目的探讨Sclerostin对骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导的人骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法取两位男性车祸伤致截肢患者的骨髓组织进行体外人BMSCs培养。将培养细胞随机分为三组,1组未做转染(Mock),2组转染对照siRNA,3组转染Sc...目的探讨Sclerostin对骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导的人骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法取两位男性车祸伤致截肢患者的骨髓组织进行体外人BMSCs培养。将培养细胞随机分为三组,1组未做转染(Mock),2组转染对照siRNA,3组转染Sclerostin(骨形态发生蛋白抑制剂)siRNA,均采用含有0.1μg/m L BMP-2的成骨诱导培养基培养。分别在诱导培养的第0、3、7天,采用CCK-8法检测各组细胞活性,采用Cy QUANT细胞增殖检测试剂盒检测DNA含量。在培养的第14天,采用RT-PCR方法检测骨相关基因骨钙素(OCN)、骨钙蛋白(OC)及骨桥蛋白(OPN),采用碱性磷酸酶(ALP)分析试剂盒进行ALP活性分析,采用BCA蛋白检测试剂盒检测细胞蛋白含量。结果在诱导培养的第3、7天,3组细胞增殖活性、DNA含量均高于1、2组(P均<0.05)。在诱导培养的第14天,3组OCN、OC、OPN mRNA相对表达量及蛋白含量均高于1、2组(P均<0.05);1、2、3组ALP活性分别为1.00%±0.08%、1.12%±0.09%、2.50%±0.03%,3组高于1、2组(P均<0.05)。结论抑制Sclerostin表达可以促进BMP-2诱导的人BMSCs的活性及成骨分化能力。展开更多
文摘目的探讨Sclerostin对骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导的人骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法取两位男性车祸伤致截肢患者的骨髓组织进行体外人BMSCs培养。将培养细胞随机分为三组,1组未做转染(Mock),2组转染对照siRNA,3组转染Sclerostin(骨形态发生蛋白抑制剂)siRNA,均采用含有0.1μg/m L BMP-2的成骨诱导培养基培养。分别在诱导培养的第0、3、7天,采用CCK-8法检测各组细胞活性,采用Cy QUANT细胞增殖检测试剂盒检测DNA含量。在培养的第14天,采用RT-PCR方法检测骨相关基因骨钙素(OCN)、骨钙蛋白(OC)及骨桥蛋白(OPN),采用碱性磷酸酶(ALP)分析试剂盒进行ALP活性分析,采用BCA蛋白检测试剂盒检测细胞蛋白含量。结果在诱导培养的第3、7天,3组细胞增殖活性、DNA含量均高于1、2组(P均<0.05)。在诱导培养的第14天,3组OCN、OC、OPN mRNA相对表达量及蛋白含量均高于1、2组(P均<0.05);1、2、3组ALP活性分别为1.00%±0.08%、1.12%±0.09%、2.50%±0.03%,3组高于1、2组(P均<0.05)。结论抑制Sclerostin表达可以促进BMP-2诱导的人BMSCs的活性及成骨分化能力。
