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不结球白菜S位点受体激酶基因片段的克隆与表达分析 被引量:1
1
作者 张爱芬 王立 +2 位作者 侯喜林 刘同坤 李英 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期25-30,共6页
以不结球白菜自交不亲和系03的基因组DNA和柱头cDNA为模板,利用引物SRKF/SRKR扩增获得长度为964 bp和646 bp的SRK基因片段。序列比较分析表明,克隆的基因片段属于SRK基因的激酶域,该序列包含4个外显子和3个内含子,编码215个氨基酸,与芜... 以不结球白菜自交不亲和系03的基因组DNA和柱头cDNA为模板,利用引物SRKF/SRKR扩增获得长度为964 bp和646 bp的SRK基因片段。序列比较分析表明,克隆的基因片段属于SRK基因的激酶域,该序列包含4个外显子和3个内含子,编码215个氨基酸,与芜菁、甘蓝、芥蓝等SRK基因有90%以上的相似性。荧光定量PCR分析结果表明:自交不亲和系03和自交亲和系105不同组织中SRK基因的表达水平存在显著的差异,SRK基因主要在自交不亲和系的柱头中高度表达,自交亲和系中该基因的表达主要分布于叶片、花蕾和柱头组织中。 展开更多
关键词 不结球白菜 s位点受体激酶基因 荧光定量PCR 基因表达分析
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羽衣甘蓝S_(13-b)位点受体激酶基因的克隆及激酶结构域的原核表达 被引量:1
2
作者 蓝兴国 杨佳 +1 位作者 王艳红 李玉花 《生物技术通讯》 CAS 2010年第2期210-212,共3页
目的:分离羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶(SRK13-b)基因并进行序列及结构域分析,构建SRK13-b结构域的原核表达载体并进行重组蛋白质的原核表达和纯化。方法:提取羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系花期柱头的RNA,用RT-PCR法分离SRK13-b基因;将... 目的:分离羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶(SRK13-b)基因并进行序列及结构域分析,构建SRK13-b结构域的原核表达载体并进行重组蛋白质的原核表达和纯化。方法:提取羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系花期柱头的RNA,用RT-PCR法分离SRK13-b基因;将编码SRK13-b激酶结构域的序列插入大肠杆菌表达载体pET-14b中,构建原核表达质粒pET-SRK13-bCT,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株,经0.1mmol/LIPTG诱导,用Ni-NTA亲和层析柱对SRK13-b激酶结构域蛋白进行纯化。结果:分离获得羽衣甘蓝SRK13-b基因的长度为2571bp,编码856个氨基酸,GenBank收录号为EU180597;对SRK13-b激酶结构域蛋白进行诱导表达及纯化,SDS-PAGE显示相对分子质量约43×103的蛋白质特异表达,对表达产物进行分离纯化,获得了SRK13-b激酶结构域的融合蛋白。结论:羽衣甘蓝SRK13-b基因的克隆及激酶结构域的原核表达,为研究SRK的功能及自交不亲和性奠定了基础。 展开更多
关键词 羽衣甘蓝 自交不亲和 s13-b位点受体激酶 原核表达 纯化
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利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝SCR与SRK胞外域片段间的相互作用 被引量:8
3
作者 杨红 朱利泉 +10 位作者 张贺翠 杨永军 薛丽琰 杨昆 余浩 彭一波 罗兵 吴志刚 黄丹 高启国 王小佳 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1953-1962,共10页
【目的】利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝自交不亲和决定因子S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)与S位点受体激酶(SRK)胞外域(eSRK)片段间可能的相互作用区域。【方法】以结球甘蓝B3为材料,利用分子克隆技术,分别构建以pGBKT7为... 【目的】利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝自交不亲和决定因子S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)与S位点受体激酶(SRK)胞外域(eSRK)片段间可能的相互作用区域。【方法】以结球甘蓝B3为材料,利用分子克隆技术,分别构建以pGBKT7为载体的全长SCRB3、SCRB3-1、SCRB3-2的重组诱饵质粒;以pGADT7为载体的全长eSRKB3、eSRKB3-1、eSRKB3-2的重组激活域(AD)质粒。用PEG/LiAc法将上述重组诱饵质粒转化感受态酵母菌Y2HGold,重组AD质粒转化感受态酵母菌Y187;Y2HGold[pGBKT7-SCRB3-s]、Y187[pGADT7-eSRKB3-s]两两融合培养,观察交配菌在SD/-Trp-Leu/x-α-gal/AbA(DDO/x/A)、SD/-Trp-Leu-Ade-His/x-α-gal/AbA(QDO/x/A)平板上的生长情况。【结果】酵母双杂交重组表达载体构建成功,且无毒性和自激活作用产生;9个试验组中只有SCRB3-1、SCRB3-2与eSRKB3-1、eSRKB3-2重组表达质粒转化子两两组合的4个融合株在QDO/x/A平板上出现蓝色克隆,激活了报告基因AUR1-C、MEL1、HIS3、ADE2。【结论】酵母双杂交系统适用于SCR与SRK蛋白相互作用的研究,初步确定了SCR与eSRK存在相互作用,SRK跨膜域的存在与否对其相互作用的研究没有影响。 展开更多
关键词 结球甘蓝 自交不亲和 s位点受体激酶(sRK) s位点富含半胱氨酸蛋白(sCR) 酵母双杂交
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利用酵母双杂交法检测甘蓝SCR与SRK之间的相互作用 被引量:6
4
作者 罗兵 薛丽琰 +7 位作者 朱利泉 张贺翠 彭一波 陈松 杨红 杨昆 李成琼 王小佳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期579-586,共8页
为深入研究甘蓝S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域(eSRK)和SCR,通过酵母双杂交检测二者之间的相互作用,并利用同源重组技术将e... 为深入研究甘蓝S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域(eSRK)和SCR,通过酵母双杂交检测二者之间的相互作用,并利用同源重组技术将eSRK与GAL4报告基因DNA活化域融合(pGADT7eSRK)以及SCR与GAL4报告基因DNA结合域融合(pGBKT7SCR)。两种重组质粒分别转化酵母Y187和Y2HGold后未出现自激活现象。融合的二倍体酵母(pGADT7eSRK×pGBKT7SCR)能在选择性固体培养基(SD/–Ade/–His/–Leu/–Trp/X-a-Gal/AbA)上生长,并且菌落呈蓝色。结果表明,eSRK与SCR蛋白能够相互结合,为深入研究二者作用位点成功建立了一个技术平台。 展开更多
关键词 甘蓝 s位点受体激酶(sRK) s位点富含半胱氨酸蛋白(sCR) 酵母双杂交
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甘蓝自交不亲和信号传导中SRK结合蛋白基因THL1的克隆与序列分析 被引量:9
5
作者 刘东 朱利泉 王小佳 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期56-58,共3页
采用PCR和RT PCR技术 ,从甘蓝基因组和柱头总RNA中扩增获得了 719bp的硫氧还蛋白(THL1)的全长基因序列和 4 30bp的cDNA序列。序列分析首次表明 ,克隆的THL1基因全序列有两个内含子 ,cDNA序列编码
关键词 信号传导 sRK结合蛋白基因 序列分析 甘蓝 硫氧还蛋白 自交不亲和 基因克隆 s位点受体激酶 THL1基因
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甘蓝SCR、THL与SRK交替相互作用的酵母双杂交检测 被引量:2
6
作者 杨永军 张贺翠 +3 位作者 杨昆 薛丽琰 常登龙 朱利泉 《中国蔬菜》 北大核心 2012年第12X期14-26,共13页
eSRK(S位点受体激酶胞外域)、SCR/SP11(S位点富含半胱氨酸蛋白-S位点蛋白11)和THL1(类硫氧还蛋白)是甘蓝自交不亲和性信号传导过程重要的3个元件。利用PCR技术获得两种甘蓝SCR2(class-Ⅱ)、eSRK2(class-Ⅱ)、THL1、SRKJ(class-Ⅰ,SRK6... eSRK(S位点受体激酶胞外域)、SCR/SP11(S位点富含半胱氨酸蛋白-S位点蛋白11)和THL1(类硫氧还蛋白)是甘蓝自交不亲和性信号传导过程重要的3个元件。利用PCR技术获得两种甘蓝SCR2(class-Ⅱ)、eSRK2(class-Ⅱ)、THL1、SRKJ(class-Ⅰ,SRK6激酶域)和eSRK28(class-Ⅰ)的编码序列,并分别构建以pGBKT7为载体的SCR2、THL1的重组诱饵质粒和以pGADT7为载体的eSRK2、eSRK28、SRKJ的重组猎物质粒。利用酵母双杂交系统验证eSRK2-SCR2、eSRK28-SCR2、SRKJ-THL1的相互作用。重组质粒在宿主细胞中未产生毒性及自激活作用,表明重组表达载体构建成功;组合Y2HGold〔pGBKT7-SCR2〕×Y187〔pGADT7-eSRK2〕在三缺平板(SD/-Trp-Leu-His/x-α-gal/AbA,TDO/x/A)上生长出蓝色克隆,激活了报告基因AUR1-C、MEL1、HIS3;组合Y2HGold〔pGBKT7-SCR2〕×Y187〔pGADT7-eSRK28〕能够在二缺平板(SD/-Trp-Leu)上生长,但在三缺平板上不生长,表明不同单倍型SRK-SCR可能不发生相互作用;组合Y187〔pGADT7-SRKJ〕×Y2HGold〔pGBKT7-THL1〕能够在四缺平板上生长,激活了4种报告基因(AUR1-C、MEL1、HIS3、ADE2)。相同的单倍型SRK与SCR之间能够相互作用,不同的单倍型之间不会发生相互作用;酵母中报告基因表达的数目和类型的差异反映了class-Ⅱ型内部的SCR-SRK和class-Ⅰ的SCR-SRK互作强度,Ⅰ型高于Ⅱ型;THL与SRK之间存在较高的互作强度。这为Ⅰ型和Ⅱ型不同的自交不亲和性表型所依赖的3个起始信号传导元件之间的识别程度差异提供了直接证据和新内容。 展开更多
关键词 甘蓝 s位点受体激酶(sRK) s位点富含半胱氨酸蛋白(sCR) 类硫氧还蛋白(THL) 蛋白质互作 酵母双杂交
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羽衣甘蓝自交不亲和系的选育及S_(13b)单倍型的鉴定 被引量:4
7
作者 蓝兴国 解莉楠 +1 位作者 于晓敏 李玉花 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第S2期31-39,共9页
该文采用亲和指数法(种子数/自交授粉花朵数)分别在羽衣甘蓝‘赤兔’和‘白波’栽培品种的自交后代中,经过3年的自交选育获得1个自交不亲和系4·1·1和一个自交亲和系3·2·3·由于在芸苔属植物F1代杂交种的生产和... 该文采用亲和指数法(种子数/自交授粉花朵数)分别在羽衣甘蓝‘赤兔’和‘白波’栽培品种的自交后代中,经过3年的自交选育获得1个自交不亲和系4·1·1和一个自交亲和系3·2·3·由于在芸苔属植物F1代杂交种的生产和自交不亲和分子机制的研究方面S单倍型鉴定是必要的,因此在该文中我们采用了PCR方法利用引物PK1和PK4获得了BoSRKx的基因组序列,此序列的大小为919bp.经过数据库检索比对后发现BoSRKx的序列与BoSRK13b的序列完全一致.通过反转录PCR的方法获得了BoSRKx的cDNA序列,结果发现BoSRKx和BoSRK13b的序列在转录水平上也是完全一致的;另一方面,我们采用SCR保守信号肽编码区和NotⅠ-oligo(dT)设计的引物获得了BoSCRx的cDNA序列,经过数据库的检索比对后发现BoSCRx的序列比BoSCR13的序列只多出3个连续的碱基.根据上述结果我们推断出Sx单倍型就是S13b单倍型;最后,通过遗传分析结合PCR-RFLP方法和DNAblot方法对自交不亲和系进行了S13b纯合体的鉴定. 展开更多
关键词 羽衣甘蓝 自交不亲和 s位点受体蛋白激酶 s位点富含半胱氨酸蛋白 s13b单倍型
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珍稀植物华木莲SRK基因的克隆与亚细胞定位
8
作者 邱珊姗 邓凌帆 +4 位作者 刘苗苗 张建强 王颜波 刘齐元 王建革 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1339-1347,共9页
【目的】利用杂种优势是植物育种的重要目的,但对于自交不亲和物种来说,因为亲本杂合,很难充分利用最大杂种优势。自交不亲和是开花植物避免近交的重要繁育机制,自交不亲和与自交亲和相互转换在自交不亲和物种中非常普遍,这种转换可为... 【目的】利用杂种优势是植物育种的重要目的,但对于自交不亲和物种来说,因为亲本杂合,很难充分利用最大杂种优势。自交不亲和是开花植物避免近交的重要繁育机制,自交不亲和与自交亲和相互转换在自交不亲和物种中非常普遍,这种转换可为自交不亲和物种育种开辟新的途径。华木莲(Sinomanglietia glauca)为木兰科珍稀物种,有重要科学价值和良好应用前景,但适应能力差,自我更新能力弱。华木莲呈现迟发性自交不亲和特征,自交不亲和机理尚不清楚。从华木莲转录组中鉴定出了与孢子体自交不亲和反应关键基因S位点受体激酶(S-locus receptor kinase,SRK)基因高度同源基因SgSRK,这是唯一一类与已知自交不亲和基因高度同源的迟发性自交不亲和基因,因此了解该基因的作用成为研究华木莲自交不亲和机理的出发点。克隆基因、分析其编码蛋白理化性质及亚细胞定位是进行基因功能分析的前提,因此了解SgSRK基因克隆与亚细胞定位可为揭示该基因在华木莲自交不亲和中的作用提供参考。【方法】以自花授粉后3 h华木莲心皮为材料,根据转录组扩增出了SgSRK基因,对其编码蛋白分析了理化性质,鉴定了结构域,推断了疏水性、信号肽、跨膜结构,并对其亚细胞定位进行了预测。为探讨SgSRK基因与已知的不同物种SRK基因演化关系,基于蛋白序列利用最大似然法构建了系统发育树。将目的基因和GFP基因构建了重组表达载体并转化农杆菌,然后将含有目的基因重组表达载体的农杆菌直接注射烟草叶片,3 d后利用荧光显微镜观察叶片注射部位基因瞬时表达情况,确定其编码蛋白的亚细胞定位。【结果】SgSRK基因共计2463 bp(GenBank登录号:MW139903),编码蛋白含有820个氨基酸,编码蛋白具有4个结构域:B;ectin、S;ocus;lycop、PAN-2、Pkinase Tyr结构域,有跨膜结构,存在信号肽,因此编码蛋白质可分为膜外域、跨膜域、胞内磷酸激酶域。共聚焦荧光显微镜观察表明,该基因蛋白产物定位在细胞质中和细胞膜上,细胞膜上表达更多。【结论】SgSRK基因具有植物SRK基因典型特征。 展开更多
关键词 华木莲 自交不亲和 s位点受体激酶 分子克隆 亚细胞定位 生物信息学
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Characterization of a S-locus-related Receptor-like Kinase Cluster in Rice Chromosome 4 被引量:1
9
作者 雷海燕 周波 +1 位作者 洪国藩 韩斌 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第11期1346-1350,共5页
We have identified 14 S _locus glycoprotein (SLG)_related protein kinase genes in a 323 kb contig of rice (Oryza sativa L.) chromosome 4 and we detected the transcription pattern of this gene cluster by reverse tra... We have identified 14 S _locus glycoprotein (SLG)_related protein kinase genes in a 323 kb contig of rice (Oryza sativa L.) chromosome 4 and we detected the transcription pattern of this gene cluster by reverse transcription_polymerase reaction (RT_PCR). RT_PCR results revealed that nine putative genes were transcribed in rice and these genes had the different expression patterns: two genes are expressed predominantly in reproductive tissues while the other seven genes are expressed in both reproductive and vegetative tissues. Analysis of the predicted amino acid sequences demonstrated that the extracellular receptor domains are highly homologous to SLG of Brassica, whereas the cytoplasmic kinase domains contain conserved amino acids present in serine/threonine kinases. 展开更多
关键词 Oryza sativa receptor_like protein kinase s _locus receptor kinase s _locus glycoprotein rice ( Oryza sativa )
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芸薹属中自交不亲和反应的信号转导 被引量:5
10
作者 芦岩 李玉花 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期547-552,共6页
自交不亲和现象在芸薹属(Brassica)植物中普遍存在,芸薹属中表现的是典型的孢子体型自交不亲和性。单元特异性的S位点受体激酶(SRK)基因和S位点花粉胞被蛋白(SCR/SP11)发生识别后,一系列相关蛋白——臂重复蛋白(ARC1)、M位点蛋白激酶(ML... 自交不亲和现象在芸薹属(Brassica)植物中普遍存在,芸薹属中表现的是典型的孢子体型自交不亲和性。单元特异性的S位点受体激酶(SRK)基因和S位点花粉胞被蛋白(SCR/SP11)发生识别后,一系列相关蛋白——臂重复蛋白(ARC1)、M位点蛋白激酶(MLPK)等,引发了自交不亲和反应信号的传导,最终产生自交不亲和反应。文章就这方面的研究进展作介绍。 展开更多
关键词 孢子体自交不亲和 ARC1 MLPK 信号转导 自交不亲和性 芸薹属 反应 s位点受体激酶 相关蛋白 孢子体型
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芸苔属植物自交不亲和性及其机理研究进展 被引量:6
11
作者 汤青林 宋明 王小佳 《生物工程进展》 CSCD 2001年第4期22-25,10,共5页
自交不亲和性广泛存在于芸苔属植物当中 ,有着防止自交衰退等作用 ,在育种工作中意义重大。本文综述了芸苔属植物自交不亲和性及其表现 ,自交不亲和内在机制 ,如S复等位基因及相互作用 ,S位点糖蛋白 ,S多基因家族 ,S位点受体激酶 。
关键词 芸苔属植物 自交不亲和性 s位点糖蛋白 s位点受体激酶 蛋白质磷酸化 信号转导
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小麦Kr基因片段的克隆及序列分析 被引量:1
12
作者 刘青青 蔡华 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期418-422,共5页
小麦远缘杂交不亲和性受Kr基因控制。为研究不同基因型小麦Kr基因的序列特征,从中国小麦微核心种质中选择蚂蚱麦、小白芒、托克逊1号、中国春、洋麦、郑麦9023等6种基因型小麦为试验材料,采用同源克隆方法,分离小麦Kr基因并分析其序列... 小麦远缘杂交不亲和性受Kr基因控制。为研究不同基因型小麦Kr基因的序列特征,从中国小麦微核心种质中选择蚂蚱麦、小白芒、托克逊1号、中国春、洋麦、郑麦9023等6种基因型小麦为试验材料,采用同源克隆方法,分离小麦Kr基因并分析其序列特征。结果表明,6种基因型小麦中有3种扩增出Kr基因片段,3条DNA序列长度均为414 bp,序列同源性为99.8%,仅在2个核苷酸位点处存在SNPs。Blast分析表明,该序列与小麦S位点受体激酶基因相同区域的序列同源性达85%,初步预测小麦Kr基因可能与植物自交不亲和基因一样,能促进柱头乳突细胞积累胼胝质,影响外源花粉的竞争力,最终导致小麦远缘杂交不亲和。 展开更多
关键词 小麦 远缘杂交 胁基因 s位点受体激酶
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甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用研究 被引量:6
13
作者 许俊强 孙梓健 +3 位作者 宋明 汤青林 王志敏 王小佳 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2429-2440,共12页
为研究甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用的分子机理及其可能相互作用的区域,从自交不亲和甘蓝材料‘E1’中分别克隆得到CaM12基因450 bp及S位点受体激酶(SRK7)基因全长序列2 118 bp,并亚克隆得到SRK胞外域(eSRK)和胞内激酶域(iSRK)... 为研究甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用的分子机理及其可能相互作用的区域,从自交不亲和甘蓝材料‘E1’中分别克隆得到CaM12基因450 bp及S位点受体激酶(SRK7)基因全长序列2 118 bp,并亚克隆得到SRK胞外域(eSRK)和胞内激酶域(iSRK),构建原核表达载体pGEX-CaM12、pCold-eSRK和pCold-iSRK,转化E.coli BL21(DE3)进行原核表达,表达产物纯化后进行体外相互作用,结果表明CaM12能够与SRK7进行相互作用,但作用区域是iSRK7而不是eSRK7。为进一步验证其相互作用,本研究利用酵母双杂交系统,构建pGBKT7-CaM12、pGADT7-eSRK7、pGADT7-iSRK7和pGADT7-SRK7酵母表达载体,转化相应酵母Y2HGold和Y187感受态细胞后未出现自激活和毒性现象,相互作用结果与原核表达检测一致。同时将CaM12的3个EF-hands结构域突变体CaM12-2-、CaM12-23-和CaM12-234-与iSRK7分别构建酵母表达载体pGADT7-CAM12-2-、pGADT7-CAM12-23-、pGADT7-CAM12-234-,检测其相互作用。结果表明CaM12 EF-hands突变体CaM12-2-、CaM12-23-和CaM12-234-在酵母双杂交系统中均不能与iSRK7片段发生相互作用,说明CaM12的EF-hands结构域突变后失去结合Ca2+能力而不能与iSRK7相互作用。该研究可为自交不亲和机理提供新的参考依据。 展开更多
关键词 结球甘蓝 CaM12 s位点受体激酶(sRK7)基因 原核表达 酵母双杂交
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甘蓝BoSU03蛋白基因的克隆及其与SRK相互作用分析 被引量:2
14
作者 毕云龙 高启国 +7 位作者 施松梅 刘晓欢 蒲全明 张莹 张林成 廉小平 柳菁 朱利泉 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2206-2214,共9页
扩增了从甘蓝柱头蛋白质谱鉴定中获得的泛素蛋白BoSU03基因的编码序列。序列分析表明BoSU03与甘蓝泛素蛋白Bo1003815的核苷酸序列相似性最高,达98%,含有臂重复结构域,属于植物泛素蛋白家族。为探究BoSU03是否为自交不亲和S位点受体激酶(... 扩增了从甘蓝柱头蛋白质谱鉴定中获得的泛素蛋白BoSU03基因的编码序列。序列分析表明BoSU03与甘蓝泛素蛋白Bo1003815的核苷酸序列相似性最高,达98%,含有臂重复结构域,属于植物泛素蛋白家族。为探究BoSU03是否为自交不亲和S位点受体激酶(SRK)下游的互作蛋白,以SRK与ARC1相互作用为对照,利用GAL酵母双杂交系统对SRK与BoSU03进行了相互作用验证,结果表明,BoSRK/BoSU03的转化酵母在四缺平板SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/x-α-gal/25 mmol 3-AT上长势较好,显色较深,进一步检测发现BoSRK/BoSU03转化酵母的β-半乳糖苷酶活性值大于BoSRK/BoARCl转化酵母的活性值,这为进一步分析鉴定BoSU03是否参与SRK下游信号传导过程提供了依据。 展开更多
关键词 甘蓝 s位点受体激酶(sRK) BosU03 植物泛素蛋白家族(PUB) 下游信号蛋白 酵母双杂交系统
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甘蓝两种SRK短截蛋白的体外表达及其与THL1作用检测 被引量:1
15
作者 高启国 孙梓健 +2 位作者 韦静宜 朱利泉 王小佳 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期725-732,共8页
为探明S–位点受体激酶(SRK)上与类硫氧还蛋白1(THL1)作用的氨基酸区域以及两者间作用方式,依据SRKE1上功能域分布构建了两种SRKE1短截体原核表达质粒pGEX-SRKE1A和pGEX-SRKE1B,分别在大肠杆菌BL21中获得了可溶性表达。通过体外孵育检... 为探明S–位点受体激酶(SRK)上与类硫氧还蛋白1(THL1)作用的氨基酸区域以及两者间作用方式,依据SRKE1上功能域分布构建了两种SRKE1短截体原核表达质粒pGEX-SRKE1A和pGEX-SRKE1B,分别在大肠杆菌BL21中获得了可溶性表达。通过体外孵育检测蛋白质相互作用的方法对SRKE1A、SRKE1B与THL1相互作用进行了检测,结果表明SRKE1A和SRKE1B均可与THL1结合,明确了THL1与SRK相互作用并不依赖于SRK激酶活性。两类SRK等位序列间比对结果表明Cys在两类SRK间的保守性存在明显差异,推测两类SRK材料亲和性的差异可能与Cys保守性不同有关。 展开更多
关键词 甘蓝 s位点受体激酶 类硫氧还蛋白1 相互作用
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甘蓝自交不亲和决定因子的体外表达和相互作用的检测 被引量:8
16
作者 杨洋 高启国 +4 位作者 宋明 牛义 汤青林 朱利泉 王小佳 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期355-362,共8页
S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)分别为甘蓝自交不亲和(self-incom patibility,SI)信号传导的雌雄决定因子。为了深入研究两者的作用机理和进行人工调控,本研究以结球甘蓝ZQ为材料,利用pET.NusA融合... S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)分别为甘蓝自交不亲和(self-incom patibility,SI)信号传导的雌雄决定因子。为了深入研究两者的作用机理和进行人工调控,本研究以结球甘蓝ZQ为材料,利用pET.NusA融合蛋白表达系统,将包含SRK胞外域和跨膜域的mSRK蛋白和SCR蛋白在大肠杆菌BL21中融合表达,经SDS-PAGE电泳检测表达出融合蛋白大小分别约为116kD和74kD。进一步将两融合蛋白进行体外相互作用的检测,结果表明mSRK与SCR蛋白能够相互结合形成稳定的复合体,这为下一步实现SRK-SCR复合体聚合与解离的人为调控提供了技术平台。 展开更多
关键词 结球甘蓝 自交不亲和 s位点受体激酶(sRK) s位点富含半胱氨酸蛋白(sCR) 原核表达
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