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λ噬菌体和cosmid重组DNA克隆的快速限制性内切酶图谱分析方法 被引量：6
1
作者 柴建华 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1990年第2期136-142,共7页
cosmld克隆的线性化用λcos末端酶来完成,线性的cosmid或λDNA经部份限制性内切酶酶解后,分别与已标记的cos顺序探针杂交(探针为分别与λ的左端或右端的cos顺序互补的12核苷酸单链片段),杂交后的部份酶解片段经电泳分离和自显影后,酶切... cosmld克隆的线性化用λcos末端酶来完成,线性的cosmid或λDNA经部份限制性内切酶酶解后,分别与已标记的cos顺序探针杂交(探针为分别与λ的左端或右端的cos顺序互补的12核苷酸单链片段),杂交后的部份酶解片段经电泳分离和自显影后,酶切点位置可直接在X-底片上读出。在本实验室条件下,可一次完成二个克隆包括5—6种限制性内切酶的图谱分析,分析和作图可通过计算机或手工进行。 展开更多
关键词 Λ噬菌体 重组dna 克隆 酶图谱
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赖型钩端螺旋体重组DNApCX7的特异性鉴定和限制性内切酶谱分析 被引量：1
2
作者 沈成义 戴保民 《华西医科大学学报》 CSCD 1994年第4期369-374,共6页
本实验将赖型钩端螺旋体（简称钩体）ＤＮＡ基因库的克隆ｐＣＸ７制备成￣（３２）Ｐ－重组ＤＮＡ探针，对８个不同血清群的１７株问号状钩体、双曲钩体ＰａｔｏｃⅠ株以及细螺旋体３０５５株ＤＮＡ进行打点杂交；同时用１５种ＤＮＡ片... 本实验将赖型钩端螺旋体（简称钩体）ＤＮＡ基因库的克隆ｐＣＸ７制备成￣（３２）Ｐ－重组ＤＮＡ探针，对８个不同血清群的１７株问号状钩体、双曲钩体ＰａｔｏｃⅠ株以及细螺旋体３０５５株ＤＮＡ进行打点杂交；同时用１５种ＤＮＡ片断进行限制性内切酶谱分析。结果表明，该重组ＤＮＡ具有问号状钩体种（Ｓｐｅｃｉｅｓ）特异性，但与不同问号状钩体之间的同源性程度有差别；限制性内切酶谱分析发现ｐＣＸ７重组ＤＮＡ片段长约１．７ｋｂ，具有１个Ｂｇ１Ⅱ识别位点和３个ＢｓｔＢ１识别位点。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 dna 限制性内切酶谱 重组质粒
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大鼠GDNF真核表达载体的构建及其真在核细胞中的表达 被引量：1
3
作者 郑世曦 李孝圭 +3 位作者 周利军 蒋嵩山 贺林 朱兴族 《第四军医大学学报》 1999年第9期737-739,共3页
目的：构建ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３／ Ｇ Ｄ Ｎ Ｆ真核表达质粒并了解其在真核细胞内的表达． 方法：将 Ｇ Ｄ Ｎ Ｆ逆转录聚合酶链式反应产物克隆至ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 真核表达载体上，经酶切鉴定及测序分析并以脂质体介导法转染真核细胞，了解... 目的：构建ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３／ Ｇ Ｄ Ｎ Ｆ真核表达质粒并了解其在真核细胞内的表达． 方法：将 Ｇ Ｄ Ｎ Ｆ逆转录聚合酶链式反应产物克隆至ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 真核表达载体上，经酶切鉴定及测序分析并以脂质体介导法转染真核细胞，了解其在细胞内的表达及其表达蛋白的生物学活性． 结果：酶切鉴定及测序分析表明重组ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３／ Ｇ Ｄ Ｎ Ｆ表达质粒克隆成功，转染实验表明重组质粒能在真核动物细胞中表达出具有活性的 Ｇ Ｄ Ｎ Ｆ蛋白．结论：以脂质体介导ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３／ Ｇ Ｄ Ｎ Ｆ质粒转染真核细胞有可能用于帕金森氏症的基因治疗． 展开更多
关键词 真核细胞 dna GDNF 载体
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丁酰苷菌素生物合成酶基因的分子克隆Ⅰ.重组质粒No.2和No.11的构建及其性质
4
作者 李元 石莲英 +1 位作者 刘伯英 王硕昌 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第1期30-35,共6页
环状芽孢杆菌B.circulans NRRL-B 3312是丁酰苷菌素的产生菌。用鸟枪法克隆其抗生素生物合成关键酶——α-羟基-γ-氨丁酰酰化酶基因。用EcoR Ⅰ分别酶切其染色体DNA和pUB110质粒,经T4-DNA连接酶连接,转化至枯草芽孢杆菌B.subtilis 168... 环状芽孢杆菌B.circulans NRRL-B 3312是丁酰苷菌素的产生菌。用鸟枪法克隆其抗生素生物合成关键酶——α-羟基-γ-氨丁酰酰化酶基因。用EcoR Ⅰ分别酶切其染色体DNA和pUB110质粒,经T4-DNA连接酶连接,转化至枯草芽孢杆菌B.subtilis 168的感受态细胞,以卡那霉素抗性标记挑选转化子。其中,No.2和No.11重组质粒对卡那霉素和新霉素的抗性较pUB110有所提高.构建了这两种重组质粒的限制性内切酶图谱。分子杂交实验确证,两个重组质粒DNA中均有B.circulans NRRL-B 3312的同源DNA序列。 展开更多
关键词 抗生素 丁酰苷菌素 基因克隆 质粒
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