期刊文献+
共找到520篇文章
< 1 2 26 >
每页显示 20 50 100
俄RT-1后处理厂2015年乏燃料处理量提升35%
1
作者 伍浩松 《国外核新闻》 2016年第11期26-26,共1页
【普氏核新闻快报2016年1 0月22日报道】根据俄罗斯国家原子能集团公司(Rosatom)2016年10月21日公布的信息,马雅克(Mayak)RT-1后处理厂2015年乏燃料处理量达到230吨,比2014年提升35%。RT-1未来几年将把乏燃料处理量进一步提升至每年... 【普氏核新闻快报2016年1 0月22日报道】根据俄罗斯国家原子能集团公司(Rosatom)2016年10月21日公布的信息,马雅克(Mayak)RT-1后处理厂2015年乏燃料处理量达到230吨,比2014年提升35%。RT-1未来几年将把乏燃料处理量进一步提升至每年400吨,并且增加能够处理的乏燃料类型,从而能对俄所有堆型反应堆产生的乏燃料进行后处理。 展开更多
关键词 乏燃料 rt-1 俄罗斯国家 堆型 雅克 普氏 罗斯托 气冷堆 Nuclear 利比
下载PDF
红酵母RT-1核酸提取方法的比较及基因crtYB和crtE扩增 被引量:2
2
作者 曹连忠 汤晖 张利平 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期52-56,共5页
对蜗牛酶法、石英砂法、氯化苄法、SDS-CTAB法、反复冻融法、溶壁酶法等6种酵母DNA提取方法进行比较,确定了反复冻融法最适合红酵母RT-1的提取,所提取的DNA质量较高,以它为模板成功克隆到crtYB内部序列,证明其完全可用于酶切、测序等后... 对蜗牛酶法、石英砂法、氯化苄法、SDS-CTAB法、反复冻融法、溶壁酶法等6种酵母DNA提取方法进行比较,确定了反复冻融法最适合红酵母RT-1的提取,所提取的DNA质量较高,以它为模板成功克隆到crtYB内部序列,证明其完全可用于酶切、测序等后续试验。同时,比较了热酸性酚法、酵母总RNA提取试剂盒RNAsimple Total RNA Kit、硅藻土-苯酚法等3种酵母RNA提取方法,比较结果表明:硅藻土-苯酚法所提RNA完整性高,用其进行RT-PCR克隆得到crtEcDNA内部序列,表明提取的RNA能够用于后续的分子生物学研究。 展开更多
关键词 红酵母 核酸提取 PCR扩增 rt-PCR
下载PDF
猫泛白细胞减少症病毒、猫杯状病毒和猫疱疹病毒1型三重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:1
3
作者 陈林文 冀伟 +5 位作者 曹龙龙 王莹 李秋燕 曹胜波 陈清秀 周登元 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1141-1147,1198,共8页
为建立一种能够快速检测猫泛白细胞减少症病毒(FPV)、猫杯状病毒(FCV)和猫疱疹病毒1型(FHV-1)的三重荧光定量RT-PCR方法,本研究根据FPV VP2基因、FCV ORF2基因和FHV-1 TK基因分别设计引物与探针,采用上述引物经PCR分别扩增上述3种病原... 为建立一种能够快速检测猫泛白细胞减少症病毒(FPV)、猫杯状病毒(FCV)和猫疱疹病毒1型(FHV-1)的三重荧光定量RT-PCR方法,本研究根据FPV VP2基因、FCV ORF2基因和FHV-1 TK基因分别设计引物与探针,采用上述引物经PCR分别扩增上述3种病原的目的基因并克隆至pMD18-T载体中,构建重组质粒标准品pMD18-T-FPV、pMD18-T-FCV和pMD18-T-FHV-1,并均经PCR和测序鉴定。将3种重组质粒标准品稀释到同一浓度1×10^(8)拷贝/μL,按体积比1∶1∶1混合后作为模板,采用方阵法优化各反应条件后,建立了检测上述病原的三重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。以FPV、FCV、FHV-1、猫博卡病毒、猫冠状病毒、猫支原体、猫白血病病毒、猫星状病毒的基因组为模板采用本研究建立的方法检测,评估该方法的特异性,结果显示,该方法仅能检测到FPV、FCV、FHV-1,而其他病原的检测结果均为阴性。选取1×10^(0)拷贝/μL~1×10^(6)拷贝/μL的混合质粒标准品和10^(-0.5) TCID_(50)/mL~10^(5.5) TCID_(50)/mL的混合病毒液分别作为模板,采用本研究建立的方法检测,评估该方法检测重组质粒和病毒的敏感性,结果显示,该方法对重组质粒标准品pMD18-T-FPV、pMD18-T-FCV和pMD18-T-FHV-1的检测限均为1.0×10^(1)拷贝/μL,对3种病毒的检测限均约为10^(0.5) TCID_(50)/mL;以1×10^(7)拷贝/μL、1×10^(5)拷贝/μL、1×10^(3)拷贝/μL质粒标准品混合物作为模板分别进行组内和组间的重复性试验,结果显示,组内和组间重复性试验的变异系数(CV)均低于3%。利用建立的该三重荧光定量RT-PCR和常规PCR对81份临床样品(77份猫的眼、鼻、咽、肛混合拭子样品和4份组织病料样品)分别检测,结果显示三重荧光定量RT-PCR检测出47份FPV、13份FCV和13份FHV-1阳性样品,而常规PCR分别检测出39份FPV、9份FCV和6份FHV-1阳性样品,该三重荧光定量RT-PCR与FPV、FCV、FHV-1常规PCR的总符合率分别为90.12%、95.06%、92.59%。本研究建立的三重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,为FPV、FCV、FHV-1临床样品的快速鉴别检测提供了有力技术支持。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 猫杯状病毒 猫疱疹病毒1 三重荧光定量rt-PCR
下载PDF
IL-6、SDF-1、ET与急性脑梗死患者rt-PA静脉溶栓后预后的关系 被引量:2
4
作者 韩泉 魏莱 胡彩英 《分子诊断与治疗杂志》 2023年第7期1191-1194,1198,共5页
目的分析白介素⁃6(IL⁃6)、基质细胞衍生因子⁃1(SDF⁃1)、血浆内皮素(ET)与急性脑梗死(ACI)患者重组组织型纤溶酶原激活剂(rt⁃PA)静脉溶栓后预后的关系。方法选取武汉市红十字会医院自2020年3月至2022年3月期间接收的151例行rt⁃PA静脉溶... 目的分析白介素⁃6(IL⁃6)、基质细胞衍生因子⁃1(SDF⁃1)、血浆内皮素(ET)与急性脑梗死(ACI)患者重组组织型纤溶酶原激活剂(rt⁃PA)静脉溶栓后预后的关系。方法选取武汉市红十字会医院自2020年3月至2022年3月期间接收的151例行rt⁃PA静脉溶栓后的ACI患者,将其设置为观察组,选取同期体检的健康人群162名作为对照组,比较两组IL⁃6、ET、SDF⁃1水平。根据治疗后1个月的改良Rankin量表结果将观察组患者分为预后良好组和预后不良组,使用Logistic回归分析影响患者rt⁃PA静脉溶栓后预后危险因素。结果观察组IL⁃6、SDF⁃1、ET水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后良好组的患者112例,预后不良组的患者39例,两组的年龄、性别、吸烟饮酒史、高血压、冠心病、TOAST分型、Fib水平比较差异无统计意义(P>0.05),NIHSS、GCS评分及IL⁃6、SDF⁃1、ET、HbAlc、D⁃D指标比较差异具有统计学意义(P<0.05)。多元Logistic回归分析结果显示,血清IL⁃6、SDF⁃1、ET水平及NIHSS、GCS评分是ACI患者静脉溶栓后预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论IL⁃6、ET、SDF⁃1的异常表达与ACI患者静脉溶栓后预后不良密切相关,对三者进行有效检测,可为选择合理治疗方案提供可靠依据,从而改善患者预后情况。 展开更多
关键词 SDF⁃1 ET 急性脑梗死 rt⁃PA静脉溶栓
下载PDF
BVDV-1型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:1
5
作者 周思佳 韩佃刚 +5 位作者 董俊 杨云庆 叶玲玲 李静 张冲 信吉阁 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2023年第3期423-430,共8页
【目的】建立特异针对牛病毒性腹泻病毒基因1型(BVDV-1)的实时荧光定量RT-PCR检测方法。【方法】通过比对分析近5年流行的BVDV-1毒株全基因序列,基于保守序列5′-UTR设计特异性引物和探针,优化反应体系和反应条件,并进行特异性、敏感性... 【目的】建立特异针对牛病毒性腹泻病毒基因1型(BVDV-1)的实时荧光定量RT-PCR检测方法。【方法】通过比对分析近5年流行的BVDV-1毒株全基因序列,基于保守序列5′-UTR设计特异性引物和探针,优化反应体系和反应条件,并进行特异性、敏感性、重复性及临床样品检测试验。【结果】BVDV-1检测的最佳探针浓度为0.25μmol/L,引物浓度为0.60μmol/L,对阳性质粒标准品的最低检测限为1.7 copies/μL。特异性试验显示:建立的方法仅能特异性扩增BVDV-1,对蓝舌病、口蹄疫、水泡性口炎、小反刍兽疫和猪瘟等病毒不发生交叉反应,特异性良好,变异系数小于1%。采用建立的方法对172份临床血液样本进行BVDV核酸检测,结果检出BVDV阳性样本33份,阳性率为19.19%,与《牛病毒性腹泻/粘膜病诊断技术规范》(GB/T 18637—2018)中实时荧光定量RT-PCR检测结果一致。【结论】本研究建立的BVDV基因1型实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于临床样本的检测,为BVDV-1的检测及监测提供了有力的技术手段。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒基因1型(BVDV-1) 实时荧光定量rt-PCR 病毒检测
下载PDF
土大黄提取物对银屑病小鼠P物质及其神经肽受体-1表达的影响
6
作者 热比姑丽·伊斯拉木 优力都孜·买买提 +2 位作者 玉素甫江·艾力 开丽比努尔·阿布来提 巴合沙拉·马乃甫 《世界中医药》 CAS 北大核心 2024年第15期2271-2278,共8页
目的:经土大黄干预,探讨P物质(SP)及其神经激肽-1受体(NK-1R)在银屑病皮肤组织中的表达及意义。方法:收集对照组,银屑病模型组,甲氨蝶呤片组(1.3 mg/kg),阿瑞匹坦胶囊组(5 mg/kg),土大黄组(1、2、4 g/kg)小鼠皮肤、血液标本,经苏木精-伊... 目的:经土大黄干预,探讨P物质(SP)及其神经激肽-1受体(NK-1R)在银屑病皮肤组织中的表达及意义。方法:收集对照组,银屑病模型组,甲氨蝶呤片组(1.3 mg/kg),阿瑞匹坦胶囊组(5 mg/kg),土大黄组(1、2、4 g/kg)小鼠皮肤、血液标本,经苏木精-伊红(HE)染色,观察银屑病小鼠皮肤组织病理学变化;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术,检测银屑病小鼠皮肤SP、NK-1R mRNA表达;采用酶联免疫吸附测定、蛋白免疫印迹技术,检测银屑病小鼠血液SP、皮肤、NK-1R蛋白表达;随后分析SP、NK-1R表达水平与银屑病的关系。结果:与银屑病模型组比较,所有药物干预组均能改善银屑病小鼠皮肤组织病理学变化;同时,小鼠皮肤SP、NK-1RmRNA表达,血清SP、皮肤NK-1R蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。与阳性对照药甲氨蝶呤片组、阿瑞匹坦胶囊组比较,1 g/kg大黄组小鼠皮肤组织NK-1R蛋白表达升高(P<0.05)。与土大黄组(1 g/kg)比较,土大黄组(2、4 g/kg)小鼠皮肤组织NK-1R蛋白表达均降低,其中土大黄组(2 g/kg)(P>0.05)、土大黄组(4 g/kg)(P<0.05)。结论:土大黄可能通过降低焦虑相关神经递质SP及其NK-1R受体基因、蛋白表达,从而改善小鼠银屑病样皮损,其作用不亚于阳性对照药甲氨蝶呤片、阿瑞匹坦胶囊。 展开更多
关键词 土大黄 银屑病 小鼠 苏木精-伊红染色 实时荧光定量聚合酶链反应 酶联免疫吸附测定 蛋白免疫印迹 P物质 神经肽-1受体
下载PDF
RT-PCR法检测胃癌组织mdr-1基因的表达及临床意义 被引量:13
7
作者 方刚 臧静 +2 位作者 刘复坤 黎介寿 陈龙邦 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期169-171,共3页
应用RT-PCR方法检测30例胃腺癌mdr-1基因的表达。结果发现术前化疗的胃腺癌中mdr-1表达阳性率为91%,明显高于术前非化疗组的阳性率(47%)(P<0.O1)。在术前非化疗组中,中分化胃癌的阳性率高于低分化胃癌的阳性率(P<0.05)。... 应用RT-PCR方法检测30例胃腺癌mdr-1基因的表达。结果发现术前化疗的胃腺癌中mdr-1表达阳性率为91%,明显高于术前非化疗组的阳性率(47%)(P<0.O1)。在术前非化疗组中,中分化胃癌的阳性率高于低分化胃癌的阳性率(P<0.05)。mdr-l基因的表达与胃癌转移的发生率无明确关系。临床检测胃癌mdr-l基因的表达,有助于选择术后化疗方案。 展开更多
关键词 胃肿瘤 rt-PCR MDR-1 基因表达
下载PDF
RT-PCR扩增HIV-1基因gag区多个片段早期诊断HIV感染 被引量:4
8
作者 王晓辉 冯铁建 +2 位作者 石向东 陈琳 赵广录 《现代预防医学》 CAS 2004年第2期156-158,共3页
目的 :建立 RT- PCR(逆转录多聚酶链式反应 )扩增 HIV核酸的检测方法并将其应用到 HIV感染的早期诊断中。方法 :合成 HIV- 1(艾滋病毒 1型 )基因组 gag区 9条引物 ,从 HIV1+2蛋白印迹法确定为抗体阳性、并经病毒载量检测阳性的 HIV感染... 目的 :建立 RT- PCR(逆转录多聚酶链式反应 )扩增 HIV核酸的检测方法并将其应用到 HIV感染的早期诊断中。方法 :合成 HIV- 1(艾滋病毒 1型 )基因组 gag区 9条引物 ,从 HIV1+2蛋白印迹法确定为抗体阳性、并经病毒载量检测阳性的 HIV感染者血浆中提取 HIV- 1RNA,应用 9条引物的随机组合 RT- PCR扩增 HIV gag区核酸片断 ,筛选出扩增灵敏度最高的 3个扩增片断。从血浆 HIV病毒载量大于 5 0 0 copy/ ml的 HIV感染者和正常人血浆中提取病毒 RNA,应用上述 3个扩增片断的引物组合 RT- PCR扩增样本核酸 ,PCR产物经凝胶电泳观察 ,判断待检病人是否感染。结果 :该方法的敏感性为 96 % ,特异性为 10 0 % ,3个片断扩增灵敏度分别为 76 %、 87%、 73%。结论 :应用 RT- PCR扩增 HIV核酸保守区多个基因片断 ,具有较高的灵敏度和特异度 ,方法简单 ,可以应用到 展开更多
关键词 rt-PCR HIV-1基因 gag区 多个核酸片段 早期诊断 艾滋病 HIV感染 逆转录多聚酶链式反应
下载PDF
荧光定量RT-PCR检测mdr-1基因表达 被引量:13
9
作者 高劲松 马刚 +3 位作者 仝明 陈佩毅 王传华 何蕴韶 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第3期200-203,共4页
目的 :建立荧光定量RT PCR检测肿瘤细胞mdr 1基因表达的方法 ,了解肺癌组织中mdr 1的表达水平。方法 :建立荧光定量RT PCR方法 ,在PE770 0型检测仪上定量检测K5 6 2 /ADM耐药株和K5 6 2不耐药株细胞mdr 1基因表达水平 ,同时检测 45例初... 目的 :建立荧光定量RT PCR检测肿瘤细胞mdr 1基因表达的方法 ,了解肺癌组织中mdr 1的表达水平。方法 :建立荧光定量RT PCR方法 ,在PE770 0型检测仪上定量检测K5 6 2 /ADM耐药株和K5 6 2不耐药株细胞mdr 1基因表达水平 ,同时检测 45例初治肺部肿瘤病人组织标本。结果 :荧光定量RT PCR检测K5 6 2 /ADM耐药株和K5 6 2不耐药株细胞mdr 1基因表达 ,重复 10次实验所得结果平均分别为 (6 86± 0 6 5 )× 10 7拷贝 /μgRNA和 (8 49± 0 6 7)× 10 5拷贝 /μgRNA ,两者相差 80 8倍 ,变异系数分别为 9 5 %和 7 9%。 45例肺部肿瘤中 ,有 12例检出有mdr 1基因不同程度的表达。结论 :荧光定量RT PCR检测mdr 1基因表达方法 ,检测结果用绝对拷贝数来表示 ,定量准确可靠 ,并有利于标准的统一。有 1/4未经化疗的肺癌病人有一定水平mdr 展开更多
关键词 荧光定量检测 rt-PCR MDR-1基因 肺肿瘤
下载PDF
1型鸭肝炎病毒RT-PCR快速检测方法的建立 被引量:2
10
作者 王永娟 朱善元 +3 位作者 王安平 吴双 洪伟鸣 左伟勇 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第2期116-119,共4页
为建立快速检测临床1型鸭肝炎病毒(DHAV-1)感染的方法,根据DHAV-1的vp1基因序列设计1对引物,以DHAV-1及其他常见的感染鸭的病毒基因组为模板,建立了DHAV-1的特异性RT-PCR检测方法;以10倍梯度稀释的DHAV-1 RNA为模板,测定该方法的灵敏度... 为建立快速检测临床1型鸭肝炎病毒(DHAV-1)感染的方法,根据DHAV-1的vp1基因序列设计1对引物,以DHAV-1及其他常见的感染鸭的病毒基因组为模板,建立了DHAV-1的特异性RT-PCR检测方法;以10倍梯度稀释的DHAV-1 RNA为模板,测定该方法的灵敏度;采集江苏多地的疑似DHAV-1感染病料,提取基因组进行RT-PCR扩增,产物经测序鉴定后判断所建立方法的检测率。结果显示,建立的方法可以特异性扩增DHAV-1 vp1基因保守区360 bp的序列,最低可检测1 fg基因组模板,对临床样品检测率为100%。表明,成功建立了特异性强、灵敏度高且可以用于临床快速诊断DHAV-1感染的方法。 展开更多
关键词 1型鸭肝炎病毒 反转录PCR 检测
下载PDF
运用FQ RT-PCR和Western blot检测Claudin-1在人类大肠癌细胞株的表达 被引量:1
11
作者 陈琳 姜泊 +3 位作者 张亚历 张宏权 龚伟 卢青 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第2期205-207,共3页
目的:探讨密连接蛋白Claudin-1与人类大肠癌进展的关系。方法:采用实时荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)和Western blot,检测Claudin-1在3株不同分期人类大肠癌细胞株中的表达。结果:Claudin-1在大肠癌Dukes'type C期细胞株SW620强表达,Duk... 目的:探讨密连接蛋白Claudin-1与人类大肠癌进展的关系。方法:采用实时荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)和Western blot,检测Claudin-1在3株不同分期人类大肠癌细胞株中的表达。结果:Claudin-1在大肠癌Dukes'type C期细胞株SW620强表达,Dukes'type B期细胞株SW480次之,Dukes'type A期细胞株SW1116最弱。结论:Claudin-1在人类大肠癌细胞株中有表达,其表达量与大肠癌分期有关。 展开更多
关键词 大肠癌Claudin-1 实时荧光定量rt-PCR WESTERN BLOT
下载PDF
水禽源禽1型副黏病毒强毒RT-PCR方法的建立 被引量:2
12
作者 施少华 程龙飞 +3 位作者 陈红梅 傅光华 杨维星 黄瑜 《福建农业学报》 CAS 2009年第1期11-13,共3页
参照GenBank上登录的水禽源禽1型副黏病毒强毒株F基因序列设计引物,建立检测水禽源禽1型副黏病毒强毒株的RT-PCR方法。该方法能从水禽源禽1型副黏病毒强毒株扩增出1条400 bp的特异片段,从水禽源禽1型副黏病毒弱毒、鸭瘟病毒、鸭1型肝炎... 参照GenBank上登录的水禽源禽1型副黏病毒强毒株F基因序列设计引物,建立检测水禽源禽1型副黏病毒强毒株的RT-PCR方法。该方法能从水禽源禽1型副黏病毒强毒株扩增出1条400 bp的特异片段,从水禽源禽1型副黏病毒弱毒、鸭瘟病毒、鸭1型肝炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性法氏囊病病毒、H9亚型禽流感病毒和禽多杀性巴氏杆菌等均不能扩增出目的片段。敏感性试验显示该RT-PCR方法最低可检测出10 pg的病毒核酸。因此,该RT-PCR方法可用于水禽源禽1型副黏病毒强毒的临床诊断。 展开更多
关键词 水禽源禽1型副黏病毒 强毒株 RT—PCR
下载PDF
PAI-1基因多态性与缺血性脑卒中rt-PA静脉溶栓后出血性转化和血管再闭塞的相关性 被引量:3
13
作者 周媛 叶斌 +1 位作者 孙静 宫鑫 《承德医学院学报》 2022年第2期106-110,共5页
目的 探讨纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)基因多态性与缺血性脑卒中rt-PA静脉溶栓后出血性转化和血管再闭塞的相关性。方法 将蚌埠市第三人民医院收治的232例接受rt-PA静脉溶栓治疗的急性缺血性脑卒中患者作为研究对象,根据患者是否出... 目的 探讨纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)基因多态性与缺血性脑卒中rt-PA静脉溶栓后出血性转化和血管再闭塞的相关性。方法 将蚌埠市第三人民医院收治的232例接受rt-PA静脉溶栓治疗的急性缺血性脑卒中患者作为研究对象,根据患者是否出现血管再闭塞或出血性转化(HT),分为再闭塞率组(41例),HT组(36例)和对照组(155例)。比较2组患者血清PAI-1水平和PAI-1基因675位点多态性,并对不同基因型患者血清PAI-1水平进行分析。结果 再闭塞组患者血清PAI-I水平明显高于对照组,而HT组患者血清PAI-I水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。基因型分析结果表明,再闭塞组4G/4G型患者比例明显高于对照组,而HT组患者4G/4G型患者比例明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 急性缺血性脑卒中患者接受rt-PA治疗溶栓治疗后发生血管再闭塞或HT与血清PAI-1水平密切相关,而PAI-1基因675位点4G/4G是影响PAI-1水平重要因素,可能是导致患者对rt-PA溶栓治疗后出现治疗效果差异的主要原因。 展开更多
关键词 纤溶酶原激活物抑制物-1 缺血性脑卒中 阿替普酶 血管再闭塞 出血转化
下载PDF
基因1型狂犬病病毒一步法荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:5
14
作者 许运斌 邵明富 +3 位作者 范金红 孙彦伟 席进 涂长春 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期297-302,310,共7页
目的在我国狂犬病均由基因1型狂犬病病毒(rabies virus,RV)引起。本研究针对RV N基因保守序列设计并合成了一套简并引物和Taqman探针,在优化反应条件的基础上,建立了检测RV核酸的一步法荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法。方法与结果该... 目的在我国狂犬病均由基因1型狂犬病病毒(rabies virus,RV)引起。本研究针对RV N基因保守序列设计并合成了一套简并引物和Taqman探针,在优化反应条件的基础上,建立了检测RV核酸的一步法荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法。方法与结果该方法能特异检测基因1型,不能检测基因2-7型和犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病病毒(CAV)、水泡性口炎病毒(VSV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)等5种非狂犬病病原体,其检测灵敏度可达到4.68个TCID50的病毒含量。用该方法对29份新鲜和5份腐败的临床犬脑组织样品进行检测,并与国际金标准确诊方法狂犬病荧光抗体染色法(FAT)和乳鼠脑内接种试验(MIT)及本实验室建立的套式RT-PCR方法进行比较。结果表明所建立的qRT-PCR与套式RT-PCR的符合率为100%,二者均检测出12份阳性的新鲜样品和5份阳性的腐败样品,而FAT只检测出12份阳性的新鲜样品和1份阳性的腐败样品,MIT只检测出12份阳性,未检测出阳性腐败样品。检测中FAT和MIT确诊的所有阳性样品在qRT-PCR检测均是阳性,而在FAT检测为阴性的4份腐败样品在qRT-PCR为阳性,说明所建立的qRT-PCR方法准确性达到了FAT和MIT的水平,而且灵敏度更高,更适合于腐败样品的检测。结论研究结果表明该qRT-PCR方法特异性好、灵敏度高、污染率低、操作简单,在我国动物狂犬病临床诊断上具有巨大的应用价值。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 基因Ⅰ型 一步法荧光定量rt-PCR
下载PDF
RT-PCR方法检测细胞信号传导抑制因子-1(SOCS-1) mRNA在髓性白血病中的表达
15
作者 杨海平 戴敏 +2 位作者 周红升 黄亮 张东华 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期677-680,共4页
为了研究细胞信号传导抑制因子(SOCS-1)在急性和慢性髓性白血病患者外周血中的表达并探讨其临床意义,用RT-PCR的方法检测急性和慢性白血病患者外周血单个核细胞中SOCS-1mRNA的表达,并将其表达与所有患者的病情进行了分析。结果显示在25... 为了研究细胞信号传导抑制因子(SOCS-1)在急性和慢性髓性白血病患者外周血中的表达并探讨其临床意义,用RT-PCR的方法检测急性和慢性白血病患者外周血单个核细胞中SOCS-1mRNA的表达,并将其表达与所有患者的病情进行了分析。结果显示在25例急性髓性白血病患者中4例SOCS-1mRNA表达阳性,阳性率16·00%,在25例慢性髓性白血病患者中11例SOCS-1mRNA表达阳性,阳性率44.00%,二者差异有统计学意义。在25例慢性髓性白血病患者中,无进展组(慢性期)12例,阳性2例,而进展组(加速期和急变期)13例,阳性11例,两组间差异有统计学意义。SOCS-1mRNA阳性的CML患者,对干扰素治疗反应差,进入加速期后SOCS-1mRNA多数呈持续阳性表达,病情进行性发展,预后极差。结论急性和慢性髓性白血病患者外周血单个核细胞中均可检测到SOCS-1mRNA的表达,CML患者阳性率高,加速期与急变期表达阳性者显著增多,与干扰素治疗反应及预后密切相关。 展开更多
关键词 rt-PCR SOCS-1 MRNA 白血病
下载PDF
实时荧光定量RT-PCR检测急性白血病患者骨髓HB-1的表达 被引量:7
16
作者 王清云 李渊 +4 位作者 戢莉 梁赜隐 刘微 任汉云 邱志祥 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期8-15,共8页
目的:探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓细胞HB-1基因的表达水平以及HB-1基因在监测ALL微小残留病(MRD)方面的意义。方法:建立实时荧光定量RT-PCR方法(Taqman探针),检测HB-1基因的表达水平,并对其灵敏度、特异性和重复性进行检测。... 目的:探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓细胞HB-1基因的表达水平以及HB-1基因在监测ALL微小残留病(MRD)方面的意义。方法:建立实时荧光定量RT-PCR方法(Taqman探针),检测HB-1基因的表达水平,并对其灵敏度、特异性和重复性进行检测。应用此方法检测了急性淋巴细胞白血病183例次,急性髓系白血病(AML)70例,血液系统非恶性疾病52例和造血干细胞健康供者24例的骨髓细胞HB-1基因的表达水平,并分析33例急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者HB-1基因的表达水平与疾病诊断、复发的相关性。结果:构建的实时荧光定量PCR方法的灵敏度达10-4水平,批间变异系数为6.79%,批内变异系数为4.80%。检测到HB-1基因特异性表达于B-ALL细胞:初发/复发B-ALL中HB-1基因表达的中位水平明显高于ALL完全缓解组、初发T-ALL、初发AML、血液系统非恶性病及健康骨髓供者(33.0%vs 0.68%、0.07%、0.02%、0.58%、0,P<0.01),而初发TALL、初发AM L、血液系统非恶性疾病和健康供者HB-1基因的表达水平无统计学差异(P>0.05)。B-ALL患者血液学缓解时HB-1基因水平明显下降至0.68%(0-7.99%),疾病复发时HB-1表达水平再次升高(共3例,HB-1分别为7.69%、8.08%和484.0%),其检测结果与流式细胞学检测结果变化一致。结论:HB-1基因特异性表达于B-ALL细胞,所建立的实时荧光定量RT-PCR法在检测骨髓细胞HB-1基因的表达水平方面具有很好的灵敏度、特异性和重复性。HB-1基因可作为B-ALL患者的临床检测、监测MRD和早期预测复发的分子学标志。 展开更多
关键词 急性白血病 HB-1基因 实时荧光定量rt-PCR
原文传递
甘薯NPR1基因半定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:8
17
作者 陈观水 潘大仁 +3 位作者 周以飞 林生 高丽华 杨志伟 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第1期56-59,共4页
为进一步研究甘薯病原微生物的侵染对甘薯病程相关非表达子1基因(NPR1)表达的影响,以甘薯肌动蛋白(β-ac-tin)基因为内参照基因,提取甘薯叶片总RNA,反转录为cDNA,同批异管对该2个基因进行PCR扩增.通过对循环数的优化和对体系重复性、准... 为进一步研究甘薯病原微生物的侵染对甘薯病程相关非表达子1基因(NPR1)表达的影响,以甘薯肌动蛋白(β-ac-tin)基因为内参照基因,提取甘薯叶片总RNA,反转录为cDNA,同批异管对该2个基因进行PCR扩增.通过对循环数的优化和对体系重复性、准确性的分析,建立了一个稳定、方便的半定量RT-PCR体系. 展开更多
关键词 甘薯 病程相关非表达子1(NPR1) 基因表达 半定量rt-PCR
下载PDF
菠萝凋萎相关病毒-1实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用 被引量:3
18
作者 胡加谊 罗志文 +6 位作者 李向宏 范鸿雁 周朋 章绍延 张治礼 刘志昕 何凡 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期116-121,125,共7页
菠萝凋萎相关病毒-1(Pineapple mealybug wilt associated virus-1,PMWaV-1)是田间检出率最高的菠萝凋萎病毒。本研究根据PMWaV-1CP基因保守序列设计特异性TaqMan探针和引物,建立并优化了PMWaV-1实时荧光定量RT-PCR检测方法。优化后的... 菠萝凋萎相关病毒-1(Pineapple mealybug wilt associated virus-1,PMWaV-1)是田间检出率最高的菠萝凋萎病毒。本研究根据PMWaV-1CP基因保守序列设计特异性TaqMan探针和引物,建立并优化了PMWaV-1实时荧光定量RT-PCR检测方法。优化后的反应体系制备的标准曲线为y=-3.307×log x+38.18,相关系数r2为0.998。试验结果表明,该方法能特异性地检测PMWaV-1,对PMWaV-2、3和阴性对照均无反应;最低检测限达到40拷贝。重复性试验表明批内和批间变异系数均小于1.98%,是一种操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性较好的PMWaV-1定量检测方法。样品检测结果表明PMWaV-1在菠萝植株老叶、嫩叶和吸芽中的病毒含量呈递减趋势。 展开更多
关键词 菠萝凋萎相关病毒-1 TAQMAN探针 实时荧光定量rt-PCR 检测
下载PDF
应用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测TGF-β1诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞中PAI-1mRNA表达 被引量:2
19
作者 何淑芳 杨林 +6 位作者 黄维娟 杨雁 周伏圣 方巧云 张安平 杨森 张学军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期64-67,共4页
目的应用SYBR荧光实时定量RT—PCR法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor betal,TGF-β1)诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KFS)中纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor1,PAI-1)mRN... 目的应用SYBR荧光实时定量RT—PCR法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor betal,TGF-β1)诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KFS)中纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor1,PAI-1)mRNA的表达。方法体外分离培养KFs,应用不同浓度(1.25~20pmol·L-1)TGF-β1刺激KFs3h或TGF-β1(10pmol·L-1)刺激KFs不同时间(0.5~6h),采用SYBRGreenI荧光实时定量RT—PCR法检测,以B—actin基因作为内参,计算各组PAI-1mRNA的相对表达量。结果与空白对照组相比,TGF-β1能明显诱导KFs中PAI-1mRNA的表达,10、20pmol·L-1浓度组表达比值分别增至4.19及4.44倍(P〈0.01);TGF-β1(10pmol·L。)的1、2h时问组表达比值分别增至2.29及2.41倍(P〈0.05),3、6h时间组分别增至4.19及5.83倍(P〈0.01)。提示,TGF-β1诱导KFs中PAI=1mRNA表达的最适浓度为10pmol·L-1、最适时间为3h。结论利用SYBR荧光实时定量RT—PCR法检测TGF-β1诱导KFs中PAI-1mRNA的表达,为进一步研究瘢痕疙瘩中TGF-β1信号通路的靶基因调控机制,以及开发治疗瘢痕疙瘩的新药提供了基础。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 转化生长因子-β1 纤溶酶原激活物抑制剂-1 荧光实时定量RT—PCR
下载PDF
用RT-PCR技术研究水稻中抗病基因同源序列DFR-1、Os Mlo-1所在基因的功能 被引量:1
20
作者 刘卫东 《咸宁学院学报》 2005年第3期117-120,共4页
DFR-1、OsMlo-1分别是最近从水稻中克隆的玉米Hm1和大麦中Mlo抗病基因同源序列,这两个序列与两个已报道的水稻抗稻瘟病数量性状位点(QTLs)有较好的对应关系,表明它们所在的基因可能参与抗病反应.为了进一步研究水稻DFR-1、OsMlo-1所在... DFR-1、OsMlo-1分别是最近从水稻中克隆的玉米Hm1和大麦中Mlo抗病基因同源序列,这两个序列与两个已报道的水稻抗稻瘟病数量性状位点(QTLs)有较好的对应关系,表明它们所在的基因可能参与抗病反应.为了进一步研究水稻DFR-1、OsMlo-1所在基因的功能,在DFR-1、OsMlo-1假定的外显子上设计引物,通过RT-PCR技术,研究在接种白叶枯病(Xan-thomanasoryzapvoryzae)菌株PX099以及接种稻瘟病(Magnoparthegrisea)菌株V86013前后,水稻品种IRBB13和水稻品种明恢63中DFR-1、OsMlo-1所在基因的表达.结果表明:在接种白叶枯病菌株PX099的水稻品种IRBB13中与DFR-1对应的基因是诱导增强的;在接种稻瘟病菌株V86013的水稻品种明恢63中与DFR-1、OsMlo-1对应的基因是诱导增强的.进一步表明DFR-1、OsMlo-1所在的基因可能参与水稻抗病反应. 展开更多
关键词 水稻 DFR-1 OsMlo-1 rt-PCR 抗病反应
下载PDF
上一页 1 2 26 下一页 到第
使用帮助 返回顶部