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乙型肝炎病毒耐药突变的焦磷酸测序与Sanger双脱氧链终止法检测试剂的比对及临床应用
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作者 叶佩燕 夏前林 张建良 《诊断学理论与实践》 2016年第3期322-325,共4页
目的:将检测乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)耐药突变位点的焦磷酸测序检测试剂与Sanger双脱氧链终止法(Sanger测序法,简称Sanger法)检测试剂进行临床比对,为临床诊断和个体化治疗提供参考。方法:分别用研制的焦磷酸测序检测试剂与... 目的:将检测乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)耐药突变位点的焦磷酸测序检测试剂与Sanger双脱氧链终止法(Sanger测序法,简称Sanger法)检测试剂进行临床比对,为临床诊断和个体化治疗提供参考。方法:分别用研制的焦磷酸测序检测试剂与Sanger法检测试剂检测415份临床慢性乙型肝炎(乙肝)患者的血清样本及30例对照血清样本,并与Sanger法检测试剂比对,计算焦磷酸测序检测试剂的特异度、灵敏度及总符合率,计算Kappa值,比较2种试剂检测结果的一致性。结果:与经典的Sanger法检测试剂比对,焦磷酸测序检测试剂的特异度为100%,灵敏度为99.82%,一致率为99.86%,受试者工作特征曲线下面积为0.999 4,两者间具有较强的一致性。结论:焦磷酸测序检测试剂适合于临床对HBV样本进行耐药性诊断,其特异度、灵敏度与Sanger测序法一致性较强,且具有检测速度快、操作方便、测序成本低等优点,能更快地对临床乙肝患者提供用药指导建议,具有良好的临床应用前景。 展开更多
关键词 焦磷酸测序 sanger双脱氧链终止法 乙型肝炎病者耐药突变位点
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链终止测序技术在RNA结构分析中的应用
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作者 王德亚 范家慧 +6 位作者 田伟 张凌 姜扬帆 田忠景 丁诚实 康美玲 王玉海 《实验室科学》 2022年第5期67-69,共3页
双脱氧链终止法是最常用的DNA测序技术,其核心是依赖双脱氧核糖核苷酸的扩增终止技术。在课堂授课中,教师对于双脱氧链终止法的原理及应用讲解较少,学生普遍对于该方法理解不足。基于以上问题,在核酸化学的教学内容上引入SHAPE(Selectiv... 双脱氧链终止法是最常用的DNA测序技术,其核心是依赖双脱氧核糖核苷酸的扩增终止技术。在课堂授课中,教师对于双脱氧链终止法的原理及应用讲解较少,学生普遍对于该方法理解不足。基于以上问题,在核酸化学的教学内容上引入SHAPE(Selective 2’-Hydroxyl Acylation and Primer Extension)技术,不仅取得了较好的教学效果,同时增强了学生对于科研的兴趣。对SHAPE技术的原理及结果分析等教学设计简要叙述,以期为核酸化学的教学提供建议与参考。 展开更多
关键词 脱氧链终止 核酸化学 SHAPE技术
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黄羽扇豆翻译延伸因子2的序列分析 被引量:6
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作者 陈建中 章镇 +1 位作者 戴剑 R.Slomski 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期102-105,共4页
利用Sanger双脱氧链终止法对黄羽扇豆(Lupinusluteus)翻译延伸因子2(EF2)的全长cDNA克隆进行了序列分析。该cDNA长度为2794bp,其中包括5’末端的80bp非翻译区,3’末端185bp非翻译区和2529bp长编码序列,3’末端为一18bp poly(A)尾... 利用Sanger双脱氧链终止法对黄羽扇豆(Lupinusluteus)翻译延伸因子2(EF2)的全长cDNA克隆进行了序列分析。该cDNA长度为2794bp,其中包括5’末端的80bp非翻译区,3’末端185bp非翻译区和2529bp长编码序列,3’末端为一18bp poly(A)尾。与其它GTP结合蛋白比较其编译的843aa(氨基酸)序列,发现它们具有显著的同源性;黄羽扇豆EF2与甜菜EF2的氨基酸序列90%相同。其差异主要存在于序列的中部;而与肽基tRNA和核糖体作用部位、与GTP结合部位和GTP酶活性有关的部位具有很高的保守性。黄羽扇豆EF2第700个氨基酸残基组氨酸是白喉毒素的ADP-核糖基化部位。 展开更多
关键词 黄羽扇豆 延伸因子2 亚克隆 序列分析 sanger双脱氧链终止法 蛋白质 生物合成
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定量PCR检测对侵袭性真菌感染肺组织标本病原真菌的诊断价值 被引量:1
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作者 李翊 《河北医学》 CAS 2017年第6期999-1001,共3页
目的:探讨应用定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测技术诊断侵袭性真菌感染(invasive fungal infection,IFI)肺组织标本病原真菌的临床意义。方法:收集2010年6月至2016年6月手术切除且病理诊断为真菌感染的肺组织标本3... 目的:探讨应用定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测技术诊断侵袭性真菌感染(invasive fungal infection,IFI)肺组织标本病原真菌的临床意义。方法:收集2010年6月至2016年6月手术切除且病理诊断为真菌感染的肺组织标本33例为研究对象,设计针对真菌的通用引物和针对隐球菌属和曲霉菌的特异性引物,采用PCR技术和双脱氧链终止法(Sanger法测序)检测石蜡包埋肺切除组织中的真菌。结果:33份真菌感染的肺组织标本PCR检测结果均为阳性,与病理诊断相符,Sanger测序可以鉴定真菌到种别。PCR检测与Sanger测序敏感性差异无统计学意义(100%比91.67%,P>0.05),PCR检测与Sanger测序特异性差异无统计学意义(100%比100%,P>0.05);PCR检测种属鉴定率显著优于镜检(100%比81.82%,χ~2=6.60,P=0.01),PCR检测与Sanger测序差异不具有统计学意义(100%比90.91%,χ~2=3.14,P=0.08)。结论:定量PCR检测用于诊断侵袭性真菌感染肺组织标本敏感性高、特异性好,具有一定参考意义。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应 侵袭性真菌感染 肺组织 脱氧链终止
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DNA测序技术 被引量:8
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作者 董天宇 《当代化工研究》 2018年第11期71-73,共3页
DNA测序,即基因测序,处于快速发展阶段,全球基因测序行业的市场规模巨大。从1990年人类基因组计划(HGP)正式启动以来,DNA测序应用的壮阔前景开始展现在人类面前。本文介绍了第一代到第三代DNA测序的原理,关注当前DNA测序的应用,并提出... DNA测序,即基因测序,处于快速发展阶段,全球基因测序行业的市场规模巨大。从1990年人类基因组计划(HGP)正式启动以来,DNA测序应用的壮阔前景开始展现在人类面前。本文介绍了第一代到第三代DNA测序的原理,关注当前DNA测序的应用,并提出对于这一领域发展的看法和前景展望。 展开更多
关键词 化学降解 脱氧链终止 焦磷酸测序 高通量测序 单分子实时测序
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定量PCR检测对侵袭性真菌感染肺组织标本病原真菌的诊断价值
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作者 彭端亮 刘成桂 +2 位作者 张建英 钟浩宇 钱金凤 《四川医学》 CAS 2017年第9期1039-1042,共4页
目的探讨应用定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测技术诊断侵袭性真菌感染(invasive fungal infection,IFI)肺组织标本病原真菌的临床意义。方法收集2010年6月至2016年6月间我院行手术切除且病理诊断为真菌感染的肺组... 目的探讨应用定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测技术诊断侵袭性真菌感染(invasive fungal infection,IFI)肺组织标本病原真菌的临床意义。方法收集2010年6月至2016年6月间我院行手术切除且病理诊断为真菌感染的肺组织标本33例和同期非真菌感染的正常肺组织标本10例为研究对象,设计针对真菌的通用引物和针对隐球菌属和曲霉菌的特异性引物,采用PCR技术和双脱氧链终止法(Sanger法测序)检测石蜡包埋肺切除组织中的真菌。结果实验组33例真菌感染的肺组织标本PCR检测结果均为阳性,与病理诊断相符,Sanger测序可以鉴定真菌到种别。PCR检测与Sanger测序敏感性差异无统计学意义(P>0.05),PCR检测与Sanger测序特异性差异无统计学意义(P>0.05);PCR检测与镜检的种属鉴定率差异有统计学意义(P<0.05),PCR检测与Sanger测序的种属鉴定率差异无统计学意义(P>0.05)。结论定量PCR检测用于诊断侵袭性真菌感染肺组织标本敏感性高、特异性好,具有一定参考意义。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应 侵袭性真菌感染 肺组织 脱氧链终止
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定量PCR检测对侵袭性真菌感染肺组织标本病原真菌的诊断价值 被引量:2
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作者 杨镋灵 唐霞 《国际呼吸杂志》 2018年第17期1291-1294,共4页
目的探讨应用定量聚合酶链反应(PCR)检测技术诊断侵袭性真菌感染肺组织标本病原真菌的临床意义。方法收集2010年6月至2016年6月间我院行手术切除且病理诊断为真菌感染的肺组织标本30例和同期非真菌感染的正常肺组织标本10例为研究对... 目的探讨应用定量聚合酶链反应(PCR)检测技术诊断侵袭性真菌感染肺组织标本病原真菌的临床意义。方法收集2010年6月至2016年6月间我院行手术切除且病理诊断为真菌感染的肺组织标本30例和同期非真菌感染的正常肺组织标本10例为研究对象,设计针对真菌的通用引物和针对隐球菌属和曲霉菌的特异性引物,采用PCR技术和双脱氧链终止法(Sanger法测序)检测石蜡包埋肺切除组织中的真菌。结果实验组33份真菌感染的肺组织标本PCR检测结果均为阳性,与病理诊断相符,Sanger测序可以鉴定真菌到种别。PCR检测与Sanger测序敏感度差异无统计学意义(100%比91.67%,P〉0.05),PCR检测与Sanger测序特异性差异无统计学意义(100%比100%,P〉0.05);PCR检测种属鉴定率显著优于镜检(100%比81.82%,χ^2=6.60,P〈0.05),PCR检测与Sanger测序差异无统计学意义(100%比90.91%,χ^2=3.14,P〉0.05)。结论定量PCR检测用于诊断侵袭性真菌感染肺组织标本敏感性高、特异性好,具有一定参考意义。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 侵袭性真菌感染 肺组织 脱氧链终止
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中国基因测序专利分析 被引量:2
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作者 刘振宇 《高科技与产业化》 2016年第7期58-66,共9页
基因测序(检测)技术是指通过血液、体液、细胞等对DNA进行分析、检测的技术。从技术的演变升级来看,国际基因测序技术主要历经三代:第一代测序技术基于Sanger和Coulson在1975年发明的双脱氧终止法的测序原理,并结合荧光标记以及毛细... 基因测序(检测)技术是指通过血液、体液、细胞等对DNA进行分析、检测的技术。从技术的演变升级来看,国际基因测序技术主要历经三代:第一代测序技术基于Sanger和Coulson在1975年发明的双脱氧终止法的测序原理,并结合荧光标记以及毛细管阵列电泳技术来实现自动测序。第二代测序技术共同的特点是以舍弃读长为代价实现了高通量。第三代测序技术,即单分子DNA测序,即通过现代光学、高分子、纳米技术等手段区分碱基信号差异,直接读取序列信息,主要特点是不需要生物或化学试剂,进一步降低测序成本。 展开更多
关键词 测序技术 基因测序 sanger 华大基因 专利分析 脱氧终止 电泳技术 纳米技术 单分子 荧光标记
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