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干扰SERBP1表达对山羊鼻甲骨原代细胞增殖、周期及凋亡的作用 被引量：1
1
作者 徐颂为 向华 +4 位作者 张焕容 杨璐 王宪军 撒朗文朱 朱江江 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2708-2720,共13页
旨在克隆山羊SERBP1基因,揭示干扰SERBP1基因后对山羊鼻甲骨原代细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的作用,为进一步研究羊口疮病毒诱导细胞凋亡的分子机制奠定基础。本研究以简州大耳羊为试验动物,利用RT-PCR技术克隆SERBP1基因cDNA序列并... 旨在克隆山羊SERBP1基因,揭示干扰SERBP1基因后对山羊鼻甲骨原代细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的作用,为进一步研究羊口疮病毒诱导细胞凋亡的分子机制奠定基础。本研究以简州大耳羊为试验动物,利用RT-PCR技术克隆SERBP1基因cDNA序列并进行生物信息学分析;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测SERBP1基因在不同组织的表达水平;并筛选有效干扰序列;MTT法检测siRNA干扰SERBP1对山羊鼻甲骨原代细胞增殖的影响,流式细胞仪检测siRNA干扰SERBP1对细胞周期和凋亡的影响,RT-qPCR检测对凋亡相关基因P53、Caspase7、Caspase3等的影响。成功扩增山羊SERBP1基因1293bp,包含5′UTR 44bp,CDS区1179bp,3′UTR 70bp,编码392个氨基酸残基,不存在信号肽,主要定位于细胞核;预测到SERBP1可能与RPL31、RPS3等10个蛋白存在相互作用。SERBP1基因在山羊胰腺中表达水平最高;筛选到干扰效率为70%的有效干扰序列;siRNA干扰SERBP1基因后抑制了山羊鼻甲骨原代细胞增殖和凋亡,且细胞被阻滞于G_(0)/G_(1)期;同时可下调Caspase3、Caspase7、BCL2L11和Bax基因mRNA的表达,而对Bcl-2、P53、PARP1基因mRNA的表达无显著影响。干扰山羊SERBP1基因抑制了山羊鼻甲骨原代细胞增殖和凋亡,并诱导细胞周期停滞。研究结果为进一步深入研究SERBP1基因功能,揭示ORFV125抑制细胞凋亡的分子机制提供重要的试验数据。 展开更多
关键词 山羊 serbp1基因 干扰 细胞周期 细胞凋亡
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