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青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌荧光定量RQ-PCR检测方法的建立 被引量:6
1
作者 赵静 张红见 +2 位作者 马梅琴 廖明 陈刚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第10期18-20,24,共4页
参照GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌种特异性基因KMT-1的保守序列设计1对引物,建立了牦牛多杀性巴氏杆菌实时荧光定量RQ-PCR检测方法。获得的标准曲线相关系数R值为0.9998,标准曲线的线性范围达到1.0×100~1×1010拷贝。对... 参照GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌种特异性基因KMT-1的保守序列设计1对引物,建立了牦牛多杀性巴氏杆菌实时荧光定量RQ-PCR检测方法。获得的标准曲线相关系数R值为0.9998,标准曲线的线性范围达到1.0×100~1×1010拷贝。对大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和伤寒沙门菌等非巴氏杆菌进行检测,结果均为阴性。结果表明,本研究建立的荧光定量RQ-PCR方法敏感性高,特异性强,为青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌病的早期诊断及分子流行病学调查提供了一种新的快速检测方法。 展开更多
关键词 牦牛 多杀性巴氏杆菌 SYBR Green 实时荧光定量rq-pcr
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成人急性白血病GST-π与LRP基因的RQ-PCR检测及其临床意义 被引量:1
2
作者 王静 肖镇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期78-82,共5页
本研究通过对急性白血病(AL)患者外周血谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)和肺耐药相关蛋白(lungresistance-related protein,LRP)基因的检测,探讨两种基因与患者多药耐药性的关系。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RQ-PCR)检测44例AL... 本研究通过对急性白血病(AL)患者外周血谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)和肺耐药相关蛋白(lungresistance-related protein,LRP)基因的检测,探讨两种基因与患者多药耐药性的关系。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RQ-PCR)检测44例AL患者及27例正常人外周血单个核细胞GST-π与LRP基因的表达。结果表明,GST-π基因水平在初治组和难治组与完全缓解组之间均有极显著性差异(P<0.01)。LPR基因水平在初治组与难治组,完全缓解组与难治组均有极显著性差异(P≤0.01)。GST-π与LRP基因之间无相关性。GST-π及LRP基因表达在不同外周血白细胞计数组、不同临床分型组(ALL、ANLL)之间的差异均不显著。结论:GST-π和LRP基因通过不同机制引起多药耐药,二者联合检测较单独测定某一基因对白血病评定预后更具临床意义。外周血白细胞计数、白血病分型可能与GST-π和LRP基因的表达无关。 展开更多
关键词 GST-Π LRP MDR 白血病 rq-pcr
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RQ-PCR技术检测白血病融合基因及其临床应用 被引量:4
3
作者 江梅 万腊根 《实验与检验医学》 CAS 2010年第5期469-472,共4页
实时荧光定量PCR技术(real time quantitative PCR,RQ-PCR)是由美国ABI公司于1995年研发用于核酸定量检测技术,目前该技术在科研和临床上已得到了广泛的应用,也为白血病的分子生物学研究提供了新的手段,已有很多临床血液病学家和检验... 实时荧光定量PCR技术(real time quantitative PCR,RQ-PCR)是由美国ABI公司于1995年研发用于核酸定量检测技术,目前该技术在科研和临床上已得到了广泛的应用,也为白血病的分子生物学研究提供了新的手段,已有很多临床血液病学家和检验学家应用该技术在白血病融合基因检测及其临床应用进行了大量的研究报道. 展开更多
关键词 白血病 融合基因 rq-pcr 分析性能
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FISH与RQ-PCR监测慢性髓系白血病患者造血干细胞移植后微小残留病 被引量:2
4
作者 朱红倩 刘晓力 +3 位作者 宋兰林 刘启发 孟凡义 周淑芸 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第2期207-211,共5页
背景与目的:监测慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)的微小残留病(minimal residual disease,MRD)的常用方法有间期荧光原位杂交(interphase fluorescence in situ hybridization,FISH)和实时定量逆转录-聚合酶链反应(real-t... 背景与目的:监测慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)的微小残留病(minimal residual disease,MRD)的常用方法有间期荧光原位杂交(interphase fluorescence in situ hybridization,FISH)和实时定量逆转录-聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription PCR,RQ-PCR)。本研究分析用FISH和RQ-PCR两种方法在CML造血干细胞移植后不同时间点监测MRD的意义。方法:采用间期FISH和RQ-PCR技术,对31例异基因造血干细胞移植前后的CML患者骨髓细胞进行BCR-ABL融合基因定期监测,随访时间3~48个月。结果:31例患者移植后,前30个月各时间点FISH检测的阳性细胞数及RQ-PCR检测的BCR-ABL/ABL比值均较移植前明显下降,下降>2个对数值(P<0.05);移植30个月后FISH检测结果为0时,RQ-PCR仍然能检测出BCR-ABL/ABL的表达水平,与移植前相比,30个月后各时间点BCR-ABL/ABL比值下降>3个对数值(P<0.05)。结论:FISH和RQ-PCR方法检测BCR-ABL融合基因有较好的一致性。RQ-PCR连续监测MRD的敏感性更高,MDR的定量分析有利于评估疗效和指导个体化治疗。 展开更多
关键词 慢性髓系白血病 BCR—ABL FISH PCR 移植
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RQ-PCR技术及应用进展
5
作者 于子涵 《中国高新技术企业》 2013年第13期44-45,共2页
传统PCR技术虽然因为其灵敏性、特异性和快速性,自发明以来取得了广泛应用,但仍存在容易交叉污染而产生假阳性及定量不准确的缺陷。而实时荧光定量PCR(RQ-PCR)技术实现了从定性到定量的飞跃,由于其操作方便、反应速度快、灵敏度高、重... 传统PCR技术虽然因为其灵敏性、特异性和快速性,自发明以来取得了广泛应用,但仍存在容易交叉污染而产生假阳性及定量不准确的缺陷。而实时荧光定量PCR(RQ-PCR)技术实现了从定性到定量的飞跃,由于其操作方便、反应速度快、灵敏度高、重复性好、定量准确等优点成为了分子生物学研究中的重要工具。 展开更多
关键词 rq-pcr 荧光探针 分子生物 荧光共振能量转移
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RQ-PCR检测Ig/TCR基因重排监测急性淋巴细胞白血病患儿治疗过程微小残留白血病 被引量:3
6
作者 李彦媚 叶铁真 +2 位作者 赖冬波 何映谊 林慧玲 《中国循证儿科杂志》 CSCD 2012年第6期454-458,共5页
目的研究RQ-PCR检测急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿Ig/TCR基因重排在微小残留白血病(MRD)监测中的作用。方法以2009年3月至2011年3月在广州市妇女儿童医疗中心血液肿瘤科确诊和治疗的ALL患儿为研究对象,PCR检测初诊ALL患儿的Ig/TCR基因重... 目的研究RQ-PCR检测急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿Ig/TCR基因重排在微小残留白血病(MRD)监测中的作用。方法以2009年3月至2011年3月在广州市妇女儿童医疗中心血液肿瘤科确诊和治疗的ALL患儿为研究对象,PCR检测初诊ALL患儿的Ig/TCR基因重排;基因扫描分析初诊患儿Ig/TCR基因重排的克隆特性;对ALL患儿的单克隆性Ig/TCR基因重排进行测序,RQ-PCR检测不同治疗阶段Ig/TCR基因重排的表达量。结果 86例ALL患儿进入分析,男52例,女34例;年龄1~13(4.3±3.0)岁,随访时间1~26(14.3±7.0)个月。①83例(96.5%)检出1种或以上Ig/TCR基因重排,共检出209个Ig/TCR基因重排;②91.8%(56/61例)检出1种或以上单克隆性Ig/TCR基因重排;61例172个Ig/TCR基因重排中,单克隆性、寡克隆性和多克隆性Ig/TCR基因重排的检出率分别为58.1%(100个)、30.8%(52个)和11.0%(19个),差异有统计学意义(P=0.000);③26例完成连续3次随访,其中22例持续完全缓解患儿的Ig/TCR基因重排平均相对表达量持续下降,在维持治疗前均为MRD阴性(≤1.0×10-4);4例复发患儿在诱导缓解治疗后至复发前各检测时点Ig/TCR基因重排表达量均>1.0×10-4,并在复发前已有回升,从开始回升至临床复发的平均时间为3.75(2~8)个月。结论 Ig/TCR基因重排相对表达量可反映MRD水平,可作为判断预后、监测复发和指导治疗的有效手段。 展开更多
关键词 急性淋巴细胞白血病 微小残留白血病 IG TCR基因重排 实时定量PCR
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实时定量PCR在乙型肝炎(HBV)诊断中的应用 被引量:15
7
作者 林灼锋 李校坤 +1 位作者 吴帆 许华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2002年第3期68-70,共3页
随着对乙型肝炎治疗的深入研究 ,对乙型肝炎病毒 (HBV DNA)数量的确诊显得尤其重要。本文采用RealTimeQuantitativePCR(简称RQ PCR)方法 ,对 2 84例经ELISA检定的乙型肝炎患者血清标本进行HBV DNA定量检测。结果有 96例HBsAg(+ ) HBeAg... 随着对乙型肝炎治疗的深入研究 ,对乙型肝炎病毒 (HBV DNA)数量的确诊显得尤其重要。本文采用RealTimeQuantitativePCR(简称RQ PCR)方法 ,对 2 84例经ELISA检定的乙型肝炎患者血清标本进行HBV DNA定量检测。结果有 96例HBsAg(+ ) HBeAg(+ ) HBcAb(+ )的血清标本RQ PCR阳性率为 10 0 % ,病毒平均量 5 0 2× 10 5拷贝 μl;87例HBsAg(+ ) HBeAb(+ ) HBcAb(+ )的血清标本RQ PCR阳性率为 4 4% (38例 ) ,病毒平均量 1 0 2× 10 3 拷贝 μl,5 3例HBsAg(+ ) HBcAb(+ )的血清标本RQ PCR阳性率为 5 8% (31例 ) ,病毒平均量 6 6 9× 10 4拷贝 μl;而 4 6例正常对照组经检测全为阴性。可见RQ PCR的检测结果反映了不同患者的病情 ,对乙型肝炎的诊断、治疗具有临床指导价值。 展开更多
关键词 实时定量PCR 乙型肝炎 诊断 应用 rq-pcr 乙肝免疫标志物 HBV-DNA
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荧光定量PCR对伊马替尼治疗后慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因变化的检测效果研究 被引量:3
8
作者 杨柳 江千里 +4 位作者 孟凡义 宋兰林 林榕 徐晓兰 周淑芸 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期451-453,共3页
目的应用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)技术检测慢性粒细胞白血病(CML)患者应用伊马替尼治疗后bcr/abl融合基因的水平,并比较RQ-PCR与荧光原位杂交(FISH)在检测CML微小残留病方面的敏感度。方法采用RQ-PCR技术检测初诊CML患者30例,以及应用... 目的应用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)技术检测慢性粒细胞白血病(CML)患者应用伊马替尼治疗后bcr/abl融合基因的水平,并比较RQ-PCR与荧光原位杂交(FISH)在检测CML微小残留病方面的敏感度。方法采用RQ-PCR技术检测初诊CML患者30例,以及应用伊马替尼治疗1年、2年的CML患者各8例,观察骨髓细胞中bcr/abl融合基因转录本的表达情况,并与荧光原位杂交(FISH)结果进行比较。结果RQ-PCR检测bcr/abl融合基因的敏感性可达到10个拷贝。初诊CML患者bcr/abl融合基因水平为68.18%±26.67%,而经伊马替尼治疗1年、2年后的水平分别为0.16%±0.15%、0.04%±0.02%,与治疗前相比,分别下降了2.82和3.36个对数级。当FISH结果为阴性时,RQ-PCR的检测结果仍为阳性。结论RQ-PCR检测bcr/abl融合基因的敏感性比FISH更高,对于监测伊马替尼治疗过程中分子水平的变化、提示病情发展具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 慢性粒细胞白血病 BCR/ABL rq-pcr 荧光原位杂交
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片仔癀对脑梗死大鼠ZO-1、MMP-9蛋白及mRNA表达的影响 被引量:6
9
作者 黄希艳 李倩 朱陵群 《中西医结合心脑血管病杂志》 2013年第3期342-343,共2页
目的观察片仔癀对局灶性脑梗死大鼠ZO-1、MMP-9蛋白及mRNA表达的影响。方法采用改良Zea-Longa方法制备MCAO模型,SD大鼠35只随机等分为假手术组、模型组、片仔癀大剂量组、片仔癀中剂量组、片仔癀小剂量组、脑得生组及尼莫地平组。造模... 目的观察片仔癀对局灶性脑梗死大鼠ZO-1、MMP-9蛋白及mRNA表达的影响。方法采用改良Zea-Longa方法制备MCAO模型,SD大鼠35只随机等分为假手术组、模型组、片仔癀大剂量组、片仔癀中剂量组、片仔癀小剂量组、脑得生组及尼莫地平组。造模后给药观察至第7天取材。行Western blot及荧光定量PCR检测。结果模型组ZO-1蛋白及mRNA表达较假手术组显著降低(P<0.01),片仔癀大剂量组、尼莫地平组及脑得生组ZO-1表达较模型组显著升高(P<0.05),片仔癀大剂量组较片仔癀小剂量组有统计学意义(P<0.05)。模型组MMP-9表达较假手术组显著升高(P<0.01),片仔癀大剂量组、尼莫地平组及脑得生组MMP-9表达较模型组显著降低(P<0.05);片仔癀大剂量组较片仔癀小剂量组差异显著(P<0.05)。结论 ZO-1、MMP-9参与了脑梗死后神经损伤,片仔癀可以上调脑梗死后ZO-1,下调MMP-9蛋白及mRNA水平表达,具有脑保护的作用。 展开更多
关键词 大脑中动脉阻塞 脑梗死 Western blot rq-pcr 片仔癀
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急性早幼粒细胞白血病融合基因荧光定量动态检测的临床意义 被引量:3
10
作者 赵峻峰 李华 王立新 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第18期2571-2573,共3页
目的利用逆转录荧光实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测急性早幼粒细胞白血病(APL)PML-RARα融合基因的方法,并观察其敏感度。方法建立荧光染料SYBR-Green1RQ-PCR技术,同时检测56例APL融合基因PML-RARα的表达水平,并且与传统巢式PCR方... 目的利用逆转录荧光实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测急性早幼粒细胞白血病(APL)PML-RARα融合基因的方法,并观察其敏感度。方法建立荧光染料SYBR-Green1RQ-PCR技术,同时检测56例APL融合基因PML-RARα的表达水平,并且与传统巢式PCR方法进行敏感度比较。结果 RQ-PCR的灵敏度均可达到50拷贝,稍低于巢式PCR,但RQ-PCR定量准确,不易污染。分别取103和107拷贝的PML-RARα质粒以及患者cDNA同时作8次平行扩增,批内变异系数分别为7.31%、8.26%和5.02%,表明方法稳定。不同APL患者PML-RARα表达水平有较大差异,初诊患者PML-RARα/GAPDH比值介于0.018~0.799,中位值为0.070。结论RQ-PCR可以准确检测微小残留病(MRD)融合基因表达水平;监测融合基因表达可以有效观察治疗效果。 展开更多
关键词 微小残留病 急性早幼粒细胞白血病 PML-RARΑ 实时定量聚合酶链反应(rq-pcr)
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1株嗜高温菌的分离、鉴定和免疫增强活性成分研究 被引量:1
11
作者 刘建玲 雷毅 +1 位作者 阴耀邦 王高学 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2011年第8期21-28,33,共9页
【目的】从温泉的底泥中分离、鉴定能产生免疫增强活性胞外代谢产物的嗜高温菌,并对其胞外代谢产物的免疫增强活性和抗病性进行研究。【方法】通过菌株个体形态、菌落形态和生理生化特性,初步排除从陕西西安东大温泉的底泥分离菌株中的... 【目的】从温泉的底泥中分离、鉴定能产生免疫增强活性胞外代谢产物的嗜高温菌,并对其胞外代谢产物的免疫增强活性和抗病性进行研究。【方法】通过菌株个体形态、菌落形态和生理生化特性,初步排除从陕西西安东大温泉的底泥分离菌株中的重复菌株;以白细胞吞噬活性、白细胞杀菌活性、血清溶菌酶和血清SOD活性为指标进一步筛选获得目的菌株,采用个体形态、群落形态、生理生化特性和分子生物学方法对目的菌株进行初步鉴定;通过大孔吸附树脂浓缩活性成分,硅胶柱层析,以白细胞吞噬活性、白细胞杀菌活性、血清溶菌酶和血清SOD活性、免疫相关基因转录水平和免疫保护率为参考指标,活性追踪分离获得该菌株的主要活性物质。【结果】筛选到1株嗜高温菌株XA-4,鉴定为Anoxybacillus flavithermus。XA-4的代谢产物能显著增强鲤的非特异性免疫功能,流分B是株菌XA-4代谢产物中活性成分的主要浓缩物,可显著提高鲤的外周血白细胞吞噬活性、白细胞杀菌活性、血清溶菌酶和血清SOD活性,上调免疫相关基因转录水平,对鲤的免疫保护率达66.67%。【结论】菌株XA-4及其免疫增强物质的粗提物有较好的免疫增强活性,很有可能开发成为一种新的鱼类免疫增强剂。 展开更多
关键词 免疫增强剂 免疫保护 嗜高温菌 细胞因子 rq-pcr
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再生障碍性贫血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)诊断价值的临床研究 被引量:1
12
作者 刘娜 姜丽波 +5 位作者 张淑英 周虹 曲延章 姚宇宁 许玲玲 周畅 《中外医疗》 2021年第10期1-5,12,共6页
目的研究分析CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)与再生障碍性贫血(AA)的相关性,探讨Treg细胞在AA中的诊断意义。方法方便选取2017年1月—2019年1月期间该院血液科收治的初发AA患者40例,根据发病时情况分为急性再生障碍性贫血组(SAA组,22... 目的研究分析CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)与再生障碍性贫血(AA)的相关性,探讨Treg细胞在AA中的诊断意义。方法方便选取2017年1月—2019年1月期间该院血液科收治的初发AA患者40例,根据发病时情况分为急性再生障碍性贫血组(SAA组,22例)和慢性再生障碍性贫血组(CAA组18例),正常成年人为对照组(CN组,20例)。采用流式细胞术检测Treg细胞的表达率(%);并用荧光定量PCR法检测其外周血中Foxp3 mRNA的表达水平。结果流式细胞检测显示SAA组及CAA组血清样本CD4+、CD4+CD25+和Foxp3Treg细胞比率与CN组相比均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);另与CAA组(2.64±0.48)%相比,SAA组在Foxp3Treg细胞百分比(1.51±0.34)%,差异有统计学意义(P<0.05)。相关基因表达显示相对于CN组,CAA组及SAA组患者外周血中的Foxp3 mRNA均呈低表达,差异有统计学意义(P<0.05),且SAA组明显低于CAA组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论再生障碍性贫血(CAA和SAA)在发病时均伴有明显的CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达率下降,且SAA组下降明显低于CAA组,说明CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率能够作为一项指标来评估AA的严重程度。 展开更多
关键词 再生障碍性贫血(AA) 调节性T细胞(Treg) 流式细胞检测 rq-pcr 临床研究
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实时荧光定量聚合酶链反应技术及应用 被引量:2
13
作者 赵紫琴 陆凤先 《中国药物与临床》 CAS 2006年第4期248-251,共4页
关键词 实时荧光定量聚合酶链反应技术 耐热DNA聚合酶 Green PCR) rq-pcr 荧光标记引物 DNA嵌合剂 杂交探针 SYBR CHAIN
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全反式维甲酸、亚砷酸对白血病NB4细胞CD44变异体表达的影响
14
作者 杨洁 李杰 +5 位作者 李燕 袁军 王瑞仓 王素云 王超 郝洪岭 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期3381-3384,共4页
目的研究全反式维甲酸(ATRA)和亚砷酸(As2O3)作用于人早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4细胞后不同CD44v分子和PML/RARα表达的变化及相互关系。方法体外培养NB4细胞,分别用ATRA(1μmol/L)、As2O3(1μmol/L)、ATRA+As2O3(1μmol/L+1μmol... 目的研究全反式维甲酸(ATRA)和亚砷酸(As2O3)作用于人早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4细胞后不同CD44v分子和PML/RARα表达的变化及相互关系。方法体外培养NB4细胞,分别用ATRA(1μmol/L)、As2O3(1μmol/L)、ATRA+As2O3(1μmol/L+1μmol/L)进行干预,应用MTT法检测细胞生长;用流式细胞术(FCM)分析以上药物对细胞分化的影响;AnnexinV-FITC/PI双标法检测凋亡;应用RQ-PCR法检测细胞中PML/RARα、CD44v3、CD44v6、CD44v10mRNA表达水平的变化。结果 ATRA、As2O3及二者联用对NB4细胞有增殖抑制作用;ATRA、As2O3、ATRA+As2O3作用于NB4细胞后CD11b抗原表达逐渐升高,ATRA组明显高于其他各组;As2O3、ATRA+As2O3对NB4细胞有促凋亡作用;ATRA、As2O3、ATRA+As2O3作用于NB4细胞后PML/RARα、CD44v3、CD44v6、CD44v10mRNA的表达随时间延长呈递减趋势;经ATRA、As2O3、ATRA+As2O3作用后,PML/RARα与CD44v6的变化趋势呈正相关,相关系数分别为r=0.98(P<0.01)、r=0.951(P<0.01)、r=0.999(P<0.01);As2O3作用后,PML/RARα与CD44v3的变化趋势呈正相关(r=0.965,P<0.01)。结论 ATRA、As2O3、ATRA+As2O3可使NB4细胞PML/RARα、CD44v3、CD44v6、CD44v10mRNA的表达下调,且呈时间依赖性。经ATRA、As2O3、ATRA+As2O3作用后PML/RARα与CD44v6的变化趋势均呈正相关。As2O3作用后PML/RARα与CD44v3的变化趋势呈正相关。 展开更多
关键词 全反式维甲酸 亚砷酸 白血病 PML/RARΑ 分化 凋亡 rq-pcr
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血红素加氧酶1在新疆卡波氏肉瘤组织中的表达及意义
15
作者 周晓斐 曾妍 +4 位作者 仙玲玲 狄春红 于娜 何玲 杨磊 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2007年第5期589-592,共4页
目的探讨血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)和卡波氏肉瘤(Kaposi’s Sarcoma,KS)病因的相关性。方法用Real Time Quantitative PCR(简称RQ-PCR)方法检测7例KS组织中HO-1表达,同时分别以相应瘤旁正常组织和7例正常人正常组织作为对... 目的探讨血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)和卡波氏肉瘤(Kaposi’s Sarcoma,KS)病因的相关性。方法用Real Time Quantitative PCR(简称RQ-PCR)方法检测7例KS组织中HO-1表达,同时分别以相应瘤旁正常组织和7例正常人正常组织作为对照组。首先抽提7例KS组织、7例瘤旁正常组织和7例正常人正常组织总RNA。以总RNA为模板,逆转录成总cDNA。以总cDNA或目的基因质粒为模板,在Smart Cycler全自动荧光定量PCR分析仪上同时扩增HO-1和GAPDH基因的标准曲线和检测样本中HO-1和GAPDH的表达。结果在KS组织中HO-1表达水平明显高于瘤旁正常组织(t=4.074,P<0.01);也明显高于对照组(t=2.731,P<0.05),并且结果有统计学意义。结论卡波氏肉瘤HO-1表达明显高于瘤旁正常组织和对照组,并且结果有统计学意义,说明HO-1在KS的发病中起到一定作用,具有重要相关性。 展开更多
关键词 卡波氏肉瘤(KS) 血红素加氧酶1(HO-1) 实时荧光定量(rq-pcr)
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Application of Real-time Fluorescent Quantitative PCR in Plant
16
作者 崔颖 贾晋 +2 位作者 莎娜 李俊芳 王国泽 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2016年第2期273-278,共6页
Real-time fluorescent quantitative PCR (RQ-PCR) is a detection method by adding fluorescent dye or fluorescent probe into the PCR reaction system, using fluorescent signal accumulation to monitor amplification react... Real-time fluorescent quantitative PCR (RQ-PCR) is a detection method by adding fluorescent dye or fluorescent probe into the PCR reaction system, using fluorescent signal accumulation to monitor amplification reactions of PCR reaction process, and finally the unknown template can be quantitatively analyzed through the standard curve. So the detection level of PCR has improved from the qualitative to the quantitative. In order to provide a theoretical reference for further application, the principle, classification, advantages and disadvantages of RQ-PCR were intro- duced, and its application and progress in plants in recent years were reviewed. 展开更多
关键词 Real-time fluorescent quantitative PCR rq-pcr PRINCIPLE Reference gene Stress resistance of plant Transgenic product
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低氧训练对大鼠骨骼肌VEGF mRNA表达及毛细血管密度的影响 被引量:16
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作者 赵鹏 路瑛丽 +2 位作者 冯连世 徐建方 朱珂 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期131-135,149,共6页
目的:探讨低氧训练对大鼠骨骼肌血管内皮细胞生长因子(VEGF) mRNA水平表达及毛细血管密度的影响。方法:选用6周龄雄性SD大鼠120只,经3周适应性训练和力竭实验筛选出90只,随机分为9组:常氧安静对照组、持续低氧安静组、间歇低氧安静组、... 目的:探讨低氧训练对大鼠骨骼肌血管内皮细胞生长因子(VEGF) mRNA水平表达及毛细血管密度的影响。方法:选用6周龄雄性SD大鼠120只,经3周适应性训练和力竭实验筛选出90只,随机分为9组:常氧安静对照组、持续低氧安静组、间歇低氧安静组、低住低练组、高住高练组、高住低练组、低住高练组、高住高练后复氧训练组、高住低练后复氧训练组。采用常压低氧舱以13.6%的氧浓度(相当于海拔3500m的氧浓度)作为低氧环境,根据血乳酸-速度曲线确定大鼠常氧训练的强度为35m/min,低氧训练的强度为30m/min。低氧训练持续时间为6周,每周训练5天。在第6周末的最后一次运动后休息48小时后处死大鼠并取材。采用实时荧光定量PCR技术、免疫组化染色法检测大鼠骨骼肌VEGF mRNA表达及毛细血管密度。结果:与常氧安静对照组相比,高住高练组骨骼肌VEGF mRNA表达明显提高(P<0.01),而高住低练组和低住高练组变化不明显;高住高练后复氧训练1周,大鼠骨骼肌VEGF mRNA表达有非常显著性下降(P<0.01),回到常氧安静组水平。与常氧安静对照组相比,高住高练组和低住高练组骨骼肌毛细血管密度增加,有非常显著性差异(P<0.01)。结论:(1)高住高练比高住低练和低住高练更能显著提高骨骼肌VEGFmRNA表达水平。(2)低氧-常氧的反复刺激更有利于血管生成。低氧下训练比常氧下训练更有利于提高骨骼肌毛细血管密度。低住高练和高住高练对血管生成的效果好于高住低练。 展开更多
关键词 低氧训练 VEGF 毛细血管密度 荧光定量PCR 大鼠 骨骼肌
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急性髓系白血病PDCD5的表达及其临床意义 被引量:7
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作者 王立茹 王敏 +1 位作者 崔建英 周合冰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期24-28,共5页
目的:本研究通过检测PDCD5(programmed cell death 5)在成人急性髓系白血病(AML)患者中的表达,探讨PDCD5在AML发病中的作用及其与AML患者临床特征和预后的相关性。方法:分别采用实时定量PCR(RQ-PCR)和流式细胞术(FCM)检测36例初治AML患... 目的:本研究通过检测PDCD5(programmed cell death 5)在成人急性髓系白血病(AML)患者中的表达,探讨PDCD5在AML发病中的作用及其与AML患者临床特征和预后的相关性。方法:分别采用实时定量PCR(RQ-PCR)和流式细胞术(FCM)检测36例初治AML患者的PDCD5 mRNA水平和胞内蛋白含量,并分析PDCD5 mRNA水平和蛋白含量与临床特征及生存时间的相关性。结果:AML患者的细胞内PDCD5蛋白含量显著高于正常人(P<0.05),mRNA水平较正常人无显著性差异(P>0.05)。PDCD5 mRNA和蛋白的表达水平与AML患者的性别、年龄、白细胞数、FAB亚型、髓外浸润情况、WT1基因、NPM1基因突变以及诱导化疗反应均无关(P>0.05),FLT3内部串联重复(FLT3/ITD)突变阳性者较突变阴性者PDCD5蛋白含量显著增高(P<0.05)。结论:AML患者PDCD5蛋白含量显著升高,但并未能发挥对AML细胞的促凋亡作用。FLT3/ITD突变阳性者PDCD5高表达。 展开更多
关键词 PDCD5 急性髓系白血病 实时定量PCR 流式细胞术
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NF-κB mRNA在急性髓系白血病中的表达 被引量:7
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作者 刘敏 魏旭东 +3 位作者 吕晓东 范瑞华 尹青松 周健 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第2期359-362,共4页
本研究目的旨在应用实时定量PCR技术(qPCR)检测急性髓系白血病(AML)患者NF-κB mRNA的表达,以揭示NF-κB在AML发病中的作用。收集60例初诊AML患者的新鲜骨髓,用TRIzoL一步法提取总RNA,合成cDNA,以GAPDH为内参照进行荧光定量检测NF-κB m... 本研究目的旨在应用实时定量PCR技术(qPCR)检测急性髓系白血病(AML)患者NF-κB mRNA的表达,以揭示NF-κB在AML发病中的作用。收集60例初诊AML患者的新鲜骨髓,用TRIzoL一步法提取总RNA,合成cDNA,以GAPDH为内参照进行荧光定量检测NF-κB mRNA的表达;在实验中选择12例正常人作为对照。结果表明,NF-κB mRNA在AML患者中的表达高于正常人,差异显著(p<0.05)。M4,M5亚型的NF-κB mRNA表达高于M1,M2,M3亚型组。结论:NF-κB在AML中表达升高,其表达上调在AML的发病中可能起了重要作用。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 NF-ΚB RQ—PCR
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肺鳞癌组织中Annexin-1的表达及意义 被引量:4
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作者 燕贞 沈飞 +5 位作者 李智涛 周舫 王娜 姚武 吴卫东 吴逸明 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期38-40,共3页
目的检测肺鳞癌组织中膜联蛋白Ⅰ(Annexin-1,Anx-A1)的表达水平,探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)和Western blot方法检测22例肺鳞癌组织及其相应癌旁正常组织中Anx-A1 mRNA及蛋白的表达水平,并分析其与临床病理指标的... 目的检测肺鳞癌组织中膜联蛋白Ⅰ(Annexin-1,Anx-A1)的表达水平,探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)和Western blot方法检测22例肺鳞癌组织及其相应癌旁正常组织中Anx-A1 mRNA及蛋白的表达水平,并分析其与临床病理指标的关系。结果肺鳞癌组织中Anx-A1 mRNA和蛋白的表达水平均高于癌旁正常组织,在低分化肺鳞癌组织中的表达水平高于高、中分化肺鳞癌组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。Anx-A1在早期(Ⅰ期+Ⅱ期)肺鳞癌组织和非早期(Ⅲ期)癌组织中表达水平的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Anx-A1在肺鳞癌中表达上调,可能与肺癌的发生、发展相关。 展开更多
关键词 ANNEXIN-1 肺鳞癌 荧光定量PCR 免疫印迹
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