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不结球白菜S位点受体激酶基因片段的克隆与表达分析 被引量：1
1
作者 张爱芬 王立 +2 位作者 侯喜林 刘同坤 李英 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期25-30,共6页
以不结球白菜自交不亲和系03的基因组DNA和柱头cDNA为模板,利用引物SRKF/SRKR扩增获得长度为964 bp和646 bp的SRK基因片段。序列比较分析表明,克隆的基因片段属于SRK基因的激酶域,该序列包含4个外显子和3个内含子,编码215个氨基酸,与芜... 以不结球白菜自交不亲和系03的基因组DNA和柱头cDNA为模板,利用引物SRKF/SRKR扩增获得长度为964 bp和646 bp的SRK基因片段。序列比较分析表明,克隆的基因片段属于SRK基因的激酶域,该序列包含4个外显子和3个内含子,编码215个氨基酸,与芜菁、甘蓝、芥蓝等SRK基因有90%以上的相似性。荧光定量PCR分析结果表明:自交不亲和系03和自交亲和系105不同组织中SRK基因的表达水平存在显著的差异,SRK基因主要在自交不亲和系的柱头中高度表达,自交亲和系中该基因的表达主要分布于叶片、花蕾和柱头组织中。 展开更多
关键词 不结球白菜 s位点受体激酶基因 荧光定量PCR 基因表达分析
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用甘蓝育成品系中聚合酶链反应分解的S—位点受体激酶的扩增多态序列来鉴定S—等位基因
2
作者 J．I．Park S．S．Lee 谢国禄 《国外作物育种》 2003年第5期24-24,共1页
关键词 聚合酶链反应 s—位点 受体激酶 多态序列 等位基因 DNA 花粉管 自交系 甘蓝
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甘蓝自交不亲和信号传导中SRK结合蛋白基因THL1的克隆与序列分析 被引量：9
3
作者 刘东 朱利泉 王小佳 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期56-58,共3页
采用PCR和RT PCR技术 ,从甘蓝基因组和柱头总RNA中扩增获得了 719bp的硫氧还蛋白(THL1)的全长基因序列和 4 30bp的cDNA序列。序列分析首次表明 ,克隆的THL1基因全序列有两个内含子 ,cDNA序列编码
关键词 信号传导 srk结合蛋白基因 序列分析 甘蓝 硫氧还蛋白 自交不亲和 基因克隆 s位点受体激酶 THL1基因
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利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝SCR与SRK胞外域片段间的相互作用 被引量：8
4
作者 杨红 朱利泉 +10 位作者 张贺翠 杨永军 薛丽琰 杨昆 余浩 彭一波 罗兵 吴志刚 黄丹 高启国 王小佳 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1953-1962,共10页
【目的】利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝自交不亲和决定因子S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)与S位点受体激酶(SRK)胞外域(eSRK)片段间可能的相互作用区域。【方法】以结球甘蓝B3为材料,利用分子克隆技术,分别构建以pGBKT7为... 【目的】利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝自交不亲和决定因子S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)与S位点受体激酶(SRK)胞外域(eSRK)片段间可能的相互作用区域。【方法】以结球甘蓝B3为材料,利用分子克隆技术,分别构建以pGBKT7为载体的全长SCRB3、SCRB3-1、SCRB3-2的重组诱饵质粒;以pGADT7为载体的全长eSRKB3、eSRKB3-1、eSRKB3-2的重组激活域(AD)质粒。用PEG/LiAc法将上述重组诱饵质粒转化感受态酵母菌Y2HGold,重组AD质粒转化感受态酵母菌Y187;Y2HGold[pGBKT7-SCRB3-s]、Y187[pGADT7-eSRKB3-s]两两融合培养,观察交配菌在SD/-Trp-Leu/x-α-gal/AbA(DDO/x/A)、SD/-Trp-Leu-Ade-His/x-α-gal/AbA(QDO/x/A)平板上的生长情况。【结果】酵母双杂交重组表达载体构建成功,且无毒性和自激活作用产生;9个试验组中只有SCRB3-1、SCRB3-2与eSRKB3-1、eSRKB3-2重组表达质粒转化子两两组合的4个融合株在QDO/x/A平板上出现蓝色克隆,激活了报告基因AUR1-C、MEL1、HIS3、ADE2。【结论】酵母双杂交系统适用于SCR与SRK蛋白相互作用的研究,初步确定了SCR与eSRK存在相互作用,SRK跨膜域的存在与否对其相互作用的研究没有影响。 展开更多
关键词 结球甘蓝 自交不亲和 s位点受体激酶(srk) s位点富含半胱氨酸蛋白(sCR) 酵母双杂交
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利用酵母双杂交法检测甘蓝SCR与SRK之间的相互作用 被引量：6
5
作者 罗兵 薛丽琰 +7 位作者 朱利泉 张贺翠 彭一波 陈松 杨红 杨昆 李成琼 王小佳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期579-586,共8页
为深入研究甘蓝S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域(eSRK)和SCR,通过酵母双杂交检测二者之间的相互作用,并利用同源重组技术将e... 为深入研究甘蓝S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域(eSRK)和SCR,通过酵母双杂交检测二者之间的相互作用,并利用同源重组技术将eSRK与GAL4报告基因DNA活化域融合(pGADT7eSRK)以及SCR与GAL4报告基因DNA结合域融合(pGBKT7SCR)。两种重组质粒分别转化酵母Y187和Y2HGold后未出现自激活现象。融合的二倍体酵母(pGADT7eSRK×pGBKT7SCR)能在选择性固体培养基(SD/–Ade/–His/–Leu/–Trp/X-a-Gal/AbA)上生长,并且菌落呈蓝色。结果表明,eSRK与SCR蛋白能够相互结合,为深入研究二者作用位点成功建立了一个技术平台。 展开更多
关键词 甘蓝 s位点受体激酶(srk) s位点富含半胱氨酸蛋白(sCR) 酵母双杂交
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甘蓝SCR、THL与SRK交替相互作用的酵母双杂交检测 被引量：2
6
作者 杨永军 张贺翠 +3 位作者 杨昆 薛丽琰 常登龙 朱利泉 《中国蔬菜》 北大核心 2012年第12X期14-26,共13页
eSRK(S位点受体激酶胞外域)、SCR/SP11(S位点富含半胱氨酸蛋白-S位点蛋白11)和THL1(类硫氧还蛋白)是甘蓝自交不亲和性信号传导过程重要的3个元件。利用PCR技术获得两种甘蓝SCR2(class-Ⅱ)、eSRK2(class-Ⅱ)、THL1、SRKJ(class-Ⅰ,SRK6... eSRK(S位点受体激酶胞外域)、SCR/SP11(S位点富含半胱氨酸蛋白-S位点蛋白11)和THL1(类硫氧还蛋白)是甘蓝自交不亲和性信号传导过程重要的3个元件。利用PCR技术获得两种甘蓝SCR2(class-Ⅱ)、eSRK2(class-Ⅱ)、THL1、SRKJ(class-Ⅰ,SRK6激酶域)和eSRK28(class-Ⅰ)的编码序列,并分别构建以pGBKT7为载体的SCR2、THL1的重组诱饵质粒和以pGADT7为载体的eSRK2、eSRK28、SRKJ的重组猎物质粒。利用酵母双杂交系统验证eSRK2-SCR2、eSRK28-SCR2、SRKJ-THL1的相互作用。重组质粒在宿主细胞中未产生毒性及自激活作用,表明重组表达载体构建成功;组合Y2HGold〔pGBKT7-SCR2〕×Y187〔pGADT7-eSRK2〕在三缺平板(SD/-Trp-Leu-His/x-α-gal/AbA,TDO/x/A)上生长出蓝色克隆,激活了报告基因AUR1-C、MEL1、HIS3;组合Y2HGold〔pGBKT7-SCR2〕×Y187〔pGADT7-eSRK28〕能够在二缺平板(SD/-Trp-Leu)上生长,但在三缺平板上不生长,表明不同单倍型SRK-SCR可能不发生相互作用;组合Y187〔pGADT7-SRKJ〕×Y2HGold〔pGBKT7-THL1〕能够在四缺平板上生长,激活了4种报告基因(AUR1-C、MEL1、HIS3、ADE2)。相同的单倍型SRK与SCR之间能够相互作用,不同的单倍型之间不会发生相互作用;酵母中报告基因表达的数目和类型的差异反映了class-Ⅱ型内部的SCR-SRK和class-Ⅰ的SCR-SRK互作强度,Ⅰ型高于Ⅱ型;THL与SRK之间存在较高的互作强度。这为Ⅰ型和Ⅱ型不同的自交不亲和性表型所依赖的3个起始信号传导元件之间的识别程度差异提供了直接证据和新内容。 展开更多
关键词 甘蓝 s位点受体激酶(srk) s位点富含半胱氨酸蛋白(sCR) 类硫氧还蛋白(THL) 蛋白质互作 酵母双杂交
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小麦Kr基因片段的克隆及序列分析 被引量：1
7
作者 刘青青 蔡华 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期418-422,共5页
小麦远缘杂交不亲和性受Kr基因控制。为研究不同基因型小麦Kr基因的序列特征,从中国小麦微核心种质中选择蚂蚱麦、小白芒、托克逊1号、中国春、洋麦、郑麦9023等6种基因型小麦为试验材料,采用同源克隆方法,分离小麦Kr基因并分析其序列... 小麦远缘杂交不亲和性受Kr基因控制。为研究不同基因型小麦Kr基因的序列特征,从中国小麦微核心种质中选择蚂蚱麦、小白芒、托克逊1号、中国春、洋麦、郑麦9023等6种基因型小麦为试验材料,采用同源克隆方法,分离小麦Kr基因并分析其序列特征。结果表明,6种基因型小麦中有3种扩增出Kr基因片段,3条DNA序列长度均为414 bp,序列同源性为99.8%,仅在2个核苷酸位点处存在SNPs。Blast分析表明,该序列与小麦S位点受体激酶基因相同区域的序列同源性达85%,初步预测小麦Kr基因可能与植物自交不亲和基因一样,能促进柱头乳突细胞积累胼胝质,影响外源花粉的竞争力,最终导致小麦远缘杂交不亲和。 展开更多
关键词 小麦 远缘杂交 胁基因 s位点受体激酶
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甘蓝BoSU03蛋白基因的克隆及其与SRK相互作用分析 被引量：2
8
作者 毕云龙 高启国 +7 位作者 施松梅 刘晓欢 蒲全明 张莹 张林成 廉小平 柳菁 朱利泉 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2206-2214,共9页
扩增了从甘蓝柱头蛋白质谱鉴定中获得的泛素蛋白BoSU03基因的编码序列。序列分析表明BoSU03与甘蓝泛素蛋白Bo1003815的核苷酸序列相似性最高,达98%,含有臂重复结构域,属于植物泛素蛋白家族。为探究BoSU03是否为自交不亲和S位点受体激酶(... 扩增了从甘蓝柱头蛋白质谱鉴定中获得的泛素蛋白BoSU03基因的编码序列。序列分析表明BoSU03与甘蓝泛素蛋白Bo1003815的核苷酸序列相似性最高,达98%,含有臂重复结构域,属于植物泛素蛋白家族。为探究BoSU03是否为自交不亲和S位点受体激酶(SRK)下游的互作蛋白,以SRK与ARC1相互作用为对照,利用GAL酵母双杂交系统对SRK与BoSU03进行了相互作用验证,结果表明,BoSRK/BoSU03的转化酵母在四缺平板SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/x-α-gal/25 mmol 3-AT上长势较好,显色较深,进一步检测发现BoSRK/BoSU03转化酵母的β-半乳糖苷酶活性值大于BoSRK/BoARCl转化酵母的活性值,这为进一步分析鉴定BoSU03是否参与SRK下游信号传导过程提供了依据。 展开更多
关键词 甘蓝 s位点受体激酶(srk) BosU03 植物泛素蛋白家族(PUB) 下游信号蛋白 酵母双杂交系统
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甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用研究 被引量：6
9
作者 许俊强 孙梓健 +3 位作者 宋明 汤青林 王志敏 王小佳 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2429-2440,共12页
为研究甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用的分子机理及其可能相互作用的区域,从自交不亲和甘蓝材料‘E1’中分别克隆得到CaM12基因450 bp及S位点受体激酶(SRK7)基因全长序列2 118 bp,并亚克隆得到SRK胞外域(eSRK)和胞内激酶域(iSRK)... 为研究甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用的分子机理及其可能相互作用的区域,从自交不亲和甘蓝材料‘E1’中分别克隆得到CaM12基因450 bp及S位点受体激酶(SRK7)基因全长序列2 118 bp,并亚克隆得到SRK胞外域(eSRK)和胞内激酶域(iSRK),构建原核表达载体pGEX-CaM12、pCold-eSRK和pCold-iSRK,转化E.coli BL21(DE3)进行原核表达,表达产物纯化后进行体外相互作用,结果表明CaM12能够与SRK7进行相互作用,但作用区域是iSRK7而不是eSRK7。为进一步验证其相互作用,本研究利用酵母双杂交系统,构建pGBKT7-CaM12、pGADT7-eSRK7、pGADT7-iSRK7和pGADT7-SRK7酵母表达载体,转化相应酵母Y2HGold和Y187感受态细胞后未出现自激活和毒性现象,相互作用结果与原核表达检测一致。同时将CaM12的3个EF-hands结构域突变体CaM12-2-、CaM12-23-和CaM12-234-与iSRK7分别构建酵母表达载体pGADT7-CAM12-2-、pGADT7-CAM12-23-、pGADT7-CAM12-234-,检测其相互作用。结果表明CaM12 EF-hands突变体CaM12-2-、CaM12-23-和CaM12-234-在酵母双杂交系统中均不能与iSRK7片段发生相互作用,说明CaM12的EF-hands结构域突变后失去结合Ca2+能力而不能与iSRK7相互作用。该研究可为自交不亲和机理提供新的参考依据。 展开更多
关键词 结球甘蓝 CaM12 s位点受体激酶(srk7)基因 原核表达 酵母双杂交
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甘蓝自交不亲和决定因子的体外表达和相互作用的检测 被引量：8
10
作者 杨洋 高启国 +4 位作者 宋明 牛义 汤青林 朱利泉 王小佳 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期355-362,共8页
S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)分别为甘蓝自交不亲和(self-incom patibility,SI)信号传导的雌雄决定因子。为了深入研究两者的作用机理和进行人工调控,本研究以结球甘蓝ZQ为材料,利用pET.NusA融合... S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)分别为甘蓝自交不亲和(self-incom patibility,SI)信号传导的雌雄决定因子。为了深入研究两者的作用机理和进行人工调控,本研究以结球甘蓝ZQ为材料,利用pET.NusA融合蛋白表达系统,将包含SRK胞外域和跨膜域的mSRK蛋白和SCR蛋白在大肠杆菌BL21中融合表达,经SDS-PAGE电泳检测表达出融合蛋白大小分别约为116kD和74kD。进一步将两融合蛋白进行体外相互作用的检测,结果表明mSRK与SCR蛋白能够相互结合形成稳定的复合体,这为下一步实现SRK-SCR复合体聚合与解离的人为调控提供了技术平台。 展开更多
关键词 结球甘蓝 自交不亲和 s位点受体激酶(srk) s位点富含半胱氨酸蛋白(sCR) 原核表达
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