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慢病毒载体介导RNA干扰抑制大肠癌细胞HT29的酪氨酸激酶受体RON基因的表达
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作者 毛联钢 李克强 +4 位作者 卓文莹 戴晓宇 余永明 乐东海 冯伟云 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期935-939,I0003,共6页
目的研究慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)对大肠癌细胞RON基因的干扰效率,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株。方法应用实时聚合酶链反应(PCR)检测大肠癌细胞DLD-1、HCT116、LOVO、RKO、SW480、HT29的RONmRNA表达情况,筛选出表达丰度能满足R... 目的研究慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)对大肠癌细胞RON基因的干扰效率,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株。方法应用实时聚合酶链反应(PCR)检测大肠癌细胞DLD-1、HCT116、LOVO、RKO、SW480、HT29的RONmRNA表达情况,筛选出表达丰度能满足RNAi的大肠癌靶细胞HT29。根据人RON基因序列,构建4种慢病毒载体质粒pGCSIL/RON-短发夹RNA(shRNA),转染包装细胞293T,获得4种重组慢病毒pGCSIL/RON-shRNA,分别感染HT29细胞。应用实时PCR检测各组HT29细胞RONmRNA表达情况,筛选出RON干扰效率最高的一种shRNA慢病毒载体质粒,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株HT29/RON-shRNA。结果 DLD-1、HCT116、RKO、SW480、HT29细胞RON表达丰度能满足RNAi的需要,选择HT29细胞作为RNAi的靶细胞。阴性对照病毒感染的细胞样品相对正常未感染病毒的细胞目的基因的相对表达水平为(94±5)%,RONshRNA-1靶点病毒感染的细胞为(86±5)%,RONshRNA-2靶点病毒感染的细胞为(67±6)%,RONshRNA-3靶点病毒感染的细胞为(63±6)%,RONshRNA-4靶点病毒感染的细胞为(30±8)%,RONshRNA-4靶点病毒感染的细胞的表达水平显著低于其他细胞(P值均<0.01),其对目的基因的沉默效果达到(70±8)%。结论慢病毒介导RNAi能显著抑制大肠癌细胞HT29的RON基因的表达,慢病毒载体介导的RNAi是一种高效的"基因沉默"的手段。 展开更多
关键词 ron ht29细胞 rna干扰 慢病毒载体
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慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因对大肠癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响
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作者 魏芹 何文静 +3 位作者 陈少卿 余娜莎 黎军和 熊建萍 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期463-467,共5页
目的探讨慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因表达，对大肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长及放射敏感性的影响。方法选取36只BALB／c（nu／nu）裸鼠，按随机区组法分为空白对照组、阴性对照组及实验组，将HT-29细胞接种于裸鼠，建立皮下移... 目的探讨慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因表达，对大肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长及放射敏感性的影响。方法选取36只BALB／c（nu／nu）裸鼠，按随机区组法分为空白对照组、阴性对照组及实验组，将HT-29细胞接种于裸鼠，建立皮下移植瘤裸鼠模型，观察裸鼠体重及瘤体积的变化。RT-PCR、免疫组织化学分析LivinmRNA及蛋白表达的变化，原位末端标记法（TUNEL）法检测细胞凋亡的变化；瘤内注射生理盐水、空载慢病毒和干扰慢病毒，同时均给予10Gy6MVX射线照射，绘制裸鼠体重和移植瘤生长曲线。结果实验组体积抑瘤率为（50．04±0．07）％，瘤体重量明显减轻（F=4．85，P〈0．05），瘤重抑瘤率为（50．27±0．17）％。实验组LivinmRNA表达水平为（17．75±0．08）％，明显低于空白对照组的（67．60±0．05）％和阴性对照组的（68．54±0．03）％（F=89．97，P〈0．01）。实验组Livin蛋白表达水平为（36．00±3．40）％，明显低于空白对照组的（85．00±3．15）％和阴性对照组的（80．33±3．08）％（F=107．32，P〈0．01）。实验组凋亡率为（23．67±2．25）％，明显高于空白对照组的（5．00±1．50）％和阴性对照组的（8．33±1．82）％（F=56．94，P〈0．01）。与射线联合时，裸鼠移植瘤体积在分组之间总体存在差异（F=10．70，P〈0．01），实验组肿瘤体积变化小于阴性对照组和空白对照组（F=7．01—9．32，P〈0．01）。结论慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因表达能抑制大肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤的生长，并增加移植瘤对放疗的敏感性。 展开更多
关键词 慢病毒载体 rna干扰 LIVIN基因 HT-29细胞 裸鼠移植瘤
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