为是通过RNA沉默起作用的.转化的核酸片段在基因组中的位置、长短和不同排列结构等均影响RNA沉默的效率.用全长马铃薯X病毒(PVX)CP基因构建非翻译的正义、反义和反向重复结构转基因的植物表达载体,通过农杆菌渗入法瞬时表达测试了这些转基因对RNA介导抗性的诱导效率和有效性.结果表明,反向重复的PVXCP是更为有效的RNA沉默诱导因子,同时也证明让目的基因在受试植物中瞬时表达,在转化植物之前能比较快速地检测转基因的表达情况以及表达产物的功能,从而节约时间和资源,并减少盲目性. 展开更多
关键词 rna沉默 马铃薯X病毒(PVX) 外壳蛋白(CP)基因 农杆菌渗入 抗性
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RNA沉默技术及其在植物中的应用 被引量：10
12
作者 朱剑 余潮 朱友林 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期22-28,共7页
RNA沉默是广泛存在于生物中的一种古老现象,是生物抵抗异常DNA的一种保护机制,同时在生物生长发育过程中扮演着基因表达调控的角色。文章对RNA沉默研究中的几个热点问题进行了介绍,按RNA沉默持续时间的不同对其在植物中应用的方法进行... RNA沉默是广泛存在于生物中的一种古老现象,是生物抵抗异常DNA的一种保护机制,同时在生物生长发育过程中扮演着基因表达调控的角色。文章对RNA沉默研究中的几个热点问题进行了介绍,按RNA沉默持续时间的不同对其在植物中应用的方法进行了分析,并重点论述了RNA沉默在植物功能基因组研究、作物品质改良以及抗病毒植物培育等方面的应用及其发展前景。 展开更多
关键词 rna沉默 rna干扰 功能基因组 作物品质改良 抗病毒植物
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RNA沉默与植物病毒 被引量：13
13
作者 郭兴启 朱常香 宋云枝 《生命科学》 CSCD 2002年第1期9-13,共5页
植物中 ＲＮＡ沉默（ＲＮＡ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ）亦称为转录后基因沉默（ＰＴＧＳ）或共抑制，是植物抵抗外来核酸（转座子、转基因或病毒）入侵；并保护自身基因组完整性的一种防御机制。ＲＮＡ沉默是近十年来发现的植物界中普遍存在... 植物中 ＲＮＡ沉默（ＲＮＡ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ）亦称为转录后基因沉默（ＰＴＧＳ）或共抑制，是植物抵抗外来核酸（转座子、转基因或病毒）入侵；并保护自身基因组完整性的一种防御机制。ＲＮＡ沉默是近十年来发现的植物界中普遍存在的现象，已成为植物分子生物学领域的一个新的研究方向。对ＲＮＡ沉默特点和机制的研究表明，植物病毒与（转基因）植物内发生的 ＲＮＡ沉默有着密切的联系。作者从病毒对ＲＮＡ沉默的诱导、抑制、防御等方面，简述了 ＲＮＡ沉默与病毒的关系；并对病毒载体所诱导的 ＲＮＡ沉默在植物发育和基因组功能分析等方面的应用价值进行了讨论。 展开更多
关键词 rna沉默 植物病毒 病毒诱导 基因沉默
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烟草CN基因的RNA沉默载体构建与功能分析 被引量：4
14
作者 张改云 熊腾飞 +2 位作者 马有志 郭家明 陈学平 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 2010年第4期77-82,共6页
黄花烟HZNH是我国特有的地方种质资源,接种烟草花叶病毒(TMV)后表现出超敏反应和系统获得性抗性。目前,已从HZNH中克隆到1个同TMV抗病基因N基因同源的基因,命名为CN基因。为方便利用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术研究烟草CN基因的... 黄花烟HZNH是我国特有的地方种质资源,接种烟草花叶病毒(TMV)后表现出超敏反应和系统获得性抗性。目前,已从HZNH中克隆到1个同TMV抗病基因N基因同源的基因,命名为CN基因。为方便利用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术研究烟草CN基因的功能,构建了用于RNAi的植物转化载体pPZYICN。通过农杆菌介导的叶盘法转化含N基因的烟草Xanthi-nc,获得了32株转基因植株,TMV接种后,转基因Xanthi-nc没有丧失对TMV的抗性,说明CN基因的RNA干扰载体不能沉默N基因的表达,故CN基因可能是HZNH中特有的抗性基因,从而为获得新的烟草抗病基因及抗病品种奠定基础。 展开更多
关键词 CN基因 烟草花叶病毒 rna沉默
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植物病毒抑制子抑制RNA沉默的机制及生物学应用 被引量：4
15
作者 牛颜冰 青玲 +2 位作者 王德富 姚敏 郭平毅 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第1期137-142,共6页
RNA沉默(RNA silencing)是真核生物细胞内保守的和序列特异的RNA降解系统。高等植物中病毒诱导的、以降解病毒为目标的RNA沉默是一种寄主适应性防御系统。为了对该系统进行防御,植物病毒已进化形成了在RNA沉默的不同阶段起作用,并最终... RNA沉默(RNA silencing)是真核生物细胞内保守的和序列特异的RNA降解系统。高等植物中病毒诱导的、以降解病毒为目标的RNA沉默是一种寄主适应性防御系统。为了对该系统进行防御,植物病毒已进化形成了在RNA沉默的不同阶段起作用,并最终战胜寄主沉默反应的病毒抑制蛋白。本文讨论了现今鉴定和初步分析抑制子的方法以及抑制子的作用模式;同时对植物沉默抑制子的生物学应用包括用抑制子解析RNA沉默途径、用抑制子增强外源蛋白表达水平以及抑制子引起发育缺陷等进行了讨论。 展开更多
关键词 rna沉默 病毒抑制子 生物学应用
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抗水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的双价RNA沉默载体的构建 被引量：4
16
作者 徐秋芳 张金凤 +2 位作者 张晓霞 熊如意 周益军 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第2期290-295,共6页
为利用RNAi技术获取抗水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)植株,分别针对两种病毒的S6和S10基因构建RNA沉默载体。采用重组PCR方法将RBSDV S6基因片段(R6)和SRBSDVS6基因片段(SR6)进行融合,获得600 bp的R6-SR6融合基... 为利用RNAi技术获取抗水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)植株,分别针对两种病毒的S6和S10基因构建RNA沉默载体。采用重组PCR方法将RBSDV S6基因片段(R6)和SRBSDVS6基因片段(SR6)进行融合,获得600 bp的R6-SR6融合基因;将RBSDV S10基因片段(R10)和SRBSDV S10基因片段(SR10)进行融合,获得600 bp的R10-SR10融合基因。融合基因以反向重复的方式连入pBS载体,并定向插入到pCAMBIA1301载体上,获取了含有发夹结构的植物表达载体pCAMBIA1301-hp(R6-SR6)和pCAMBIA1301-hp(R10-SR10)。抗RBSDV和SRBSDV RNA沉默载体的构建为利用RNA沉默进行植物抗病毒研究奠定了基础。 展开更多
关键词 水稻黑条矮缩病毒 南方水稻黑条矮缩病毒 重组PCR 融合基因 rna沉默载体
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RNA沉默:基因组的免疫系统 被引量：7
17
作者 钟苗 雷小勇 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期83-85,90,共4页
基因组是病毒入侵的敏感作用靶点。近年来发现的RNA沉默是普遍存在于真核生物的一种防御机制。RNA沉默作为基因组的免疫系统有几个特点 :特异的作用于外来核酸 ;扩增外来核酸并产生强大的效应。后一特性在分子水平正得以揭示。近来研究... 基因组是病毒入侵的敏感作用靶点。近年来发现的RNA沉默是普遍存在于真核生物的一种防御机制。RNA沉默作为基因组的免疫系统有几个特点 :特异的作用于外来核酸 ;扩增外来核酸并产生强大的效应。后一特性在分子水平正得以揭示。近来研究表明 ,哺乳动物细胞RNAi介导的抗病毒治疗表现出了良好的应用前景。 展开更多
关键词 rna沉默 基因组 免疫系统 抗病毒
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植物RNA沉默机制的研究进展 被引量：3
18
作者 赵庆臻 赵双宜 夏光敏 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第1期104-110,共7页
RNA沉默是真核生物中普遍存在的抵抗病毒复制表达、抑制转座子转座及调控基因表达的监控机制。植物中的RNA沉默 (转录水平的基因沉默PTGS)在RdRP的作用、transitiveRNAi的双向延伸、沉默效应的系统性传播等方面与动物中有所不同 ,且植... RNA沉默是真核生物中普遍存在的抵抗病毒复制表达、抑制转座子转座及调控基因表达的监控机制。植物中的RNA沉默 (转录水平的基因沉默PTGS)在RdRP的作用、transitiveRNAi的双向延伸、沉默效应的系统性传播等方面与动物中有所不同 ,且植物中的内源性miRNA在数量和种类上也更具多样性。 展开更多
关键词 rna沉默 转录后基因沉默 rna指导的rna聚合酶 小干扰rna MIrna
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马铃薯卷叶病毒P0蛋白抑制RNA沉默及其与AGO蛋白的相互作用 被引量：3
19
作者 霍晓辉 申永梅 +1 位作者 刘国富 曹雪松 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期70-76,共7页
马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)P0是由开放阅读框1(ORF1)所编码,利用农杆菌介导的瞬时表达技术渗透注射转绿色荧光蛋白(GFP)基因的16c烟草叶片发现PLRV-P0能够抑制由GFP mRNA引起的基因沉默,结果表明PLRV-P0是马铃薯卷叶... 马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)P0是由开放阅读框1(ORF1)所编码,利用农杆菌介导的瞬时表达技术渗透注射转绿色荧光蛋白(GFP)基因的16c烟草叶片发现PLRV-P0能够抑制由GFP mRNA引起的基因沉默,结果表明PLRV-P0是马铃薯卷叶病毒编码的一个基因沉默抑制因子。通过序列分析发现PLRV-P0基因序列中含有两个重复的WG基序,我们将PLRV-P0基因序列中第87位和第140位的色氨酸(W)点突变为丙氨酸(A)(命名为P0WA),构建植物表达载体pCAMBIA1300-CE-P0,pCAMBIA1300-CE-P0WA,农杆菌渗透注射本氏(Nicotiana benthamiana)烟草叶片,通过荧光显微镜观察发现PLRV-P0和AGO共同注射后有绿色荧光出现而PLRV-P0WA和AGO共同注射后则没有绿色荧光出现。研究结果初步表明,PLRV-P0能够和AGO蛋白发生相互作用,重复的WG基序是其与AGO蛋白相互作用的关键氨基酸。 展开更多
关键词 马铃薯卷叶病毒(PLRV) P0蛋白 抑制rna沉默 AGO蛋白 相互作用
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甘蔗线条花叶病毒RNA沉默抑制子的寄主互作蛋白鉴定 被引量：2
20
作者 冯小艳 王俊刚 +4 位作者 王文治 沈林波 赵婷婷 冯翠莲 张树珍 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2022年第6期1231-1239,共9页
甘蔗线条花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)是引起甘蔗花叶病的一种主要病原。SCSMV编码的P1蛋白是RNA沉默抑制子,在SCSMV抑制寄主的RNA沉默防御中发挥关键作用,但其作用机制尚未清楚。与寄主蛋白互作是RNA沉默抑制子发挥... 甘蔗线条花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)是引起甘蔗花叶病的一种主要病原。SCSMV编码的P1蛋白是RNA沉默抑制子,在SCSMV抑制寄主的RNA沉默防御中发挥关键作用,但其作用机制尚未清楚。与寄主蛋白互作是RNA沉默抑制子发挥其抑制作用的主要途径之一,因此鉴定与病毒RNA沉默抑制子互作的寄主蛋白是研究抑制子作用机制的一个重要方法。为探究SCSMVP1抑制寄主RNA沉默的机制,本研究首先将SCSMVP1基因连接到质粒pGBKT7上构建诱饵质粒pGBKT7-P1,然后对pGBKT7-P1进行毒性和自激活检测,最后以pGBKT7-P1为诱饵,采用酵母双杂交技术从甘蔗cDNA文库中筛选与P1互作的寄主蛋白。结果显示,成功构建pGBKT7-P1诱饵质粒。将pGBKT7-P1诱饵质粒转入Y2HGold酵母菌株后,酵母菌株在SD/-Trp平板及液体培养基中生长良好,表明pGBKT7-P1诱饵质粒对Y2HGold酵母菌株无毒性。含pGBKT7-P1诱饵质粒的酵母菌株在SD/-Trp/X-α-Gal平板上长出白色菌落未变蓝,在SD/-Trp/X-α-Gal/AbA和SD/-Trp/-Leu/X-α-Gal/AbA平板上无菌落生长,表明pGBKT7-P1诱饵质粒无自激活活性。用pGBKT7-P1诱饵质粒对甘蔗cDNA文库进行筛选,经SD/-Trp/-Leu/X-α-Gal/AbA平板筛选1次及SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade/X-α-Gal/AbA平板筛选3次后,获得42个阳性酵母克隆,提取阳性酵母质粒并导入大肠杆菌中扩大培养,经测序及blastx比对分析,获得13个可能与SCSMV P1互作的寄主甘蔗蛋白,分别是生长素应答蛋白IAA1、IAA15,转录因子NAC、GATA4、OFP4,真核翻译起始因子eIF5A,分子伴侣DnaJ,辅分子伴侣SBA1,重金属相关异戊二烯化植物蛋白HIPP35,mec-8和unc-52蛋白同系物抑制子SMU2,外膜孔蛋白OEP24,及2个未表征蛋白。基于这些蛋白的功能,推测P1可能通过与寄主蛋白互作来调控寄主防御反应相关基因的表达,和/或通过与寄主蛋白互作来影响寄主RNA沉默相关蛋白的合成、加工或转运,从而发挥其RNA沉默抑制子的功能。研究结果为后续深入解析P1抑制RNA沉默的作用机制奠定了重要基础。 展开更多
关键词 甘蔗线条花叶病毒 rna沉默抑制子 P1蛋白 互作蛋白
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