阴道卷曲乳杆菌S层蛋白多样性研究

1

作者 李娜 刘好静 +2 位作者 张婷 张茜 李娇 《川北医学院学报》 CAS 2024年第9期1167-1170,1175,共5页

目的:分析比较西安市女性阴道卷曲乳杆菌S层蛋白的多样性及NCBI数据库中阴道来源卷曲乳杆菌S层蛋白的多样性。方法:选取100例妇科患者的阴道分泌物标本作为研究对象,从其中10例标本中分离得到480株卷曲乳杆菌,其中两株卷曲乳杆菌S层蛋... 目的:分析比较西安市女性阴道卷曲乳杆菌S层蛋白的多样性及NCBI数据库中阴道来源卷曲乳杆菌S层蛋白的多样性。方法:选取100例妇科患者的阴道分泌物标本作为研究对象,从其中10例标本中分离得到480株卷曲乳杆菌,其中两株卷曲乳杆菌S层蛋白有明显差异,对其进行全基因组测序;并从NCBI数据库中下载人阴道源的卷曲乳杆菌全基因组数据,分析并比较西安市来源与数据库来源的卷曲乳杆菌S层蛋白的多样性。结果:S层蛋白注释基因具有菌株内和菌株间的多样性,同一套基因组中有多个S层蛋白注释基因,菌株间的相似性偏差较大,通过系统发育分析发现,中国人阴道卷曲乳杆菌的S层蛋白基因与其他人种的具有系统发育相似性。结论:阴道卷曲乳杆菌S层蛋白具有菌种间和菌株间多样性的特征,不同人种的卷曲乳杆菌具有相似性。 展开更多

关键词 阴道 卷曲乳杆菌 s层蛋白 多样性

下载PDF 职称材料

嗜水气单胞菌细胞外膜蛋白及S层蛋白分析 被引量：9

2

作者 董传甫 林天龙 +1 位作者 俞伏松 龚晖 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期201-205,共5页

用十二烷酰肌氨酸盐抽提结合超速离心纯化,制备了19株典型嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和1株温和气单胞菌(A.sobria)的主要外膜蛋白(MOMP)。根据SDS-PAGE图谱,将其中的14株菌分为3个MOMP组,Ⅰ组的主要蛋白带为40 kD和43 kD,Ⅱ组... 用十二烷酰肌氨酸盐抽提结合超速离心纯化,制备了19株典型嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和1株温和气单胞菌(A.sobria)的主要外膜蛋白(MOMP)。根据SDS-PAGE图谱,将其中的14株菌分为3个MOMP组,Ⅰ组的主要蛋白带为40 kD和43 kD,Ⅱ组的主要蛋白带为40 kD和50 kD,Ⅲ组的主要蛋白带为40 kD、46 kD和50kD。MOMP组和血清型间没有严格的关系。用兔抗嗜水气单胞菌体抗原为第一抗体进行免疫印迹实验,结果显示,所有被试菌株都能产生强阳性反应,其中40 kD的蛋白带为大多数菌株所共有,且具有相似的免疫原性,是构成菌体抗原的重要免疫原。用0.2 mol/L甘氨酸缓冲液(pH 4.0)处理上述菌株培养物,结果仅有嗜水气单胞菌ZY01-g3能够分离到丰富的S层样蛋白,其分子量约为52 kD,而其他菌株未能分离到典型的S层样蛋白,表明S层蛋白的分布有限。 展开更多

关键词 嗜水气单胞菌 血清型 主要外膜蛋白 s层蛋白

下载PDF 职称材料

嗜酸乳杆菌S层蛋白抗IBV感染鸡肠上皮细胞作用初探

3

作者 张萍 贾国东 魏萍 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第4期24-26,共3页

为了评价S层蛋白在嗜酸乳杆菌抗病毒作用中参与抗病毒的程度,本试验进行了嗜酸乳杆菌不同成分抗IBV感染IEC作用研究,设计了预防试验、治疗试验、混合感作试验。结果显示,S层蛋白对病毒抑制性最强,菌体其次,脱S层蛋白菌体次之,代谢产物... 为了评价S层蛋白在嗜酸乳杆菌抗病毒作用中参与抗病毒的程度,本试验进行了嗜酸乳杆菌不同成分抗IBV感染IEC作用研究,设计了预防试验、治疗试验、混合感作试验。结果显示,S层蛋白对病毒抑制性最强,菌体其次,脱S层蛋白菌体次之,代谢产物抑制病毒率最低。为了进一步研究S层蛋白与病毒之间的作用关系,用间接ELISA方法检测病毒与S层蛋白的粘附性,评价了牛血清白蛋白有无病毒抑制性,方法同S层蛋白的病毒抑制试验。表明S层蛋白与白蛋白都能粘附IBV,但是只有S蛋白对病毒具有显著的抑制性,白蛋白抑制病毒性质并不明显。 展开更多

关键词 嗜酸乳杆菌s层蛋白 鸡肠上皮细胞 抗IBV感染

下载PDF 职称材料

嗜酸乳杆菌S层蛋白抗NDV感染鸡肠上皮细胞作用初探

4

作者 张萍 贾国东 魏萍 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第6期48-48,49,50,共3页

为了评价S层蛋白在嗜酸乳杆菌抗病毒作用中参与抗病毒的程度,本试验进行了嗜酸乳杆菌不同成分抗NDV感染IEC(Primary intestinal epithelial cells of chick embryo鸡胚肠上皮原代细胞)作用研究,设计3组试验:1预防试验、2治疗试验、3混... 为了评价S层蛋白在嗜酸乳杆菌抗病毒作用中参与抗病毒的程度,本试验进行了嗜酸乳杆菌不同成分抗NDV感染IEC(Primary intestinal epithelial cells of chick embryo鸡胚肠上皮原代细胞)作用研究,设计3组试验:1预防试验、2治疗试验、3混合感作试验。结果显示,S层蛋白对病毒抑制性最强,菌体其次,脱S层蛋白菌体次之,代谢产物抑制病毒率最低。为了进一步研究S层蛋白与病毒之间的作用关系,用间接ELISA方法检测病毒与S层蛋白的粘附性,评价了牛血清白蛋白有无病毒抑制性,方法同S层蛋白的病毒抑制试验。试验结果显示,S层蛋白与白蛋白都能粘附NDV,但是只有S蛋白对病毒具有显著的抑制性,白蛋白抑制病毒性质并不明显。 展开更多

关键词 嗜酸乳杆菌s层蛋白 鸡肠上皮细胞 抗病毒感染

下载PDF 职称材料

重组嗜酸乳杆菌S层蛋白拮抗H_9N_2禽流感病毒对树突状细胞侵袭的研究 被引量：1

5

作者 高雪 朱立麒 +3 位作者 栗云云 吴海琴 朱怡蕾 庾庆华 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期881-887,共7页

[目的]乳酸杆菌S层蛋白可结合树突状细胞特异性细胞间黏附分子3捕获的非整合蛋白(DC-SIGN)受体调节树突状细胞的成熟和分化,禽流感病毒同样可以通过与DC-SIGN的结合促进病毒在人源树突状细胞内的复制。为了探究S层蛋白是否竞争性与DC-S... [目的]乳酸杆菌S层蛋白可结合树突状细胞特异性细胞间黏附分子3捕获的非整合蛋白(DC-SIGN)受体调节树突状细胞的成熟和分化,禽流感病毒同样可以通过与DC-SIGN的结合促进病毒在人源树突状细胞内的复制。为了探究S层蛋白是否竞争性与DC-SIGN结合,进而拮抗禽流感病毒侵袭树突状细胞,本试验构建表达嗜酸乳杆菌ATCC4356 S层蛋白的重组大肠杆菌,并探究重组S层蛋白抑制H9N2禽流感病毒侵袭树突状细胞的影响。[方法]以嗜酸乳杆菌ATCC4356的基因组为模板扩增S层蛋白基因并携带GST标签,构建重组质粒p GEX-4t-2-S并转化E.coli Rosetta-gami2(DE3),18℃低温诱导重组S层蛋白的表达,提取S层蛋白后经亲和层析进一步纯化;用纯化的重组S层蛋白提前作用于小鼠和鸡骨髓源树突状细胞,随后感染H9N2禽流感病毒,检测S层蛋白对禽流感病毒感染的拮抗作用。[结果]电泳结果显示成功扩增出1 295 bp的带有同源臂的嗜酸乳杆菌ATCC4356 S层蛋白基因;酶切得到2条带,分别为载体骨架4 951 bp,目的基因1 263 bp,表示成功构建p GEX-4t-2-S质粒,并且测序结果正确;电泳结果显示转化子中带有S层蛋白的基因,表明构建的质粒成功转入到DE3中并成功表达;电泳结果显示在相对分子质量70×103处有1条带,灰度分析表明亲和层析纯化后得到了纯度为95%的重组S层蛋白,产量为每1011CFU大肠杆菌11.9 mg;流式细胞检测结果证明S层蛋白能够使入侵小鼠和鸡树突状细胞中的H9N2病毒量减少25%~30%,实时荧光定量PCR结果表明HA、NA、NP和PB1基因的相对表达水平均达20%以上。[结论]重组大肠杆菌Rosetta-gami2(DE3)表达的S层蛋白能够有效地拮抗H9N2亚型禽流感病毒对小鼠和鸡树突状细胞的侵袭,为预防禽流感疫病提供新思路。 展开更多

关键词 嗜酸乳杆菌ATCC4356 s层蛋白 树突状细胞 禽流感病毒

下载PDF 职称材料

嗜酸性乳杆菌MG株S层蛋白的高级结构预测分析及原核表达

6

作者 王敏 小琴 +4 位作者 那日苏 王彩凤 特尼格尔 赵慧 格日勒图 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第4期18-22,共5页

以嗜酸性乳杆菌MG株slp基因(表达S层蛋白的基因)为材料,应用Genetyx软件推导出其正确的开放阅读框(ORF),并用CPHmodels,Swiss-Model和Swiss-PdbViewer生物软件预测SLP蛋白质的高级结构;此外,构建slp基因的原核表达载体pGEX-slp,经IPTG... 以嗜酸性乳杆菌MG株slp基因(表达S层蛋白的基因)为材料,应用Genetyx软件推导出其正确的开放阅读框(ORF),并用CPHmodels,Swiss-Model和Swiss-PdbViewer生物软件预测SLP蛋白质的高级结构;此外,构建slp基因的原核表达载体pGEX-slp,经IPTG诱导后,成功表达出重组S层蛋白(S-layer protein,SLP),并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果表明,使用3种不同的软件预测SLP蛋白质的高级结构,预测结果具有很高的相似性,其中α螺旋占3.33%,线性结构占45%,无规则卷曲占51.67%,平均亲水值为-0.262,亲水氨基酸比例为59.1%;表达载体pGEX-slp在E.coli BL21中经IPTG诱导成功表达出重组SLP蛋白,其GST融合蛋白的大小约为70ku。本研究结果为进一步以SLP为材料的生物制品的制备和应用开发奠定了基础。 展开更多

关键词 嗜酸性乳杆菌MG株 s层蛋白 高级结构预测 原核表达

下载PDF 职称材料

一种基于S-层蛋白基因检测炭疽芽胞杆菌PCR方法的研究与建立 被引量：1

7

作者 顾贵波 赵殿国 +3 位作者 赵凤菊 郑洪玲 吴运谱 冯书章 《现代畜牧兽医》 2013年第11期69-72,共4页

在国内外的炭疽芽胞杆菌检测方法中,针对炭疽芽胞杆菌基因的检测方法,其特异性以及临床的实用性方面难以令人满意,特别是针对炭疽疫情在临床诊断及鉴别诊断方面还有欠缺。本文针对炭疽芽胞杆菌的S层蛋白建立一种PCR检测方法,并初步应用... 在国内外的炭疽芽胞杆菌检测方法中,针对炭疽芽胞杆菌基因的检测方法,其特异性以及临床的实用性方面难以令人满意,特别是针对炭疽疫情在临床诊断及鉴别诊断方面还有欠缺。本文针对炭疽芽胞杆菌的S层蛋白建立一种PCR检测方法,并初步应用于我省的疫情临床诊断。结果表明,所建立的PCR方法,能检测到100 pg/μL级,对其他芽胞杆菌无交叉反应,检测特异性和敏感性强。该方法适合于现场疫情的快速诊断。 展开更多

关键词 炭疽芽胞杆菌 s层蛋白 PCR

下载PDF 职称材料

球形芽胞杆菌S层蛋白基因的克隆及原核表达

8

作者 杨李 周鹰 +2 位作者 王运刚 马桂芳 崔玉宝 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第3期186-189,224,共5页

目的克隆球形芽胞杆菌S层蛋白的编码基因,实现其原核表达并纯化表达产物。方法提取球形芽胞杆菌菌体基因组DNA,根据GenBank公布的核酸序列设计并合成引物,扩增S层蛋白编码基因sllB,与pMD19-T载体连接;测序验证后,构建原核表达质粒pET28a... 目的克隆球形芽胞杆菌S层蛋白的编码基因,实现其原核表达并纯化表达产物。方法提取球形芽胞杆菌菌体基因组DNA,根据GenBank公布的核酸序列设计并合成引物,扩增S层蛋白编码基因sllB,与pMD19-T载体连接;测序验证后,构建原核表达质粒pET28a(+)-sllB并转化BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAG和Westernblot鉴定表达产物,亲和柱层析纯化重组蛋白。结果扩增获得S层蛋白编码基因sllB全长(3 306bp),与参考序列同源性为97.5%。构建的原核表达质粒pET28a(+)-sllB转化BL21(DE3)后,SDS-PAGE显示表达蛋白的分子质量为116ku,与理论值相符。Western blot显示其全蛋白、可溶性蛋白和不溶性蛋白中均被鼠抗Penta-His抗体识别。结论获得了球形芽胞杆菌S层蛋白编码基因sllB,并实现了其原核表达。 展开更多

关键词 s层蛋白 球形芽胞杆菌 基因克隆 表达

原文传递

嗜酸乳杆菌表层蛋白提取方法及影响因素的研究 被引量：5

9

作者 李振梅 陈营 +1 位作者 安利国 邵占涛 《生命科学研究》 CAS CSCD 2007年第1期44-47,共4页

对嗜酸乳杆菌S层蛋白的提取方法进行了改进.用酸性5mol/LLiCl法,中性5mol/LLiCl法和8mol/L尿素法提取嗜酸乳杆菌的表层蛋白,考马斯亮兰法测蛋白浓度,进行常规SDS-PAGE,用Gel-Pro软件进行数据分析,得出其中酸性5mol/LLiCl法提取表层蛋白... 对嗜酸乳杆菌S层蛋白的提取方法进行了改进.用酸性5mol/LLiCl法,中性5mol/LLiCl法和8mol/L尿素法提取嗜酸乳杆菌的表层蛋白,考马斯亮兰法测蛋白浓度,进行常规SDS-PAGE,用Gel-Pro软件进行数据分析,得出其中酸性5mol/LLiCl法提取表层蛋白百分含量最多.分析影响提取条件的因素,设置0、4、室温(25℃)3个温度梯度和10、15、20、25、30min5个时间梯度,进行常规SDS-PAGE,检测提取表层蛋白的效果.Sephadex G-100柱分离中性5mol/LLiCl法和8mol/L尿素法提取嗜酸乳杆菌的表层蛋白获得SA蛋白.酸性5mol/LLiCl法可用于分析各种表层蛋白;中性5mol/LLiCl法和8mol/L尿素法用于提取43kDa的SA蛋白.25℃处理15min得到最大量的表层蛋白. 展开更多

关键词 嗜酸乳杆菌 s层蛋白 酸性5 mol/L LiCl法 中性5 mol/L LiCl法 8 mol/L尿素法

下载PDF 职称材料

乳杆菌表面蛋白的研究进展 被引量：2

10

作者 张静飞 万翠香 +1 位作者 曾明 魏华 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2009年第1期177-182,共6页

本文综述了乳杆菌表面蛋白的分布以及近年来表面蛋白的功能和分子生物学方面的研究进展。

关键词 乳杆菌 表面蛋白 s层蛋白 表面展示技术 功能基因

下载PDF 职称材料

嗜酸乳杆菌S-层蛋白的提取和鉴定 被引量：6

11

作者 尹琼芳 潘道东 +3 位作者 郭宇星 曾小群 孙杨赢 曹锦轩 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第5期224-229,共6页

采用高浓度溶剂法（氯化锂/盐酸胍）及溶菌酶结合氯化锂法提取3株乳酸杆菌的表层粗蛋白,通过SDSPAGE比较不同方法及菌株的蛋白提取效果。对嗜酸乳杆菌CGMCC 1.1878表层粗蛋白进行凝胶过滤层析纯化后,采用MALDI-TOF-TOF对纯化的蛋白进行... 采用高浓度溶剂法（氯化锂/盐酸胍）及溶菌酶结合氯化锂法提取3株乳酸杆菌的表层粗蛋白,通过SDSPAGE比较不同方法及菌株的蛋白提取效果。对嗜酸乳杆菌CGMCC 1.1878表层粗蛋白进行凝胶过滤层析纯化后,采用MALDI-TOF-TOF对纯化的蛋白进行二级质谱鉴定,用扫描电镜观察蛋白表面形态。结果表明：高浓度溶剂法提取的蛋白条带多集中在40~60 ku,其中,氯化锂溶剂所提蛋白特征条带明显,便于纯化及分析。根据MASCOT软件搜索及NCBInr数据库比对,成功鉴定出该纯化蛋白为嗜酸乳杆菌S层蛋白,分子质量为46 ku。 展开更多

关键词 乳酸杆菌 s层蛋白 凝胶过滤层析 扫描电镜 二级质谱

原文传递

PEDV S基因的B细胞表位嵌入型乳杆菌S-层蛋白的原核表达及其鉴定 被引量：1

12

作者 朝木丽格 侯殿文 +4 位作者 韩佳 黄天鹏 吴咪 贺海燕 格日勒图 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2118-2122,共5页

利用生物软件和在线数据库中筛选出猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S基因的B细胞表位,通过overlap PCR方法将其嵌入到嗜酸性乳杆菌的S-层蛋白基因中,获得融合基因SLP-EpitopeS。将该融合基因导入到原核表达载体... 利用生物软件和在线数据库中筛选出猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S基因的B细胞表位,通过overlap PCR方法将其嵌入到嗜酸性乳杆菌的S-层蛋白基因中,获得融合基因SLP-EpitopeS。将该融合基因导入到原核表达载体pGEX-4T-3中,成功构建了原核表达载体pGEX-SLP-EpitopeS。经过双酶切和PCR方法以及基因测序方法验证融合表达载体pGEX-SLP-EpitopeS的正确性。应用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达产物,其中SDS-PAGE结果显示:融合蛋白质的大小约为77000,与理论值相符;Western blot结果显示:融合蛋白SLP-EpitopeS被GST血清所识别,而B细胞表位分别被表位特异的鼠源单克隆抗体(McAb)和表位合成多肽所识别。本试验为进一步嵌入型蛋白SLP-EpitopeS的免疫原性研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 s基因 嗜酸性乳杆菌 s层蛋白 B细胞表位 原核表达

原文传递

乳酸菌细胞表面结构与胃肠道的相互作用 被引量：4

13

作者 丁诗瑶 雷文平 +3 位作者 刘成国 戴智勇 汪镇南 周辉 《食品与机械》 北大核心 2020年第4期40-44,共5页

文章综述了乳酸菌表面结构及其与胃肠道相互作用所带来的积极影响。乳酸菌可以通过定植于人体胃肠道发挥其有利于宿主的生理功能,其中,乳酸菌细胞的表面结构可促进乳酸菌在胃肠道中的存活和定植,并且许多生理功能的发挥也与表面结构有关。

关键词 乳酸菌 细胞壁 s层蛋白 胃肠道 粘附

下载PDF 职称材料

路氏乳杆菌JCM1081黏附相关蛋白的初步鉴定

14

作者 王斌 魏银萍 +2 位作者 袁静 唐欢 魏泓 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期539-543,共5页

目的研究路氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri,也称罗伊氏乳杆菌)JCM1081菌体表面蛋白对其黏附HT-29细胞的影响。方法将路氏乳杆菌JCM1081菌体进行胰蛋白酶、蛋白酶K处理;用氯化锂和盐酸胍对乳杆菌表面的蛋白进行抽提,进行SDS-PAGE后与黏... 目的研究路氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri,也称罗伊氏乳杆菌)JCM1081菌体表面蛋白对其黏附HT-29细胞的影响。方法将路氏乳杆菌JCM1081菌体进行胰蛋白酶、蛋白酶K处理;用氯化锂和盐酸胍对乳杆菌表面的蛋白进行抽提,进行SDS-PAGE后与黏蛋白受体进行Western blot,并对杂交阳性蛋白进行质谱分析鉴定。结果路氏乳杆菌JCM1081菌体经胰蛋白酶、蛋白酶K处理后,其对HT-29细胞的黏附力显著下降(P<0．01);用氯化锂去除路氏乳杆菌JCM1081菌体外表面的S层蛋白后,路氏乳杆菌JCM1081对HT-29细胞的黏附力无显著变化;Western blot结果显示相对分子质量(Mr)为29×103和14×103的两种菌体表面蛋白与黏蛋白受体杂交中出现了强阳性;质谱分析结果显示29×103蛋白与路氏乳杆菌ATCC55730的h0793蛋白相似性高达71．1％。结论路氏乳杆菌JCM1081菌体表面的蛋白参与了乳杆菌的黏附,其中29×103和14×103的两种胞壁表面蛋白能够特异地识别黏蛋白受体并与之结合,29×103蛋白属ABC转运蛋白家族。 展开更多

关键词 乳杆菌 黏附 s层蛋白 表面蛋白

原文传递