Bcl-2基因加强表达对SK细胞编程死亡的效应 被引量：6

1

作者 温龙平 陈亚兵 +3 位作者 蔡毓 曾桂生 俞春东 曾定 《细胞生物学杂志》 CSCD 1996年第2期73-78,共6页

TNF和OA诱发人神经母细胞瘤SK细胞编程死亡(PCD)。将编码Bcl-2完整蛋白质的cDNA植入pXJ 41neo载体中,由HCMV病毒启动子控制其表达。形成的正向(pBcl-2-S)及反向(pBcl-2-AS)表达质粒经转染导入SK细胞中获得稳定转染子。Western印迹表明... TNF和OA诱发人神经母细胞瘤SK细胞编程死亡(PCD)。将编码Bcl-2完整蛋白质的cDNA植入pXJ 41neo载体中,由HCMV病毒启动子控制其表达。形成的正向(pBcl-2-S)及反向(pBcl-2-AS)表达质粒经转染导入SK细胞中获得稳定转染子。Western印迹表明正向转染子表达较大量的26kd Bcl-2蛋白,而反向转染子则不表达。增强表达的Bcl-2基因产物能抑制由TNF引发的PCD,但不影响由OA引发的PCD,从而证明Bcl-2基因产物抗细胞死亡效应的特异性。 展开更多

关键词 神经母细胞瘤 sk细胞 细胞编程死亡 基因表达

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姜黄素对人卵巢癌SK细胞增殖活性及PCNA、P53 mRNA表达的影响 被引量：3

2

作者 张振军 刘铮 万良刚 《疑难病杂志》 CAS 2009年第8期468-470,共3页

目的探讨姜黄素抗卵巢癌SK细胞增殖活性的作用及机制。方法培养好的人卵巢癌SK细胞,分别加入10、20、30、40、50μmol/L姜黄素,对照组加等量溶剂二甲基亚砜(DMSO),分别孵育24、48 h,应用MTT方法和细胞计数方法测定SK细胞生长抑制率。40... 目的探讨姜黄素抗卵巢癌SK细胞增殖活性的作用及机制。方法培养好的人卵巢癌SK细胞,分别加入10、20、30、40、50μmol/L姜黄素,对照组加等量溶剂二甲基亚砜(DMSO),分别孵育24、48 h,应用MTT方法和细胞计数方法测定SK细胞生长抑制率。40μmol/L姜黄素孵育48 h后,收集细胞,RT-PCR方法测定PCNA和P53 mRNA的表达。结果姜黄素对SK细胞增殖具有明显的抑制作用。在10～50μmol/L浓度范围内,姜黄素对SK细胞增殖的抑制率随浓度增高和时间延长而增加。40μmol/L姜黄素处理SK细胞48 h后,PCNA mRNA表达显著下降(P<0.01),P53 mRNA表达显著上升(P<0.01)。结论姜黄素可通过下调PCNA表达、上调P53 mRNA表达,发挥其抑制卵巢癌SK细胞增殖的作用。 展开更多

关键词 姜黄素 sk细胞 增殖

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TNF和OA诱发人神经母细胞瘤SK细胞程序死亡

3

作者 陈亚乒 俞春东 +2 位作者 蔡毓 曹桂生 温龙平 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期597-599,共3页

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和Ｏｋａｄａｉｃａｃｉｄ（ＯＡ）能诱发人神经母细胞瘤ＳＫ细胞死亡，死亡细胞缩小变圆，细胞质凝聚，ＤＮＡ断裂形成以２００ｂＰ左右为单位的梯形分布，且上述过程可由蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮（ＣＨＸ）... 肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和Ｏｋａｄａｉｃａｃｉｄ（ＯＡ）能诱发人神经母细胞瘤ＳＫ细胞死亡，死亡细胞缩小变圆，细胞质凝聚，ＤＮＡ断裂形成以２００ｂＰ左右为单位的梯形分布，且上述过程可由蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮（ＣＨＸ）抑制，显示ＴＮＦ和ＯＡ诱发的ＳＫ细胞死亡为细胞程序死亡． 展开更多

关键词 细胞程序死亡 神经母细胞瘤 TNF OA sk细胞

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逆转录病毒载体介导的T7RNA聚合酶在猪源细胞PK15及SK6中的稳定表达 被引量：2

4

作者 吴锦艳 田宏 +4 位作者 郑海学 陈妍 靳野 尚佑军 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期527-532,共6页

本研究旨在利用逆转录病毒载体系统将T7RNA聚合酶基因导入猪源细胞,并对该基因的遗传稳定性进行分析。作者克隆并构建含T7RNA聚合酶基因的逆转录病毒重组载体pBABEpuro/T7。将pBABEpuro/T7与水泡性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞... 本研究旨在利用逆转录病毒载体系统将T7RNA聚合酶基因导入猪源细胞,并对该基因的遗传稳定性进行分析。作者克隆并构建含T7RNA聚合酶基因的逆转录病毒重组载体pBABEpuro/T7。将pBABEpuro/T7与水泡性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获重组病毒并用该病毒在Polybrene的介导下分别感染PK15和SK6细胞,用嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。对此阳性细胞进行传代,并对不同代次细胞中的T7RNA聚合酶基因进行扩增,确定其遗传稳定性。用直接荧光法和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测细胞中T7RNA聚合酶基因的表达及其活性。结果表明T7RNA聚合酶能够被稳定地整合进靶细胞基因组内,细胞系内的T7RNA聚合酶具有较好的转录活性,其活性传代不减弱。免疫荧光检测发现所表达的T7RNAP蛋白具有良好的反应原性。本研究表明T7RNA聚合酶基因稳定整合进猪源细胞,该基因的稳定整合为建立高效体内病毒拯救系统提供了良好的工具。 展开更多

关键词 T7RNA聚合酶基因 逆转录病毒载体 PK15细胞 sk6细胞 稳定表达

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人参皂苷Rg1对过氧化氢诱导SK-N-SH细胞凋亡的保护作用 被引量：3

5

作者 邵世滨 丁岩 +2 位作者 张亚伦 段珊 崔行 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期401-404,共4页

目的研究人参皂苷Rg1对过氧化氢(H2O2)诱导SK-N-SH细胞凋亡的影响。方法建立H2O2致SK-N-SH细胞凋亡模型,MTT比色法检测细胞活力;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;DNA梯型观察凋亡细胞的DNA片段化;化学比色法测定细胞培养液和细胞内丙二醛(... 目的研究人参皂苷Rg1对过氧化氢(H2O2)诱导SK-N-SH细胞凋亡的影响。方法建立H2O2致SK-N-SH细胞凋亡模型,MTT比色法检测细胞活力;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;DNA梯型观察凋亡细胞的DNA片段化;化学比色法测定细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;RT-PCR检测细胞bcl-2、bax的表达水平。结果100μmol/LH2O2诱导SK-N-SH细胞12h,细胞活力下降(均P<0.01),细胞凋亡率为16.6%,DNA断裂呈片段状,细胞培养液及细胞内MDA含量增加,SOD活性下降,细胞中bax表达明显升高。而人参皂苷Rg1可明显减少细胞损伤,使细胞中bax表达明显减少、细胞培养液及细胞内MDA含量减少、SOD活性增加、细胞凋亡的各项指标均明显改善。结论人参皂苷Rg1对H2O2诱导的SK-N-SH细胞凋亡具有保护作用,其作用机制可能与提高SK-N-SH细胞的抗氧化能力以及减少bax表达有关。 展开更多

关键词 人参皂苷RG1 sk—N-SH细胞 过氧化氢 细胞凋亡

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新生牛牛脑活性肽NBBP-1对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡的诱导作用 被引量：1

6

作者 黄晓明 李祺福 +3 位作者 刘用金 石松林 宋建晔 武福云 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期399-405,共7页

应用新生牛牛脑活性肽NBBP-1处理人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,通过细胞计数、流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳、Hoechst染色、HE染色和电子显微镜检测等方法,研究新生牛牛脑活性肽NBBP-1对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡的诱导作用.实验结果... 应用新生牛牛脑活性肽NBBP-1处理人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,通过细胞计数、流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳、Hoechst染色、HE染色和电子显微镜检测等方法,研究新生牛牛脑活性肽NBBP-1对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡的诱导作用.实验结果显示,60μg/mL新生牛牛脑活性肽NBBP-1能有效抑制人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖活动,生长抑制率高达88.84%;细胞周期检测出现亚G1细胞凋亡峰,细胞凋亡率达19.20%;琼脂糖凝胶电泳显示出现细胞凋亡典型的DNA梯状条带;Hoechst染色显示细胞核内出现浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光;光学显微镜和电子显微镜下可见典型的细胞凋亡特征:细胞核固缩、染色质凝聚与凋亡小体等典型的细胞凋亡形态和超微结构特征.因此,新生牛牛脑活性肽NBBP-1能够有效诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的凋亡. 展开更多

关键词 新生牛牛脑活性肽NBBP-1 人神经母细胞瘤sk—N-SH细胞 细胞凋亡

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Foxp3在成神经细胞瘤细胞株SK-N-SH中的表达及其对化疗的敏感性 被引量：2

7

作者 孙婧 李良 +1 位作者 肖燕 唐锁勤 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期179-182,共4页

目的:研究成神经细胞瘤细胞株SK-N-SH中Foxp3的表达及其对化疗药物环磷酰胺(cyclophosvnamide,CTX)和吡柔比星(pirarubicin,THP)的敏感性。方法:体外培养SK-N-SH细胞,流式细胞术检测Foxp3在SK-N-SH细胞中的表达。MTT法检测化疗药物CTX、... 目的:研究成神经细胞瘤细胞株SK-N-SH中Foxp3的表达及其对化疗药物环磷酰胺(cyclophosvnamide,CTX)和吡柔比星(pirarubicin,THP)的敏感性。方法:体外培养SK-N-SH细胞,流式细胞术检测Foxp3在SK-N-SH细胞中的表达。MTT法检测化疗药物CTX、THP对SK-N-SH细胞的敏感剂量;流式细胞术及real-time PCR检测CTX、THP对SK-N-SH细胞中Foxp3表达的影响。结果:流式细胞术检测结果显示,SK-N-SH细胞高表达Foxp3分子。CTX作用于SK-N-SH细胞的敏感剂量为6mmol/L,THP作用于SK-N-SH细胞的敏感剂量为80ng/ml。6mmol/L CTX或80ng/ml THP以及两者的联合不能抑制SK-N-SH细胞中Foxp3的表达(P>0.05);real-time PCR结果也证实,CTX或THP以及两者的联合不能抑制SK-N-SH细胞中Foxp3 mRNA的表达。结论:成神经细胞瘤细胞株SK-N-SH高表达Foxp3蛋白,但其表达对化疗药物CTX和THP不敏感。 展开更多

关键词 FOXP3 成神经细胞瘤 sk—N—SH细胞 环磷酰胺 吡柔比星

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人肝癌顺铂耐药细胞系SK-Hep1/CDDP的建立 被引量：9

8

作者 周源 凌贤龙 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第2期176-181,共6页

背景与目的:多药耐药是肿瘤治疗的主要障碍,本研究旨在建立人肝癌多药耐药细胞株SK-Hep1/CDDP,并对其生物学特性及发生多药耐药的可能机制进行初步评价。方法:采用大剂量冲击,间歇诱导法获得人肝癌顺铂(Cisplatin,CDDP)多药耐药系SK-Hep... 背景与目的:多药耐药是肿瘤治疗的主要障碍,本研究旨在建立人肝癌多药耐药细胞株SK-Hep1/CDDP,并对其生物学特性及发生多药耐药的可能机制进行初步评价。方法:采用大剂量冲击,间歇诱导法获得人肝癌顺铂(Cisplatin,CDDP)多药耐药系SK-Hep1/CDDP;CCK-8法检测药物敏感性,计算半数抑制浓度(IC50)和耐药指数(RI);Western blot检测多药耐药基因(MDR1,ABCB1)、多药耐药相关蛋白1(MRP-1,ABCC1)、多药耐药相关蛋白2(MRP-2,ABCC2)、Bax蛋白的表达,以及加入MDR1抑制剂CsA对肝癌细胞MDR1蛋白的表达影响;流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及凋亡率。结果:历时6个月建成SK-Hep1/CDDP细胞株,其对CDDP的耐药指数为13.76,并对盐酸阿霉素(doxorubicin,DOX)、氟尿嘧啶(5-Fluororacil,5-FU)等多种抗肿瘤药物交叉耐药;Westernblot发现SK-Hep1/CDDP与亲本细胞相比MDR1、MRP-1、MRP-2的表达明显升高(P<0.01),Bax蛋白表达明显降低(P<0.01),加入小剂量环孢素A对肝癌细胞MDR1蛋白的表达无影响(P>0.05);细胞周期分析发现相对于亲本SK-Hep1细胞[G1期为(59.83±3.28)%,S期为(27.91±2.16)%,G2/M期为(12.14±3.36)%],SK-Hep1/CDDP耐药细胞[G1期为(37.50±5.05)%,S期为(42.20±2.65)%,G2/M期(20.67±5.69)%]的G2/M,S期比例增加,G1期比例减少,两组相比差异均有统计学意义(P<0.01);流式细胞仪分析表明CDDP对耐药细胞SK-Hep1/CDDP的凋亡率明显减少,加入MDR1抑制剂干预后可明显增加CDDP对SK-Hep1/CDDP细胞的凋亡率。结论:成功建立MDR细胞株SK-Hep1/CDDP,其耐药机制可能与MDR1、MRP-1、MRP-2蛋白的表达增加,Bax蛋白表达降低及降低化疗药物诱导肿瘤细胞的凋亡作用相关。 展开更多

关键词 肝肿瘤 顺铂 多药耐药 sk—Hep1细胞株 MDR1 MRP-1 MRP-2

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新型大气污染物MMT诱导人SK-N-SH细胞凋亡的分子机制 被引量：1

9

作者 秦文 王立祥 +1 位作者 曾季平 王姿颖 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期266-268,共3页

目的研究甲基环戊二烯羰基锰(MMT)诱导人SK-N-SH细胞凋亡的分子机制。方法MMT诱导SK-N-SH细胞后,MTT法检测细胞存活率,分光光度法检测活性氧(ROS)生成;化学发光法检测Caspase-3活性;Western blot法检测p38 MAPK磷酸化程度。结果在MMT诱... 目的研究甲基环戊二烯羰基锰(MMT)诱导人SK-N-SH细胞凋亡的分子机制。方法MMT诱导SK-N-SH细胞后,MTT法检测细胞存活率,分光光度法检测活性氧(ROS)生成;化学发光法检测Caspase-3活性;Western blot法检测p38 MAPK磷酸化程度。结果在MMT诱导SK-N-SH细胞过程中,细胞ROS生成量为正常组的5.2倍(P<0.01);抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)及二硫苏糖醇(DTT)可有效抑制细胞ROS生成(P<0.01),提高细胞存活率(P<0.01);在这一过程中,Capase-3活性明显增强,为对照组的3.01倍(P<0.01);同时p38 MAPK磷酸化程度加强;p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可提高细胞存活率(P<0.05),抑制Caspase-3的活性(P<0.01)。结论MMT诱导的SK-N-SH细胞凋亡与ROS升高,激活Caspase-3有关,这一过程有p38 MAPK相关信号转导途径参与。 展开更多

关键词 甲基环戊二烯羰基锰 sk—N—SH细胞 凋亡 分子机制

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反转录病毒载体介导的EGFP基因在SK-N-SH神经母细胞瘤细胞中的表达 被引量：7

10

作者 刘朝晖 杨宇 +3 位作者 庄鹏辉 许杰华 马延兵 胡海涛 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期10-13,共4页

目的构建携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的反转录病毒载体,并且探讨病毒载体对SK-N-SH神经母细胞瘤细胞株的感染效率。方法使用基因重组技术构建携带EGFP基因的反转录病毒载体(RV/EGFP)。将稀释的RV病毒液感染NIH3T3细胞,计数NIH... 目的构建携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的反转录病毒载体,并且探讨病毒载体对SK-N-SH神经母细胞瘤细胞株的感染效率。方法使用基因重组技术构建携带EGFP基因的反转录病毒载体(RV/EGFP)。将稀释的RV病毒液感染NIH3T3细胞,计数NIH3T3荧光表达细胞的数量来确定病毒的浓度;使用RV载体感染SK-N-SH细胞,通过流式细胞学荧光检测明确RV在SK-N-SH细胞的感染效率。结果成功构建了基因转移载体RV/EGFP,确定重组病毒的浓度为8.3×106病毒颗粒/mL。在SK-N-SH细胞RV/EGFP稳定转染并有效表达。在SK-N-SH细胞EGFP的荧光表达显示RV的转移并且表达的效率达到30%以上。结论SK-N-SH细胞能被RV病毒载体有效感染,在转基因细胞株外源基因的表达长期稳定并且显示RV病毒载体具有良好的基因转移效率。 展开更多

关键词 sk—N—SH神经母细胞瘤细胞 增强型绿色荧光蛋白 反转录病毒载体

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人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞Ca^(2+)通道的电生理特性 被引量：1

11

作者 雷洪伊 张庆国 +1 位作者 徐世元 许平 《广东医学》 CAS CSCD 2003年第8期821-822,共2页

目的　研究人神经母细胞瘤SK -N -SH细胞L型Ca2 + 通道的特性及其激动剂BayK 864 4对通道的影响。方法　培养SK -N -SH细胞 ,用膜片钳细胞贴附式技术记录和研究L型Ca2 + 通道的特性。结果　SK -N -SH细胞L型Ca2 + 通道电导为 ( 2 7 8
... 目的　研究人神经母细胞瘤SK -N -SH细胞L型Ca2 + 通道的特性及其激动剂BayK 864 4对通道的影响。方法　培养SK -N -SH细胞 ,用膜片钳细胞贴附式技术记录和研究L型Ca2 + 通道的特性。结果　SK -N -SH细胞L型Ca2 + 通道电导为 ( 2 7 8± 2 5 6)pS ,平均开放时间为 ( 0 65± 0 0 8)ms ,平均关闭时间的短关闭时间常数 ( 0 5 3±0 0 5 )ms ,长关闭时间常数 ( 6 0 2± 3 46)ms。BayK 864 4使Ca2 + 通道平均开放时间延长 (P <0 0 5 ) ,但不影响其电导 (P >0 0 5 )。结论　人神经母细胞瘤SK -N -SH细胞上存在L型Ca2 + 通道 ,与其他神经元上L型Ca2 + 展开更多

关键词 人神经母细胞瘤 sk—N—SH细胞 CA^2+通道 电生理特性

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姜黄提取物对Na_2S_2O_4诱导SK-N-SH细胞凋亡的保护作用 被引量：2

12

作者 郝淑芹 王亚辉 王四平 《现代中西医结合杂志》 CAS 2014年第2期127-129,136,共4页

目的观察姜黄提取物对Na2S2O4诱导SK-N-SH细胞凋亡的保护作用及其机制。方法取相同代的SK-N-SH细胞随机分为正常对照组、模型组、姜黄提取物低浓度(20μmol/L)组、姜黄提取物中浓度(40μmol/L)组、姜黄提取物高浓度(80μmol/L)组。用分... 目的观察姜黄提取物对Na2S2O4诱导SK-N-SH细胞凋亡的保护作用及其机制。方法取相同代的SK-N-SH细胞随机分为正常对照组、模型组、姜黄提取物低浓度(20μmol/L)组、姜黄提取物中浓度(40μmol/L)组、姜黄提取物高浓度(80μmol/L)组。用分光光度法检测姜黄提取物对细胞外SOD、MDA的影响,通过MTT比色法检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡率,采用Western blot检测法检测细胞Caspase-3蛋白的表达情况。结果与模型组比较,姜黄提取物各组细胞存活率升高(P<0.01),姜黄提取物各组SK-N-SH细胞培养液内的MDA水平均明显降低(P均<0.01),而SOD水平均明显升高(P均<0.01),同时Caspase-3活性受到抑制。结论姜黄提取物能够通过抗氧化作用抑制Na2S2O4对SK-N-SH细胞凋亡作用。 展开更多

关键词 姜黄提取物 血管性痴呆 CASPASE-3 sk—N—SH细胞 乳酸脱氢酶 丙二醛 超氧物歧化酶

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半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂普鲁司特调节SK-N-SH细胞分化 被引量：5

13

作者 彭芳 方三华 +3 位作者 郑晓亮 张纬萍 卢韵碧 魏尔清 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2007年第2期123-129,共7页

目的:观察半胱氨酰白三烯受体激动剂LTD4以及受体1(CysLT1)拮抗剂普鲁司特对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞分化的影响。方法:以维A酸为阳性对照,观察LTD4、普鲁司特、LTD4+普鲁司特诱导SK-N-SH细胞形态学变化;用免疫印迹法观察SK-N-S... 目的:观察半胱氨酰白三烯受体激动剂LTD4以及受体1(CysLT1)拮抗剂普鲁司特对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞分化的影响。方法:以维A酸为阳性对照,观察LTD4、普鲁司特、LTD4+普鲁司特诱导SK-N-SH细胞形态学变化;用免疫印迹法观察SK-N-SH细胞CysLT1和CysLT2受体的表达;用免疫荧光法观察神经元分化标记物微管相关蛋白(MAP-2)的表达。结果:免疫印迹显示,SK-N-SH表达CysLT1受体和CysLT2受体,CysLT2受体表达较多。形态学结果显示,维A酸、普鲁司特、LTD4+普鲁司特诱导SK-N-SH细胞发生形态学改变,表现为胞体变小,有明显的突起生长;而LTD4无明显作用。免疫荧光结果显示,在对照组和普鲁司特组MAP-2主要分布于胞体;在维甲酸组MAP-2除了分布于胞体外,还分布于突起。普鲁司特增加MAP-2阳性细胞数。结论:CysLT1受体拮抗剂普鲁司特参与SK-N-SH细胞分化的调节。 展开更多

关键词 白三烯类/治疗应用 受体 白三烯 神经母细胞瘤/病理学 半胱氨酰白三烯受体 白三烯D4 普鲁司特 sk—N—SH细胞 细胞分化

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CRE-decoy ODN对慢性吗啡诱导SK-N-SH细胞CCK及fosB mRNA表达上调的抑制作用

14

作者 苏彦君 丛斌 +4 位作者 张国忠 张瑾 姚玉霞 李淑瑾 付丽红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期630-635,共6页

目的:研究以转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)为靶点的CRE -decoyODN对慢性吗啡诱导SK -N -SH细胞胆囊收缩素(CCK)及fosBmRNA表达上调的抑制作用。方法:体外合成含cAMP反应元件CRE序列TGACGTCA的单链寡核苷酸,将自身杂交形成发卡结... 目的:研究以转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)为靶点的CRE -decoyODN对慢性吗啡诱导SK -N -SH细胞胆囊收缩素(CCK)及fosBmRNA表达上调的抑制作用。方法:体外合成含cAMP反应元件CRE序列TGACGTCA的单链寡核苷酸,将自身杂交形成发卡结构。将终浓度为15 0nmol/L的CRE -decoyODN与SK -N-SH细胞孵育1h后,加入终浓度为10 0 μmol/L的吗啡作用4 8h ,随后加入终浓度为10 μmol/L的纳络酮,戒断15min。采用电泳迁移率改变分析(EMSA)检测CRE -decoyODN与CREB结合的序列特异性及其对慢性吗啡诱导的CREB的DNA结合活性升高的影响;细胞掺入的CRE -decoyODN用酚:氯仿法提取,经2 0 %非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影检测;采用RT -PCR检测CCK及fosBmRNA表达。结果:慢性吗啡作用及纳络酮急性戒断使SK-N -SH细胞CREB的DNA结合活性、CCK和fosBmRNA表达明显升高,CRE -decoyODN可特异抑制其升高。结论:CRE -decoyODN通过特异抑制慢性吗啡诱导SK -N -SH细胞CREB的DNA结合活性而下调CCK及fosBmRNA表达。 展开更多

关键词 吗啡 sk—N-SH细胞 CRE—decoy OLIGODEOXYNUCLEOTIDE 胆囊收缩素 基因 fosB

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nNOS基因在慢性吗啡作用的SK-N-SH细胞的表达及调控

15

作者 苏彦君 丛斌 +4 位作者 张国忠 张瑾 李淑瑾 姚玉霞 付丽红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期512-512,共1页

关键词 吗啡 sk—N—SH细胞 NNOS CREB

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PICE抑制STAT3的激活增强IFN-α对SK-MEL-28细胞系的抗肿瘤作用

16

作者 林能兴 黄长征 +4 位作者 刘志香 刘厚君 占部和敬 古江增隆 涂亚庭 《中国麻风皮肤病杂志》 2007年第11期953-955,共3页

目的:评价用3,5,3’,4’盐酸四氢唑啉反1-2二苯乙烯(piceatannol,PICE)抑制细胞信号传导与转录活化因子3(STAT3)的激活,对IFN-α在SK-MEL-28细胞系的抗肿瘤作用的影响。方法:用细胞内染色法检测PICE预处理对IFN-α刺激后SK-MEL-28细胞... 目的:评价用3,5,3’,4’盐酸四氢唑啉反1-2二苯乙烯(piceatannol,PICE)抑制细胞信号传导与转录活化因子3(STAT3)的激活,对IFN-α在SK-MEL-28细胞系的抗肿瘤作用的影响。方法:用细胞内染色法检测PICE预处理对IFN-α刺激后SK-MEL-28细胞系内磷酸化STAT1(p-STAT1)和磷酸化STAT3(p-STAT3)表达的变化,MTT比色法检测细胞增殖活性,用ELISA法检测细胞培养上清中的血管内皮细胞生长因子(VEGF)。结果:IFN-α刺激细胞后,细胞内的p-STAT1,p-STAT3的表达均有不同程度的升高,且升高比例与IFN-α浓度成正比;PICE很好地抑制了IFN-α诱导p-STAT3的表达,但对IFN-α诱导的p-STAT1的表达没有影响,并且PICE和IFN-α与肿瘤细胞共培养时,比单用IFN-α能更好地抑制肿瘤细胞生长和抑制STAT3诱导的VEGF的分泌。结论:PICE抑制STAT3的激活,能明显增强SK-MEL-28细胞系的抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 干扰素-Α PICE sk—MEL-28细胞系

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CREB诱骗寡核苷酸抑制吗啡依赖诱导SK-N-SH细胞神经元型一氧化氮合酶及fosB基因表达上调

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作者 苏彦君 丛斌 +4 位作者 张国忠 张瑾 姚玉霞 李淑瑾 付丽红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期837-841,共5页

目的研究转录因子CREB的结合位点cAMP反应元件(cAMPresponseelement,CRE)的诱骗寡核苷酸(CREtranscriptionfactordecoyoligodeoxynucleotide,CREdecoyODN)对吗啡依赖SKNSH细胞的神经元型一氧化氮合酶(Neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)... 目的研究转录因子CREB的结合位点cAMP反应元件(cAMPresponseelement,CRE)的诱骗寡核苷酸(CREtranscriptionfactordecoyoligodeoxynucleotide,CREdecoyODN)对吗啡依赖SKNSH细胞的神经元型一氧化氮合酶(Neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)及fosBmRNA表达上调的抑制作用。方法建立吗啡依赖SKNSH细胞模型,体外合成含CRE序列的寡核苷酸,作为CREdecoyODN,与阳离子脂类N[1(2,3dioleoyloxy)propyl]N,N,Ntrimethylammoniummethylsulfate(DOTAP)混合后导入细胞。采用放射自显影检测细胞内参入的CREdecoyODN。采用电泳迁移率改变分析(Electrophoresismobilityshiftassay,EMSA)及RTPCR技术,分别检测CREdecoyODN对吗啡依赖诱导的CREB的DNA结合活性、nNOS及fosBmRNA表达的影响。结果CREdecoyODN可在细胞内稳定存在,特异抑制吗啡依赖SKNSH细胞CREB的DNA结合活性升高、nNOS和fosBmRNA表达上调。结论CREdecoyODN通过特异抑制吗啡依赖SKNSH细胞的CREB的DNA结合活性而下调nNOS及fosBmRNA表达。 展开更多

关键词 吗啡 sk—N—SH细胞 CREB诱骗寡核苷酸 电泳迁移率改变分析 一氧化氮合酶 FOSB

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结合电生孔技术的抗体-纳米TiO_2靶向光敏杀癌细胞 被引量：4

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作者 许娟 赵尧敏 +4 位作者 陈春妹 孙毅 刘国元 严曼明 江志裕 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第22期2296-2300,共5页

报道了用免疫、电生孔和纳米TiO2光催化组合技术进行杀伤结肠癌LoVo细胞的研究.先把结合LoVo细胞表面CEA抗原的单克隆抗CEA抗体吸附在纳米TiO2微粒表面,抗体-纳米TiO2复合微粒就会自动吸附到LoVo细胞的表面,然后用电脉冲法使LoVo癌细胞... 报道了用免疫、电生孔和纳米TiO2光催化组合技术进行杀伤结肠癌LoVo细胞的研究.先把结合LoVo细胞表面CEA抗原的单克隆抗CEA抗体吸附在纳米TiO2微粒表面,抗体-纳米TiO2复合微粒就会自动吸附到LoVo细胞的表面,然后用电脉冲法使LoVo癌细胞的细胞膜上产生小孔,促使纳米TiO2微粒进入癌细胞内部.最后在紫外光照射下使TiO2纳米粒子在癌细胞内部发生光催化氧化作用,杀伤癌细胞.结果表明,这种组合技术具有很高的杀癌细胞能力.在仅含3.12μg/mL抗体-纳米TiO2的细胞培养液内和强度为4mW/cm2的紫外光照射下,可在30min内将所有LoVo癌细胞杀死.这种技术对LoVo癌细胞的杀伤力远高于对不表达CEA抗原的人正常TE353.sk细胞的杀伤力,显示了组合技术杀癌细胞的高选择性.因此,这种组合技术有望成为治疗癌症的新方法,值得进一步探索. 展开更多

关键词 人结肠癌LoVo细胞 人皮肤TE353.sk细胞 纳米-TiO2免疫 细胞电生孔 光催化 癌症治疗

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金丝桃苷对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移以及侵袭的影响 被引量：11

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作者 徐里 赵川 张延武 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期702-706,共5页

目的探讨金丝桃苷(hyperin)对卵巢癌细胞SKOV3的增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法将SKOV3细胞分为:正常对照组、金丝桃苷组和阳性对照顺铂组。MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western Blot检测cleaved-Caspase-... 目的探讨金丝桃苷(hyperin)对卵巢癌细胞SKOV3的增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法将SKOV3细胞分为:正常对照组、金丝桃苷组和阳性对照顺铂组。MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western Blot检测cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、Bcl-2、p65和p-IκB-α的蛋白表达;划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果与正常对照组相比,金丝桃苷处理显著抑制SKOV3的细胞增殖(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05),上调cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9而下调Bcl-2的蛋白水平(P<0.05),降低细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),减少p65和p-IκB-α的蛋白水平(P<0.05),抑制NF-κB信号通路的激活,且以上作用均随金丝桃苷处理浓度的增大而增强。结论金丝桃苷抑制SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,这可能与抑制NF-κB信号通路有关。 展开更多

关键词 金丝桃苷 sk0V3细胞 细胞增殖 细胞凋亡 迁移侵袭 NF-KB信号通路

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山茱萸羟甲基糠醛对冈田酸致神经细胞形态及细胞骨架损伤的保护作用 被引量：4

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作者 张如意 朴景华 +2 位作者 楚晋 徐艳玲 李林 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 2008年第6期417-421,共5页

目的观察山茱萸活性成分山茱萸羟甲基糠醛(HMF)对蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸(OA)致神经细胞骨架系统损伤的拮抗作用。方法不同浓度的HMF与人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞预孵育24h,弃去培养液,加100nmol/LOA损伤4h后,用MTT法测定细胞存活... 目的观察山茱萸活性成分山茱萸羟甲基糠醛(HMF)对蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸(OA)致神经细胞骨架系统损伤的拮抗作用。方法不同浓度的HMF与人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞预孵育24h,弃去培养液,加100nmol/LOA损伤4h后,用MTT法测定细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察细胞的微管、微丝结构。结果HMF(12.5～200μg/mL)与SK-N-SH神经细胞预孵育能明显拮抗OA致细胞存活率的下降,使损伤的微管、微丝结构基本恢复正常。结论HMF能够拮抗蛋白磷酸酶抑制剂致神经细胞损伤,其机制与保护细胞骨架系统有关。 展开更多

关键词 羟甲基糠醛 山茱萸 蛋白磷酸酶 冈田酸 sk—N—SH细胞 阿尔茨海默病

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