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CONFORMATION STUDY OF THE LARGE FRAGMENT OF E. COLI DNA POLYMERASE I BY STM
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作者 要小未 李民乾 +6 位作者 徐耀良 顾敏明 胡钧 张兰平 张家骅 陆长德 裘敏燕 《Nuclear Science and Techniques》 SCIE CAS CSCD 1992年第4期260-262,共3页
The large fragment of E.coli DNA polymerase I is imaged by scanning tunneling microscope. The specimen is deposited on highly oriented pyrolytic graphite surface, and then covered with pure paraffin oil in order to ma... The large fragment of E.coli DNA polymerase I is imaged by scanning tunneling microscope. The specimen is deposited on highly oriented pyrolytic graphite surface, and then covered with pure paraffin oil in order to maintain hydration of the molecules. Images of the enzyme reveal an ellipsoid shape of 5.5-6.0nm wide and 7.0 -7.5 nm long. The conformation of the enzyme is in agreement with the model derived from X- ray crystallography studies. 展开更多
关键词 stm e. coli dna polymerase
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A simplified method for reconstituting active E.coli DNA polymerase Ⅲ 被引量:1
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作者 Shi-Qiang Lin Li-Jun Bi Xian-En Zhang 《Protein & Cell》 SCIE CSCD 2011年第4期303-307,共5页
Genome duplication in E.coli is carried out by DNA polymeraseⅢ,an enzyme complex consisting of ten subunits.Investigations of the biochemical and structural properties of DNA polymeraseⅢrequire the expression and pu... Genome duplication in E.coli is carried out by DNA polymeraseⅢ,an enzyme complex consisting of ten subunits.Investigations of the biochemical and structural properties of DNA polymeraseⅢrequire the expression and purification of subunits includingα,ε,θ,γ,δ′,δ,andβseparately followed by in vitro reconstitution of the polⅢcore and clamp loader.Here we propose a new method for expressing and purifying DNA polymeraseⅢcomponents by utilizing a protein coexpression strategy.Our results show that the subunits of the polⅢcore and those of the clamp loader can be coexpressed and purified based on inherent interactions between the subunits.The resulting polⅢcore,clamp loader and sliding clamp can be reconstituted effectively to perform DNA polymerization.Our strategy considerably simplifies the expression and purification of DNA polymeraseⅢand provides a feasible and convenient method for exploring other multi-subunit systems. 展开更多
关键词 e.coli dna polymerase COeXPReSSION PURIFICATION
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大肠杆菌表达重组Taq DNA聚合酶的分离和纯化 被引量:7
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作者 何钢 王义强 +1 位作者 李樊 刘贤桂 《中南林学院学报》 CSCD 北大核心 2006年第5期50-54,共5页
以插入Taq DNA聚合酶基因的pET-24a表达质粒转化E.coli菌株,表达Taq DNA聚合酶,用反复冻融的方法裂解菌体.表达产物为可溶性蛋白,采用Duo-Flow系统(Bio-Rad)及S柱,Tris缓冲液pH为7.5.以0-1 mol/L盐梯度洗脱方式,收集洗脱峰.透析... 以插入Taq DNA聚合酶基因的pET-24a表达质粒转化E.coli菌株,表达Taq DNA聚合酶,用反复冻融的方法裂解菌体.表达产物为可溶性蛋白,采用Duo-Flow系统(Bio-Rad)及S柱,Tris缓冲液pH为7.5.以0-1 mol/L盐梯度洗脱方式,收集洗脱峰.透析去盐可得到高纯度的产品.经PCR反应与商品Taq酶的一个活性单位相比较,重组的Taq酶活性有1个单位.用该方法可以从1 L培养液中分离得到5.51 mg产品. 展开更多
关键词 生物技术 TAQ dna聚合酶 大肠杆菌 表达 分离 纯化
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人γ心钠素在大肠杆菌中的高效表达 被引量:2
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作者 王培京 马康涛 张迺蘅 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第2期138-142,共5页
利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增人γ心钠素(γ-hANP)cDNA编码序列,在其5′和3′端分别引入EcoRⅠ和BamHⅠ限制性内切酶位点,定向克隆到表达质粒载体pMS-31b,在大肠杆菌pop2136中高效表达... 利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增人γ心钠素(γ-hANP)cDNA编码序列,在其5′和3′端分别引入EcoRⅠ和BamHⅠ限制性内切酶位点,定向克隆到表达质粒载体pMS-31b,在大肠杆菌pop2136中高效表达出人γ心钠素融合蛋白,表达产物占菌体总蛋白的30~40%。双向免疫扩散法测定证明表达产物与人α心钠素(α-hANP)抗血清呈阳性反应,纯化的表达产物经复性处理后能引起大鼠胸主动脉条舒张. 展开更多
关键词 心钠素 大肠杆菌 高效表达
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Pfu酶原核的高效表达及其活性分析 被引量:3
5
作者 袁跃 胡晶 王友如 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期29-31,共3页
目的:在大肠杆菌中高效表达重组Pfu酶。方法:将pfu基因构建于载体pET28a上,重组质粒pET28a-pfu转化DH5α,获得了含pET28a-pfu重组表达菌株。在重组菌株OD600为0.2时,经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达10~12 h后,菌体超声波破壁后,80℃... 目的:在大肠杆菌中高效表达重组Pfu酶。方法:将pfu基因构建于载体pET28a上,重组质粒pET28a-pfu转化DH5α,获得了含pET28a-pfu重组表达菌株。在重组菌株OD600为0.2时,经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达10~12 h后,菌体超声波破壁后,80℃条件下热变性30 min去除部分杂蛋白;粗酶液再经Ni离子亲和层析进一步纯化。结果:获得了高纯度的重组Pfu酶,利用该酶成功扩增出目的基因片段。结论:纯化的Pfu酶具有较高的活性,比活性为62 500 U/mg,该研究表达的重组酶完全可以替代商用Pfu酶。 展开更多
关键词 PFU dna聚合酶 高效表达 大肠杆菌 活性
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肠出血性大肠埃希菌(O_(157)∶H_7)的基因同源性的分析 被引量:6
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作者 杨晋川 景怀琦 +3 位作者 李洪卫 逄波 赵广法 徐建国 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期410-412,共3页
目的 对江苏省徐州地区O157∶H7的病原学进行分析。方法 采用聚合酶链反应对O157∶H7菌株毒力基因谱进行检测 ,同时用脉冲凝胶电泳 (PFGE)和随机扩增多态性DNA(RAPD)方法对O157∶H7菌株的同源性分析比较。结果 流行地区分离的O157∶H... 目的 对江苏省徐州地区O157∶H7的病原学进行分析。方法 采用聚合酶链反应对O157∶H7菌株毒力基因谱进行检测 ,同时用脉冲凝胶电泳 (PFGE)和随机扩增多态性DNA(RAPD)方法对O157∶H7菌株的同源性分析比较。结果 流行地区分离的O157∶H7菌株 ,10 0 %携带Hly、eaeA基因 ,95 .35 %携带SLT2 基因 ,11.6 3%携带SLT1基因。脉冲凝胶电泳图谱表明流行地区分离的O157∶H7菌株与日本分离的O157∶H7菌株有明显差异 ,为不相关菌株 ;与国内标准菌株 882 36 4为近似型(相似 ,但不相同 )。流行地区患者分离菌株与外环境家畜家禽粪便及昆虫肠道分离菌株的脉冲凝胶电泳图谱完全相同。结论 携带O157∶H7菌株的家畜家禽可能是导致疫情发生的传染源。脉冲凝胶电泳方法用于O157∶H7病原学分析 ,对流行病学研究有重要意义。随机扩增多态性DNA方法用于O157∶H7病原学分析 ,技术简便、省时。 展开更多
关键词 肠出血性大肠埃希菌 O157:H7 基因同源性 聚合酶链反应 检测 流行病学
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