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马泰勒虫RON2基因真核表达及互作蛋白预测分析
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作者 芦星 范士龙 +7 位作者 刘明明 王水怡 刘雨桐 李思媛 王金明 巴音查汗 刘丹丹 张伟 《动物医学进展》 北大核心 2023年第7期23-30,共8页
为探究马泰勒虫入侵宿主细胞关键蛋白RON2的功能及其互作蛋白,并尝试解析马泰勒虫入侵关键结构--移动连接体,以马泰勒虫新疆分离株为研究对象,在课题组前期获得马泰勒虫RON 2基因的基础上,设计特异性引物,构建重组蛋白真核表达载体pmche... 为探究马泰勒虫入侵宿主细胞关键蛋白RON2的功能及其互作蛋白,并尝试解析马泰勒虫入侵关键结构--移动连接体,以马泰勒虫新疆分离株为研究对象,在课题组前期获得马泰勒虫RON 2基因的基础上,设计特异性引物,构建重组蛋白真核表达载体pmcherry-TeRON2。融合表达重组蛋白,制备His-TeRON2多克隆抗体,通过间接免疫荧光和Western blot鉴定蛋白的表达情况,最后对RON 2基因编码蛋白的互作蛋白进行预测分析。成功构建pmcherry-TeRON2真核表达质粒,获得的马泰勒虫TeRON2重组蛋白分子质量为37 ku,间接免疫荧光和Western blot结果显示,重组蛋白能够被抗体特异性识别,大小正确。间接ELISA结果显示,当抗原包被量为2μg/mL时,His-TeRON2小鼠多克隆抗体效价为1∶409600,多克隆抗体真核重组蛋白发生特异性反应。TeRON2蛋白互作网络预测显示,共有10种蛋白与马泰勒虫TeRON2蛋白发生相互作用关系,大部分蛋白都与虫体入侵宿主细胞的关键结构移动连接体相关,包括顶膜抗原1、棒状体颈部蛋白4及棒状体颈部蛋白11、棒状体相关蛋白和滑行相关蛋白等,另外与鸟苷酸环化酶和钙依赖激酶也有相互作用关系。推测TeRON2蛋白可能与入侵关键结构移动连接体(MJ)形成有关,参与虫体对宿主细胞的入侵过程,为进一步深入研究马泰勒虫TeRON2蛋白作为疫苗候选抗原以及在虫体入侵宿主过程中的作用提供了理论依据。 展开更多
关键词 马泰勒虫 RON 2基因 真核表达 互作蛋白预测 多克隆抗体制备
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