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hCu,Zn-SOD-TAT PTD的融合表达及其跨膜转运性质的初步研究 被引量：5
1
作者 汪飞鹏 桂向东 宋礼华 《药物生物技术》 CAS CSCD 2004年第1期11-15,共5页
HIV I反式激活蛋白TAT中的一段富含碱性氨基酸的短序列具有独特的跨膜转运能力 ,被称为TAT蛋白转导结构域 (proteintransductiondomain ,PTD)。从人肺cDNA文库中PCR扩增hCu ,Zn SOD基因 ,插入pUC19测序 ;以测序质粒为模板 ,再用含TATPT... HIV I反式激活蛋白TAT中的一段富含碱性氨基酸的短序列具有独特的跨膜转运能力 ,被称为TAT蛋白转导结构域 (proteintransductiondomain ,PTD)。从人肺cDNA文库中PCR扩增hCu ,Zn SOD基因 ,插入pUC19测序 ;以测序质粒为模板 ,再用含TATPTD编码序列的 3’引物PCR扩增得hCu ,Zn SOD TATPTD融合基因 ,并插入 pUC19。将SOD基因和SOD TATPTD融合基因分别亚克隆至温控表达载体 pJW 2 ,转化大肠杆菌DH5α。SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,热击诱导 4h后 ,分别在 19ku和 2 2ku处出现SOD和SOD TATPTD目标表达条带 ,表达蛋白以包含体形式存在。分别提取SOD和SOD TATPTD包含体 ,复性纯化后SOD和SOD PTD重组蛋白均具有特异的SOD酶活性 ,其比活性分别为 12× 10 3 NU/mg和 9.9× 10 3 NU/mg。细胞试验结果表明 ,与SOD相比较 ,SOD TATPTD融合蛋白能显著提高细胞内SOD酶活力。 展开更多
关键词 sod-tat PTD融合蛋白 原核表达 蛋白转导
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TAT蛋白介导锰—超氧化物歧化酶(Mn-SOD)可行性研究 被引量：2
2
作者 贾栋 高国栋 《神经疾病与精神卫生》 2007年第1期18-20,共3页
目的探究TAT蛋白介导锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)的可行性。方法建立插入TATPTDDNA序列的表达载体pT7460,将锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)基因融合进入载体pT7460。应用层析方法提纯融合蛋白并用电泳分析。结果锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)与... 目的探究TAT蛋白介导锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)的可行性。方法建立插入TATPTDDNA序列的表达载体pT7460,将锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)基因融合进入载体pT7460。应用层析方法提纯融合蛋白并用电泳分析。结果锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)与TAT的融合蛋白表达在包涵体内。结论锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)可与TAT形成融合蛋白。 展开更多
关键词 TAT蛋白 锰-超氧化物歧化酶 介导
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TAT-SOD融合蛋白表达载体的构建 被引量：1
3
作者 王茜茜 宋波 +2 位作者 苗成 韩志强 许予明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第1期72-74,共3页
目的:构建pET28a-TAT-SOD原核表达载体,纯化并测定其活性。方法:PCR法扩增TAT-SOD片段,插入载体pET28a后得到pET28a-TAT-SOD重组表达子,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导TAT-SOD融合蛋白表达。表达产物用SDS-PAGE电泳鉴定,组氨酸亲和层... 目的:构建pET28a-TAT-SOD原核表达载体,纯化并测定其活性。方法:PCR法扩增TAT-SOD片段,插入载体pET28a后得到pET28a-TAT-SOD重组表达子,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导TAT-SOD融合蛋白表达。表达产物用SDS-PAGE电泳鉴定,组氨酸亲和层析柱纯化融合蛋白,利用SOD活性测定试剂盒测定其活性。结果:构建了高表达重组子pET28a-TAT-SOD,获得了相对分子质量约为25000的具有活性的融合蛋白TAT-SOD,纯度达90%。纯化的蛋白浓度为700mg/L,活性为197.54U/L。结论:成功构建了具有活性TAT-SOD融合蛋白的表达载体。 展开更多
关键词 TAT SOD 蛋白转导 载体
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TAT-SOD在长期保藏的重组毕赤酵母中表达的条件优化 被引量：1
4
作者 李孔翰 陈玲琳 +1 位作者 周建森 刘树滔 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期51-58,共8页
TAT-SOD是TAT蛋白转导结构域与SOD的融合蛋白质。作者以2007年构建的产TATSOD重组毕赤酵母菌为出发菌株,通过摇瓶实验研究不同温度、初始pH、诱导剂浓度等因素对蛋白质表达的影响。通过比色分析法测定菌体浓度、超氧阴离子自由基清除法... TAT-SOD是TAT蛋白转导结构域与SOD的融合蛋白质。作者以2007年构建的产TATSOD重组毕赤酵母菌为出发菌株,通过摇瓶实验研究不同温度、初始pH、诱导剂浓度等因素对蛋白质表达的影响。通过比色分析法测定菌体浓度、超氧阴离子自由基清除法测定酶活、SDSPAGE分析目的蛋白质TAT-SOD的浓度;并采用定量PCR法分析表达菌株的目的基因的mRNA变化规律,从而研究长期保藏重组毕赤酵母菌株表达TAT-SOD的适合性及其条件优化。研究结果表明,摇瓶发酵的最佳条件下(YPDM培养基,体积分数1.0%诱导剂浓度,诱导温度30.0℃,初始p H值7.0),发酵液上清酶活水平为753 U/mL,是未优化初始酶活水平的5.1倍,其中pH值优化使TAT-SOD表达水平提高到原始值的3.4倍。7.0的初始诱导pH值的mRNA水平是对照组pH 4.0的3.5倍。这些结果说明,长期保藏的重组毕赤酵母菌株仍然适合表达TAT-SOD,发酵条件会对毕赤酵母的TAT-SOD表达造成显著影响,影响表达水平的最主要因素是目的蛋白质的mRNA水平变化。 展开更多
关键词 TAT-SOD 巴斯德毕赤酵母 基因表达 发酵 优化
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转录反式作用催化蛋白-超氧化物歧化酶(TAT-SOD)对神经细胞凋亡的保护作用
5
作者 李贺 郑世民 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第7期151-154,共4页
正常机体存在一套比较完整的氧化-抗氧化平衡系统。病理情况下,该系统失衡向氧化方向进行时,便会给机体造成一系列的损伤,产生大量自由基。转录反式作用催化蛋白(TAT)可介导超氧化物歧化酶(SOD)透过血脑屏障进入细胞,甚至线粒体内对其... 正常机体存在一套比较完整的氧化-抗氧化平衡系统。病理情况下,该系统失衡向氧化方向进行时,便会给机体造成一系列的损伤,产生大量自由基。转录反式作用催化蛋白(TAT)可介导超氧化物歧化酶(SOD)透过血脑屏障进入细胞,甚至线粒体内对其进行清除,从而对机体发挥抗氧化能力及保护作用,尤其对神经细胞凋亡的保护作用尤为明显。TAT介导外源性大分子物质进入细胞的机制众说纷纭,迄今为止,还没有一个明确的、具有说服力的观点。因此,对TAT介导SOD对神经细胞凋亡的保护作用近几年的研究进展作一简要综述具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 超氧化物歧化酶 TAT-SOD 神经细胞凋亡
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TAT-SOD融合蛋白的跨膜转导性质的研究 被引量：8
6
作者 赵辉 潘剑茹 +2 位作者 刘树滔 张晨 饶平凡 《福州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期936-940,共5页
探讨了融合蛋白TAT-SOD的跨膜转导特性.实验结果表明:非变性的TAT-SOD也可以不受细胞种类限制,突破质膜屏障,显著提高L02、A375、Hela细胞的胞内SOD的活力;TAT-SOD的这种跨膜转导有明显的浓度、时间依赖关系,随着浓度和时间的增加而增加... 探讨了融合蛋白TAT-SOD的跨膜转导特性.实验结果表明:非变性的TAT-SOD也可以不受细胞种类限制,突破质膜屏障,显著提高L02、A375、Hela细胞的胞内SOD的活力;TAT-SOD的这种跨膜转导有明显的浓度、时间依赖关系,随着浓度和时间的增加而增加;在TAT跨膜转导SOD过程中,TAT-SOD首先黏附到细胞膜上,黏附量随TAT-SOD浓度的提高而明显增加,随作用时间的延长虽然也有增加,但是在30 min内迅速达到一个较高的水平,其后增加的趋势极为缓慢.细胞紫外线辐射防护试验表明,320 U/mL的TAT-SOD对细胞的保护率约为野生型SOD的5倍.试验结果说明,TAT-SOD具有明显的跨膜转导能力,可提高SOD的生物利用率. 展开更多
关键词 TAT—SOD 跨膜转导 胞内酶活 膜上酶活 辐射防护
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