miRNA-138-5p靶向调控胱天蛋白酶3减缓吸烟所致睾丸支持细胞TM4细胞凋亡 被引量：1

1

作者 徐华 买尔哈巴·阿不力孜 +1 位作者 赵婉竹 何丽娟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期285-294,共10页

近年来研究表明,长期大量吸烟可致睾丸出现不可逆性损伤进而出现精子发生受阻,凋亡信号通路在其中发挥着关键作用,其分子调控机制仍有待深入研究。本研究旨在探讨miRNA-138-5p在香烟烟雾所致小鼠睾丸支持细胞TM4细胞(正常小鼠睾丸Sertol... 近年来研究表明,长期大量吸烟可致睾丸出现不可逆性损伤进而出现精子发生受阻,凋亡信号通路在其中发挥着关键作用,其分子调控机制仍有待深入研究。本研究旨在探讨miRNA-138-5p在香烟烟雾所致小鼠睾丸支持细胞TM4细胞(正常小鼠睾丸Sertoli细胞)损伤中的靶向调控机制。MTT法、乳酸脱氢酶法和TUNEL法结果显示,CSE干预后的TM4细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞毒性显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05);RT-PCR和Western印迹结果证明,10%CSE干预TM4细胞后,凋亡前体基因p53、促凋亡基因Bak和胱天蛋白酶3(caspase-3)的mRNA和蛋白质表达水平显著上调(P<0.05);在TM4细胞中转染miRNA-138-5p过表达质粒后同样进行CSE干预,结果显示,支持细胞存活率较转染前显著升高(P<0.05),凋亡阳性细胞数较转染前显著降低(P<0.05),凋亡前体p53基因、促凋亡基因Bak和Caspase-3的mRNA和蛋白质表达较转染前显著下调(P<0.05);沉默miRNA-138-5p后,Bak、胱天蛋白酶3的mRNA和蛋白质表达水平显著增加(P<0.05);在线数据库分析显示,miRNA-138-5p与胱天蛋白酶3具有较高的匹配预测值,双荧光素酶报告基因结果显示,Bak未结合至miRNA-138-5p,而胱天蛋白酶3可以靶向结合至miRNA-138-5p。以上结果提示,miRNA-138-5p可靶向调控胱天蛋白酶3,减缓吸烟所致睾丸支持细胞凋亡,具有支持细胞的保护作用。 展开更多

关键词 香烟烟雾暴露 tm4细胞(正常小鼠睾丸Sertoli细胞) miRNA-138-5p

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虫草素对小鼠睾丸支持细胞株TM4细胞增殖的影响 被引量：2

2

作者 王庆忠 王东方 +3 位作者 刘慧莲 冯道俊 王汉海 郭祖宝 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1591-1593,共3页

目的探讨虫草素对支持细胞系TM4体外增殖的影响。方法采用形态学观察、MTT法和TUNNEL法检测5个不同浓度的虫草素对小鼠支持细胞株TM4细胞生长和增殖的作用。结果虫草素抑制TM4细胞的增殖,诱导其细胞凋亡,并呈现出剂量依赖效应。当用10 m... 目的探讨虫草素对支持细胞系TM4体外增殖的影响。方法采用形态学观察、MTT法和TUNNEL法检测5个不同浓度的虫草素对小鼠支持细胞株TM4细胞生长和增殖的作用。结果虫草素抑制TM4细胞的增殖,诱导其细胞凋亡,并呈现出剂量依赖效应。当用10 mg/L以上的虫草素处理培养的TM4细胞时,MTT法测得的细胞生长抑制率和TEN-NEL法获得的细胞凋亡指数与对照组相比均有显著差异。结论虫草素在预防和治疗睾丸癌方面有应用价值。 展开更多

关键词 虫草素 tm4细胞 细胞凋亡

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壬基酚异构体对小鼠Sertoli TM4细胞内黏着连接、雄激素结合蛋白和抑制素B的影响 被引量：1

3

作者 刘晓珍 王小银 +1 位作者 黄丹菲 谢明勇 《南昌大学学报（理科版）》 CAS 北大核心 2013年第5期469-473,共5页

研究了壬基酚异构体[4-(1-乙基-1-甲基-己基)酚](4-NP65)对小鼠睾丸Sertoli TM4细胞黏着连接相关分子表达和分泌雄激素结合蛋白(ABP),抑制素B(Inhibin B)的作用。不同浓度4-NP65(0、0.1、1、10、20、40μmol·L-1)作用于TM4细胞24h,... 研究了壬基酚异构体[4-(1-乙基-1-甲基-己基)酚](4-NP65)对小鼠睾丸Sertoli TM4细胞黏着连接相关分子表达和分泌雄激素结合蛋白(ABP),抑制素B(Inhibin B)的作用。不同浓度4-NP65(0、0.1、1、10、20、40μmol·L-1)作用于TM4细胞24h,MTT法测定细胞存活率,RT-PCR测定TM4细胞波形蛋白(Vimentin),N-钙黏着蛋白(N-cadherin),黏着斑蛋白(Vinculin)mRNA的表达情况;Elisa法测定细胞上清液中ABP和Inhibin B的含量。结果4-NP65在低剂量(0.1、1、10、20μmol·L-1)对细胞存活率无显著影响,在高剂量(40、80、100μmol·L-1)能显著降低TM4细胞存活率(P<0.01);4-NP65剂量依赖性增加Vimentin mRNA表达,降低Vinculin、N-cadherin mRNA的表达;4-NP65呈剂量依赖性降低ABP的分泌量,与对照组比较,在20、40μmol·L-1处理组有显著差异(P<0.05),而Inhibin B的含量在20、40μmol·L-1 4-NP65处理组有显著降低(P<0.05)。4-NP65对小鼠Sertoli TM4细胞具有生殖毒性作用,黏着连接是其作用的可能靶点之一,4-NP65可能通过影响TM4细胞黏着连接相关分子的表达和TM4细胞分泌ABP、Inhibin B引起雄性生殖系统损伤。 展开更多

关键词 壬基酚异构体 SERTOLI tm4细胞 黏着连接 雄激素结合蛋白 抑制素B

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N-乙酰-半胱氨酸干预壬基酚对小鼠Sertoli TM4细胞的损伤作用 被引量：2

4

作者 刘晓珍 聂少平 +2 位作者 余强 黄丹菲 谢明勇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第13期130-136,共7页

目的:研究N-乙酰-半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)对壬基酚(nonylphenol,NP)诱导的小鼠SertoliTM4细胞氧化损伤及凋亡的干预作用。方法:以Sertoli TM4细胞为对象,实验分为对照组、NP组(20 μmol/L NP处理)、NP+NAC组(5 mmol/L NAC预处... 目的:研究N-乙酰-半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)对壬基酚(nonylphenol,NP)诱导的小鼠SertoliTM4细胞氧化损伤及凋亡的干预作用。方法:以Sertoli TM4细胞为对象,实验分为对照组、NP组(20 μmol/L NP处理)、NP+NAC组(5 mmol/L NAC预处理4 h后20 μmol/L NP处理24 h)、NAC组(5 mmol/L NAC处理4 h后换正常培养基培养),采用噻唑蓝法检测细胞存活率;流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量和细胞凋亡情况;试剂盒法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及Caspase-3相对活力;Western blot法检测细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化情况。结果:与对照组相比,20 μmol/L NP处理24 h能显著降低细胞存活率(P<0.05),同时诱导细胞内ROS生成,下调SOD和CAT活力,增加MDA含量,诱导Sertoli TM4细胞凋亡,增加Caspase-3相对活力,促进ERK、JNK蛋白磷酸化激活;与NP组相比,NAC预处理能够明显削弱NP引起的细胞内ROS生成,使SOD、CAT活力下调,MDA含量增加,Sertoli TM4细胞凋亡,Caspase-3相对活力增强,激活ERK、JNK信号通路。结论:NAC具有干预NP对小鼠Sertoli TM4细胞损伤的作用,这可能与NAC抑制NP诱导的细胞氧化应激和凋亡以及阻断ERK、JNK信号通路的激活相关。 展开更多

关键词 壬基酚 小鼠Sertoli tm4细胞 N-乙酰-半胱氨酸 细胞凋亡 氧化应激

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闭合蛋白的胞外环缺失对小鼠TM4细胞紧密连接的影响分析 被引量：3

5

作者 谭小方 陈德宇 +1 位作者 丁家怡 吴洁 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期675-680,共6页

目的:分析闭合蛋白的2个胞外环结构域在小鼠TM4细胞紧密连接中的功能。方法:利用基因工程的方法,分别或者同时缺失掉闭合蛋白的2个胞外环,将缺失了胞外环3个闭合蛋白基因序列,分别克隆入pcDNA3.1表达载体,再转入TM4细胞。用RT-PCR和West... 目的:分析闭合蛋白的2个胞外环结构域在小鼠TM4细胞紧密连接中的功能。方法:利用基因工程的方法,分别或者同时缺失掉闭合蛋白的2个胞外环,将缺失了胞外环3个闭合蛋白基因序列,分别克隆入pcDNA3.1表达载体,再转入TM4细胞。用RT-PCR和Western印迹分析闭合蛋白表达量,用紧密连接的体外细胞模型来分析闭合蛋白的胞外环对紧密连接程度的影响。结果:测序结果表明pcDNA3.1-occludinΔOCC1、pcDNA3.1-occludinΔOCC2和pcDNA3.1-occludinΔOCC1+OCC2表达载体已经构建成功。RT-PCR和Western印迹结果显示3个缺失组闭合蛋白的mRNA和蛋白质的表达量都显著高于对照组。体外紧密连接模型分析结果表明闭合蛋白2个胞外环都能够增加TM4的紧密连接程度,其中,pcDNA3.1-occludinΔOCC1转染组每天的大分子通过率均比pcDNA3.1-occludinΔOCC2转染组显著降低(P<0.05),表明闭合蛋白第二个胞外环对紧密连接的影响程度比第一个胞外环要高。结论:闭合蛋白2个胞外环都能够影响小鼠TM4细胞紧密连接的程度,并且第二个胞外环对紧密连接的影响程度比第一个胞外环要高。 展开更多

关键词 血-睾屏障 闭合蛋白 胞外环结构域 紧密连接 tm4细胞 小鼠

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SiO_(2)NPs通过诱导氧化应激激活Fas/FasL通路促进TM4细胞凋亡 被引量：4

6

作者 王旭莹 郭志义 +6 位作者 郝会宇 孙凡丽 张品正 孟芳宇 陈紫云 李金泽 尚璇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第10期2024-2033,共10页

目的探讨纳米二氧化硅(silicon dioxide nanoparticles,SiO_(2)NPs)对小鼠睾丸支持细胞(TM4)的毒性作用及其分子机制。方法将TM4细胞暴露于不同浓度的SiO_(2)NPs(0、1、10、100 mg/L)培养液24 h,处理结束后,采用光学显微镜和CCK-8法检... 目的探讨纳米二氧化硅(silicon dioxide nanoparticles,SiO_(2)NPs)对小鼠睾丸支持细胞(TM4)的毒性作用及其分子机制。方法将TM4细胞暴露于不同浓度的SiO_(2)NPs(0、1、10、100 mg/L)培养液24 h,处理结束后,采用光学显微镜和CCK-8法检测小鼠睾丸支持细胞的形态和活性。利用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)水平,MDA和SOD试剂盒检测细胞内的丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。利用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒分析TM4细胞的凋亡水平,免疫印迹法检测Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3、Bax和Bcl-2等细胞凋亡信号分子的蛋白质表达水平。结果研究发现,SiO_(2)NPs呈剂量依赖性地抑制TM4细胞增殖,降低细胞存活率和数量,并影响细胞的形态结构。此外,SiO_(2)NPs诱导TM4细胞产生过量ROS,引起脂质过氧化产物MDA含量以及抗氧化酶SOD活性增加导致氧化应激。进一步研究显示,SiO_(2)NPs显著增加TM4细胞凋亡水平,并激活Fas/FasL死亡受体介导的细胞凋亡信号通路。有意思的是,抗氧化剂NAC可以通过降低氧化应激水平有效缓解SiO_(2)NPs引起的TM4细胞损伤和细胞凋亡。结论综上,SiO_(2)NPs通过诱导氧化应激激活Fas/FasL信号通路促进TM4细胞凋亡。 展开更多

关键词 纳米二氧化硅(SiO_(2)NPs) 生殖毒性 tm4细胞 氧化应激 细胞凋亡

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基于内质网应激探讨淫羊藿苷对TM4细胞损伤的保护作用 被引量：2

7

作者 杨思琪 赵海霞 +3 位作者 马琼艳 尤旭 袁丁 张长城 《中药材》 CAS 北大核心 2020年第2期452-456,共5页

目的:基于内质网应激(ERS)探讨淫羊藿苷对D-半乳糖(D-Gal)诱导的小鼠睾丸支持细胞株TM4细胞损伤的保护作用。方法:将TM4细胞分为正常对照组、模型组及淫羊藿苷低(0.5μmol/L)、高(1.0μmol/L)浓度组。Western blot法检测TM4细胞紧密连... 目的:基于内质网应激(ERS)探讨淫羊藿苷对D-半乳糖(D-Gal)诱导的小鼠睾丸支持细胞株TM4细胞损伤的保护作用。方法:将TM4细胞分为正常对照组、模型组及淫羊藿苷低(0.5μmol/L)、高(1.0μmol/L)浓度组。Western blot法检测TM4细胞紧密连接相关蛋白Occludin、Claudin-1及内质网应激相关蛋白GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1、XBP1、ATF6表达水平。结果:Western blot结果显示,与正常对照组比较,模型组细胞紧密连接相关蛋白Occludin、Claudin-1及内质网应激相关蛋白GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1、XBP1、ATF6表达显著降低(P<0.01),给予淫羊藿苷干预后上述蛋白表达均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:淫羊藿苷可减轻D-Gal诱导的TM4细胞损伤,其机制可能与上调内质网应激信号通路有关。 展开更多

关键词 淫羊藿苷 内质网应激 tm4睾丸支持细胞

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氟咯草酮对小鼠睾丸及TM4细胞凋亡和Nrf2/HO-1及NFκB信号通路的影响

8

作者 赵淑琦 王彦娜 +5 位作者 倪志晶 田芳 李睿 张济明 常秀丽 周志俊 《环境与职业医学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期673-680,共8页

[背景]氟咯草酮(FLC)具有雄性生殖毒性,可引起氧化应激状态下睾丸组织及支持细胞凋亡,核因子红细胞2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路以及核因子κB(NFκB)信号通路是否在该过程中发挥作用值得关注。[目的]观察FLC体内/外... [背景]氟咯草酮(FLC)具有雄性生殖毒性,可引起氧化应激状态下睾丸组织及支持细胞凋亡,核因子红细胞2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路以及核因子κB(NFκB)信号通路是否在该过程中发挥作用值得关注。[目的]观察FLC体内/外染毒小鼠睾丸组织及小鼠睾丸支持细胞系TM4细胞对细胞凋亡及Nrf2/HO-1和NFκB信号通路的影响。[方法](1)动物实验。获取雄性C57BL/6小鼠FLC(染毒剂量为每日0、3、15、75和375 mg·kg^(-1))经口染毒28 d后睾丸组织样本;通过比色分析睾丸组织匀浆中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,观察睾丸组织氧化应激水平,TUNEL染色观察睾丸组织凋亡情况,免疫组化观察Nrf2、NFκB的表达及分布,Western blotting检测睾丸组织匀浆中Nrf2、HO-1、醌NADH脱氢酶1(NQO1)、NFκB、NFκB抑制因子激酶β(IKKβ)、磷酸化NFκB抑制因子α(P-IκBα)蛋白表达水平。(2)细胞实验。40、80、120、160、200μmol·L^(-1)FLC对TM4细胞系染毒6 h,CCK-8细胞计数,试剂盒检测细胞活力。40、80、160μmol·L^(-1)FLC染毒6 h,通过流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测Nrf2、HO-1、NQO1、NFκB、IKKβ、IκBα蛋白表达水平。[结果](1)动物实验。雄性C57BL/6小鼠经口FLC染毒28 d后,生精小管间质及基底部发生细胞凋亡。与对照组相比,375 mg·kg^(-1)FLC染毒组睾丸组织中MDA含量明显升高(P<0.05),SOD活性明显下降(P<0.05)。375 mg·kg^(-1)FLC染毒后生精小管间质及基底部发生细胞凋亡。免疫组化结果显示染毒组生精小管间质及基底部Nrf2、NFκB表达。与对照组相比,Nrf2、NQO1、P-IκBα、NFκB、IKKβ蛋白水平在15、75、375 mg·kg^(-1)组均明显升高(P<0.001),HO-1蛋白水平在375 mg·kg^(-1)组明显升高(P<0.001)。(2)细胞实验。与对照组相比,40、80、120、160、200μmol·L^(-1)FLC组TM4细胞活力明显下降(P<0.01);细胞凋亡率明显升高(P<0.05),40、80、160μmol·L^(-1)FLC染毒后细胞凋亡比例从对照组的5.7%分别提高至7.4%、9.4%、11.7%。Nrf2蛋白水平在40μmol·L^(-1)组明显升高(P<0.01),80、160μmol·L^(-1)组明显降低(P<0.01),HO-1蛋白水平在40、80、160μmol·L^(-1)组明显升高(P<0.01)。NQO1蛋白水平在40μmol·L^(-1)组明显升高(P<0.01)。NFκB蛋白水平在80、160μmol·L^(-1)组明显升高(P<0.001),IκBα蛋白在各染毒组均明显降低(P<0.001),各染毒组IKKβ蛋白无明显变化。[结论]FLC诱导睾丸组织凋亡,该过程中涉及Nrf2/HO-1信号通路和NFκB信号通路。体外研究验证FLC损伤TM4细胞活力诱导细胞凋亡,激活Nrf2/HO-1和NFκB信号通路。 展开更多

关键词 氟咯草酮 睾丸支持细胞 tm4细胞 凋亡 核因子红细胞2相关因子2 核因子ΚB

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雌激素受体α下调导致小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤的作用机制

9

作者 杨焱娜 张长城 +4 位作者 常言语 周本文 陈思敏 邓何 赵海霞 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1718-1724,共7页

目的探究雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)下调导致的小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤是否与自噬相关。方法不同浓度ERα抑制剂ICI182780(ICI)处理TM4细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性;将细胞分为正常对照组、不同浓度ICI处理... 目的探究雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)下调导致的小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤是否与自噬相关。方法不同浓度ERα抑制剂ICI182780(ICI)处理TM4细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性;将细胞分为正常对照组、不同浓度ICI处理组。光镜观察细胞数量及形态变化;Western blot法检测ERα蛋白、连接功能相关蛋白、自噬标志物蛋白表达变化;免疫荧光法检测缝隙连接蛋白43(Cx43)表达与定位;氯喹(chloroquine,CQ)与ICI联合作用细胞24 h,Western blot法检测自噬及连接功能相关蛋白表达水平。结果ICI 50 nmol·L^(-1)及以上浓度时,细胞活力明显下降;光镜观察ICI组细胞空泡增多;与正常对照组相比,ICI用药组ERα、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)、紧密连接蛋白11(claudin-11)、β-联蛋白(β-catenin)及Cx43表达水平均下降,而神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)表达无明显变化;微管相关蛋白轻链3(LC3)上升,p62表达下降;免疫荧光结果显示,ICI用药组Cx43荧光表达量明显下降,位置无明显变化;与ICI组相比,CQ+ICI组LC3Ⅱ、p62、ZO-1、β-catenin、Cx43表达水平均上升。结论ERα下调可导致TM4细胞连接功能损伤,其机制可能与激活自噬有关。 展开更多

关键词 雌激素受体Α 支持细胞 tm4细胞 自噬 连接功能 血睾屏障

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PERK在玉米赤霉烯酮诱导TM4细胞凋亡中的作用 被引量：5

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作者 冯楠楠 王冰洁 +7 位作者 郑王龙 司梦雪 邹辉 顾建红 袁燕 刘学忠 刘宗平 卞建春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1416-1423,共8页

以TM4细胞（小鼠睾丸支持细胞株）为材料，用不同浓度的玉米赤酶烯酮（zearalenone，ZEA）染毒，利用透射电子显微镜（设0，5，10，20μmol／LZEA浓度组），流式细胞仪、Western blot等技术检测了细胞超微结构、凋亡率、凋亡相关调控蛋... 以TM4细胞（小鼠睾丸支持细胞株）为材料，用不同浓度的玉米赤酶烯酮（zearalenone，ZEA）染毒，利用透射电子显微镜（设0，5，10，20μmol／LZEA浓度组），流式细胞仪、Western blot等技术检测了细胞超微结构、凋亡率、凋亡相关调控蛋白以及内质网应激相关蛋白的变化（设0，0．1，1，10，20μmol／L ZEA浓度组）；通过转染PERK（蛋白激酶R样内质网激酶）siRNA，沉默PERK基因后检测了ZEA诱导TM4细胞凋亡率和凋亡相关蛋白的变化。结果显示：与对照组相比，20μmol／L浓度组损伤最为严重。随着ZEA浓度的增加，细胞凋亡相关蛋白Bax／Bcl-2的值逐渐升高，cleaved caspase 9、cleaved canpase 3蛋白表达量均呈升高趋势，1μmol／L以上染毒组均较各自对照组有极显著差异（P〈0．01）；内质网应激相关蛋白BIP、CHOP的表达量也呈升高趋势，10gmol／L以上染毒组BIP、0．1μmol／L以上染毒组CHOP的表达量均较对照组有显著或极显著差异（P〈0．05或P〈0．01）；PERK通路蛋白含量在10〉mol／L时最高，20，30〉mol／L时逐渐降低，但各染毒组与对照组相比呈显著或极显著差异（P〈0．05或P〈0．01）；TM4细胞caspase3的活性和凋亡率均呈升高趋势，10μmol／L以上染毒组caspase3的活性较对照组均有极显著差异（P〈0．01），各染毒组细胞的凋亡率较对照组均有极显著差异（P〈0．01）。与10μmol／L ZEA处理组相比，siRNA PERK＋10μmol／L ZEA组细胞凋亡率呈显著下降（P〈0．01），Bax／Bcl-2比值、cleaved caspase 3、cleaved caspase 9表达量均下降（P〈0．05或P〈0．01）。结果表明，ZEA可触发TM4细胞内质网应激，通过PERK-eLF2α-ATF4信号通路诱导细胞发生凋亡，PERK信号通路在ZEA诱导TM4细胞凋亡中发挥重要作用。 展开更多

关键词 玉米赤酶烯酮 tm4细胞 凋亡 内质网应激 PERK

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氟咯草酮通过IRE1α-JNK信号通路介导小鼠睾丸组织细胞及TM4细胞凋亡 被引量：2

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作者 张芬 李睿 +4 位作者 赵淑琦 王彦娜 倪志晶 常秀丽 周志俊 《环境与职业医学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期996-1003,共8页

[背景]氟咯草酮(FLC)可诱导睾丸支持细胞凋亡,但其具体机制尚未阐明。[目的]通过体内动物及体外细胞系构建FLC染毒模型,探究FLC染毒后小鼠睾丸组织中细胞凋亡以及小鼠睾丸支持细胞系TM4细胞凋亡和内质网应激活化情况,并通过干预实验探... [背景]氟咯草酮(FLC)可诱导睾丸支持细胞凋亡,但其具体机制尚未阐明。[目的]通过体内动物及体外细胞系构建FLC染毒模型,探究FLC染毒后小鼠睾丸组织中细胞凋亡以及小鼠睾丸支持细胞系TM4细胞凋亡和内质网应激活化情况,并通过干预实验探究肌醇需酶1α(IRE1α)-c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在FLC诱导TM4细胞凋亡过程中的作用。[方法]利用C57BL/6雄性小鼠28 d经口染毒3、15、75和375 mg·(kg·d)^(−1) FLC结束后留取的睾丸标本,通过TUNEL染色观察睾丸组织中细胞凋亡发生情况,通过Western blotting检测睾丸组织中的凋亡蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相互作用介质(Bim)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]表达水平。在体外细胞实验中,使用不同浓度(40、80和160μmol·L^(−1))的FLC对TM4细胞染毒6 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡蛋白(Bcl-2、Bim、Bax)及内质网应激相关蛋白[葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化-蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、活化转录因子6(ATF6)、磷酸化-肌醇需酶1α(p-IRE1α)、磷酸化-JNK(p-JNK)]水平。随后使用IRE1α磷酸化抑制剂4μ8C(25、50μmol·L^(−1))、JNK磷酸化抑制剂SP600125(10、20μmol·L^(−1))预处理TM4细胞6 h后再使用160μmol·L^(−1) FLC染毒6 h,采用Western blotting检测凋亡及内质网应激相关蛋白水平,通过CCK-8法检测细胞活力。[结果]雄性C57BL/6小鼠经口染毒FLC 28 d后,睾丸组织TUNEL染色结果显示生精小管间质及基底部有细胞凋亡发生。Bcl-2家族抗凋亡蛋白Bcl-2水平在FLC染毒75、375 mg·(kg·d)^(−1)组中较对照组下降(P<0.05);而促凋亡蛋白Bim水平在FLC染毒75 mg·(kg·d)^(−1)组中,Bax水平在FLC染毒375 mg·(kg·d)^(−1)组中较对照组上升(P<0.05)。0、40、80和160μmol·L^(−1) FLC染毒组的细胞凋亡率分别为2.7%±0.2%、4.8%±1.3%、9.4%±0.3%、13.2%±0.2%,FLC染毒组细胞凋亡率均明显上升(P<0.05)。TM4细胞中Bcl-2蛋白水平在160μmol·L^(−1) FLC染毒时下降(P<0.05),而Bim和Bax蛋白水平在80、160μmol·L^(−1) FLC染毒时均上升(P<0.05),内质网应激相关蛋白(GRP78、p-PERK、ATF6、p-IRE1α和p-JNK)水平在FLC染毒后均上升(P<0.05)或呈上升趋势。4μ8C(25、50μmol·L^(−1))和SP600125(10、20μmol·L^(−1))预处理后,由FLC染毒引起的GRP78、p-IRE1α、p-JNK以及Bim、Bax蛋白表达水平上调幅度降低(P<0.05)或呈降低的趋势;预先使用两种抑制剂处理细胞后,FLC对细胞活力的损伤得到明显缓解(P<0.05)或呈缓解的趋势。[结论]FLC能够诱导小鼠睾丸组织发生细胞凋亡,并且通过激活内质网应激及IRE1α-JNK信号通路诱导TM4细胞凋亡发生。 展开更多

关键词 氟咯草酮 睾丸组织 tm4细胞 凋亡 内质网应激 未折叠蛋白反应

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熟地黄浸提物对培养的小鼠TM_4细胞的抑制作用研究 被引量：1

12

作者 王庆忠 《安徽农业科学》 CAS 2012年第23期11560-11561,共2页

[目的]研究熟地黄浸提物对培养的小鼠TM4细胞的抑制作用。[方法]通过显微镜观察和MTT法研究不同浓度的熟地黄乙醇提取物对小鼠支持细胞系中TM4细胞的影响。[结果]浓度40μg/ml的醇提取物处理组对TM4细胞已经有较明显的抑制作用;而随着... [目的]研究熟地黄浸提物对培养的小鼠TM4细胞的抑制作用。[方法]通过显微镜观察和MTT法研究不同浓度的熟地黄乙醇提取物对小鼠支持细胞系中TM4细胞的影响。[结果]浓度40μg/ml的醇提取物处理组对TM4细胞已经有较明显的抑制作用;而随着处理浓度的增大,这种抑制作用越来越强,当处理浓度达到100μg/ml时,TM4细胞的生长已经基本完全被抑制。[结论]熟地黄醇提取物对TM4细胞的生长和增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性。 展开更多

关键词 熟地黄(RADIX REHMANNIAE PRAEPARATA) tm4细胞 抑制

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生姜醇提取物诱导TM_4细胞凋亡的研究 被引量：1

13

作者 王庆忠 《潍坊学院学报》 2012年第4期60-63,共4页

生姜醇提取物的应用已引起了广泛的关注,特别是在医药方面得到了人们的高度重视。本研究主要探讨生姜醇提取物对支持细胞系TM4体外生长的影响。通过采用形态学观察、MTT法和TUN-NEL法检测5个不同浓度的生姜醇提取物对小鼠支持细胞株TM4... 生姜醇提取物的应用已引起了广泛的关注,特别是在医药方面得到了人们的高度重视。本研究主要探讨生姜醇提取物对支持细胞系TM4体外生长的影响。通过采用形态学观察、MTT法和TUN-NEL法检测5个不同浓度的生姜醇提取物对小鼠支持细胞株TM4细胞生长和增殖的作用。结果表明,生姜醇提取物抑制TM4细胞的增殖并诱导其细胞凋亡,这种作用呈剂量依赖效应,当用40μM/mL的生姜醇提取物处理培养的TM4细胞时,MTT法测得的细胞生长抑制率和TENNEL法获得的细胞凋亡指数与对照组相比均有显著差异。这些结果说明,生姜醇提取物在预防和治疗睾丸癌方面有应用价值。 展开更多

关键词 生姜醇提取物 tm4细胞 细胞凋亡

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生姜醇提取物诱导TM4细胞凋亡的研究

14

作者 王汉海 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期113-114,166,共3页

为了探讨生姜醇提取物对TM4细胞体外生长的影响,试验通过形态学观察、MTT法和原位末端标记(TUNNEL)法检测了5个不同浓度的生姜醇提取物对小鼠支持细胞株TM4细胞生长和增殖的作用。结果表明:生姜醇提取物可抑制TM4细胞的增殖及诱导其凋亡... 为了探讨生姜醇提取物对TM4细胞体外生长的影响,试验通过形态学观察、MTT法和原位末端标记(TUNNEL)法检测了5个不同浓度的生姜醇提取物对小鼠支持细胞株TM4细胞生长和增殖的作用。结果表明:生姜醇提取物可抑制TM4细胞的增殖及诱导其凋亡,呈剂量依赖效应,当用40μg/mL的生姜醇提取物处理TM4细胞时,MTT法测得的细胞生长抑制率和TENNEL法获得的细胞凋亡指数与对照组相比均差异显著。说明生姜醇提取物在预防和治疗睾丸癌方面有一定应用价值。 展开更多

关键词 生姜醇提取物 tm4细胞 细胞凋亡

原文传递

姜黄素对小鼠睾丸细胞株TM_4细胞的影响

15

作者 王庆忠 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第23期5418-5420,共3页

主要探讨姜黄素(Curcumin,CCM)对支持细胞株TM4体外生长的影响。通过采用形态学观察、MTT法和TUNNEL法检测了5种不同浓度的姜黄素对小鼠支持细胞株TM4细胞生长和增殖的影响。结果表明,姜黄素抑制TM4细胞的增殖并诱导其细胞凋亡,这种作... 主要探讨姜黄素(Curcumin,CCM)对支持细胞株TM4体外生长的影响。通过采用形态学观察、MTT法和TUNNEL法检测了5种不同浓度的姜黄素对小鼠支持细胞株TM4细胞生长和增殖的影响。结果表明,姜黄素抑制TM4细胞的增殖并诱导其细胞凋亡,这种作用呈剂量依赖效应,当用40μmol/mL的姜黄素处理培养的TM4细胞时,MTT法测得的细胞生长抑制率和TUNNEL法获得的细胞凋亡指数与对照组相比均有显著差异。说明姜黄素在预防和治疗睾丸癌方面有一定的应用价值。 展开更多

关键词 姜黄素(Curcumin CCM) 小鼠tm4细胞 细胞凋亡

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白藜芦醇对玉米赤霉烯酮致TM4细胞氧化损伤及凋亡的保护作用 被引量：3

16

作者 佘进进 冯楠楠 +7 位作者 郑豪 刘双双 邹辉 顾建红 袁燕 刘学忠 刘宗平 卞建春 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1453-1460,共8页

为探究白藜芦醇(RSV)对玉米赤霉烯酮(ZEA)致睾丸支持细胞氧化损伤及凋亡的保护作用,以小鼠睾丸支持细胞系TM4细胞为研究对象,分别设对照组、ZEA组(20μmol/L)、RSV组(5μmol/L)、ZEA+RSV组(5μmol/L RSV处理30 min后+20μmol/L ZEA),24 ... 为探究白藜芦醇(RSV)对玉米赤霉烯酮(ZEA)致睾丸支持细胞氧化损伤及凋亡的保护作用,以小鼠睾丸支持细胞系TM4细胞为研究对象,分别设对照组、ZEA组(20μmol/L)、RSV组(5μmol/L)、ZEA+RSV组(5μmol/L RSV处理30 min后+20μmol/L ZEA),24 h后,通过CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测ROS水平和细胞凋亡率,试剂盒检测细胞内MDA含量和SOD活力,免疫荧光法结合流式细胞术检测线粒体膜电位(ΔΨm)变化,Western-blot检测Fas/FasL通路相关蛋白表达。结果显示,与对照组相比,ZEA极显著抑制TM4细胞活性(P<0.01),增加细胞凋亡率及提高ROS、SOD和MDA水平(P<0.01),并能够显著增加Fas/FasL信号通路相关蛋白FasL、FADD、Cleaved-caspase8的表达水平(P<0.05),极显著增加Fas的表达水平(P<0.01);与ZEA组相比,ZEA+RSV组细胞活力显著提高(P<0.05),细胞凋亡率和SOD水平显著降低(P<0.05),ROS和MDA水平极显著下降(P<0.01),Fas、FasL表达下调(P<0.01和P<0.05)。结果表明,RSV可有效减轻ZEA对小鼠睾丸支持细胞的氧化损伤作用,并能够通过调控Fas/FasL通路缓解ZEA诱导的睾丸支持细胞凋亡。 展开更多

关键词 白藜芦醇 玉米赤霉烯酮 tm4细胞 氧化损伤 细胞凋亡

原文传递

D-半乳糖(D-gal)通过激活p38MAPK通路引起小鼠睾丸TM4支持细胞屏障功能损伤 被引量：3

17

作者 杨圆 张长城 +5 位作者 张艳 杨思琪 叶勇 吴杰 袁丁 赵海霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1002-1008,共7页

目的研究D-半乳糖(D-gal)对小鼠TM4睾丸支持细胞屏障功能的损伤作用及机制。方法TM4细胞分为正常对照组和(25、50、100、150、200、250)mmol/L D-gal刺激组,噻唑蓝(MTT)法检测TM4细胞增殖活性,Western blot法检测TM4细胞紧密连接相关蛋... 目的研究D-半乳糖(D-gal)对小鼠TM4睾丸支持细胞屏障功能的损伤作用及机制。方法TM4细胞分为正常对照组和(25、50、100、150、200、250)mmol/L D-gal刺激组,噻唑蓝(MTT)法检测TM4细胞增殖活性,Western blot法检测TM4细胞紧密连接相关蛋白闭锁小带蛋白1(ZO-1)和闭合蛋白(occludin),黏附连接相关蛋白神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和β联蛋白(β-catenin),缝隙连接相关蛋白连接子蛋白43(CX43),骨架蛋白波形蛋白(vimentin)和丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、Janus激酶(JNK)和p38MAPK的蛋白表达及磷酸化水平。结果与正常对照组比较,D-gal浓度大于50 mmol/L时,细胞活力显著下降;ZO-1、occludin、N-cadherin、E-cadherin和β-catenin的蛋白表达水平均显著降低,p38MAPK蛋白磷酸化水平显著增加,而CX43、vimentin及ERK1/2、JNK蛋白及磷酸化水平无明显变化。结论D-gal可引起TM4睾丸支持细胞紧密连接损伤和黏附连接损伤,可能与激活p38MAPK通路有关。 展开更多

关键词 D-半乳糖(D-gal) 睾丸支持细胞 tm4细胞 血睾屏障

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自噬在玉米赤霉烯酮诱导TM4细胞凋亡中的作用 被引量：2

18

作者 司梦雪 王冰洁 +6 位作者 冯楠楠 邹辉 顾建红 袁燕 刘学忠 刘宗平 卞建春 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第8期104-109,共6页

为探讨自噬在玉米赤霉烯酮（ZEA）诱导睾丸支持细胞株TM4凋亡中的作用,用不同浓度ZEA（0、5、10、20μmol/L）处理细胞24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测Bax等凋亡相关蛋白的表达情况;同时检测20μmol/L ZEA联合自噬抑... 为探讨自噬在玉米赤霉烯酮（ZEA）诱导睾丸支持细胞株TM4凋亡中的作用,用不同浓度ZEA（0、5、10、20μmol/L）处理细胞24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测Bax等凋亡相关蛋白的表达情况;同时检测20μmol/L ZEA联合自噬抑制剂氯喹（CQ）或促进剂雷帕霉素（RAP）后对TM4细胞凋亡率和凋亡相关蛋白及自噬关键蛋白LC-3的变化。结果显示：与对照组相比,5μmol/L ZEA以上染毒组Bax/Bcl-2的比值、cleaved-caspase-3和cleaved-caspase-9蛋白表达量均显著或极显著增加。20μmol/LZEA＋c Q可使ZEA诱导的TM4细胞的凋亡率上升,Bax/Bcl-2的比率以及cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9蛋白表达显著下降而自噬标志蛋白LC-3的表达上升;20μmol/LZEA＋RAP,可使ZEA诱导的TM4细胞的凋亡率下降;Bax/Bcl-2的比率,cleaved-caspase-3和cleaved-caspase-9蛋白表达及LC-3的表达显著上升。结果表明：在ZEA诱导的TM4细胞发生凋亡的过程中,细胞凋亡率与自噬水平的高低有明显的关系,抑制自噬,ZEA诱导的TM4细胞凋亡率明显升高;促进自噬,ZEA诱导的TM4细胞凋亡率明显降低。研究表明,自噬能够延迟TM4细胞发生凋亡,自噬在ZEA对TM4细胞的毒性损伤中发挥保护作用。 展开更多

关键词 玉米赤霉烯酮 tm4细胞 自噬 凋亡 氯喹 雷帕霉素

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枸杞多糖对顺铂诱导小鼠睾丸支持细胞TM4氧化损伤的影响 被引量：10

19

作者 王海 周游 +1 位作者 黄姗婉 高丽萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第17期198-202,共5页

目的:研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum(Ⅱ),CDDP)诱导的小鼠睾丸支持细胞TM4氧化损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:噻唑蓝法测定CDDP、LBP分别对TM4细胞生长的影响以及LB... 目的:研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum(Ⅱ),CDDP)诱导的小鼠睾丸支持细胞TM4氧化损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:噻唑蓝法测定CDDP、LBP分别对TM4细胞生长的影响以及LBP对CDDP诱导的细胞毒性的拮抗作用。硫代巴比妥酸法测定细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,二硫代二硝基苯甲酸法测定谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力。结果:5~100 mg/L LBP可极显著提高TM4细胞存活率(P<0.01),20~100 mg/L LBP能够极显著抑制CDDP造成的细胞毒性(P<0.01),50 mg/L的LBP保护效果最佳。50 mg/L LBP能够极显著抑制CDDP(12 mg/L)引起的MDA含量升高以及GSH含量和SOD活力降低(P<0.01)。结论:LBP能有效拮抗顺铂诱导的TM4细胞氧化损伤,其机制与LBP较强的抗氧化作用有关。 展开更多

关键词 枸杞多糖 顺铂 小鼠睾丸支持细胞tm4 氧化损伤

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D-半乳糖刺激小鼠睾丸TM4支持细胞分泌功能的衰退及其机制 被引量：4

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作者 陈茜 赵海霞 +5 位作者 马娜 尤旭 杨思琪 马琼艳 袁丁 张长城 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期327-333,共7页

目的采用D-半乳糖(D-Gal)刺激小鼠TM4睾丸支持细胞,建立衰老所致TM4细胞分泌功能衰退模型。方法将小鼠TM4睾丸支持细胞分为正常对照组、(25、50、100、150、200、250)mmol/L D-Gal刺激组。MTT法检测TM4细胞活力、流式细胞术检测细胞周... 目的采用D-半乳糖(D-Gal)刺激小鼠TM4睾丸支持细胞,建立衰老所致TM4细胞分泌功能衰退模型。方法将小鼠TM4睾丸支持细胞分为正常对照组、(25、50、100、150、200、250)mmol/L D-Gal刺激组。MTT法检测TM4细胞活力、流式细胞术检测细胞周期、光镜观察细胞形态、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老细胞百分率;反转录PCR检测P21、P16、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和干细胞因子(SCF)的mRNA水平;Western blot法检测GDNF、SCF、红系2样核因子2(nuclear factor,erythroid 2 like 2,NRF2)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)的蛋白水平。结果与正常对照组比较,D-Gal刺激组细胞活力显著下降;处于G1期的细胞比例增高、S期细胞比例降低,细胞阻滞于G0/G1期;SA-β-Gal染色阳性率明显增多,衰老基因P21 mRNA表达上调,GDNF和SCF mRNA及蛋白水平均显著下调;氧化应激相关蛋白NRF2、HO-1和NQO-1的蛋白水平显著降低。结论成功建立D-Gal刺激的TM4睾丸支持细胞分泌功能衰退模型,衰老机制可能与下调NRF2信号通路有关。 展开更多

关键词 D-半乳糖(D-Gal) tm4睾丸支持细胞 衰老 NRF2信号通路

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