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SHV-12型超广谱β-内酰胺酶特性的研究 被引量：8
1
作者 张哲 蒋晓飞 +1 位作者 李敏 吕元 《检验医学》 CAS 北大核心 2006年第1期31-34,共4页
目的研究SHV-12型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的特性。方法将b laSHV-12基因连接至pET28 a载体上,并用重组质粒转化大肠埃希菌BL21进行克隆表达,挑选b laSHV-12阳性表达的菌落,提取其酶蛋白进行等电点测定和酶动力学分析。结果SHV-12型ESB... 目的研究SHV-12型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的特性。方法将b laSHV-12基因连接至pET28 a载体上,并用重组质粒转化大肠埃希菌BL21进行克隆表达,挑选b laSHV-12阳性表达的菌落,提取其酶蛋白进行等电点测定和酶动力学分析。结果SHV-12型ESBL等电点为8.2。同时,在所测的几种抗生素中,该酶对头孢他啶和头孢噻肟的Km相同且最小;对头孢噻吩,有着最大的Vm ax/Km;而对阿莫西林,表现出最大的Km和最低的Vm ax。结论SHV-12型ESBL对头孢他啶和头孢噻肟具有高的亲和力,而对头孢噻吩有最大的催化效能。 展开更多
关键词 Β-内酰胺酶 shv-12 酶动力学
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鸡福氏志贺菌SHV-12型ESBLs基因的扩增、原核表达及酶特性研究 被引量：1
2
作者 孙亚伟 胡功政 +4 位作者 陈红英 刘建华 苑丽 邓立新 袁业友 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期65-69,共5页
对5株鸡福氏志贺菌产SHV-12型ESBLs基因进行重组表达并优化表达条件,观察了表达蛋白的底物水解特性和抑制剂的抑酶特性。结果表明:构建的重组质粒经EcoRⅠ和XholⅠ双酶切后,可切下目的条带。重组质粒转化BL21后所表达的重组蛋白有超广谱... 对5株鸡福氏志贺菌产SHV-12型ESBLs基因进行重组表达并优化表达条件,观察了表达蛋白的底物水解特性和抑制剂的抑酶特性。结果表明:构建的重组质粒经EcoRⅠ和XholⅠ双酶切后,可切下目的条带。重组质粒转化BL21后所表达的重组蛋白有超广谱β-内酰胺酶活性。SHV-12原核表达的最佳条件是IPTG浓度为0.5 mmol/L、温度37℃、诱导时间5 h;SHV-12型ESBLs亲和力最强的底物是头孢噻呋钠,Km值为1.29μmol,较难水解的底物是头孢曲松钠,Km值为24.13μmol;它唑巴坦、舒巴坦对头孢曲松钠的抑酶保护率分别为21.01%、25.51%,对头孢噻呋钠的抑酶保护率分别为34.99%、35.49%。 展开更多
关键词 福氏志贺菌 shv-12型ESBLs 原核表达 酶特性
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鸡福氏志贺菌产超广谱β-内酰胺酶SHV-12和TEM-1V基因的重组表达及酶特性 被引量：1
3
作者 孙亚伟 胡功政 +5 位作者 陈红英 邓立新 刘建华 潘玉善 许兰菊 李胜利 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期566-571,共6页
通过PCR扩增获得鸡福氏志贺菌产超广谱β-内酰胺酶SHV-12和TEM-1V型ESBLs基因片段,定向克隆入质粒载体构建重组质粒,酶切和DNA测序鉴定后转化受体菌BL21,用SDS-PAGE电泳观察目的基因在重组菌中的表达,用双紫外分光光度仪测定表达蛋白的... 通过PCR扩增获得鸡福氏志贺菌产超广谱β-内酰胺酶SHV-12和TEM-1V型ESBLs基因片段,定向克隆入质粒载体构建重组质粒,酶切和DNA测序鉴定后转化受体菌BL21,用SDS-PAGE电泳观察目的基因在重组菌中的表达,用双紫外分光光度仪测定表达蛋白的底物水解特性和抑制剂的抑酶作用。结果表明,构建的重组质粒经EcoRⅠ和XholⅠ双酶切后,可切下目的条带;DNA测序发现插入片段与SHV-12和TEM-1V ESBLs基因序列完全一致。重组质粒转化BL21所表达的重组蛋白有超广谱β-内酰胺酶活性。重组菌S-BL21、T-BL21的最优表达条件分别是IPTG浓度0.5、0.8mmol/L,诱导温度37℃、37℃,诱导时间5、4h。SHV-12和TEM-1V型ESBLs能水解青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、头孢噻呋、头孢曲松和头孢噻肟;对头孢噻呋钠的Km值最小,分别为4.9和1.29;对头孢曲松钠的Km值最大,分别为53.43和24.13;抑制剂舒巴坦钠、它唑巴坦钠对SHV-12和TEM-1V型ESBLs水解抗生素有不同程度的抑制作用。 展开更多
关键词 鸡福氏志贺菌 超广谱Β-内酰胺酶 shv-12 TEM-1V
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超广谱β-内酰胺酶SHV-12编码基因的克隆及序列分析 被引量：10
4
作者 周伟琳 陈亚岗 +2 位作者 俞云松 余素飞 马亦林 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期275-277,共3页
目的　分析浙江省临床分离的产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)肺炎克雷伯菌E95株的耐药基因序列 ,并确定其所产ESBLs亚型。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)获得ESBLs编码基因片段 ,克隆入 pGEM Teasy载体 ,双脱氧链终止法测定核苷酸序列并确... 目的　分析浙江省临床分离的产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)肺炎克雷伯菌E95株的耐药基因序列 ,并确定其所产ESBLs亚型。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)获得ESBLs编码基因片段 ,克隆入 pGEM Teasy载体 ,双脱氧链终止法测定核苷酸序列并确定亚型。结果　PCR扩增E95株ESBLs基因型为SHV型 ,其基因片段含 812个核苷酸 ,与瑞士报道的SHV 12型ESBLs编码基因的序列完全相同。结论　E95株肺炎克雷伯菌所产ESBLs为SHV 12亚型 ,从而证明在我国有SHV 展开更多
关键词 超广谱Β-内酰胺酶 聚合酶链反应 序列分析 shv-12 编码基因 克隆
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同时产DHA-1型头孢菌素酶和SHV-12型超广谱β内酰胺酶的肺炎克雷伯菌 被引量：13
5
作者 管希周 刘又宁 +4 位作者 罗燕萍 佘丹阳 周光 陈良安 徐雅萍 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期475-478,共4页
目的研究头孢菌素酶(AmpC)和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)在临床分离肺炎克雷伯菌中的流行、表型及其基因特性。方法先后用标准纸片扩散法、三维试验、等电聚焦、酶抑制试验以及微量稀释法等进行表型检测。然后用接合试验、多重聚合酶链反应... 目的研究头孢菌素酶(AmpC)和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)在临床分离肺炎克雷伯菌中的流行、表型及其基因特性。方法先后用标准纸片扩散法、三维试验、等电聚焦、酶抑制试验以及微量稀释法等进行表型检测。然后用接合试验、多重聚合酶链反应(PCR)以及基因测序等方法进行分子生物学研究。结果受试的86株细菌中有4株三维试验阳性,等电聚焦以及酶抑制试验表明这些菌株都产一种等电点(PI)为7·8并具有AmpC性质的β内酰胺酶,基因测序表明和DHA-1型AmpC酶一致;它们同时伴随产生一种PI为8·2的ESBLs,基因测序表明其来源为SHV-12。微量稀释法检测表明上述菌株不但对多种三代头孢菌素耐药,而且出现了对头孢吡肟耐药,但对碳青霉烯类抗生素仍敏感。结论本研究发现同时产DHA-1型高产AmpC酶和SHV-12型ESBLs的肺炎克雷伯菌及其耐药表型。此类菌株的出现,将为临床抗感染治疗带来新的困难。 展开更多
关键词 超广谱Β内酰胺酶 shv-12型 肺炎克雷伯菌 头孢菌素酶 多重聚合酶链反应(PCR) 1型 碳青霉烯类抗生素 分子生物学研究 临床抗感染治疗 微量稀释法 ESBLs 基因测序 三代头孢菌素 产AmpC酶 三维试验 等电聚焦 抑制试验 纸片扩散法
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革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究 被引量：3
6
作者 侯晓娜 杨婧 +3 位作者 傅炜昕 何丽 高洪福 王月 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1180-1182,共3页
目的　分析革兰阴性杆菌中超广谱 β-内酰胺酶 (ESBLs)的基因型。 方法　采用双纸片协同法筛选ES BLs菌 ,用纸片扩散法检测其药敏结果 ,分别用TEM、SHV和CTX -M通用引物进行PCR扩增并对PCR产物进行序列分析。结果　大部分产ESBLs菌对头... 目的　分析革兰阴性杆菌中超广谱 β-内酰胺酶 (ESBLs)的基因型。 方法　采用双纸片协同法筛选ES BLs菌 ,用纸片扩散法检测其药敏结果 ,分别用TEM、SHV和CTX -M通用引物进行PCR扩增并对PCR产物进行序列分析。结果　大部分产ESBLs菌对头孢噻肟耐药 ,而对头孢他啶敏感 ,少部分对两者都耐药 ,这些菌株前者以CTX-M引物的PCR扩增结果 ,主要为CTX -M - 3,还检出CTX -M - 12、CTX -M - 14 ;后者以SHV引物的PCR扩增结果 ,主要为SHV - 12 ,还检出SHV - 4 0、SHV - 33和SHV - 5型。TEM引物扩增结果全部为TEM - 1型广谱酶。结论　革兰阴性杆菌中ESBLs主要是CTX -M - 3型 ,6 2 9%的菌同时存在 2～ 3种酶。 展开更多
关键词 革兰阴性杆菌 超广谱Β-内酰胺酶 CTX-M-3 shv-12 TEM-1
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肺炎克雷伯氏菌K99-1029中的ESBLs基因型分析 被引量：11
7
作者 熊自忠 朱德妹 +1 位作者 汪复 张婴元 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期96-100,共5页
目的　了解华山医院临床分离的肺炎克雷伯氏菌K99 10 2 9菌株产生的超广谱 β 内酰胺酶(ESBLs)的基因型。方法　编码框以外设计引物、PCR扩增K99 10 2 9转移接合子中的ESBLs全编码基因 ,克隆入pHSG398质粒、表达 ,并对PCR产物进行测序... 目的　了解华山医院临床分离的肺炎克雷伯氏菌K99 10 2 9菌株产生的超广谱 β 内酰胺酶(ESBLs)的基因型。方法　编码框以外设计引物、PCR扩增K99 10 2 9转移接合子中的ESBLs全编码基因 ,克隆入pHSG398质粒、表达 ,并对PCR产物进行测序分析其基因型。结果　K99 10 2 9转移接合子所产生的三种酶编码基因序列分别与GenBank中TEM 1、SHV 12、CTX M 3编码基因序列的同源性为 10 0 % ;产SHV 12或CTX M 3克隆菌株对多数 β 内酰胺类抗生素耐药 ,SHV 12和CTX M 3对多数 β 内酰胺类抗生素具有水解作用 ,CTX M 3对头孢噻肟的水解能力明显强于头孢他啶 ;产TEM 1克隆菌株仅对青霉素类耐药 ,TEM 1对青霉素类有明显的水解作用。结论　临床分离的肺炎克雷伯氏菌K 99 10 2 9菌株同时产生TEM 1、SHV 12、CTX M 3型酶 ,可导致对大多数的 β 内酰胺类抗生素产生耐药性。 展开更多
关键词 ESBLS 基因型 肺炎克雷伯氏菌 医院 超广谱Β-内酰胺酶 抗生素
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产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌中SHV型β内酰胺酶的分子生物学研究 被引量：17
8
作者 熊自忠 朱德妹 +1 位作者 汪复 张婴元 《中国抗感染化疗杂志》 2003年第4期194-198,共5页
目的 :了解复旦大学附属华山医院临床分离产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)大肠埃希菌中SHV型 β内酰胺酶的分布、流行情况以及分子生物学特点。方法 :用SHV型 β内酰胺酶基因的通用引物进行聚合酶链反应 (PCR)检测 ;编码框以外设计引物、PC... 目的 :了解复旦大学附属华山医院临床分离产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)大肠埃希菌中SHV型 β内酰胺酶的分布、流行情况以及分子生物学特点。方法 :用SHV型 β内酰胺酶基因的通用引物进行聚合酶链反应 (PCR)检测 ;编码框以外设计引物、PCR扩增SHV型 β内酰胺酶全编码基因并进行克隆表达、序列分析 ;对产SHV型 β内酰胺酶的菌株进行脉冲场凝胶电泳 (PFGE)检测。结果 :5 8株产ESBLs大肠埃希菌中 ,只有 3株细菌产生SHV型 β内酰胺酶 (5 .2 % ) ,其中 1株产生SHV 1 1(非ESBLs) ,另 2株产生SHV 1 2 (ESBLs) ;3株产SHV型 β内酰胺酶菌株的PFGE谱型不同。 结论 :临床分离产ESBLs大肠埃希菌中 ,SHV型 β内酰胺酶的基因型为SHV 1 1和SHV 1 2 ,SHV型ESBLs不是主要的ESBLs型别。未发现产SHV型 展开更多
关键词 大肠埃希菌 SHV型β内酰胺酶 超广谱Β内酰胺酶 shv-11 SHV—12
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浙江省产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的基因分型 被引量：57
9
作者 季淑娟 陈亚岗 +3 位作者 俞云松 周伟琳 李家斌 李兰娟 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期75-78,共4页
目的了解浙江省产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型分布。方法对119株实验室保存的1998年9月至1999年6月浙江省各个地区临床分离的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,采用接合试验,聚合酶链反应(PCR),PCR... 目的了解浙江省产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型分布。方法对119株实验室保存的1998年9月至1999年6月浙江省各个地区临床分离的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,采用接合试验,聚合酶链反应(PCR),PCR产物克隆测序等方法明确ESBLs基因型。结果119株菌株中有115株产CT-X-M型ESBLs,阳性率为93.28%,包括88株CTXM14,12株CT-X-M24,6株CTXM22,5株CT-X-M3,2株CT-X-M9及CTXM27,CTXM28、CTX-M-29各1株;9株产SHV型ESBLs,阳性率为7.56%,包括8株SHV12,1株SHV5;未分离到TEM型ESBLs。有9株产2种及2种以上ESBLs,有4株未能确定ESBLs基因型。结论浙江地区产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的基因型以CT-X-M14型为主;CTX-M-29是一种新基因型ESBLs,基因库登录号为AY267213。 展开更多
关键词 产超广谱Β-内酰胺酶 肺炎克雷伯菌 浙江省 产ESBLS大肠埃希菌 基因分型 聚合酶链反应(PCR) shv-12 CTX 基因型分布 1999年 1998年 PCR产物 临床分离 克隆测序 SHV型 TEM型 浙江地区 新基因型 阳性率 实验室 基因库
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