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TFEB基因shRNA慢病毒载体的构建及鉴定
1
作者 常熙昊 郭雅坤 李薇 《生物化工》 2023年第2期69-72,共4页
目的:构建TFEB基因的shRNA慢病毒载体,并鉴定是否成功。采用该载体包装的慢病毒侵染所获得的细胞系可利用TFEB(转录因子EB)作为靶点,用于TFEB相关性疾病发病机制的研究及为临床疾病研究提供新的药物治疗方向。方法:利用PCR、双酶切、连... 目的:构建TFEB基因的shRNA慢病毒载体,并鉴定是否成功。采用该载体包装的慢病毒侵染所获得的细胞系可利用TFEB(转录因子EB)作为靶点,用于TFEB相关性疾病发病机制的研究及为临床疾病研究提供新的药物治疗方向。方法:利用PCR、双酶切、连接、转化等分子生物学技术构建TFEB基因的shRNA慢病毒载体,利用测序鉴定序列是否连接成功;通过RNAi技术,将构建成功的重组质粒包装成慢病毒并侵染细胞,建立敲低TFEB的细胞系,利用Western blot检测侵染及对照HeLa细胞TFEB蛋白表达水平。结果:测序结果显示pLKO.1-TFEB-shRNA重组质粒分别包含3U、OR不同干扰序列,重组质粒构建成功;Western blot检测结果表明,序列为3U和OR的慢病毒收集液侵染的细胞内TFEB表达量均降低。结论:利用序列为3U和OR的shRNA构建的重组质粒、包装的慢病毒均成功,干扰了侵染获得的细胞系中TFEB的表达。 展开更多
关键词 tfeb基因 shRNA慢病毒载体 RNAI技术
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小鼠TFEB基因重组腺相关病毒的构建及鉴定
2
作者 丁广前 欧阳丽斯 吕建平 《解剖学研究》 CAS 2016年第1期7-10,共4页
目的构建小鼠TFEB基因的重组8型腺相关病毒(AAV8),并通过感染293细胞观察TFEB表达情况。方法将pUC57-mTFEB及载体质粒分别进行酶切、连接、转化,得到重组质粒pAAV-CMV-mTFEB,并进行PCR鉴定及测序;将鉴定正确重组质粒,进行AAV8病毒载体包... 目的构建小鼠TFEB基因的重组8型腺相关病毒(AAV8),并通过感染293细胞观察TFEB表达情况。方法将pUC57-mTFEB及载体质粒分别进行酶切、连接、转化,得到重组质粒pAAV-CMV-mTFEB,并进行PCR鉴定及测序;将鉴定正确重组质粒,进行AAV8病毒载体包装;正确包装病毒载体后,感染293细胞,通过Western blot观察TFEB基因在293细胞表达情况。结果酶切鉴定和测序结果证明了pAAV-CMV-mTFEB病毒包装成功;病毒滴度4.65×10^(12)vg/m L;细胞实验提示相比对照组,实验组TFEB基因表达水平升高6倍余(P<0.01)。结论 rAAV2/8-CMV-mTFEB构建及包装成功,并可以有效感染和表达。 展开更多
关键词 tfeb基因 重组质粒 腺相关病毒
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t(6;11)染色体易位肾细胞癌中Alpha基因片段的克隆及启动子活性分析 被引量：1
3
作者 詹鹤琴 袁毅 秦蓉 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第15期951-956,共6页
目的：构建包含不同Alpha基因片段的重组报告质粒和Alpha1-TFEB融合基因表达质粒,并评价Alpha基因启动子活性。方法：利用软件对Alpha基因进行启动子预测;采用PCR技术扩增出5种不同长度的Alpha基因片段和正常TFEB基因启动子序列pTFEB,... 目的：构建包含不同Alpha基因片段的重组报告质粒和Alpha1-TFEB融合基因表达质粒,并评价Alpha基因启动子活性。方法：利用软件对Alpha基因进行启动子预测;采用PCR技术扩增出5种不同长度的Alpha基因片段和正常TFEB基因启动子序列pTFEB,构建含Alpha基因片段和pTFEB的重组报告质粒;采用脂质体转染法将其分别转染至人胚肾293T细胞;通过荧光素酶活性检测确定Alpha基因的启动子活性。同时构建含Alpha1-TFEB融合基因表达质粒,转染293T细胞后,采用Western blot法检测转染前后TFEB蛋白的表达水平。结果：成功构建含不同Alpha基因片段和pTFEB的重组报告质粒。与pGL3-Basic质粒转染组进行比较,Alpha1、Alpha2、Alpha3、Alpha4、Alpha5质粒转染组的荧光素酶活性显著增高（P〈0.01）;与正常TFEB基因启动子进行比较,Alpha1、Alpha2、Alpha5的荧光素酶活性明显增高（P〈0.01）;与pGL3-Enhancer质粒转染组进行比较,pGL3-Enhanc-er-Alpha1-TFEB表达质粒组TFEB蛋白的表达明显升高。结论：t（6;11）染色体易位肾细胞癌中Alpha基因具有启动子活性,可促进TFEB表达,Alpha5片段最强活性区域位于643~693位碱基序列。 展开更多
关键词 Alpha基因 启动子活性 肾肿瘤 t(6 11)染色体易位
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儿童MiT家族异位性肾细胞癌的影像表现
4
作者 陈淑娟 孙磊 张莉 《临床放射学杂志》 北大核心 2022年第12期2290-2294,共5页
目的分析儿童MiT家族异位性肾细胞癌(MiT-RCC)[包括Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾细胞癌(Xp11.2 RCC)和t(6;11)(p21;q12)/TFEB基因融合相关性肾细胞癌t(6;11)RCC]的影像学表现特点,提高对这类疾病的认识及诊断水平。方法回顾性分析1... 目的分析儿童MiT家族异位性肾细胞癌(MiT-RCC)[包括Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾细胞癌(Xp11.2 RCC)和t(6;11)(p21;q12)/TFEB基因融合相关性肾细胞癌t(6;11)RCC]的影像学表现特点,提高对这类疾病的认识及诊断水平。方法回顾性分析13例经病理证实的MiT-RCC患儿的临床及影像资料,Xp11.2 RCC 12例,t(6;11)RCC 1例。13例行CT扫描,8例行MRI扫描,分析并总结CT及MRI表现特点。结果12例Xp11.2 RCC患儿CT图像肿块大小不一,影像表现可分为4种类型,肿瘤实性部分密度偏高,可见出血、坏死、钙化,钙化多见,淋巴结转移多见,腹膜后转移淋巴结常伴有钙化,增强扫描延迟期强化程度稍下降。MRI信号混杂,可见坏死、出血、钙化等信号,大部分T1呈稍高信号,T_(2)呈稍低信号,DWI呈稍高信号,平均ADC值下降。1例t(6;11)RCC CT上表现为类圆形等密度影,边界清晰,密度均匀。结论MiT-RCC是儿童RCC的主要亚型,影像学表现具有一定特点。 展开更多
关键词 儿童 MiT家族异位性肾细胞癌 Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾细胞癌 t(6 11)(p21 q12)/tfeb基因融合相关性肾细胞癌
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