透明质酸合成酶2通过调控TGF-β/SMAD4信号通路对肾细胞癌发生发展的影响

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作者 刘军 冉灿 +1 位作者 曾定胜 奉友刚 《遵义医科大学学报》 2023年第4期396-402,共7页

目的探讨透明质酸合成酶2(HAS2)在肾细胞癌(RCC)中的作用及其潜在分子机制。方法收集我院从2019年8月至2021年7月收治的RCC患者接受手术切除的30例RCC组织(RCC组)和30例癌旁组织(NAT组),RT-qPCR和Western blot实验分别检测HAS2 mRNA和... 目的探讨透明质酸合成酶2(HAS2)在肾细胞癌(RCC)中的作用及其潜在分子机制。方法收集我院从2019年8月至2021年7月收治的RCC患者接受手术切除的30例RCC组织(RCC组)和30例癌旁组织(NAT组),RT-qPCR和Western blot实验分别检测HAS2 mRNA和蛋白在RCC组织和细胞中的表达。将NC-siRNA、HAS2-siRNA转染至细胞后,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测RCC细胞的活力;流式细胞术检测RCC细胞凋亡情况;细胞划痕实验检测细胞迁移情况;Western blot检测RCC细胞中上皮-间充质转化(EMT)标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白和凋亡蛋白标志物Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白以及TGF-β1、p-Smad4蛋白的表达。结果与NAT组比较,RCC组织中HAS2 mRNA和蛋白水平均显著升高(P<0.05);与正常肾近端小管上皮细胞(RPTEC)比较,RCC细胞系中HAS2 mRNA和蛋白水平均显著升高(P<0.05)。与Control组比较,HAS2-siRNA组细胞中HAS2 mRNA和蛋白水平显著降低,细胞增殖和迁移能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Bax和Caspase-3蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低,E-cadherin蛋白水平显著升高,N-cadherin和Vimentin蛋白水平显著降低,TGF-β1、p-Smad4蛋白水平均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。NC-siRNA组与Control组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默HAS2能抑制肾细胞癌细胞增殖、迁移和EMT,促进肾细胞癌细胞凋亡,其机制可能与调控TGF-β/SMAD4信号通路有关。 展开更多

关键词 肾细胞癌 透明质酸合成酶2 凋亡 增殖 TGF-β/smad4信号通路

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TGF-β/SMAD4信号通路中基因突变对胰腺癌患者生存的影响 被引量：3

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作者 方闯 田伟军 《天津医科大学学报》 2020年第5期450-453,共4页

目的:分析胰腺导管腺癌患者转化生长因子(TGF)-β/SMAD4信号通路中基因突变的情况及对生存的影响。方法:回顾性分析天津医科大学总医院普通外科2016年7月—2019年9月共19例胰腺导管腺癌患者的临床资料,NGS检测患者基因突变情况,查询dbSN... 目的:分析胰腺导管腺癌患者转化生长因子(TGF)-β/SMAD4信号通路中基因突变的情况及对生存的影响。方法:回顾性分析天津医科大学总医院普通外科2016年7月—2019年9月共19例胰腺导管腺癌患者的临床资料,NGS检测患者基因突变情况,查询dbSNP及COSMIC数据库关键基因突变位点的临床意义。结果:19例胰腺导管腺癌患者中最常见的基因突变是KRAS(84.2%)、TP53(68.4%)、SMAD4(26.3%)、CDKN2A(26.3%)、CREBBP(15.8%)、RNF43(15.8%)、BRAF(15.8%)等。具有TGF-β/SMAD4信号通路相关基因突变的患者有7例(36.8%),其中SMAD4基因突变组中位生存时间5.0个月,无SMAD4基因突变组中位生存时间14.0个月,差异有统计学意义(P=0.032)。结论:TGF-β/SMAD4信号通路中具有SMAD4基因突变患者的临床预后相较于无基因突变患者的临床预后更差,此通路中具有多个基因突变其预后相对更差。 展开更多

关键词 胰腺癌 基因突变 生存分析 TGF-β/smad4信号通路

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DACT3激活BMP4/Smad信号通路促进胶质瘤细胞铁死亡

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作者 郑立 邓枚 +7 位作者 王利亚 张继勤 岳建和 韩国强 彭硕 刘健 尹浩 谭赢 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第13期1397-1404,共8页

目的探究基因DACT3促进神经胶质瘤细胞(U251、U118)铁死亡的分子机制。方法培养人U251、U118胶质瘤细胞,慢病毒转染构建稳定过表达DACT3的细胞后,qRT-PCR和Western blot检测转染效率。上述细胞分成3组:Ctrl组(对照组)、DACT3组(过表达DA... 目的探究基因DACT3促进神经胶质瘤细胞(U251、U118)铁死亡的分子机制。方法培养人U251、U118胶质瘤细胞,慢病毒转染构建稳定过表达DACT3的细胞后,qRT-PCR和Western blot检测转染效率。上述细胞分成3组:Ctrl组(对照组)、DACT3组(过表达DACT3细胞组)和DACT3+ferrostatin-1组(过表达DACT3+铁死亡抑制剂)。采用CCK-8检测细胞生存率,铁离子、MDA、谷胱甘肽(glutatione,GSH)检测试剂盒测定细胞铁离子、MDA、GSH含量,Western blot检测GPX4、SLC7A11、TFR1表达。进一步将上述细胞分为以下3组:Ctrl组(对照组)、DACT3组(过表达DACT3细胞组)和DACT3+siBMP4组(过表达DACT3+敲低BMP4组),再次利用CCK-8检测细胞生存率,铁离子、MDA、GSH检测试剂盒测定细胞铁离子、MDA、GSH含量,Western blot检测GPX4、SLC7A11、TFR1、BMP4、p-Smad表达。结果DACT3组中DACT3 mRNA和蛋白表达均显著高于Ctrl组;与Ctrl组比较,DACT3组细胞生存率明显下降,铁离子、MDA含量显著升高,GSH含量明显下降,GPX4、SLC7A11表达显著下降,TFR1、p-Smad、BMP4表达明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);DACT3+ferrostatin-1组、DACT3+siBMP4组均能一定程度抵消DACT3导致的上述指标的变化,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论DACT3可以促进U251、U118胶质瘤细胞铁死亡,其机制与BMP4/SMAD信号通路激活有关。 展开更多

关键词 DACT3 胶质瘤 铁死亡 BMP4/smad信号通路

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温针联合桃红四物汤对腰椎骨折大鼠骨愈合能力、骨矿化及Smad4通路的影响

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作者 高宇 王晓云 +1 位作者 文培培 池红万 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第24期6006-6010,共5页

目的探讨温针联合桃红四物汤对腰椎骨折大鼠骨愈合能力、骨矿化及Smad4信号通路的影响。方法随机将45只大鼠分为5组,假手术(CO)组、模型(MO)组、针灸(AC)组、桃红四物汤(PE)组、联合(JO)组,每组9只。建立大鼠腰椎骨折模型。AC组给予温... 目的探讨温针联合桃红四物汤对腰椎骨折大鼠骨愈合能力、骨矿化及Smad4信号通路的影响。方法随机将45只大鼠分为5组,假手术(CO)组、模型(MO)组、针灸(AC)组、桃红四物汤(PE)组、联合(JO)组,每组9只。建立大鼠腰椎骨折模型。AC组给予温针治疗,隔日一次,干预28 d;PE组给予桃红四物汤6 ml/kg灌胃;JO组在PE组的基础上给予温针治疗;CO组和MO组均给予等容量生理盐水灌胃。比色法测定血清钙(Ca)浓度;磷钼酸法测定血清磷(P)浓度;全自动生化分析仪检测碱性磷酸酶(ALP)水平;放射免疫法检测骨钙素(BGP)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓组织病理学变化;免疫组化检测血管内皮生长因子(VEGF)表达;免疫印迹检测转化生长因子(TGF)-β1、Smad4蛋白的表达。结果与CO组相比,MO组血清中Ca、P、ALP、BGP水平均明显降低(P<0.05),与MO组相比,AC组、PE组和JO组Ca、P、ALP、BGP水平均显著升高(P<0.05),AC组和PE组相比,组间比较无统计学差异(P>0.05),与AC组相比,JO组Ca、P、ALP、BGP水平均明显升高(P<0.05)。HE染色结果显示,CO组显示灰白质边界清楚,神经元丰富;MO组显示出以为灰白质边界不清及神经元数目显著降低为特征的严重损害;与MO组相比,AC组、PE组神经元数目明显增加,但灰白质边界欠清;与AC组、PE组相比,JO组中神经元数目增加更明显,脊髓的结构更好。与CO组相比,MO组腰椎组织中VEGF阳性表达显著降低(P<0.05),与MO组相比,AC组、PE组和JO组VEGF阳性表达显著升高(P<0.05),AC组和PE组相比,组间比较无统计学差异(P>0.05),与AC组相比,JO组VEGF表达明显升高(P<0.05)。与CO组相比,MO组腰椎组织中TGF-β1、Smad4表达显著降低(P<0.05),与MO组相比,AC组、PE组和JO组TGF-β1、Smad4表达显著升高(P<0.05),AC组和PE组相比,组间比较无统计学差异(P>0.05),与AC组相比,JO组TGF-β1、Smad4表达明显升高(P<0.05)。结论温针联合桃红四物汤可以抑制骨矿物质的流失,加快钙盐的沉积,上调Smad4水平,促进骨愈合。 展开更多

关键词 温针 桃红四物汤 腰椎骨折 骨愈合 骨矿化 smad4信号通路

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miRNA-224-5p通过TGF-β/Smad4信号通路调控甲状腺乳头状癌细胞凋亡 被引量：2

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作者 马楠 徐蓉 苏鹏程 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2018年第11期609-613,共5页

目的探讨miRNA-224-5p通过TGF-β/Smad4信号通路对甲状腺乳头状癌细胞凋亡的调控作用。方法选取2015年7月至2017年11月新疆维吾尔自治区人民医院手术切除所得甲状腺乳头状癌组织及相应的癌旁组织冻存标本各60份。通过逆转录聚合酶链反应... 目的探讨miRNA-224-5p通过TGF-β/Smad4信号通路对甲状腺乳头状癌细胞凋亡的调控作用。方法选取2015年7月至2017年11月新疆维吾尔自治区人民医院手术切除所得甲状腺乳头状癌组织及相应的癌旁组织冻存标本各60份。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测60例甲状腺乳头状癌组织及60例癌旁组织中miRNA-224-5p的相对表达量,二者比较采用配对资料t检验。将miRNA-224-5p(miRNA-224-5p组)与miRNA-224-5p抑制剂(miRNA-224-5p抑制剂组)分别转染到甲状腺乳头状癌细胞株GLAG-66中,通过RT-PCR检测两组中GLAG-66细胞内miRNA-224-5p的相对表达量,应用流式细胞仪检测两组GLAG-66细胞转染48 h后凋亡率,应用Western blot实验检测两组GLAG-66细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3、TGF-β1、Smad4蛋白的相对表达量,并采用两个独立样本t检验进行比较。结果 miRNA-224-5p在甲状腺乳头状癌组织中的相对表达量与癌旁组织比较明显升高,差异具有统计学意义[(4.175±0.523)vs(1.236±0.236),t=9.675,P=0.001)]。miRNA-224-5p抑制剂组GLAG-66细胞中miRNA-224-5p的相对表达量与miRNA-224-5p组比较明显下降,差异具有统计学意义[(0.381±0.078)vs(1.000±0.023),t=19.785,P <0.001)]。miRNA-224-5p抑制剂组GLAG-66细胞转染48 h后的凋亡率与miRNA-224-5p组比较明显增高,差异具有统计学意义[(18.66%±0.98%)vs(3.78%±0.36%),t=17.561,P <0.001]。miRNA-224-5p抑制剂组和miRNA-224-5p组比较,GLAG-66细胞中Bcl-2、TGF-β1和Smad4蛋白的相对表达量明显降低,差异具有统计学意义[(0.197±0.008)vs(0.278±0.013),t=8.259,P=0.001;(0.117±0.013)vs(0.227±0.012),t=13.269,P <0.001;(0.268±0.012)vs(0.439±0.016),t=9.897,P=0.001];Bax、Cleaved-Caspase3蛋白的相对表达量明显升高,差异具有统计学意义[(0.286±0.011)vs(0.159±0.009),t=12.569,P <0.001;(0.128±0.009)vs(0.083±0.010),t=7.693,P=0.002]。结论 miRNA-224-5p在甲状腺乳头状癌组织中表达增高,下调miRNA-224-5p可以促进甲状腺乳头状癌细胞的凋亡,其作用机制可能与TGF-β/Smad4信号通路有关。 展开更多

关键词 微小RNA-224-5p 甲状腺乳头状癌 TGF-β/smad4信号通路 凋亡

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千金子二萜醇调控TGF-β/Smad4通路调节肾癌小鼠Th1/Th2免疫平衡

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作者 周磊 宋圣佑 +4 位作者 邰伦伟 蒋俊玲 王蒙蒙 潘世杰 赵俊峰 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第18期4512-4515,共4页

目的探究千金子二萜醇对肾癌小鼠Th1/Th2免疫平衡的影响及转化生长因子(TGF)-β/Smad4信号通路调控作用的可能机制。方法12只BALB/c小鼠随机分为模型组、实验组(模型+千金子二萜醇)和TGF-β/Smad通路抑制剂组(模型+LY2109761),通过接种... 目的探究千金子二萜醇对肾癌小鼠Th1/Th2免疫平衡的影响及转化生长因子(TGF)-β/Smad4信号通路调控作用的可能机制。方法12只BALB/c小鼠随机分为模型组、实验组(模型+千金子二萜醇)和TGF-β/Smad通路抑制剂组(模型+LY2109761),通过接种肾癌Renca细胞构建肾癌小鼠模型。灌胃21 d后,取小鼠瘤块和脾脏组织并计算各组瘤块体积增长率,Western印迹检测小鼠脾脏TGF-βRⅡ和Smad4蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素(IL)-4和干扰素(IFN)-γ水平,RT-qPCR检测小鼠脾脏TGF-βRⅡ、Smad4、IL-4和IFN-γmRNA表达水平。结果与模型组相比,实验组肿瘤体积增长率、TGF-βRⅡ、Smad4 mRNA和蛋白表达显著降低,IL-4水平显著降低,IFN-γ水平显著升高,LY2109761组TGF-βRⅡmRNA表达显著升高,蛋白水平显著降低,Smad4蛋白表达水平显著降低(均P<0.05)。结论千金子二萜醇通过调控TGF-β/Smad4信号通路抑制肾癌模型小鼠的肿瘤生长,并调节Th1/Th2免疫平衡。 展开更多

关键词 肾细胞癌 千金子二萜醇 转化生长因子(TGF)-β/smad4信号通路 Th1/Th2免疫平衡

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异氟醚后处理通过Bmp4/Smad信号通路调节脑缺血再灌注损伤大鼠AQP4表达 被引量：3

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作者 孟轶男 安洋 王守田 《解剖学研究》 CAS 2018年第5期398-402,共5页

目的探讨异氟醚后处理对脑缺血再灌注损伤大鼠AQP4表达的影响及Bmp4/Smad信号通路发挥的调节作用。方法 SPF级SD大鼠48只,体质量250～300 g,随机分为假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注损伤组(CIRI组)、异氟醚后处理组(ISO组)、AQP4抑制剂... 目的探讨异氟醚后处理对脑缺血再灌注损伤大鼠AQP4表达的影响及Bmp4/Smad信号通路发挥的调节作用。方法 SPF级SD大鼠48只,体质量250～300 g,随机分为假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注损伤组(CIRI组)、异氟醚后处理组(ISO组)、AQP4抑制剂组(TGN020组)、BMP4抑制剂组(LDN193189组)和二甲基亚砜组(DMSO组),每组8只。采用大脑中动脉结扎方法建立CIRI模型;苏木精-伊红(HE)染色观察大脑组织病理学变化;Western blot法检测各组大鼠BMP4、Smad、p-Smad和AQP4蛋白表达水平;qRT-PCR法检测AQP4m RNA表达水平。结果 ISO后处理可以改善大鼠脑缺血再灌注损伤的脑组织损伤,降低AQP4的表达水平(P<0.05),增加BMP4和p-Smad的表达(P<0.05);加入BMP4抑制剂后,ISO的作用得到抑制(P<0.05)。结论 ISO后处理对CIRI大鼠脑组织有保护作用,其机制与AQP4表达及Bmp4/Smad信号通路有关。 展开更多

关键词 异氟醚后处理 脑缺血再灌注损伤 水通道蛋白 Bmp4/smad信号通路

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熊果酸通过BMP-2/Smad4/Wnt/β-catenin信号通路介导对去卵巢大鼠骨量流失的保护作用 被引量：11

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作者 李洁 孙雅楠 +1 位作者 解光越 李斯 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1810-1814,共5页

目的探讨熊果酸(XGS)对去卵巢大鼠骨量流失的影响,并探索可能的机制。方法通过双侧去卵巢建立骨质疏松大鼠模型;随后随机分为假手术组(Sham)、去卵巢组(OVX)以及熊果酸组(XGS),每组10只;其中XGS组大鼠接受熊果酸(100 mg/kg)治疗12周;待... 目的探讨熊果酸(XGS)对去卵巢大鼠骨量流失的影响,并探索可能的机制。方法通过双侧去卵巢建立骨质疏松大鼠模型;随后随机分为假手术组(Sham)、去卵巢组(OVX)以及熊果酸组(XGS),每组10只;其中XGS组大鼠接受熊果酸(100 mg/kg)治疗12周;待治疗检测股骨骨量、骨密度(BMD)、骨矿物质含量(BMC)、骨代谢指标以及BMP-2、Smad4、Wnt 1和β-catenin表达。结果治疗12周后,与OVX组相比,Micro-CT和双能X线结果显示XGS组的大鼠骨小梁微观参数、骨密度和骨矿物质含量得到明显改善。XGS组大鼠BMD、BMC、TV/BV、Tb.N、Tb.Th和Tb.Sp较OVX组明显改善(P<0.05)。血清检测结果和生物力学检测结果显示XGS组的最大载荷和弹性模量均高于OVX组(P<0.05);XGS组大鼠血清ALP、OPD和OCN水平较OVX组明显降低,组间差异有统计学意义(P<0.05)。WB检测显示,和OVX组比较,XGS组BMP-2、Smad4、Wnt1和β-catenin表达水平明显上调,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论熊果酸可以通过BMP-2/Smad4/Wnt/β-catenin信号通路介导对去卵巢大鼠骨量流失保护作用。 展开更多

关键词 熊果酸 绝经后骨质疏松症 骨代谢指标 骨密度 BMP-2/smad4/Wnt/β-catenin信号通路

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孕期尼古丁暴露所致子代成骨细胞BMP-4/Smad信号通路的变化 被引量：2

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作者 王军建 刘鑫 +2 位作者 刘方娜 姚满叶 邓宇 《医学研究杂志》 2018年第11期57-61,共5页

目的探究大鼠孕期尼古丁暴露对子代成骨细胞(OB) BMP-4/Smad信号通路的影响。方法将妊娠期大鼠分为对照组与实验组,对照组受孕第9天皮下注射2mg/(kg·d)生理盐水,实验组在受孕后第9天于皮下注射2mg/(kg·d)尼古丁,新生3天乳鼠... 目的探究大鼠孕期尼古丁暴露对子代成骨细胞(OB) BMP-4/Smad信号通路的影响。方法将妊娠期大鼠分为对照组与实验组,对照组受孕第9天皮下注射2mg/(kg·d)生理盐水,实验组在受孕后第9天于皮下注射2mg/(kg·d)尼古丁,新生3天乳鼠处死后收集颅骨,采用钙钴法对OB碱性磷酸酶进行染色,反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)测定OB细胞中骨形态发生蛋白4 (BMP-4)、Smad1、Smad5、Smad8、Runt相关转录因子2(Runx-2)、成骨相关转录因子(Osterix)、Smads泛素化调节因子1(Smurf1)表达,免疫印迹法(Western blot)检测OB中BMP-4、Smad1、Smad5、Smad8、Runx-2、Osterix、Smurf1蛋白表达。结果 ALP染色显示OB细胞胞体较大,细胞核染色呈蓝紫色,细胞质呈淡紫色,对照组ALP细胞阳性率为42. 69%±5. 16%,高于实验组(18. 67%±3. 19%),差异有统计学意义(P <0. 05)。RT-PCR结果显示实验组BMP-4、Smad1、Smad5、Smad8、Runx-2、Osterix m RNA表达量均低于对照组,Smurf1mRNA表达量高于对照组,差异有统计学意意义(P <0. 05)。Western blot法检测结果显示,实验组乳鼠OB中BMP-4、Smad1、Smad5、Smad8、Runx-2、Osterix蛋白表达量均低于对照组,Smurf1蛋白表达量高于对照组。蛋白条带灰度扫描结果显示,实验组乳鼠OB中BMP-4、Smad1、Smad5、Smad8、Runx-2、Osterix蛋白相对灰度值均低于实验组,Smurf1蛋白相对灰度值高于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论大鼠孕期尼古丁暴露对OB具有一定的抑制作用,可能与上调Smurf1表达、抑制BMP-4/Smad信号通路和下调转录因子Runx-2、Osterix有关。 展开更多

关键词 尼古丁暴露 子代乳鼠 成骨细胞 BMP-4/smad信号通路

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半枝莲总黄酮通过Smad4/PKM2/HIF-1α改善高糖诱导的足细胞损伤的机制研究

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作者 闫东 顾长瑞 张响 《海南医学院学报》 CAS 2023年第2期102-108,共7页

目的:观察半枝莲总黄酮(TF-SB)对高糖诱导的足细胞(MPC-5)损伤及Smad4/PKM2/HIF-1α信号通路的影响。方法:首先采用CCK8法分析TF-SB对MPC-5细胞的安全性及药效浓度。随后MPC-5分为空白组、模型组和TF-SB组,除空白组外,模型组和TF-SB组... 目的:观察半枝莲总黄酮(TF-SB)对高糖诱导的足细胞(MPC-5)损伤及Smad4/PKM2/HIF-1α信号通路的影响。方法:首先采用CCK8法分析TF-SB对MPC-5细胞的安全性及药效浓度。随后MPC-5分为空白组、模型组和TF-SB组,除空白组外,模型组和TF-SB组采用高糖诱导建立MPC-5细胞损伤模型,分别检测TF-SB对MPC-5细胞ATP、凋亡和ROS水平的影响,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞因子(IL-1β、TNF-α、MCP-1)含量,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测糖酵解基因(GLU1、PFK1和HK1)表达丰度,蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞Smad4/PKM2/HIF-1α信号通路中相关蛋白的表达水平;结果:与空白组相比,模型组MPC-5细胞ATP含量、GLU1、PKF1和HK1表达丰度显著下降,凋亡和ROS水平、IL-1β、TNF-α与MCP-1的含量均显著增加(P<0.01);与模型组相比,TF-SB组ATP含量、GLU1、PKF1和HK1表达丰度显著升高,凋亡和ROS水平、IL-1β、TNF-α与MCP-1的含量均显著降低(P<0.01)。此外,与空白组相比,模型组Smad4、HIF-1α蛋白表达及细胞核中PKM2表达显著升高,细胞质中PKM2表达显著降低(P<0.01);与模型组相比,TF-SB组Smad4、HIF-1α表达及细胞核中PKM2表达显著降低,而细胞质中PKM2表达显著升高(P<0.01);结论:TF-SB促进MPC-5细胞线粒体活性诱导糖酵解,进而抑制炎症的分泌,达到治疗糖尿病肾病的作用可能与通过抑制Smad4/PKM2/HIF-1α信号通路有关。 展开更多

关键词 TF-SB 糖尿病肾病 足细胞 smad4/PKM2/HIF-1α信号通路

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miR-145-5p通过SMAD4基因对食管鳞状细胞癌细胞增殖与凋亡影响

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作者 赵红丹 郭康 +1 位作者 宋士军 高明 《青岛大学学报（医学版）》 CAS 2022年第4期577-583,共7页

目的探究miR-145-5p靶向调控SMAD4基因对食管鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法收集68例食管鳞状细胞癌病人癌组织及其癌旁正常组织,采用免疫组织化学方法检测SMAD4蛋白阳性表达率,应用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术... 目的探究miR-145-5p靶向调控SMAD4基因对食管鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法收集68例食管鳞状细胞癌病人癌组织及其癌旁正常组织,采用免疫组织化学方法检测SMAD4蛋白阳性表达率,应用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测食管鳞状细胞癌及其癌旁正常组织中miR-145-5p和SMAD4表达水平。筛选合适食管鳞状细胞癌细胞株分为Blank组、NC组、miR-145-5pmimic组、miR-145-5pinhibitor组、siRNA-SMAD4组和miR-145-5pinhibitor+siRNA-SMAD4组。生物学网站和双荧光素酶实验验证miR-145-5p和SMAD4的靶向关系。qRT-PCR检测miR-145-5p、SMAD4、TGF-β、Bcl-2和Bax的mRNA表达水平,WesternBlot分别检测SMAD4、TGF-β、Bcl-2和Bax的蛋白的表达水平。CCK8方法检测细胞增殖活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果免疫组织化学检测显示,SMAD4阳性颗粒主要表达于细胞浆或细胞核,且与癌旁正常组织相比,食管鳞状细胞癌组织中SMAD4阳性率明显升高( χ^(2)=14.251,P<0.05);而qRT-PCR显示miR-145-5p表达水平显著降低(t=109.800,P<0.05)。相比其他细胞株,ECA-109细胞中的miR-145-5p表达量最低(F=48.000,P<0.05),选用于后续实验。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-145-5p可靶向调控SMAD4(t=21.820,P<0.05)。与Blank组相比,NC组的各项指标无显著差异(P均>0.05);与Blank组和NC组相比,miR-145-5pmimic组miR-145-5p和Bax表达增加,SMAD4、TGF-β和Bcl-2表达降低,细胞增殖能力明显下降,细胞凋亡率显著上升(P均<0.05);siRNA-SMAD4组miR-145-5p表达无明显变化,Bax表达增加,SMAD4、TGF-β和Bcl-2表达降低,细胞增殖能力明显下降,细胞凋亡率显著上升(P均<0.05);miR-145-5pinhibitor组miR-145-5p和Bax表达降低,SMAD4、TGF-β和Bcl-2表达上升,细胞增殖能力明显上升,细胞凋亡率显著下降(P均<0.05);而miR-145-5pinhibitor+siRNA-SMAD4组与Blank组和NC组相比组间差异无显著性(P均>0.05)。结论miR-145-5p高表达可通过靶向抑制SMAD4基因表达,抑制TGF-β/Smad4信号通路的激活,抑制食管鳞状细胞癌细胞增殖并促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 食管鳞癌 微RNAS smad4蛋白质 TGF-β/smad4信号通路 细胞增殖 细胞凋亡

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骨形态发生蛋白4/Smad信号通路在小鼠原始卵泡发育中的作用及作用机制 被引量：3

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作者 丁祥云 李毅 +1 位作者 史琨 郝晶 《生殖与避孕》 CAS CSCD 2012年第10期649-655,680,共8页

目的:探讨骨形态发生蛋白4(BMP4)/Smad信号通路在小鼠原始卵泡发育中的作用及作用机制。方法:取3日龄昆明雌性小鼠卵巢体外培养,添加重组BMP4,并以不添加BMP4为对照,采用HE染色和TUNEL法,检测BMP4在原始卵泡存活和发育中的作用;采用免... 目的:探讨骨形态发生蛋白4(BMP4)/Smad信号通路在小鼠原始卵泡发育中的作用及作用机制。方法:取3日龄昆明雌性小鼠卵巢体外培养,添加重组BMP4,并以不添加BMP4为对照,采用HE染色和TUNEL法,检测BMP4在原始卵泡存活和发育中的作用;采用免疫组织化学、Westernblotting与RT-PCR检测BMP4对原始卵泡中p-Smad1/5/8、sohlh2及c-kit表达的影响。结果:①BMP4组卵巢直径明显变大(1.17±0.24 mm vs 0.65±0.13 mm,P<0.05),原始卵泡数(45.3±4.2枚)明显低于对照组(55.0±5.0枚)(P<0.05),而初级卵泡的数(25.3±2.5枚)明显多于对照组(19.0±1.0枚)(P<0.05)。②TUNEL结果显示BMP4组凋亡卵母细胞比例明显低于对照组(P<0.05)。③免疫组织化学、Western blotting与RT-PCR结果显示,与对照组相比,BMP4组原始卵泡卵母细胞中p-Smad 1/5/8、Sohlh2及C-kit的表达均显著升高(P<0.01)。结论:BMP4/Smad信号通路可促进小鼠原始卵泡向初级卵泡转变,并抑制卵母细胞的凋亡;其可能通过上调Sohlh2及C-kit基因的表达而发挥作用。 展开更多

关键词 BMP4/smad信号通路 Sohlh2 C-KIT 小鼠 原始卵泡

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补肾填精法通过Bmp4/Smad信号通路对小鼠原始卵泡发育的作用及机制研究 被引量：3

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作者 庾敏姬 陶莉莉 吴爱华 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期280-282,共3页

目的探讨补肾填精法通过Bmp4/Smad信号通路对小鼠原始卵泡发育的作用及机制。方法选择雌性小鼠40只,通过透明带3多肽注射建立卵巢早衰(POF)模型,并随机分为模型组和补中药组各20只,其中中药组给予补肾填精法治疗,HE染色法观察各组卵巢... 目的探讨补肾填精法通过Bmp4/Smad信号通路对小鼠原始卵泡发育的作用及机制。方法选择雌性小鼠40只,通过透明带3多肽注射建立卵巢早衰(POF)模型,并随机分为模型组和补中药组各20只,其中中药组给予补肾填精法治疗,HE染色法观察各组卵巢及卵巢切片最大截面上原始卵泡、初级卵泡的数量情况;采用TUNEL法观察各组原始卵泡中卵母细胞凋亡情况;Western blotting法检测Bmp4、Smad1、sohlh2及c-kit蛋白的表达情况。结果 HE染色结果显示,与模型组相比,中药组原始卵泡和初级卵泡数量明显增加(P<0.05);TUNEL结果显示,中药组原始卵泡中卵母细胞凋亡率明显低于模型组(P<0.05)。Western Blot结果显示,与模型组小鼠相比,中药组Bmp4、Smad1、sohlh2及c-kit蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论补肾填精法通过激活BMP4/Smad信号通路,促进小鼠原始卵泡发育,并抑制卵母细胞的凋亡,改善卵母细胞质量。 展开更多

关键词 补肾填精法 Bmp4/smad信号通路 原始卵泡 sohlh2 C-KIT

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重组日本血吸虫虫卵核糖核酸酶SjCP1412体外抑制肝星状细胞LX-2活化作用的研究

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作者 李其凤 宋丽君 +7 位作者 杨莹莹 董盼盼 梅丛进 李溢鑫 张键锋 熊春蓉 余传信 杨坤 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期566-579,共14页

目的观察重组日本血吸虫虫卵核糖核酸酶SjCP1412(r SjCP1412)对体外培养的人肝星状细胞LX-2增殖、细胞周期、凋亡及活化的作用,并探索其潜在机制。方法在大肠埃希菌BL21中采用原核表达方式表达rSjCP1412蛋白,并通过Ni-NTA亲和层析法及... 目的观察重组日本血吸虫虫卵核糖核酸酶SjCP1412(r SjCP1412)对体外培养的人肝星状细胞LX-2增殖、细胞周期、凋亡及活化的作用,并探索其潜在机制。方法在大肠埃希菌BL21中采用原核表达方式表达rSjCP1412蛋白,并通过Ni-NTA亲和层析法及尿素梯度复性透析制备高纯度可溶性rSjCP1412蛋白。使用12.5、25.0、50.0μg rSjCP1412蛋白分别于37℃酶解酵母RNA 2、3、4 h,酶解产物采用1.5%琼脂糖凝胶电泳分析,观察rSjCP1412蛋白RNA酶活性。采用CCK-8法检测经不同浓度rSjCP1412蛋白刺激48 h后LX-2细胞增殖,采用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染法检测经不同浓度rSjCP1412蛋白刺激48 h后LX-2细胞凋亡,采用DAPI染色法检测经不同浓度rSjCP1412蛋白刺激48 h后LX-2细胞周期中G0/G1、S、G2/M期细胞百分比,采用荧光实时定量PCR(qPCR)检测经不同浓度rSjCP1412蛋白刺激48 h后LX-2细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达水平;采用Western blotting法检测经rSjCP1412蛋白刺激LX-2细胞48 h后Ⅰ型胶原、α-SMA和Smad4/7蛋白表达水平,以明确LX-2细胞活化。以上实验均设可溶性虫卵抗原(SEA)阳性对照和正常组(不含rSjCP1412蛋白的PBS)。采用rSjCP1412蛋白单独刺激或与转化生长因子-β1(TGF-β1)共同刺激LX-2细胞48 h后,采用Western blotting检测LX-2细胞中Ⅰ型胶原、α-SMA和Smad4蛋白表达水平,分析r SjCP1412作用于LX-2细胞的信号通路。结果成功表达并制备了高纯度可溶性的rSjCP1412蛋白,且rSjCP1412蛋白具有RNA酶活性。与正常组相比,12.5、25.0、50.0μg/mL r SjCP1412和SEA处理48 h后,LX-2细胞存活率均显著下降(F=22.417、20.448,P均<0.05);12.5、25.0、50.0μg/mL r SjCP1412蛋白处理48 h后,LX-2细胞凋亡率显著增加(F=11.350,P<0.05);12.5、25.0、50.0μg/mL rSjCP1412蛋白处理48 h后,可导致LX-2细胞G0/G1期阻滞(F=20.710,P<0.05)。12.5、25.0、50.0μg/mL rSjCP1412蛋白处理可导致LX-2细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-SMA m RNA表达水平均显著下降(F=11.340、456.600、23.100,P均<0.05)。rSjCP1412与SEA均可导致LX-2细胞中Ⅰ型胶原、α-SMA和Smad4蛋白表达水平下调,活化水平下降(F=1302.000、49.750、52.420,P均<0.05)。此外,rSjCP1412蛋白抑制TGF-β1激活的LX-2细胞中Ⅰ型胶原、α-SMA和Smad4蛋白表达水平(F=66.290、31.300、27.010,P均<0.05)。结论SjCP1412在体外能诱导肝星状细胞LX-2凋亡,对LX-2细胞增殖、细胞周期及活化均具有一定抑制作用,其作用机制与下调Smad4信号分子表达水平相关。 展开更多

关键词 日本血吸虫 核糖核酸酶 SjCP1412 肝星状细胞 smad4信号通路

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荆防颗粒对CCl4诱导小鼠肝纤维化的治疗作用及其机制研究 被引量：8

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作者 李郁茹 赵亚芳 +5 位作者 程国良 王恩力 谭玉军 姚景春 赵琰 张贵民 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第22期6127-6136,共10页

探讨荆防颗粒对四氯化碳(CCl4)诱导小鼠肝纤维化的治疗作用及其作用机制。将49只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组、CCl4组、水飞蓟宾(阳性对照,100 mg·kg^(-1))+CCl4组、荆防颗粒高剂量(16 g·kg^(-1))组、荆防颗粒高剂量... 探讨荆防颗粒对四氯化碳(CCl4)诱导小鼠肝纤维化的治疗作用及其作用机制。将49只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组、CCl4组、水飞蓟宾(阳性对照,100 mg·kg^(-1))+CCl4组、荆防颗粒高剂量(16 g·kg^(-1))组、荆防颗粒高剂量(16 g·kg^(-1))+CCl4组、荆防颗粒中剂量(8 g·kg^(-1))+CCl4组、荆防颗粒低剂量(4 g·kg^(-1))+CCl4组,每组7只。除空白组和荆防颗粒高剂量组小鼠腹腔注射橄榄油溶液外,其余各组小鼠腹腔注射10%CCl4橄榄油溶液(5 mL·kg^(-1))诱导肝纤维化,每周2次,间隔3 d,连续8周。同时,除空白组和CCl4组给予去离子水外,其余各组小鼠灌胃给予相应剂量的药物,每日1次,连续8周,灌胃体积10 mL·kg^(-1)。末次给药后,小鼠禁食,自由饮水12 h后摘取眼球取血,收集肝脏和脾脏,计算脏器指数。采用自动化分析仪检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)、总胆汁酸(total bile acid, TBA)、甘油三酯(triglyceride, TG)的水平;ELISA法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的含量;采用试剂盒检测小鼠肝组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)的含量;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色、Masson染色、天狼猩红染色观察肝组织病理学的变化;蛋白印迹法检测小鼠肝组织中的转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Smad4蛋白表达。结果显示,荆防颗粒能显著降低CCl4诱导肝纤维化小鼠的脏器指数及血清中ALT、AST、TBA、TG和TNF-α、IL-6、IL-1β的水平及肝组织中MDA的含量,显著升高SOD和GSH的含量,同时,下调肝组织中TGF-β、α-SMA及Smad4蛋白的表达水平。此外,荆防颗粒对正常小鼠肝组织形态及上述指标无明显影响。以上结果表明,荆防颗粒对CCl4诱导的小鼠肝纤维化有明显的治疗作用,其作用机制可能与降低促炎因子的表达、抗氧化、调节TGF-β/Smad4信号通路有关。 展开更多

关键词 荆防颗粒 肝纤维化 小鼠 治疗作用 机制 TGF-β/smad4信号通路

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黑蒜提取液抑制胰腺癌Panc-1小鼠移植瘤的转移能力及分子机制 被引量：3

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作者 宫晓静 郭娜 王义善 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期4648-4651,共4页

目的:探讨黑蒜提取液(ABGE)对荷瘤小鼠Panc-1细胞在体内的生长以及转移能力的影响,并初步探讨其分子机制。方法:分别建立胰腺癌Panc-1小鼠皮下移植瘤模型以及转移瘤模型,将40只小鼠随机分为空白对照组,黑蒜低,高剂量组、阳性对照组4组,... 目的:探讨黑蒜提取液(ABGE)对荷瘤小鼠Panc-1细胞在体内的生长以及转移能力的影响,并初步探讨其分子机制。方法:分别建立胰腺癌Panc-1小鼠皮下移植瘤模型以及转移瘤模型,将40只小鼠随机分为空白对照组,黑蒜低,高剂量组、阳性对照组4组,分别给予0.9%氯化钠溶液,黑蒜提取液组0.4、0.8m L(相当于生药8.0、16.0g/kg),阳性环磷酰胺,2周后摘取眼球血脱臼处死小鼠,剥离瘤体称重,计算肿瘤生长抑制率以及转移抑制率;免疫组化检测肿瘤组织Smad4以及TGF-β1的表达。结果:腹腔注射黑蒜提取液可显著抑制小鼠Panc-1细胞移植瘤生长及肺转移的发生率,肿瘤抑制率可高达63.6%(P<0.01),而肺转移抑制率可高达63.5%(P<0.01)。且黑蒜高剂量抑制Panc-1细胞转移作用优于阳性对照组;免疫组化可检测发现:黑蒜提取液组Panc-1细胞胞质中TGF-β1褐黄色颗粒较空白对照组少见,而Smad4胞浆着黄色则较空白对照组多见。结论:腹腔注射黑蒜提取液可显著抑制小鼠Panc-1细胞移植瘤生长及肺转移的发生率,上调荷Panc-1小鼠移植瘤中Smad4的表达并下调TGF-β1的表达,与TGF-β1/Smad4信号通路密切相关,以上可能是黑蒜提取液抑制胰腺癌Panc-1细胞生长和转移的重要作用机制。 展开更多

关键词 黑蒜提取液 小鼠Panc-1细胞 TGF-β1/smad4信号通路 分子机制

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吡非尼酮对IgA肾病患者血清IgA1诱导人肾小球系膜细胞增殖的影响 被引量：2

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作者 占小江 付梦茹 +4 位作者 廖露 梅文娟 朱恒梅 魏昕 肖俊 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1008-1014,共7页

目的探讨吡非尼酮(pirfenidone,PFD)对IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者血清IgA1诱导人肾小球系膜细胞(HMC)增殖的作用及其可能机制。方法采用Jacalin亲和层析联合Sephacryl S-200凝胶过滤法纯化IgAN患者血清IgA1并将单体热聚合为聚合... 目的探讨吡非尼酮(pirfenidone,PFD)对IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者血清IgA1诱导人肾小球系膜细胞(HMC)增殖的作用及其可能机制。方法采用Jacalin亲和层析联合Sephacryl S-200凝胶过滤法纯化IgAN患者血清IgA1并将单体热聚合为聚合IgA1(aIgA1)。CCK8法摸索PFD作用浓度及时间,分为空白对照组、IgA1(0.5 mg/ml)组、IgA1(0.5 mg/ml)+PFD(2 mmol/L)组。采用CCK8法检测各组系膜细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期变化,并计算系膜细胞增殖指数;Western印迹法检测转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad4、Smad7、纤维连接蛋白、Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ)的蛋白表达水平;实时定量PCR检测各组TGF-β1、Smad4、Smad7、纤维连接蛋白、collagenⅣ的mRNA表达水平。结果与空白对照组相比,aIgA1诱导的HMC增殖显著增加(P<0.05);PFD处理后,HMC增殖活力显著被抑制(P<0.01);与空白对照组相比,IgA1组HMC中G1期细胞明显减少、S期细胞明显增多,细胞增殖指数增加(均P<0.05);与IgA1组相比,IgA1+PFD组HMC中G1期细胞明显增多、S期及G2/M期细胞明显减少,细胞增殖指数下降(均P<0.05)。与空白对照组相比,aIgA1刺激下HMC中collagenⅣ、纤维连接蛋白、Smad4蛋白及mRNA表达均明显增加,TGF-β1蛋白表达增加,Smad7蛋白表达下降(均P<0.05);PFD处理后,HMC中collagenⅣ、纤维连接蛋白、Smad4蛋白及mRNA表达均明显下降,TGF-β1蛋白表达下调,Smad7蛋白表达上调(均P<0.05);各组TGF-β1和Smad7 mRNA表达在PFD处理前后差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论PFD可增加HMC在G1期的阻滞,抑制IgAN患者aIgA1诱导的HMC增殖,减少细胞外基质的产生,其机制可能与Smad7表达上调及TGF-β1/Smad4通路下调有关。 展开更多

关键词 肾小球肾炎 IgA 肾小球系膜细胞 细胞增殖 吡非尼酮 TGF-β1/smad4信号通路

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微小RNA-96对结直肠癌细胞迁移及侵袭的影响 被引量：11

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作者 胡思锋 王庆光 +2 位作者 李耀锋 孟凡美 姜超 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期83-85,共3页

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-96对SW620结直肠癌细胞迁移及侵袭的影响。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测SW620、SW480、HT-29、HCT116、LoVo、CaCo-2结直肠癌细胞,NCM-460正常结肠上皮细胞中miR-96的表达,应用Lipofectam... 目的观察微小RNA(miRNA,miR)-96对SW620结直肠癌细胞迁移及侵袭的影响。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测SW620、SW480、HT-29、HCT116、LoVo、CaCo-2结直肠癌细胞,NCM-460正常结肠上皮细胞中miR-96的表达,应用Lipofectamine?3000将miR-96抑制物、miR-96阴性对照(NC)转染到SW620细胞,Real-time PCR检测miR-96表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,Transwell法检测细胞迁移及侵袭能力,Western blot检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、p-Smad4蛋白表达。结果Real-time PCR结果表明miR-96在SW620(2.42±0.20)、SW480(1.75±0.12)、HT-29(1.43±0.11)、HCT116(1.52±0.12)、LoVo(1.73±0.14)、CaCo-2(1.36±0.13)结直肠癌细胞中的表达量显著高于NCM-460(0.39±0.02)细胞(P均<0.01),miR-96抑制物组(0.45±0.03)miR-96表达量较miR-96 NC组(2.35±0.32)降低(P<0.01)。CCK-8实验结果表明miR-96抑制物组(0.389±0.034)细胞活力较miR-96 NC组(0.586±0.058)降低(P<0.01)。Transwell实验结果表明miR-96抑制物组[(28.37±2.84)个]细胞迁移数目较miR-96 NC组[(128.45±12.84)个]减少(P<0.01),miR-96抑制物组侵袭数目[(23.60±2.30)个]较miR-96 NC组[(133.57±13.36)个]减少(P<0.01)。Western blot结果表明miR-96抑制物组中MMP-2、MMP-9、Vimentin、TGF-β1、p-Smad4表达量较miR-96 NC组下调(P均<0.01),miR-96抑制物组中E-cadherin表达量较miR-96 NC组上调(P<0.01)。结论 下调miR-96表达能显著抑制SW620结肠癌细胞迁移及侵袭,与抑制TGF-β1/Smad4信号通路有关。 展开更多

关键词 微小RNA-96 结肠癌 迁移 侵袭 转化生长因子-β1/smad4信号通路

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