目的观察长链非编码RNA RP11-38P22在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株中表达水平的变化、对细胞生长和转移的影响以及调控的途径,探讨RP11-38P22在NSCLC的作用机制。方法2019年1月至2019年6月深圳市人民医院胸外科获取56对成对的NSCLC组织和...目的观察长链非编码RNA RP11-38P22在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株中表达水平的变化、对细胞生长和转移的影响以及调控的途径,探讨RP11-38P22在NSCLC的作用机制。方法2019年1月至2019年6月深圳市人民医院胸外科获取56对成对的NSCLC组织和相邻癌旁组织。通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测RP11-38P22在56例肺癌组织以及多个肺癌细胞株中的表达变化,并分析其表达水平的变化与NSCLC临床病理特征的相关性。将RP11-38P22过表达和敲低表达的A549和H1299细胞均设为实验组,将转染空载体病毒(即未干扰RP11-38P22表达的)的A549和H1299细胞设为对照组。改变RP11-38P22在细胞株A549和H1299的表达,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验评估RP11-38P22对细胞生长的影响。通过流式细胞术、划痕实验及Transwell实验评估RP11-38P22对细胞凋亡、迁移和侵袭的影响。此外,通过免疫印迹技术探讨RP11-38P22发挥作用是否与p53通路相关。采用t检验比较两组的平均值,两组以上比较使用方差分析,使用Kaplan-Meier分析和对数秩检验比较生存数据。结果与癌旁组织相比较,RP11-38P22在肺癌组织中的表达明显降低(正常组织比腺癌组织为t=2.266,P<0.05;正常组织比鳞癌组织为t=2.313,P<0.05),且其表达的高低与肿瘤大小显著相关(χ^2=4.758,P<0.05)。与正常细胞(HBE)相比,5种NSCLC细胞系中,RP11-38P22表达也显著性下降,差异有统计学意义(A549细胞为F=45.674,P<0.01;H1299细胞为F=38.568,P<0.01;PC9细胞为F=23.337,P<0.05;H460细胞为F=18.459,P<0.05;Calu3细胞为F=22.102,P<0.05)。RP11-38P22过表达能够显著抑制A549和H1299细胞系的增殖能力[72 h A549细胞增殖率为对照组(110.275±5.663)%,实验组(65.735±3.706)%,F=16.342,P<0.05;72 h H1299细胞增殖率为对照组(125.357±6.733)%,实验组(76.857±3.935)%,F=11.360,P<0.05],并促进细胞的凋亡[A549细胞凋亡率为对照组(2.031±0.032)%,实验组(35.078±2.512)%,F=50.231,P<0.01;H1299细胞凋亡率为对照组(1.872±0.022)%,实验组(31.265±1.206)%,F=41.232,P<0.01]。RP11-38P22敲低表达可增加A549和H1299细胞的迁移[A549细胞划痕面积为对照组(571.235±17.006)μm^2,实验组(705.150±32.238)μm^2,F=19.258,P<0.05;H1299细胞划痕面积为对照组(430.786±12.135)μm^2,实验组(681.547±30.246)μm^2,F=16.345,P<0.05]和A549细胞侵袭能力(对照组231.235±7.206,实验组345.121±16.201,F=11.331,P<0.05);而过表达使得A549细胞的迁移[A549细胞划痕面积为对照组(572.585±19.125)μm^2,实验组(278.870±12.215)μm^2,F=15.873,P<0.05]和侵袭能力显著降低,差异有统计学意义[对照组226.772±10.268,实验组125.323±5.819,F=14.548,P<0.05]。此外,在RP11-38P22敲低表达的细胞中p53的表达显著降低,差异有统计学意义(对照组1.000±0.056,实验组0.377±0.036,t=3.209,P<0.05)。结论长链非编码RNA RP11-38P22通过调控p53途径影响NSCLC细胞的生长和转移。展开更多
文摘目的观察长链非编码RNA RP11-38P22在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株中表达水平的变化、对细胞生长和转移的影响以及调控的途径,探讨RP11-38P22在NSCLC的作用机制。方法2019年1月至2019年6月深圳市人民医院胸外科获取56对成对的NSCLC组织和相邻癌旁组织。通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测RP11-38P22在56例肺癌组织以及多个肺癌细胞株中的表达变化,并分析其表达水平的变化与NSCLC临床病理特征的相关性。将RP11-38P22过表达和敲低表达的A549和H1299细胞均设为实验组,将转染空载体病毒(即未干扰RP11-38P22表达的)的A549和H1299细胞设为对照组。改变RP11-38P22在细胞株A549和H1299的表达,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验评估RP11-38P22对细胞生长的影响。通过流式细胞术、划痕实验及Transwell实验评估RP11-38P22对细胞凋亡、迁移和侵袭的影响。此外,通过免疫印迹技术探讨RP11-38P22发挥作用是否与p53通路相关。采用t检验比较两组的平均值,两组以上比较使用方差分析,使用Kaplan-Meier分析和对数秩检验比较生存数据。结果与癌旁组织相比较,RP11-38P22在肺癌组织中的表达明显降低(正常组织比腺癌组织为t=2.266,P<0.05;正常组织比鳞癌组织为t=2.313,P<0.05),且其表达的高低与肿瘤大小显著相关(χ^2=4.758,P<0.05)。与正常细胞(HBE)相比,5种NSCLC细胞系中,RP11-38P22表达也显著性下降,差异有统计学意义(A549细胞为F=45.674,P<0.01;H1299细胞为F=38.568,P<0.01;PC9细胞为F=23.337,P<0.05;H460细胞为F=18.459,P<0.05;Calu3细胞为F=22.102,P<0.05)。RP11-38P22过表达能够显著抑制A549和H1299细胞系的增殖能力[72 h A549细胞增殖率为对照组(110.275±5.663)%,实验组(65.735±3.706)%,F=16.342,P<0.05;72 h H1299细胞增殖率为对照组(125.357±6.733)%,实验组(76.857±3.935)%,F=11.360,P<0.05],并促进细胞的凋亡[A549细胞凋亡率为对照组(2.031±0.032)%,实验组(35.078±2.512)%,F=50.231,P<0.01;H1299细胞凋亡率为对照组(1.872±0.022)%,实验组(31.265±1.206)%,F=41.232,P<0.01]。RP11-38P22敲低表达可增加A549和H1299细胞的迁移[A549细胞划痕面积为对照组(571.235±17.006)μm^2,实验组(705.150±32.238)μm^2,F=19.258,P<0.05;H1299细胞划痕面积为对照组(430.786±12.135)μm^2,实验组(681.547±30.246)μm^2,F=16.345,P<0.05]和A549细胞侵袭能力(对照组231.235±7.206,实验组345.121±16.201,F=11.331,P<0.05);而过表达使得A549细胞的迁移[A549细胞划痕面积为对照组(572.585±19.125)μm^2,实验组(278.870±12.215)μm^2,F=15.873,P<0.05]和侵袭能力显著降低,差异有统计学意义[对照组226.772±10.268,实验组125.323±5.819,F=14.548,P<0.05]。此外,在RP11-38P22敲低表达的细胞中p53的表达显著降低,差异有统计学意义(对照组1.000±0.056,实验组0.377±0.036,t=3.209,P<0.05)。结论长链非编码RNA RP11-38P22通过调控p53途径影响NSCLC细胞的生长和转移。
