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SMA小鼠中相关剪接因子表达与SMN2外显子7列入比率关系研究
1
作者 杜利莉 马钰 +2 位作者 柏文清 吴刘成 邵义祥 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第5期54-63,共10页
目的研究SMN2外显子7在SMA小鼠不同组织的列入,筛选与其相关的剪接因子。方法通过RT-PCR和非变性PAGE电泳分析在神经及非神经组织中SMN2外显子7列入比例,通过QPCR筛选分析剪接因子在大脑和脊髓与非神经组织中的mRNA水平。结果SMN2外显子... 目的研究SMN2外显子7在SMA小鼠不同组织的列入,筛选与其相关的剪接因子。方法通过RT-PCR和非变性PAGE电泳分析在神经及非神经组织中SMN2外显子7列入比例,通过QPCR筛选分析剪接因子在大脑和脊髓与非神经组织中的mRNA水平。结果SMN2外显子7在大脑和脊髓组织中列入比例显著高于非神经组织,QPCR筛选显示Nova1/2在大脑和脊髓中的表达显著高于大部分非神经组织。通过差异分析显示,Srsf7/9及Nova2在SMAⅠ型小鼠脊髓中的表达显著高于对照小鼠。结论神经组织中,Srsf7/9和Nova1/2基因高表达与SMN2外显子7列入比例显著提高呈正相关,剪接因子SRSF7/9及NOVA1/2可能参与SMN2基因的剪接调控。 展开更多
关键词 sma小鼠 剪接因子 表达 SMN2 外显子列入
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SMA模型小鼠骨髓间充质干细胞体外培养体系的建立
2
作者 陈志衡 吴刘成 +1 位作者 景谨 朱顺星 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期679-685,共7页
目的建立脊髓型肌萎缩症(SMA)小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)体外培养体系,研究反义寡核苷酸(ASO)对其生物学特性的影响,为深入研究SMA发病机制及药物筛选提供可靠的体内模拟工具细胞。方法选取刚出生4 d的SMA小鼠,CO_(2)窒息法处死后,于... 目的建立脊髓型肌萎缩症(SMA)小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)体外培养体系,研究反义寡核苷酸(ASO)对其生物学特性的影响,为深入研究SMA发病机制及药物筛选提供可靠的体内模拟工具细胞。方法选取刚出生4 d的SMA小鼠,CO_(2)窒息法处死后,于75%乙醇中浸泡,分离、纯化骨髓细胞。细胞荧光检测细胞表面标志物;RT-PCR及Western Blot研究ASO对运动神经元存活基因2(SMN2)外显子(exon7)列入水平以及运动神经元存活(SMN)蛋白表达量;EDU法和TUNEL法检测细胞增殖和凋亡能力。结果体外分离培养的SMA模型小鼠BMMSC具有贴壁生长、可以传代等特点;对P3代BMMSC进行细胞免疫荧光鉴定结果显示:CD44、CD29高表达,CD34、CD45低表达;转染ASO后细胞SMN2 exon7列入率显著上升以及SMN蛋白表达量显著上调,并显著促进细胞增殖能力,同时核内Gemini bodies(gems)数量也有所增多。结论成功建立SMA小鼠BMMSC体外培养体系,通过阳性药物ASO验证可促进BMMSC SMN2 exon7列入及SMN蛋白表达,为SMN2相关调控机制及药物筛选提供一种新的工具细胞。 展开更多
关键词 sma小鼠 骨髓间充质干细胞 ASO 运动神经元存活2基因 细胞增殖
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