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RNAi沉默RON基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和耐药性的抑制作用 被引量：1
1
作者 毛联钢 李克强 +4 位作者 卓文莹 戴晓宇 余永明 冯伟云 乐东海 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期502-507,共6页
目的:探讨RNAi沉默酪氨酸激酶受体RON(recepteur d’origine nantais)基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和对抗肿瘤药物敏感性的影响。方法:构建RON基因的RNAi慢病毒载体Lv-RON-siRNA。Real-time PCR和Western blotting检测RON基因的沉默效率... 目的:探讨RNAi沉默酪氨酸激酶受体RON(recepteur d’origine nantais)基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和对抗肿瘤药物敏感性的影响。方法:构建RON基因的RNAi慢病毒载体Lv-RON-siRNA。Real-time PCR和Western blotting检测RON基因的沉默效率及RON蛋白表达水平;Transwell侵袭实验和ATP-TCA(ATP-tumor chemosensitivity assay)检测RON基因对HT-29细胞侵袭和对药物敏感性的影响。结果:慢病毒载体Lv-RON-siRNA感染HT-29细胞对RON基因的沉默效果达到70%。Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞侵袭力较对照组明显降低(0.97±0.072 vs 1.29±0.076,P<0.05)。Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouraci,5-FU)的IC90值和IC50值分别为(14.28±1.34)、(8.93±1.20)μg/ml,顺铂(cisplatin,DDP)的IC90值和IC50值分别为(1.91±0.22)、(0.64±0.07)μg/ml,均明显低于对照组(P<0.01)。结论:沉默RON基因表达能抑制HT-29细胞的侵袭力,提高细胞对5-FU和DDP的敏感性。 展开更多
关键词 ron基因 HT-29细胞 RNAI 侵袭 耐药
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反义核酸抑制RON基因表达对A549的体外作用(英文) 被引量：1
2
作者 潘铁成 徐利军 +6 位作者 李军 赵金平 陈涛 张霓 魏翔 潘友民 刘立刚 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第24期1-5,共5页
目的探讨针对人RON基因跨膜区段(RONm)反义核酸对肺癌细胞系A549活性和细胞增殖的抑制作用,研究以RONm为靶的肺癌基因治疗的可能性?方法将人RONm cDNA反向插入到真核表达载体pcDNA3.1中,转染肺癌细胞A549,利用ELISA检测细胞模型RON基因... 目的探讨针对人RON基因跨膜区段(RONm)反义核酸对肺癌细胞系A549活性和细胞增殖的抑制作用,研究以RONm为靶的肺癌基因治疗的可能性?方法将人RONm cDNA反向插入到真核表达载体pcDNA3.1中,转染肺癌细胞A549,利用ELISA检测细胞模型RON基因表达水平,同时利用MTT和细胞计数方法监测细胞生物学活性的变化。结果转染后的肺癌细胞RON基因表达量和细胞活性明显降低,并出现明显的细胞凋亡?结论RONm反义核酸明显抑制RON基因的表达,同时对肺癌细胞的生长有抑制作用,促进细胞凋亡? 展开更多
关键词 ron基因 反义核酸 反义 肺癌 抑制
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RON基因反义核酸真核表达载体的构建策略 被引量：1
3
作者 徐利军 潘铁成 +6 位作者 李军 赵金平 陈涛 张霓 魏翔 潘友民 刘立刚 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期291-294,共4页
目的构建RON基因跨膜区段(RONm)的反义核酸真核表达载体。方法用RTPCR技术,从人肺癌细胞提取的总RNA克隆RONmcDNA序列。然后酶切鉴定与测序分析得到RONm的T载体,再将RONm反向插入pcDNA3.1+中,酶切鉴定得到RONm反义真核表达载体。结果用R... 目的构建RON基因跨膜区段(RONm)的反义核酸真核表达载体。方法用RTPCR技术,从人肺癌细胞提取的总RNA克隆RONmcDNA序列。然后酶切鉴定与测序分析得到RONm的T载体,再将RONm反向插入pcDNA3.1+中,酶切鉴定得到RONm反义真核表达载体。结果用RTPCR亚克隆RONm,测序结果与GenBank的RONm相应序列(X70040)一致,阅读框无改变。构建出正确的RONm反义真核表达载体。结论成功构建RONm反义核酸真核表达载体,为进一步将RON基因反义核酸作为一种肺癌基因治疗方法的研究打下了分子生物学基础。 展开更多
关键词 ron基因 分子克隆 反义核酸类 真核表达载体
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反义核酸抑制RON基因表达对A549的体外作用 被引量：1
4
作者 徐利军 潘铁成 +6 位作者 赵金平 陈涛 张霓 李军 魏翔 潘友民 刘立刚 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期138-140,共3页
目的　探讨针对人RON基因跨膜区段(RONm)反义核酸对肺癌细胞系 A549 活性和细胞增殖的抑制作用,研究以RON基因为靶的肺癌基因治疗的可能性。方法　将人 RONm cDNA反向插入到真核表达载体 pcDNA3.1中,转染肺癌细胞A549,利用ELISA检测细... 目的　探讨针对人RON基因跨膜区段(RONm)反义核酸对肺癌细胞系 A549 活性和细胞增殖的抑制作用,研究以RON基因为靶的肺癌基因治疗的可能性。方法　将人 RONm cDNA反向插入到真核表达载体 pcDNA3.1中,转染肺癌细胞A549,利用ELISA检测细胞模型RON基因的表达水平,同时利用MTT方法监测细胞生物学活性的变化。结果　转染后的肺癌细胞 RON基因表达量和细胞活性明显降低,并出现明显的细胞凋亡。结论　RONm反义核酸明显抑制 RON基因的表达,同时对肺癌细胞的生长有抑制作用,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 反义核酸类 ron基因 肺癌
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肺癌组织中RON基因的表达及其临床意义(英文)
5
作者 徐利军 陈忠华 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第24期2949-2951,2956,共4页
目的研究RON基因在人肺癌组织及正常肺组织中的表达水平及其临床意义。方法用免疫组化SP法检测80例肺癌患者的库存标本和20例同期手术切除的正常肺组织中RON的表达,RON基因表达与临床病理、预后之间的关系。结果RON基因在肺癌中表达的... 目的研究RON基因在人肺癌组织及正常肺组织中的表达水平及其临床意义。方法用免疫组化SP法检测80例肺癌患者的库存标本和20例同期手术切除的正常肺组织中RON的表达,RON基因表达与临床病理、预后之间的关系。结果RON基因在肺癌中表达的阳性率为53.75%(43/80),明显高于对照组正常肺组织的表达(0%)(P=0.000)。不同性别、年龄的患者和病理类型的肺癌组织中,RON基因的表达差异无显著性(P>0.05);RON基因表达的阳性率随TNM分期的升高而升高(I期29.03%、II期65.52%、III期75.00%)(P=0.002)。Kaplan-Meier生存分析显示RON阳性表达者的1、3及5年生存率(67.44%、20.93%和9.30%)明显低于阴性者(81.08%、45.94%和24.30%)(P=0.029)。结论RON基因可能在肺癌的发生、发展过程中起着重要作用,提示其可作为肺癌一种新的预后判断指标和治疗靶点。 展开更多
关键词 肺癌 ron基因 表达 临床意义 预后
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RON基因在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
6
作者 陈志军 乐涵波 +2 位作者 张永奎 钱立勇 王朝晔 《浙江医学》 CAS 2012年第8期615-617,620,共4页
目的 研究RON基因在人非小细胞肺癌组织中的表达水平及其临床意义.方法 收集2007年1月至 2008年12月手术的肺腺癌及鳞癌组织标本共96例,应用Envision二步法检测96例肺腺鳞癌中RON蛋白的表达情况,统计分析非小细胞肺癌组织中RON表达与临... 目的 研究RON基因在人非小细胞肺癌组织中的表达水平及其临床意义.方法 收集2007年1月至 2008年12月手术的肺腺癌及鳞癌组织标本共96例,应用Envision二步法检测96例肺腺鳞癌中RON蛋白的表达情况,统计分析非小细胞肺癌组织中RON表达与临床病理相关因素的关系.另外检测20例正常肺组织中RON蛋白的表达情况,比较RON在肺癌组织和正常组织中的表达情况.结果 RON在肺癌组织中表达明显（63/96,66%）,而正常肺组织中几乎无表达（1/20,5%）.在肺癌组织中,RON在肺腺癌及鳞癌中都有不同程度的表达,两组相比RON的表达差异具有统计学意义,腺癌标本中RON表达明显高于鳞癌（P＜0.05）;不同分化程度的肺腺癌相比,RON的表达也有差异,低分化的肺腺癌明显高于中分化的腺癌和高分化的腺癌（P＜0.05 ）,而有淋巴结转移者及晚期组患者组织中RON的表达亦明显高于无淋巴结转移者及早期组患者.结论 RON基因可能在肺癌的发生、发展过程中起着重要作用,提示其可作为肺癌一种新的预后判断指标和治疗靶点. 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 ron基因 临床意义
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马泰勒虫RON2基因真核表达及互作蛋白预测分析
7
作者 芦星 范士龙 +7 位作者 刘明明 王水怡 刘雨桐 李思媛 王金明 巴音查汗 刘丹丹 张伟 《动物医学进展》 北大核心 2023年第7期23-30,共8页
为探究马泰勒虫入侵宿主细胞关键蛋白RON2的功能及其互作蛋白,并尝试解析马泰勒虫入侵关键结构--移动连接体,以马泰勒虫新疆分离株为研究对象,在课题组前期获得马泰勒虫RON 2基因的基础上,设计特异性引物,构建重组蛋白真核表达载体pmche... 为探究马泰勒虫入侵宿主细胞关键蛋白RON2的功能及其互作蛋白,并尝试解析马泰勒虫入侵关键结构--移动连接体,以马泰勒虫新疆分离株为研究对象,在课题组前期获得马泰勒虫RON 2基因的基础上,设计特异性引物,构建重组蛋白真核表达载体pmcherry-TeRON2。融合表达重组蛋白,制备His-TeRON2多克隆抗体,通过间接免疫荧光和Western blot鉴定蛋白的表达情况,最后对RON 2基因编码蛋白的互作蛋白进行预测分析。成功构建pmcherry-TeRON2真核表达质粒,获得的马泰勒虫TeRON2重组蛋白分子质量为37 ku,间接免疫荧光和Western blot结果显示,重组蛋白能够被抗体特异性识别,大小正确。间接ELISA结果显示,当抗原包被量为2μg/mL时,His-TeRON2小鼠多克隆抗体效价为1∶409600,多克隆抗体真核重组蛋白发生特异性反应。TeRON2蛋白互作网络预测显示,共有10种蛋白与马泰勒虫TeRON2蛋白发生相互作用关系,大部分蛋白都与虫体入侵宿主细胞的关键结构移动连接体相关,包括顶膜抗原1、棒状体颈部蛋白4及棒状体颈部蛋白11、棒状体相关蛋白和滑行相关蛋白等,另外与鸟苷酸环化酶和钙依赖激酶也有相互作用关系。推测TeRON2蛋白可能与入侵关键结构移动连接体(MJ)形成有关,参与虫体对宿主细胞的入侵过程,为进一步深入研究马泰勒虫TeRON2蛋白作为疫苗候选抗原以及在虫体入侵宿主过程中的作用提供了理论依据。 展开更多
关键词 马泰勒虫 ron 2基因 真核表达 互作蛋白预测 多克隆抗体制备
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马泰勒虫棒状体颈部蛋白4基因的克隆与原核表达分析
8
作者 芦星 范士龙 +7 位作者 王水怡 王金明 李思媛 刘明明 刘雨桐 巴音查汗 刘丹丹 张伟 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2023年第9期1-10,共10页
【目的】克隆马泰勒虫新疆株棒状体颈部蛋白4基因(RON4)并原核表达RON4蛋白。【方法】参考美国马泰勒虫WA株基因组数据及其他顶复门原虫RON4基因信息,设计特异性引物,以马泰勒虫新疆株DNA为模板克隆RON4基因片段,构建pET-32a-RON4原核... 【目的】克隆马泰勒虫新疆株棒状体颈部蛋白4基因(RON4)并原核表达RON4蛋白。【方法】参考美国马泰勒虫WA株基因组数据及其他顶复门原虫RON4基因信息,设计特异性引物,以马泰勒虫新疆株DNA为模板克隆RON4基因片段,构建pET-32a-RON4原核表达载体后进行原核表达与鉴定,并对RON4基因编码蛋白进行生物信息学分析。【结果】获得马泰勒虫新疆株RON4基因(NCBI登录号为:ON254212)。马泰勒虫新疆株与马泰勒虫WA株亲缘关系最近,RON4基因的核苷酸和氨基酸相似性分别为99.4%和99.0%;RON4基因在种间高度保守,其氨基酸序列与其他顶复门原虫具有高度相似的保守区域。成功构建了RON4蛋白原核表达载体,诱导表达获得分子质量为50 ku的重组包涵体蛋白;重组蛋白可与马泰勒虫阳性马血清特异性反应。生物信息学分析表明,马泰勒虫新疆株RON4蛋白的亲水性、柔韧性以及表面可及性较弱,B细胞表面抗原表位区域较少,形成表面抗原表位的结构基础条件不足。【结论】克隆获得了马泰勒虫新疆株RON4基因,并完成了原核表达及鉴定,该基因高度保守,在不同物种间可能具有相似的功能。 展开更多
关键词 马泰勒虫 ron4基因 原核表达 B细胞抗原表位
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RON、Hepsin和C-Met在浸润性乳腺癌中的表达及其意义 被引量：2
9
作者 仇加高 《实用癌症杂志》 2009年第6期584-586,共3页
目的探讨浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C-Met的免疫表达及其意义。方法采用免疫组化PV-6000法检测了87例浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C-Met基因的表达情况。结果Hepsin、C-Met、RON在87例浸润性乳腺癌组织中的阳性表达率分别为70... 目的探讨浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C-Met的免疫表达及其意义。方法采用免疫组化PV-6000法检测了87例浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C-Met基因的表达情况。结果Hepsin、C-Met、RON在87例浸润性乳腺癌组织中的阳性表达率分别为70.1%、64.4%、65.5%,三者的阳性表达两两呈正相关(P<0.01),同时与浸润性乳腺癌的病理学分级、淋巴结转移亦呈正相关性(P<0.01)。结论Hepsin、C-Met、RON与浸润性乳腺癌的预后因素有相关性,联合检测可以更好地提示患者的预后。 展开更多
关键词 乳腺癌 ron基因 Hepsin基因 C—Met基因 免疫组织化学
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巨噬细胞刺激蛋白及其受体的发现和研究
10
作者 宫锋 贺福初 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1996年第4期341-342,共2页
酪氨酸磷酸化在调节细胞增殖、分化过程中甚为重要,许多生长因子受体属蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTKs)家族,它们可自身磷酸化或使相应配基的氨基酸磷酸化,参与信号转导等重要过程。在了解已知PTKs家族成员的基础上,人们... 酪氨酸磷酸化在调节细胞增殖、分化过程中甚为重要,许多生长因子受体属蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTKs)家族,它们可自身磷酸化或使相应配基的氨基酸磷酸化,参与信号转导等重要过程。在了解已知PTKs家族成员的基础上,人们还在继续寻找新的PTKs成员。最近由于与肝细胞生长因子(hepa-tocyte growth factor,HGF) 展开更多
关键词 巨噬细胞刺激蛋白 巨噬细胞刺激蛋白受体 ron基因 Stk基因
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