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The rice Raf-like MAPKKK OsILA1 confers broad-spectrum resistance to bacterial blight by suppressing the OsMAPKK4-OsMAPK6 cascade 被引量:6
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作者 Jie Chen Lihan Wang +8 位作者 Zeyu Yang Hongbo Liu Chuanliang Chu Zhenzhen Zhang Qinglu Zhang Xianghua Li Jinghua Xiao Shiping Wang Meng Yuan 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2021年第10期1815-1832,共18页
Mitogen-activated protein kinase kinase kinase(MAPKKK)are the first components of MAPK cascades,which play pivotal roles in signaling during plant development and physiological processes.The genome of rice encodes 75 ... Mitogen-activated protein kinase kinase kinase(MAPKKK)are the first components of MAPK cascades,which play pivotal roles in signaling during plant development and physiological processes.The genome of rice encodes 75 MAPKKKs,of which 43 are Raf-like MAPKKKs.The functions and action modes of most of the Raf-like MAPKKKs,whether they function as bona fide MAPKKKs and which are their downstream MAPKKs,are largely unknown.Here,we identified the osmapkkk43 mutant,which conferred broad-spectrum resistance to Xanthomonas oryzae pv.oryzae(Xoo),the destructive bacterial pathogen of rice.Oryza sativa(Os)MAPKKK43 encoding a Raf-like MAPKKK was previously known as Increased Leaf Angle 1(OsILA1).Genetic analysis indicated that OsILA1 functioned as a negative regulator and acted upstream of the OsMAPKK4-OsMAPK6 cascade in rice-Xoo interactions.Unlike classical MAPKKKs,OsILA1 mainly phosphorylated the threonine 34 site at the N-terminal domain of OsMAPKK4,which possibly influenced the stability of OsMAPKK4.The N-terminal domain of OsILA1 is required for its homodimer formation and its full phosphorylation capacity.Taken together,our findings reveal that OsILA1 acts as a negative regulator of the OsMAPKK4-OsMAPK6 cascade and is involved in rice-Xoo interactions. 展开更多
关键词 MAPK cascade OsILAI raf-like MAPKKK RICE XANTHOMONAS
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枳NLP转录因子响应干旱胁迫并与NRE顺式作用元件互作 被引量:3
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作者 曹雄军 卢晓鹏 +2 位作者 熊江 李静 谢深喜 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第17期3370-3378,共9页
【目的】探讨枳氮素含量在干旱条件下的变化,以及氮代谢途径枳亚硝酸还原酶基因(NiR)和NLP转录因子的响应表达,分析确定枳NLP转录因子与NiR启动子区域硝酸盐响应顺式作用元件(nitrate-responsive cis-element,NRE)位点绑定互作。【方法... 【目的】探讨枳氮素含量在干旱条件下的变化,以及氮代谢途径枳亚硝酸还原酶基因(NiR)和NLP转录因子的响应表达,分析确定枳NLP转录因子与NiR启动子区域硝酸盐响应顺式作用元件(nitrate-responsive cis-element,NRE)位点绑定互作。【方法】以一年生的砧木枳为试验材料,进行干旱处理直至植株叶片开始萎蔫,并设置对照。利用凯氏定氮仪检测干旱条件下枳叶片和侧根的全氮含量,并同步利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和2-ΔΔCT法分析PtNiR、PtNLP2、PtNLP4、PtNLP7及PtNLP8在枳叶片和侧根的表达情况。通过基因克隆并检索与比对分析,获取PtNiR启动子区域的硝酸盐响应顺式作用元件序列,之后利用同源克隆方法构建用于酵母单杂交的pHIS2-4×NRE和p GADT7-Rec-NLP载体,将构建的pHIS2-4×NRE和p GADT7-Rec-NLP载体质粒共同转化到酵母菌株Y187中,在氨基酸缺失培养基(SD/-Trp/-Leu,以及SD/-His/-Trp/-Leu/+120 mmol·L^(-1) 3-氨基三唑)上30℃恒温培养3—5 d,观察酵母的生长情况,以确定枳NLP转录因子(PtNLP2、PtNLP4、PtNLP7及PtNLP8)与NRE的互作关系。【结果】受干旱的影响,枳叶片全氮含量表现出先升高再下降的趋势,而侧根中全氮含量则显著下降;在对照中,枳叶片和侧根全氮含量均显著上升。RT-qPCR分析表明,PtNiR的表达水平在叶片中先上调然后再显著下调,而在侧根中则随着干旱程度的增加显著下调;PtNLP2、PtNLP4及PtNLP7在枳叶片和侧根中的表达也均呈现不同程度的先上调然后再受到抑制的规律,而PtNLP8在枳叶片和侧根中的表达则在一定程度上受到干旱抑制。通过克隆测序分析,在枳NiR启动子区域-196至-154的位置发现了疑似NRE。酵母单杂交分析表明,转化pHIS2-4×NRE-HIS3载体和p GADT7-Rec-NLP载体的Y187酵母在对照培养基(-Trp/-Leu)和含有120 mmol·L^(-1) 3-氨基三唑的三缺培养基(-His/-Trp/-Leu)上均能正常生长。【结论】枳侧根中的全氮含量受干旱的影响而显著下降,以对照为参比,枳侧根和叶片中的全氮含量均随着干旱时间的延长而相对减少。氮代谢途径的枳NiR和NLP转录因子在叶片和侧根中的表达对干旱有不同程度的响应。PtNLP2、PtNLP4、PtNLP7及PtNLP8转录因子均能与PtNiR启动子中的硝酸盐响应顺式作用元件(NRE)位点绑定互作,从而激活下游基因的表达。 展开更多
关键词 NLP转录因子 干旱胁迫 硝酸盐响应顺式作用元件 绑定
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糖蛋白96、Raf-1和Nei内切核酸酶Ⅷ样蛋白2表达与鼻咽癌患者放射治疗敏感性的相关性
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作者 訾滢洁 王彬 高会霞 《新乡医学院学报》 CAS 2022年第6期548-551,556,共5页
目的探讨糖蛋白96(gp96)、Raf-1及Nei内切核酸酶Ⅷ样蛋白2(NEIL2)在鼻咽癌(NPC)组织中的表达及其与放射治疗敏感性的相关性。方法选择2017年12月至2019年12月河南科技大学附属许昌市中心医院收治的125例疑似NPC患者为研究对象,根据病理... 目的探讨糖蛋白96(gp96)、Raf-1及Nei内切核酸酶Ⅷ样蛋白2(NEIL2)在鼻咽癌(NPC)组织中的表达及其与放射治疗敏感性的相关性。方法选择2017年12月至2019年12月河南科技大学附属许昌市中心医院收治的125例疑似NPC患者为研究对象,根据病理组织学检查结果确诊为NPC 65例,鼻咽炎60例(对照组)。65例NPC患者确诊后均行放射治疗,放射治疗后根据治疗效果将患者分为放射治疗敏感组(n=48)和放射治疗抵抗组(n=17)。采用免疫组织化学法检测NPC组织和鼻咽炎患者鼻咽部黏膜组织中gp96、Raf-1及NEIL2蛋白的表达,采用Kendall分析gp96、Raf-1及NEIL2蛋白与NPC患者放射治疗敏感性的关系。结果放射治疗敏感组和放射治疗抵抗组患者NPC组织中gp96、Raf-1、NEIL2蛋白表达显著高于对照组,放射治疗抵抗组患者NPC组织中gp96、Raf-1、NEIL2蛋白表达显著高于放射治疗敏感组(P<0.05)。Kendall相关分析结果显示,gp96、Raf-1及NEIL2蛋白表达与NPC患者的放射治疗敏感性均呈显著负相关(r=-0.323、-0.618、-0.396,P<0.01)。结论NPC组织中gp96、Raf-1和NEIL2蛋白高表达,且gp96、Raf-1和NEIL2蛋白表达水平与NPC的放射治疗敏感性呈负相关,抑制gp96、Raf-1和NEIL2蛋白表达有望提高NPC的放射治疗敏感性。 展开更多
关键词 鼻咽癌 糖蛋白96 RAF-1 Nei内切核酸酶Ⅷ样蛋白2 放射治疗 敏感性
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胰高血糖素样肽2对吉西他滨诱导的肠上皮细胞凋亡、周期阻滞及Ras-Raf-MEK-ERK通路的影响
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作者 叶蕾 杜晓翔 《全科医学临床与教育》 2019年第3期206-209,188,共5页
目的探讨胰高血糖素样肽2(GLP-2)对吉西他滨(GEM)诱导的肠上皮细胞凋亡、周期及Ras-Raf-MEKERK通路的影响。方法培养人肠上皮模型细胞Caco2,根据损伤与保护措施分为溶剂对照组、10 mg/L GEM损伤组和10 mg/L GEM基础上加入1μmol/L GLP-... 目的探讨胰高血糖素样肽2(GLP-2)对吉西他滨(GEM)诱导的肠上皮细胞凋亡、周期及Ras-Raf-MEKERK通路的影响。方法培养人肠上皮模型细胞Caco2,根据损伤与保护措施分为溶剂对照组、10 mg/L GEM损伤组和10 mg/L GEM基础上加入1μmol/L GLP-2的保护组。细胞培养24 h后,采用流式细胞术PI单染法检测分析细胞周期;采用流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染法检测分析细胞凋亡情况;采用real-time RT-PCR检测周期相关分子CDK4、细胞凋亡相关分子BAX和FAS、Ras-Raf-MEK-ERK通路关键分子MEK mRNA的表达。结果与对照组比较,GEM不仅明显增加细胞周期G1期比例与细胞凋亡比例(P<0.05),而且使CDK4 mRNA表达下降(t=12.15,P<0.05),BAX、FAS mRNA及MEK mRNA表达升高(t分别=-12.80、-19.30、-4.55,P均<0.05)。而GLP-2干预GEM作用后,细胞周期G1期比例与细胞凋亡比例均下调,且CDK4 mRNA表达上调,BAX mRNA、FAS mRNA及MEK mRNA表达明显下调(t分别=-25.23、5.16、15.51、4.78,P均<0.05)。结论 GLP-2可抑制甚至逆转GEM所致的肠上皮细胞周期阻滞、细胞凋亡及Ras-Raf-MEK-ERK信号通路的异常活化。 展开更多
关键词 胰高血糖素样肽2 吉西他滨 细胞周期阻滞 细胞凋亡 Ras-Raf-MEK-ERK通路
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瘀血痹片对大鼠胶原诱导性关节炎的干预作用及抗炎机制 被引量:12
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作者 袁蓓 苏晓慧 +4 位作者 郭婉怡 汪倩 刘春芳 韩岚 林娜 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期52-62,共11页
目的:观察瘀血痹片对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的干预作用并探索抗炎相关机制。方法:建立大鼠CIA模型,给药组和阳性药组分别灌胃给予低、中、高剂量瘀血痹片(0.1,0.2,0.4 g·kg^(-1))和甲氨蝶呤(0.4 mg·kg^(-1)),每3 d检测发... 目的:观察瘀血痹片对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的干预作用并探索抗炎相关机制。方法:建立大鼠CIA模型,给药组和阳性药组分别灌胃给予低、中、高剂量瘀血痹片(0.1,0.2,0.4 g·kg^(-1))和甲氨蝶呤(0.4 mg·kg^(-1)),每3 d检测发病率、机械痛敏阈值及冷刺激痛敏;给药30 d后取材,外周血检测血小板计数(PLT)及纤维蛋白原(FIB)含量;苏木素-伊红染色法分析CIA大鼠关节组织病理变化;免疫组化法(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测CIA大鼠关节组织中白细胞介素(IL)-1β,IL-8,核转录因子-κB(NF-κB)p65,磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65),大鼠肉瘤(Ras)及Raf-1蛋白表达情况。此外,采用10μg·L^(-1)的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人类类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS),转移小室法检测RA-FLS迁移及侵袭能力。Western blot检测RA-FLS中Ras,Raf-1,p-NF-κB p65蛋白表达水平。结果:与正常组比较,CIA模型组发病率升高,机械痛阈值明显降低(P<0.05,P<0.01),冷刺激反应评分显著增高(P<0.01),外周血中PLT和FIB含量,大鼠关节组织病理评分,RA-FLS迁移和侵袭细胞个数及炎性相关因子的表达水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,瘀血痹片低、中、高剂量组均能降低CIA大鼠发病率,提高其机械痛阈值并降低冷刺激痛敏反应评分(P<0.05,P<0.01);降低CIA大鼠外周血中PLT和FIB含量(P<0.05,P<0.01),改善关节滑膜增生、骨及软骨破坏等病理变化(P<0.05,P<0.01),并抑制RA-FLS的迁移及侵袭。此外,瘀血痹片低、中、高剂量组均能不同程度地著抑制CIA大鼠关节组织中IL^(-1)β,IL-8,Ras,Raf-1和p-NF-κB p65的含量,以及RA-FLS细胞中Ras,Raf-1及p-NF-κB p65等蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:瘀血痹片具有降低大鼠CIA发病率、关节炎临床症状和改善关节组织病理变化、抑制滑膜生成等作用,并且这一作用可能与其对Ras/Raf-1/NF-κB信号通路的抑制有关。 展开更多
关键词 类风湿关节炎(RA) 瘀血痹片 成纤维样滑膜细胞(FLS) 炎症因子 Ras/Raf-1/核转录因子-κB(NF-κB)
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